Method Article

השפעת שיטות חילוץ שונות על פרופילי הביואקטיביות במבחנה של Terfezia Claveryi

DOI:

10.3791/69950

⸱

March 20th, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biophysics, Department of Basic Medical Sciences, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering and Architecture, Kirsehir Ahi Evran University, 3Department of Physiology, Gulhane Faculty of Medicine, University of Health Sciences, 4Department of Medical Services and Techniques, Medical Laboratory Techniques Program, Vocational School of Health Services, Kirsehir Ahi Evran University, 5Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Kirsehir Ahi Evran University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפעילות הביולוגית במבחנה של תמציות Terfezia claveryi התבססה על שיטת החילוץ הביופיזית ובקוטביות הממס. תמצית המים מהפקה בסיוע השרייה (MAE) הציגה את הפעילות הנוגדת חמצון החזקה ביותר, בעוד שתמצית ה-Soxhlet (SE) גרמה לציטטוקסיות גבוהה יותר בתאי SH-SY5Y. תוצאות אלו מראות הבדלים ברורים התלויים בשיטה בפעילות הביולוגית במבחנה של תמציות Terfezia claveryi.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טרפזיה קלברי היא כמהין מדברית אכילה הנאכלת באופן מסורתי באזורים צחיחים. בשנים האחרונות הוא זכה לעניין מדעי גובר בשל תכונותיו הפוטנציאליות כנוגדי חמצון, אנטימיקרוביאליות וטיפוליות, מה שמרמז על יישומים אפשריים במזון ובתחומים הקשורים לבריאות. עם זאת, למרות הראיות הגוברות לפוטנציאל הביולוגי שלו, השפעת אסטרטגיות חילוץ שונות על שיקום תרכובות ביואקטיביות ופרופיל הביואקטיביות החוץ-גופית של Terfezia claveryi טרם הובהר בספרות. במחקר זה, הוערכה הפעילות הביולוגית במבחנה של תמציות Terfezia claveryi שהושגו באמצעות שיטות חילוץ שונות וממסים בעלי קוטביות משתנה. נקבעה תפוקת ההוצאה, והתמציות שהושגו הוערכו לפעילויות נוגדי חמצון, אנטימיקרוביאליות, אנטיביופילם וציטוטוקסיות באמצעות מערכות בדיקה מבוססות. קיבולת נוגדי החמצון נמדדה באמצעות בדיקות 2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל (DPPH), 2,2′-אזינו-ביס (3-אתילבנזוזוזולין-6-סולפונית) (ABTS), ובדיקות FRAP (כוח נוגד חמצון מפחית ברזל), בעוד שנבדקו השפעות ציטוטוקסיות בתאי נוירובלסטומה SH-SY5Y. תפוקת החילוץ השתנתה בהתאם לשיטה ולקוטביות הממס, כאשר התפוקה הגבוהה ביותר התקבלה מהתמצית המימית שהוכנה בשיטת החילוץ בסיוע אולטרסאונד (UAE) (18.40%). נקבע כי פעילות נוגדי החמצון הראתה הבדלים משמעותיים בהתאם לשיטת החילוץ, ותמציות מימיות שהושגו בשיטת החילוץ בעזרת השרייה (MAE) הציגו פרופיל עשיר בתרכובות פנוליות יחד עם יכולת איסוף רדיקליות חזקה ביותר. ניתוח LC-MS/MS של תמצית זו חשף נוכחות של תשע תרכובות פנוליות; חומצה קווינית וחומצה כלורוגנית זוהו כרכיבים הדומיננטיים. לעומת זאת, תמציות שמקורן ב-Soxhlet גרמו להשפעות ציטוטוקסיות מוגברות בתאי SH-SY5Y. תגובות אנטימיקרוביאליות ואנטיביופילם הראו שונות מוגבלת יחסית בין שיטות החילוץ, מה שמעיד על תלות חלשה יותר באסטרטגיית החילוץ לפעילויות אלו. בסך הכול, ממצאים אלו מראים כי שיטת החילוץ הביופיזיקלית ובחירת הממס הן גורמים קריטיים לפרופיל הביואקטיביות במבחנה של תמציות Terfezia claveryi , עם השפעות בולטות שנצפו על פעילויות נוגדי חמצון וציטוטוקסיות.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השימוש במינים שונים של פטריות לשיפור הבריאות ולמניעה ולטיפול במחלות קיים מאז ימי קדם 1,2,3. המאקרופטריות מסווגות בדרך כלל לשתי קבוצות: פטריות אפיגיאוסיות והיפוגיאויות (טרפלות). הידועה בשם כמהין המדברית, Terfezia claveryi (T. claveryi) היא מין כמהין מוכר ואכיל בעולם, השייך לסוג Terfezia5. T. claveryi נפוצה באזורים צחיחים וחצי-צחיחים שבהם מיני Helianthemum נפוצים 6,7,8,9,10,11. בשנים האחרונות, העומס העולמי של מחלות כרוניות כמו סרטן והפרעות ניווניות נוירודגנרטיביות גדל משמעותית, מה שמדגיש את הצורך הדחוף בחומרים טיפוליים חדשים, בטוחים ויעילים. לפי דיווחי בריאות עולמיים, סרטן נותר אחד מגורמי המוות המובילים בעולם, בעוד שמחלות ניווניות ממשיכות לעלות יחד עם אוכלוסייה מזדקנת. בהינתן בעיית בריאות הציבור ההולכת וגדלה, חקירת מוצרים טבעיים שמקורם בפטריות וצמחים רפואיים כמקור פוטנציאלי לתרכובות ביואקטיביות הפכה לעדיפות מחקרחשובה 12.

