פרוטוקול זה מציג טכניקת השתלת לב הטרוטופית צווארית ללא אזיק, מבוססת תפרים בעכברים, שנועדה לאפשר מיקום אמין של שתל לב הטרוטופי שני להערכת סבילות חיסונית ייחודית לתורם בתנאים פיזיולוגיים עם מינימום הפרעה מחומר זר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל צוואר הרחם המבוסס על תפרים ללא שרוול להשתלת לב הטרוטופית משנית להערכת סבילות חיסונית ייחודית לתורם בעכברים
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
השתלת לב הטרוטופית בעכברים היא מודל מבוסס היטב לחקירת דחיית אלוגרפט וסבילות חיסונית. במחקרי סבילות, לעיתים קרובות נדרש הצבת שתל לב הטרוטופי שני להערכת ספציפיות התורם, כאשר אזור צוואר הרחם מספק אתר אנטומי אידיאלי. בעוד שטכניקות מבוססות שרוולים מפשטות אנסטומוזה וסקולרית, שיטות אלו מציגות חומרים מלאכותיים שיכולים לקדם דלקת פרי-אנסטומוטית, לשנות המודינמיקה ולבלבל ניתוחים אימונולוגיים. בנוסף, היצרות כלי דם הנגרמות משינויים גנטיים, טיפול מדכא חיסונית, גיל מתקדם של המקבל או מצבים ניסיוניים כרוניים עלולים להקשות טכנית על מיקום השרוול בכלי דם בקוטר קטן. כאן, אנו מציגים טכניקה ללא אזיקים, מבוססת תפרים, להשתלת לב הטרוטופית צווארית בעכברים. שיטה זו מונעת שימוש בפולימרים תוך-לומינליים, שומרת על זרימת דם פיזיולוגית ומפחיתה סיבוכים הקשורים לשינוי בדינמיקת הזרימה. הפרוטוקול כולל הכנה מדוקדקת של כלי התורם והמקבל, מיקרו-אנסטומוזות מקצה לקצה של העורק הקרוטידי והווריד היוגולרי החיצוני, הערכות פטנטיות תוך ניתוח, ואסטרטגיות ניטור לאחר הניתוח. על ידי הפחתת השימוש בחומרים מלאכותיים והסתגלות לכלי דם בקוטר קטן, טכניקה זו ללא אזיקים יוצרת פלטפורמה פיזיולוגית וניתנת לשחזור להשתלת לב משנית. גישה זו מאפשרת מחקרים מכניים קפדניים של סבילות ספציפית לתורם במודלים של השתלות לב בעכברים.
מבוא
השתלת לב היא התערבות מצילת חיים עבור חולים עם אי ספיקת לב בשלב סופי1. מקבלים אלוגרפטים לבביים זקוקים לטיפול מדכא חיסון לכל החיים כדי למנוע דחייה2. למרות דיכוי חיסוני, הישרדות השתל לטווח ארוך עדיין נפגעת בשל דחייה חריפה וכרונית, במיוחד דחייה מתווכת נוגדנים (AMR) ווסקולופתיה אלוגרפטית לבבית (CAV)3. בנוסף, משטרים אלו נושאים תופעות לוואי משמעותיות, כולל נפרוטוקסיות, תסמונת מטבולית, זיהומים וממאירויות, שמפחיתות הן את שיטת השתל והן את שיעור ההישרדות של המטופל 2,4. אתגרים אלו מדגישים את הצורך הדחוף בסבילות חיסונית, מצב שבו מערכת החיסון של המקבל מקבלת את השתל מהתורם מבלי להזדקק לדיכוי חיסון לכל החיים. השגת סבילות תבטל רעילות הקשורה לתרופות, תפחית את הסיכון לזיהומים ולממאירויות, תמנע פגיעות אלואימוניות כרוניות, ותאפשר גמילה מסטרואידים, ובכך תשפר את השליטה המטבולית ותשמור על תפקוד השתל. בעוד שאסטרטגיות סבילות מרובות הראו פוטנציאל במודלים של בעלי חיים, כולל כימריזם מעורב, חסימה קוסטימולצית, עירויי תאים רגולטוריים וגישות ממוקדות גנים, התרגום הקליני נותר מוגבל 6,7,8,9. מחסום משמעותי הוא הצורך במודלים אמינים ב-in vivo שבודקים בקפדנות את הסבילות הספציפית לתורם5.