במקביל, ההופעה המהירה של עמידות לאנטימיקרוביאלית מהווה איום משמעותי נוסף על הבריאות העולמית. עמידות לתרופות הפחיתה משמעותית את יעילות האנטיביוטיקה המסורתית, ויצרה צורך דחוף באסטרטגיות אנטימיקרוביאליות חלופיות13. מטבוליטים משניים שמקורם במקורות טבעיים, במיוחד תרכובות פנוליות ופוליפנוליות, מושכים עניין גובר בשל המנגנונים האנטי-מיקרוביאליים המגוונים שלהם ונטייה נמוכה לפתח עמידות14. לחץ חמצוני הוא גורם מכני יסודי העומד בבסיס מחלות כרוניות רבות, כולל סרטן, הפרעות ניווניות נוירודגנרטיביות ותסמונות מטבוליות. ייצור מופרז של מיני חמצן תגובתי (ROS) עלול בסופו של דבר לשבש את ההומאוסטזיס התא על ידי גרימת נזק ל-DNA, פרוקסידציה של שומנים וחמצון חלבונים. בהקשר זה, נוגדי חמצון טבעיים שיכולים לאסוף רדיקלים חופשיים ולווסת את איזון החמצון נחשבים לסוכנים מבטיחים להפחתת נזק חמצוני והתקדמות מחלה15.

כמהין עשירות בחומצות שומן בלתי רוויות, חלבונים, מינרלים, ויטמינים, חומצות אמינו, פנולים ופוליפנולים, רכיבים שנקשרו לתכונות אנטימיקרוביאליות, נוגדי חמצון ואנטי-סרטניות 16,17,18,19,20,21,22,23,24. היכולת שלהם לנוגד חמצון נקשרה ליעילותם באיסוף רדיקלים חופשיים 25,26,27. מבין מיני כמהין, T. claveryi בולט במיוחד בשל מבנהו האכילי, ערכו הכלכלי האזורי והעושר המדווח בתרכובות פנוליות23. למרות ראיות מתפתחות לגבי צריכתו המסורתית ופעילותו הביולוגית, מחקרים מקיפים החוקרים כיצד אסטרטגיות ההפקה משפיעות על הרכב הכימי וההשפעות הביולוגיות שלו נותרו מוגבלים.

ההתאוששות של תרכובות פעילות ביולוגית מהכמהין מושפעת מאוד מפרמטרי חילוץ, כולל טכניקת החילוץ המיושמת וקוטביות הממס. שיטות חילוץ ביופיזיקליות כגון חילוץ בסיוע אולטרסאונד (UAE), חילוץ בעזרת השררה (MAE) וחילוץ סוקסלט (SE) מראות הבדלים משמעותיים בקלט אנרגיה, יעילות החילוץ וסלקטיביות עבור תרכובות קוטביות28. עם זאת, רוב המחקרים הסתמכו על שיטת חילוץ אחת או מערכות ממס מוגבלות, ומחקרים שמטפלים בהשפעות שיטות אלו על פרופיל הפעילות הביולוגית במבחנה של T. claveryi מוגבלים. לכן, מחקר זה משווה באופן שיטתי בין שיטות חילוץ ביופיזיקליות שונות באמצעות ממסים בעלי קוטביות משתנה כדי להעריך את הפעילות הביולוגית במבחנה של תמציות T. claveryi . הועלתה השערה כי שיטת החילוץ וקוטביות הממס יובילו להבדלים תלויי שיטה בפעילויות הביולוגיות. בהתאם לכך, מטרות המחקר הן: (i) להשוות תפוקות חילוץ בין שיטות וממסים שונים, (ii) להעריך שונות תלויה בשיטה בפעילויות נוגדי חמצון וציטוטוקסיות, ו-(iii) לבחון תגובות אנטימיקרוביאליות ואנטיביופילם, תוך התחשבות ברגישותן לאסטרטגיית החילוץ.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערה: תהליך הניסוי הכולל להכנת וניתוח תמציות T. claveryi מסוכם סכמטית באיור 1. כל החומרים ששימשו במחקר מתוארים בטבלת החומרים.

1. אימות והכנה של חומר פטרייתי

  1. איסוף ועיבוד חומר
    הערה: כמהין T.claveryi טריות נאספו במאי 2023 מאדמות ערבות וחוליות לא מעובדות (שאינן חקלאיות) במחוז קירשהיר, אנטוליה המרכזית, טורקיה. הדגימה בוצעה בשלושה מיקומים מובחנים: כפר דדלי (38°54′15.8" צפון, 34°06′40.3" מזרח; ~1050 מטר מעל פני הים), כפר בויוקאיאפה (38°53′45.1" צפון, 34°19′37.5" מזרח; ~1020 מטר מעל פני הים), וכפר אקג'אגיל (39°01′39.9" צפון, 34°12′39.8" מזרח; ~1100 מטר מעל פני הים). אתרי האיסוף מאופיינים באקלים יבשתי חצי-צחיח, עם חורפים קרים, קייצים חמים ויבשים, וממוצע משקעים שנתי של כ-380–420 מ"מ. כל הדגימות נקטפו בעונת הפרי הטבעית מאזורים ללא פעילות חקלאית עדכנית כדי למזער זיהום אנתרופוגני פוטנציאלי.
    1. בחרו כמהין נקיות ולא פגומות, קילפו אותן ושטפו שלוש פעמים במים מזוקקים.
    2. חתכו את הדגימות לחתיכות קטנות וייבשו בצל עד להשגת משקל קבוע (כ-20 יום).
    3. טחון את החומר היבש באמצעות מטחנה מכנית ועבר דרך מסננת של 328 מיקרון (50 רשתות).
    4. אחסן את הדגימות המעובדות בשקיות זיפלוק בסביבה קרירה, יבשה וחשוכה בטמפרטורת החדר עד לניתוחים נוספים.
  2. זיהוי מולקולרי של T. claveryi
    1. בידוד DNA גנומי מדגימות מיובשות של T. claveryi לזיהוי מולקולרי.
    2. העריכו את כמות ה-DNA וטוהר ספקטרופוטומטרית.
    3. ביצוע תגובת שרשרת פולימראז לזיהוי מין (PCR) על ידי הגברת אזור המרווח הפנימי המתועתק (ITS) באמצעות פריימרים אוניברסליים ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′) ו-ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′).
    4. פתרון תוצרי הגברה של PCR באמצעות אלקטרופורזה על ג'ל אגרוז 1.5% שהוכן בבופר TAE 1x ומוצג תחת תאורת UV לאחר צביעת ברומיד אתידיום.
    5. טיהור מוצרי PCR חד-רצועה לפי הוראות היצרן29. המגברים המטוהרים של הנבדק לרצף סנגר.
    6. הרכבת קריאות רצף קדימה ואחורה לרצפי קונצנזוס באמצעות אלגוריתם תכנית הרכבת קונטיג (CAP).
    7. זהות המין אושרה על ידי השוואה בין רצף ITS הקונצנזוס לבין רצפי ייחוס הזמינים במאגרי מידע ציבוריים.
      הערה: דגימת שובר של T. claveryi נשמרה באוסף המעבדה לעיון עתידי. זיהוי המינים אושר באמצעות ניתוח מולקולרי מבוסס ITS (קובץ משלים 1).

2. הכנה וחילוץ של חומר פטרייתי

  1. הכנת תמציות T. Claveryi
    1. שקול כ-30 גרם אבקת T. claveryi מיובשת.
    2. הוסף 150 מ"ל ממס (מתנול, אצטון, n-הקסאן, אתיל אצטט או מים מזוקקים) כדי לשמור על יחס מוצק-נוזל קבוע בכל שיטות החילוץ.
    3. השתמש בממסים בדרגת אנליטית לכל הליכי החילוץ.
    4. סנן כל תמצית בלחץ מופחת באמצעות נייר מסנן איכותי.
    5. ריכזו את הסינון בלחץ מופחת בטמפרטורה של 30–45 מעלות צלזיוס באמצעות אידוי סיבובי.
    6. ייבוש בהקפאה (ליופיליזציה) של התמציות המרוכזות עד להשגת הסרה מלאה של הממס.
    7. אחסן את תמציות הנפט הגולמי היבש בטמפרטורה של −20 מעלות צלזיוס עד לניתוח נוסף.
      הערה: יש ליישם שלבי עיבוד זהים לאחר החילוץ על כל הדגימות כדי להבטיח עקביות מתודולוגית והשוואתיות.
  2. שיטות חילוץ ביופיזיקליות
    1. חילוץ בסיוע השרייה (MAE)
      1. הניחו את הדגימה האבקה של T. claveryi במיכל מיצוי סגור.
      2. הוסף את הממס שנבחר תוך שמירה על יחס קבוע בין ממס למוצק.
      3. דגרו את התערובת בטמפרטורת החדר בתנאי חשוך למשך 72 שעות.
      4. שמור על המיכלים סגורים כדי למנוע אידוי ממס.
      5. אין להפעיל ערבוב חיצוני במהלך תקופת ההשרצה.
      6. תן לתערובת לשקוע בסוף תקופת החילוץ.
      7. סנן את התמצית לפני המשך העיבוד.
    2. חילוץ סוקסלט (SE)
      הערה: ודאו שזרימת מים תקינה במעבה והימנעו מחימום יבש במהלך רפלוקס.
      1. הניחו את הדגימה האבקתית באצבעון הפקת תאית.
      2. מקם את האצבעון בתוך תא חילוץ הסוקסלט המחובר לבקבוק תחתית עגולה.
      3. הוסף את הממס הנבחר לבקבוק תוך שמירה על יחס קבוע בין ממס למוצק.
      4. חממו את הממס לריפלוקס באמצעות מעטפת חימום מבוקרת תרמוסטטית.
      5. שמור על חילוץ רציף במשך 24 שעות.
      6. שמרו על טמפרטורת ההפקה בנקודת הרתיחה של כל ממס (n-הקסאן: 68.7°C; אתיל אצטט: 77.1°C; מתנול: 64.7°C; אצטון: 56°C; מים מזוקקים: 100°C).
    3. הוצאה בסיוע אולטרסאונד (איחוד האמירויות)
      הערה: יש לעקוב אחרי הטמפרטורה באופן רציף כדי למנוע התחממות יתר במהלך סוניקציה.
      1. הניחו את דגימת T. claveryi האבקה בכלי החילוץ.
      2. הוסף את הממס שנבחר תוך שמירה על יחס קבוע בין ממס למוצק.
      3. סוניקה את התערובת בתדר קבוע של 35 קילוהרץ והספק יציאה של 520 וואט למשך 25 דקות.
      4. שמור על טמפרטורת החילוץ בכ-30 מעלות צלזיוס.
      5. הוסיפו קרח במרווחים של 5 דקות כדי לשמור על טמפרטורה בטווח של 25–28 מעלות צלזיוס במהלך הסוניקציה.
  3. יעילות חילוץ
    1. שקלו את החומר הפטרייתי היבש (Wp) לפני החילוץ.
    2. שקלו את תמצית הנפט המיובשת (Wext) לאחר הסרת הממס המלאה.
    3. חשב את יעילות החילוץ באמצעות משוואה (1).
      figure-protocol-1(1)
    4. יש להמיס מחדש כל תמצית גולמית מיובשת בממס המתאימה לה כדי להכין תמיסת מלאי בריכוז סטנדרטי של 10 מ"ג/מ"ל.
    5. הכינו תמיסות מלאי טריות לפני כל ניסוי ביואקטיביות במבחנה .
      הערה: יש לאחד את כל ריכוזי התמציות כדי להבטיח מינון דומה בין בדיקות הפעילות הביולוגית הבאות.

3. קביעת פעילות נוגדי חמצון

  1. בצע ניתוח פעילות נוגדי חמצון באמצעות בדיקות DPPH, ABTS ו-FRAP.
  2. הכינו חמישה ריכוזי תמצית שונים הנעים בין 0.25 ל-1.0 mg/mL מתמיסות מלאי טריות.
  3. בצע את כל המדידות בשלוש עותקים כדי להבטיח שחזוריות.
  4. רשמו ערכי ספיגה ספקטרופוטומטרית באמצעות קורא מיקרופלט.
    הערה: בצע את כל הבדיקות לפי פרוטוקולי ספרות מוכרים עם שינויים קלים.
  5. פעילות איסוף רדיקלי DPPH
    הערה: פעילות איסוף רדיקלי DPPH של תמציות T. claveryi הוערכה לפי השיטה המתוארת בספרות, עם שינויים קלים30. להגן על תמיסת DPPH ותערובות תגובה מחשיפה לאור.
    1. הכינו תמיסת DPPH ב-70% מתנול.
    2. כוון את תמיסת ה-DPPH לספיגה של 1.00 ± 0.02 ב-517 ננומטר.
    3. פיפטה של 50 מיקרוליטר תמצית בריכוזים שונים לתוך באר מיקרופלטה.
    4. הוסף 250 מיקרוליטר של תמיסת DPPH לכל באר.
    5. דגרו את תערובת התגובה בחושך בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
    6. מדדו את הספיגה ב-517 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרופלט.
    7. השתמש במתנול כבקרה שלילית ובחומצה אסקורבית כבקרה חיובית.
    8. בנה עקומות מינון-תגובה וחשב ערכי IC₅₀ כדי לכמת פעילות איסוף רדיקלית.
  6. פעילות איסוף רדיקלי של קטיון ABTS
    הערה: בצע את מבחן האיסוף הרדיקלי של ABTS לפי השיטה המתוארת בספרות, עם שינויים קלים31. הכינו את תמיסת הרדיקל ABTS⁺ לפחות 16 שעות לפני השימוש והגנו עליה מאור.
    1. יצרו את פתרון הרדיקלי של ABTS על ידי דגירה של תערובת התגובה בחושך בטמפרטורת החדר למשך 16 שעות.
    2. מדלל 1 מ"ל של תמיסת ABTS עם 80 מ"ל אתנול לפני הניתוח.
    3. כוונן את הספיגה של תמיסת ABTS המדוללת ל-0.80 ±-0.02 ב-734 ננומטר.
    4. פיפטה של 50 מיקרוליטר תמצית בריכוזים שונים לתוך באר מיקרופלטה.
    5. הוסף 250 מיקרוליטר של תמיסת ABTS לכל באר.
    6. דגרו את התערובת בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.
    7. מדדו את הספיגה ב-734 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרופלט.
    8. בנה עקומות מינון-תגובה וחשב ערכי IC₅₀.
  7. בדיקת כוח נוגד חמצון מפחית ברזל (FRAP)
    הערה: בצע את מבחן FRAP לפי השיטה שהוצעה בספרות, עם שינויים קלים32. הכינו את המגיב ל-FRAP טרי לפני השימוש והגנו על תערובת התגובה מאור.
    1. הכינו את תגובת ה-FRAP לפי הפרוטוקול שצוין.
    2. פיפטה של 20 מיקרוליטר תמצית בריכוזים שונים לתוך באר מיקרופלטה.
    3. הוסיפו 280 מיקרוליטר של תגובת FRAP טרייה.
    4. דגרו את תערובת התגובה בטמפרטורת החדר בחושך למשך 45 דקות.
    5. מדדו את הספיגה ב-593 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרופלט.
    6. יצר עקומת כיול באמצעות Trolox כסטנדרט.
    7. מבטאים את קיבולת נוגדי החמצון כמ"ג שקולות טרולוקס (TE) לגרם תמצית.

4. ניתוח תוכן פנולי כולל (TPC)

הערה: קבעו את התכולה הפנולית הכוללת (TPC) בתמציות T. claveryi באמצעות שיטת פולין–צ'יוקלטו כפי שמתואר בספרות, עם שינויים קלים33. הגן על תערובות התגובה מאור במהלך הדגירה. הכינו את תמיסת סודיום קרבונט טרייה לפני השימוש.

  1. הכינו תמיסות תמצית בריכוז של 1 מ"ג/מ"ל מתמיסות מלאי טריות.
  2. פיפט של 25 מיקרוליטר תמצית לבאר מיקרופלטה, הוסף 75 מיקרוליטר מים מזוקקים, ואז מוסיפים 25 מיקרוליטר של תגובת פולין–צ'יוקלטאו.
  3. דגרו את התערובת בטמפרטורת החדר למשך 6 דקות.
  4. הוסיפו 100 מיקרוליטר של תמיסת נתרן פחמתית של 7% (w/v) לכל באר.
  5. דגרו את תערובת התגובה בטמפרטורת החדר בחושך למשך 90 דקות.
  6. מדדו את הספיגה ב-665 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרופלט.
  7. הכינו עקומת כיול תוך שימוש בחומצה גאלית כסטנדרט וחישבו את התכולה הפנולית הכוללת, תוך ביטוי התוצאות כמקבילות לחומצה גאלית (GAE) למיליג של תמצית.

5. ניתוח פיטוכימי באמצעות LC-MS/MS

הערה: בצע ניתוח LC-MS/MS לפי שיטות כרומטוגרפיות שפורסמו בעבר עם שינויים קלים34. מסננים את כל הדגימות והפאזות הניידות באמצעות מסנני ממברנה של 0.22 מיקרון ומסחררים גזים מהפאזות הניידות לפני הניתוח.

  1. בחר את התמצית שמציגה את התכולה הפנולית הכוללת הגבוהה ביותר לפרופילינג פיטוכימי כמותי.
  2. בצע הפרדה כרומטוגרפית באמצעות עמודת C18 בפאזה הפוכה שנשמרת בטמפרטורה של 30°C.
  3. הכינו את השלב הנייד הכולל (A) חומצה פורמית 0.1% במים דה-יוניים ו-(B) חומצה פורמית 0.1% באצטוניטריל, קבעו את קצב הזרימה ל-0.4 מ"ל לדקה, כוונו את נפח ההזרקה ל-5 מיקרוליטר, וקבעו את זמן ההפעלה הכולל ל-17 דקות.
  4. לבצע זיהוי ספקטרומטרי מסה בתנאי יינון אלקטרוספריי (ESI) באמצעות חנקן כגז ייבוש, מעטפת ונוזל.
  5. כוונו את טמפרטורת גז הייבוש ל-350 מעלות צלזיוס עם קצב זרימה של 12 ליטר לדקה, הגדרו את טמפרטורת גז המעטפת ל-250 מעלות צלזיוס עם קצב זרימה של 5 ליטר לדקה, וכוונו את לחץ הנבולייזר ל-55 psi.
  6. הכינו עקומות כיול חיצוניות לכל תקן פנולי וכימות את האנליטים באמצעות עקומות הכיול המתאימות.

6. בדיקת פעילות אנטימיקרוביאלית

הערה: העריכו את הפעילות האנטיבקטריאלית באמצעות שיטת דיפוזיית באר האגר בהתאם לפרוטוקולים מיקרוביולוגיים מבוססים. בצע את כל ההליכים המיקרוביולוגיים בתנאים אספטיים בארון בטיחות ביולוגית. חטא את כל החומרים לפני ואחרי השימוש.

  1. בחרו את הזנים הבאים לבדיקות אנטימיקרוביאליות: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Bacillus cereus ATCC 14579, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Listeria monocytogenes ATCC 19115, Acinetobacter baumannii ATCC 17978, Shigella dysenteriae ATCC 13313, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, ו Enterobacter aerogenes ATCC 13048.
  2. החרינו כל זן חיידקי לתוך מרק טריפטון סויה (TSB) ודגרו בטמפרטורת הגדילה האופטימלית עד שמגיעים לצפיפות אופטית של OD₆₀₀ = 0.7.
  3. פזר את תרביות החיידקים באופן אחיד על לוחות טריפטון סויה אגר (TSA) באמצעות מטוש סטרילי.
  4. מכניס לתוך האגר בצורה אספטית באמצעות מקדח שעם.
  5. הוסף 100 מיקרוליטר מכל תמצית (100 מיקרוגרם/מ"ל) לבארות המתאימות.
  6. דגרו את הלוחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות.
  7. מדדו את קוטר אזורי העיכוב סביב כל באר כדי להעריך פעילות אנטימיקרוביאלית.
  8. בצע את כל הניסויים בשלושה עותקים והביע את התוצאות כערכים ממוצעים.

7. עיכוב ביופילם

הערה: העריכו את פעילות האנטיביופילם באמצעות בדיקת צביעת קריסטל סגול נגד זני חיידקים ייחוסים. בצע את כל ההליכים בתנאים אספטיים והימנע מהפרעות של ביופילמים דביקים במהלך שלבי הכביסה.

  1. בחרו ב-Escherichia coli ATCC 25922 ו-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 כזני ייחוס ותגדלו אותם ב-TSB בטמפרטורה של 37°C עד לשלב הגידול הלוגריתמי.
  2. כוונן את ההשענות החיידקיים לצפיפות אופטית של OD₆₀₀ = 0.132.
  3. פיפט 100 מיקרוליטר של תמיסות תמצית (0.625–10 מ"ג/מ"ל) ללוחות מיקרוטיטר פוליסטירן סטריליים עם 96 בארים, מוסיפים 100 מיקרוליטר של תלייה חיידקית לכל באר, ומערבבים בעדינות.
  4. דגרו את הלוחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. השתמשו בבארות המכילות TSB בלבד כבקרים ריקים ובבארות המכילות השעיה חיידקית ללא תמצית כבקרה.
  5. הסר בזהירות תאים לא דביקים למים, שטוף את הבארות פעמיים במים מזוקקים, ותן לצלחות להתייבש באוויר.
  6. הוסיפו 200 מיקרוליטר של תמיסת קריסטל סגול 0.4% (עם וולט) לכל באר ודגרו במשך 30 דקות.
  7. הסירו כתמים עודפים, שטפו את הבארות פעמיים במים מזוקקים, ותנו לצלחות להתייבש לחלוטין.
  8. הוסיפו אתנול כדי להמיס את הצבע הקשור ולמדוד ספיגות ב-595 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט.
  9. חשב את פעילות האנטיביופילם באמצעות משוואה (2).
    figure-protocol-2(2)

8. ניתוח תרבית תאים ופעילות ציטוטוקסית (בדיקת MTT)

הערה: העריכו השפעות ציטוטוקסיות באמצעות בדיקת MTT בהתאם לפרוטוקולי קיום התאים הסטנדרטיים. בצע את כל ההליכים בתנאים סטריליים בארון בטיחות ביולוגית ובמדיות ותגובות חימום מוקדם ל-37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.

  1. השגת קו תאי הנוירובלסטומה האנושי SH-SY5Y ממאגר תאים מוסמך ותרבת התאים במדיום Eagle (DMEM) המותאם של Dulbecco, בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS), 1% פניצילין/סטרפטומיצין ו-1% L-גלוטמין בבקבוקי תרבית בגודל 25 ס"מ2 .
  2. שמרו על התרביות בטמפרטורה של 37°C באטמוספירה לחה המכילה 5%CO2 והגדלת התאים לכ-80% מפגש משותף.
  3. הפרדו את התאים באמצעות טריפסיניזציה, זרעו אותם ללוחות של 96 בארות בצפיפות של 2 ×-10-4 תאים בכל באר, ודגרו במשך 24 שעות כדי לאפשר הצמדה.
  4. לטפל בתאים בתמציות T. claveryi בריכוזים של 150, 300, 600, 1200 ו-2000 מיקרוגרם/מ"ל ודגירה במשך 24 שעות.
  5. הסר את מדיום הגידול, הוסף 100 מיקרוליטר מדיום טרי המכיל 10 מיקרוליטר תמיסת MTT לכל באר, ודגר במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  6. שאיבת התווך, המסה של גבישי הפורמזן על ידי הוספת 100 מיקרוליטר דימתיל סולפוקסיד (DMSO) לכל באר, ומדידת ספיגה ב-570 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרופלט.
  7. בצע את כל הניסויים בשלושה עותקים.

figure-protocol-3
איור 1: סקירה סכמטית של זרימת העבודה הניסויית. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה רחבה יותר של איור זה.

9. ניתוח סטטיסטי

  1. לבצע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות תוכנות סטטיסטיות מתאימות ולהשוות קבוצות ביקורת וטיפול באמצעות מבחן t של סטודנט או ניתוח שונות דו-כיווני (ANOVA), לפי הצורך.
  2. לבטא את כל הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).
  3. הגדר מובהקות סטטיסטית ב-p < 0.05.
  4. ציין את המשמעות הסטטיסטית בנתונים באמצעות כוכבית כך: **** עבור p < 0.0001, *** עבור p < 0.001, ** עבור p < 0.01, ו-* עבור p < 0.05, והשתמש ב-"ns" לציון אי-מובהקות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זיהוי מולקולרי של T. claveryi
הגברת אזור ה-ITS בוצעה באמצעות הפריימרים האוניברסליים ITS1 ו-ITS4 לזיהוי מולקולרי של T. claveryi. הרצפים שהתקבלו נותחו והושוו לרצפי ייחוס במסד הנתונים של NCBI באמצעות אלגוריתם BLAST, מה שאפשר זיהוי מינים סופי (קובץ משלים 1).

יעילות חילוץ
יעילות החילוץ השתנתה בהתאם לשיטת החילוץ ולקוטביות הממס (טבלה 1). בשיטת MAE, יעילות החילוץ ירדה בסדר הבא:...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר הנוכחי מקים פלטפורמה השוואתית וסטנדרטית של חילוץ-פעילות ביולוגית עבור T. claveryi, ומראה כי אסטרטגיית החילוץ היא גורם מכריע הן להרכב הכימי והן לתפקוד הביולוגי. החוזק המתודולוגי העיקרי של פרוטוקול זה טמון בשליטה קפדנית על פרמטרי החילוץ, במיוחד יחס מוצק-נוזל קבוע, נפח ממס סטנדרטי, עיבוד זהה לאחר החילוץ והכנת תמיסת מלאי אחידה לפני הביואסאות. שלבים אלו מהווים נקודות שליטה קריטיות בזרימת העבודה. שונות בנפח הממס, הסרה לא שלמה של הממס או ריכוזי בנייה מחדש לא עקביים עלולים להטות ב...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים. כל הנתונים התומכים בממצאי מחקר זה זמינים בכתב היד הראשי ובקבצי המידע המשלים. מערכי הנתונים שנוצרו ונותחו במהלך המחקר הנוכחי זמינים מהמחבר המתאים לפי בקשה סבירה.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים הצהירו כי מחקר זה לא קיבל כל תמיכה כספית.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
לוחות מיקרוטיטר פוליסטירן 96 באריםNest Scientific701001תרבית תאים / לוחות בדיקה
ABTS (2,2'-אזינו-ביס (3-אתילבנזוזולין-6-חומצה סולפונית))סיגמא-אלדריץ'A3219מבחן איסוף רדיקלי של קטיון
אצטון (דרגה אנליטית)סיגמא-אלדריץ'179124ממס חילוץ
אצטוניטריל (דרגת LC-MS)סיגמא-אלדריץ'34851שלב נייד אורגני
Acinetobacter baumanniiATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 17978
Triple Quad LC-MS/MS עם מערכת UPLC אינפיניטי 1290אג'ילנט טכנולוגיות6460ניתוח כמותי
עמודה אנליטית (C18, 4.6 & פעמים; 100 מ"מ, 3.5 & mu; m)Agilent Technologies (זורבקס)959990-902עמודה בפאזה הפוכה
תקני נוגדי חמצון (חומצה אסקורבית / טרולוקס)סיגמא-אלדריץ'A7506 / 238813בקרות חיוביות
אנלייזרים DNA של Applied Biosystems 3730xlApplied Biosystems מנתחי DNA 3730xlמערכת ריצוף DNA
מערכות ביולוגיות יישומיות ומסחר; BigDye&Trade; ערכת ריצוף מחזורים של Terminator v3.1Applied Biosystems 4337455ערכת ריצוף סנגר
bacillus cereusATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 14579
ניתוח ביואינפורמטיקה, תוכנת BioEdit, אלגוריתם בשימוש: הרכבת CAP contigאיביס ביוסיינססNAתוכנת הרכבת רצפים
אצבעון חילוץ תאיתפישרברנד וטרייד;  11724043משמש לחילוץ סוקסלט
דימתילסולפוקסיד (DMSO)מרק102952ממס
ערכת בידוד DNA (Plant& ערכת בידוד DNA של פטריות (פולין)EurX GeneMATRIXE3595בידוד DNA 
DPPH (2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל)סיגמא-אלדריץ'D9132מבחן איסוף רדיקלי
מדיום הנשר המותאם של דולבקוגדי, DMEM-HA
אירוגנים של אנטרובקטריםATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 13048
אנטרוקוקוס פאקליסATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 29212
אשריכיה קוליATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 25922
אתנולמרק100983ממס
אתיל אצטטמרק109623ממס חילוץ
סרום בקר עוברי (FBS)קפריקורן סיינטיפיקFBS-16A
ערכת ריצוף מחזורים של BigDyeTerminator v3.1תרמופישר4337455ערכת סידור
תגובת פולין-צ'יוקלטוסיגמא-אלדריץ'  47641תכולת הפנול הכוללת
חומצה פורמיתסיגמא-אלדריץ'  33015תוסף פאזה ניידת
חומצה גאליתקרלו ארבה406335עקומת כיול
Gene MATRIX Plant& ערכת בידוד DNA של פטריותEurX E3595ערכת בידוד DNA
פריזמת GraphPad (v9)ויזואליזציה של נתונים וניתוח סטטיסטילא זמיןניתוח סטטיסטי
מעטפת חימוםאלקטרתרמי EME30500משמש לשמירת רפלוקס ממס
HighPrep & trade; מערכת ניקוי PCRMAGBIOAC-60005
קרחדרגת מעבדה—בקרת טמפרטורה באיחוד האמירויות
קלבסיאלה דלקת ריאותATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 13883
L-גלוטמיןקפריקורן סיינטיפיקגרמניה
ליסטריה מונוציטוגנסATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 19115
ליופילייזרסיינטזלא זמיןייבוש בהקפאה של תמציות
חרוז מגנטי ו-ndash; מערכת ניקוי PCR מבוססתMAGBIOAC-60005PCR
מתנולמרק106009ממס חילוץ
n-Hexaneמרק103701ממס חילוץ
פניצילין/סטרפטומיציןקפריקורן סיינטיפיקגרמניה
פסאודומונס אארוגינוסהATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 27853
נייר פילטר (מס' 541)ציטיבה1541-125 Vבתהליך סינון התמצית
אידוי סיבוביבוצ'י R10011100V101הסרת ממס
שיגלה דיזנטריהATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 13313
פחמת נתרןמרק106392ניתוח פנולי כולל
קורא מיקרופלט ננו של SPECTROstar  BMG Labtechמדידות ספיגה
סטפילוקוקוס אוראוסATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 25923
סטפילוקוקוס אפידרמידיסATCCמנאסס, וירג'יניה, ארה"בATCC 12228
תוכנת ניתוח סטטיסטי (SPSS, v23)ניתוח נתוניםNA
Thermo Scientific Nanodrop 2000 תרמו פישר סיינטיפיקND-2000
טריפטון סויה אגר (TSA)מרקגרמניה—
ציר סויה טריפטון (TSB)מרקגרמניה—
הומוגניזר אולטרסוניסיינטזSCIENTZ-650Lחילוץ בסיוע אולטרסאונד

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P. Current findings, future trends, and unsolved problems in studies of medicinal mushrooms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 89 (5), 1323-1332 (2011).
  3. Badalyan, S. Medicinal aspects of edible ectomycorrhizal mushrooms. Edible Ectomycorrhizal Mushrooms: Current Knowledge and Future Prospects. Zambonelli, A., Bonito, G. M. , Springer. Berlin, Heidelberg. 317-334 (2012).
  4. El Enshasy, H. A., Hatti-Kaul, R. Mushroom immunomodulators: unique molecules with unlimited applications. Trends Biotechnol. 31 (12), 668-677 (2013).
  5. Morte, A., Kagan-Zur, V., Navarro-Ródenas, A., Sitrit, Y. Cultivation of desert truffles—A crop suitable for arid and semi-arid zones. Agronomy. 11 (8), 1462(2021).
  6. Gutiérrez, A., Morte, A., Honrubia, M. Morphological characterization of the mycorrhiza formed by Helianthemum almeriense Pau with Terfezia claveryi Chatin and Picoa lefebvrei (Pat.) Maire. Mycorrhiza. 13 (6), 299-307 (2003).
  7. Loizides, M., Hobart, C., Konstandinides, G., Yiangou, Y. Desert truffles: the mysterious jewels of antiquity. Field Mycology. 13 (1), 17-21 (2012).
  8. Atila, F., Kazankaya, A. Terfezia species natural distributed in Türkiye and their ecologies. Mantar Dergisi. 13 (3), 119-130 (2022).
  9. Türkoğlu, A., Castellano, M., Trappe, J., Yaratanakul Güngör, M. Turkish truffles I: 18 new records for Turkey. Turkish J. Bot. 39, 359-376 (2015).
  10. Doğan, H., Kurt, F. New macrofungi records from Turkey and macrofungal diversity of Pozantı-Adana. Turkish J. Bot. 40, 209-217 (2016).
  11. İnci, Ş, Kırbağ, S. Nutritional content, antioxidant and antimicrobial activity of Terfezia claveryi Chatin. Artvin Çoruh Univ. J. For. Fac. 19 (2), 138-143 (2018).
  12. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  13. Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P T. 40 (4), 277-283 (2015).
  14. Cushnie, T. P. T., Lamb, A. J. Antimicrobial activity of flavonoids. Int. J. Antimicrob. Agents. 26 (5), 343-356 (2005).
  15. Valko, M., et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39 (1), 44-84 (2007).
  16. Morte, A., Honrubia, M., Gutiérrez, A. Biotechnology and cultivation of desert truffles. Mycorrhiza: State of the Art. Varma, A. , 467-483 (2008).
  17. Corrêa, R. C. G., et al. Biotechnological, nutritional and therapeutic uses of Pleurotus spp. related with its chemical composition: a review. Trends Food Sci Technol. 50, 103-117 (2016).
  18. Ma, G., et al. A critical review on the health promoting effects of mushrooms nutraceuticals. Food Sci. Hum. Wellness. 7 (2), 125-133 (2018).
  19. Reis, F. S., et al. Functional foods based on extracts or compounds derived from mushrooms. Trends Food Sci. Technol. 66, 48-62 (2017).
  20. Mandeel, Q. A., Al-Laith, A. A. Ethnomycological aspects of the desert truffle among native Bahraini and non-Bahraini peoples. J. Ethnopharmacol. 110 (1), 118-129 (2007).
  21. Patel, S. Food, health and agricultural importance of truffles: a review. Curr. Trends Biotechnol. Pharm. 6, 15-27 (2012).
  22. Janakat, S., Nassar, M. Hepatoprotective activity of desert truffle (Terfezia claveryi) compared with Nigella sativa in rats. Pak. J. Nutr. 9, 52-56 (2010).
  23. Al-Laith, A. A. A. Antioxidant components and activities of desert truffle (Tirmania nivea). J. Food Compos. Anal. 23 (1), 15-22 (2010).
  24. Shavit, E., Shavit, E. The medicinal value of desert truffles. Desert Truffles. Kagan-Zur, V., Roth-Bejerano, N., Sitrit, Y., Morte, A. 38, 323-340 (2014).
  25. Patel, S., et al. Potential health benefits of natural products derived from truffles. Trends Food Sci. Technol. 70, 1-8 (2017).
  26. Beara, I. N., et al. Phenolic profile, antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities of truffles. Food Chem. 165, 460-466 (2014).
  27. Dahham, S. S., et al. Antioxidant, anticancer and apoptosis properties of Terfezia claveryi. Saudi J. Biol. Sci. 25 (8), 1524-1534 (2018).
  28. Azmir, J., et al. Techniques for extraction of bioactive compounds: a review. J. Food Eng. 117 (4), 426-436 (2013).
  29. Kumar, M., Shukla, P. K. PCR targeting of ITS regions for rapid diagnosis of mycotic keratitis. J. Clin. Microbiol. 43 (2), 662-668 (2005).
  30. Bondet, V., Brand-Williams, W., Berset, C. Kinetics and mechanisms of antioxidant activity using the DPPH method. LWT Food Sci. Technol. 30, 609-615 (1997).
  31. Re, R., et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS assay. Free Radic. Biol. Med. 26 (9-10), 1231-1237 (1999).
  32. Đorđević, T. M., et al. Effect of fermentation on antioxidant properties of cereals. Food Chem. 119 (3), 957-963 (2010).
  33. Herald, T. J., et al. High-throughput micro plate assays for screening flavonoid content and DPPH-scavenging activity in sorghum bran and flour. Sci. Food Agric. 92 (11), 2326-2331 (2012).
  34. Kısa, D., et al. Evaluation of Biological Potency of two Endemic Species Integrated with in vitro and in silico Approches: LC-MS/MS Analysis of the Plants. Chem. Biodivers. 21 (3), e202301351(2024).
  35. Kumoro, A., Singh Hasan, Effects of solvent properties on the soxhlet extraction of diterpenoid lactones from andrographis paniculata leaves. ScienceAsia. 35, 306-309 (2009).
  36. Ng, Z. X., Samsuri, S. N., Yong, P. H. The antioxidant index and chemometric analysis of tannin, flavonoid, and total phenolic extracted from medicinal plant foods with the solvents of different polarities. Food Process. Preserv. 44 (9), e14680(2020).
  37. Kıvrak, İ Analytical methods applied to assess chemical composition, nutritional value and ın vitro bioactivities of Terfezia olbiensis and Terfezia claveryi from Turkey. Food Anal. Methods. 8 (5), 1279-1293 (2015).
  38. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2015).
  39. Monteiro, M., et al. Effect of extraction method and solvent system on the phenolic content and antioxidant activity of selected macro- and microalgae extracts. J. Appl. Phycol. 32 (1), 349-362 (2020).
  40. Pingret, D., et al. Degradation during application of ultrasound in food processing: A review. Food Control. 31, 593-606 (2013).
  41. Şahin, A., et al. Total phenol, antioxidant activity, fatty acid composition and mineral contents of the species of fungi known as domalan. J. Agroalimentary Process. Technol. 26 (3), 149-154 (2020).
  42. Fidan, M., et al. cytotoxic and protective effects of truffles. Anal. Biochem. 641, 114566(2022).
  43. Awika, J. M., et al. Screening methods to measure antioxidant activity of sorghum (sorghum bicolor) and sorghum products. J. Agric. Food Chem. 51 (23), 6657-6662 (2003).
  44. Gursoy, N., et al. Antioxidant activities, metal contents, total phenolics and flavonoids of seven Morchella species. Food Chem. Toxicol. 47 (9), 2381-2388 (2009).
  45. Elsayed, E., et al. Truffles: A potential source of bioactive compounds. Bioactive Compounds in Food. , CRC Press. 163-174 (2021).
  46. Elsayed, E. A., et al. Mushrooms: a potential natural source of anti-inflammatory compounds for medical applications. Mediators Inflamm. 2014, 805841(2014).
  47. Stanikunaite, R., et al. Cyclooxygenase-2 inhibitory and antioxidant compounds from the truffle Elaphomyces granulatus. Phytother. Res. 23 (4), 575-578 (2009).
  48. Doğan, H. H., Aydın, S. Determination of antimicrobial effect, antioxidant activity and phenolic contents of desert truffle in Turkey. Afr. J. Tradit. Complement. Altern. Med. 10 (4), 52-58 (2013).
  49. Abu-Odeh, A., et al. In vitro and In vivo Antidiabetic Activity, phenolic content and microscopical characterization of Terfezia claveryi. Molecules. 27 (15), 4843(2022).
  50. Nguyen, V., et al. Chlorogenic Acid: A systematic review on the biological functions, mechanistic actions, and therapeutic potentials. Nutrients. 16 (7), 924(2024).
  51. Suhag, R., et al. Mapping antioxidant mechanisms in plant extracts via reactivity kinetics inhibiting oil autoxidation. Appl. Food Res. 5 (2), 101476(2025).
  52. Harir, M., et al. Evaluation of antimicrobial activity of Terfezia arenaria extracts collected from Saharan desert against bacteria and filamentous fungi. 3 Biotech. 9 (7), 281(2019).
  53. Hamza, A., et al. Nutraceutical potential, antioxidant and antibacterial activities of Terfezia boudieri Chatin, a wild edible desert truffle from Tunisia arid zone. Arab. J. Chem. 9 (3), 383-389 (2016).
  54. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2020).
  55. Dib, S., Fortas, Z. Antimicrobial activities of desert truffle extracts and their chemical ıdentification. J. Pharm. Pharmacol. 7, 1-7 (2019).
  56. Gargano, M. B., et al. Antimicrobial activity of the extracts of Terfezia Claveryi and Tirmania Pinoyi against gram-positive and gram-negative bacteria causal agent of diseases in tomato. Chem. Eng. Trans. 58, 73-78 (2017).
  57. Khojah, H. M. J., et al. Antimicrobial efficacy of extracts of Saudi Arabian desert Terfezia claveryi truffles. Saudi J. Biol. Sci. 29 (11), 103462(2022).
  58. Akyüz, M., et al. Cytotoxicity and DNA protective effects of the Terfezia and Picoa species from the eastern region of Turkey. Istanbul J. Pharm. 51 (2), 198-203 (2021).
  59. Al Obaydi, M. F., et al. Terfezia boudieri: A Desert Truffle With Anticancer and Immunomodulatory Activities. Front. Nutr. 7, 38(2020).
  60. Pakrashi, S., et al. Quercetin alleviates 6-OHDA-caused apoptosis in SH-SY5Y cells. Toxicol. Res. 13 (4), tfae117(2024).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Terfezia ClaveryiExtraction MethodsIn Vitro BioactivityAntioxidant ActivityAntimicrobial ActivityCytotoxic ActivityUltrasound Assisted ExtractionMaceration Assisted ExtractionPhenolic CompoundsLC MS MS Analysis

Related Articles