השתלת לב הטרוטופית בעכברים היא מודל ניסיוני עוצמתי ונפוץ לחקר מנגנוני דחיית אלוגרפט וסבילות 10,11,12,13,14. הזמינות של זני עכברים מוגדרים גנטית ומודלים טרנסגניים מאפשרת ניתוח קפדני של מסלולי החיסון המעורבים בפגיעת השתל ובוויסות 9,15,16. במחקרי סבילות, לעיתים נדרשת השתלת לב הטרוטופית שנייה, בין אם מותאמת לתורם או צד שלישי, כדי להעריך את ספציפיות התורם של ויסות מערכת החיסון 13,17,18. אזור צוואר הרחם מספק אתר אנטומי אידיאלי להשתלה השנייה הזו, ומציע גישה ישירה לניתוח, ניטור שתל אמין באמצעות מישוש או הדמיה, ושאיבה יעילה של רקמות לניתוחים אימונולוגיים והיסטולוגיים במורד הזרם 8,19. תכונות אלו הופכות את מודל צוואר הרחם ליקר ערך במיוחד לחקירת מנגנוני השראת סבילות ודחייה במגוון רחב של סביבות השתלה.
במהלך שלושת העשורים האחרונים תוארו מספר טכניקות השתלת לב הטרוטופית באמצעות תפרים. מחקרים מוקדמים קבעו כי הצוואר הוא אתר אפשרי להשתלת השתל ולניטור תפקודי ישיר באמצעות אנסטומוזות קצה לקצה מבוססות תפר בין כלי הדם של התורם למערכת הקרוטיד והצוואר של המקבל20. קבוצות אחרות דיווחו על תצורות שרוול ללא חפתים כאמצעי חלופי לאבטחת העורק הריאתי או האאורטה של התורם לכלי דם צוואריים21. הוצע מודל צווארי חדשני מבוסס תפרים מקצה לצד כדי לשמר את הרצף הקרוטידי הטבעי ולהתקרב יותר לגאומטריה של אנסטומוזה בטנית סטנדרטית מקצה לצד22. יחד, גישות אלו מדגישות את הרב-שימושיות של אתר צוואר הרחם וממחישות את הפשרות ההכרחיות בין מורכבות טכנית, המודינמיקה וכמות החומר הזר בממשק האנסטומטי.
טכניקת אנסטומוטיקה וסקולרית הנפוצה בהשתלת לב צוואר הרחם בעכברים היא טכניקת השרוול התוך-לומינלי 23,24,25,26. טכניקות צוואר הרחם מבוססות השרוול מציגות סטנטים תוך-לומינליים כדי לפשט אנסטומוזה מיקרווסקולרית ולהעלות את שיעורי ההצלחה הטכנית, במיוחד עבור מיקרוכירורגים פחות מנוסים 24,25,26. בעוד שגישות מבוססות אזים מפשטות את האתגר הטכני של חיבור כלי שיטה, טכניקה זו מכניסה חומר זר לאתר האנסטומטי. נוכחות פולימרים עלולה לקדם דלקת פרי-אנסטומוטית, לשנות את ההמודינמיקה המקומית, ועלולה לבלבל את ניתוחי מערכת החיסון27,28. יתרה מזאת, היצרות כלי הדם המקבלים, בין אם כתוצאה מזני עכברים מהונדסים גנטית, טיפול מדכא חיסון, גיל מתקדם של המקבל או מצבים ניסיוניים כרוניים, עלולה להקשות טכנית על מיקום השרוול בכלי דם בקוטר קטן29.
כדי להתמודד עם מגבלות אלו, פיתחנו טכניקה ללא אזיקים, מבוססת תפרים, להשתלת לב הטרוטופית צווארית. בתצורה זו, העורק הקרוטידי של המקבל מותקף מקצה לקצה לאאורטה העולה של התורם, ווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל מנותק מקצה לקצה עד לגזע הריאתי של התורם, ומספק זרימה פנימה והחוצה פשוטה לפרפוזיה כלילית (איור 1A). על ידי הפחתת השימוש בחומר סינתטי תוך-לומינלי, גישה זו מונעת מגע ישיר בין פולימר לדם באתר האנסטומטי והיא מושכת מבחינה רעיונית למחקרים המתמקדים בתגובות חיסוניות ודלקתיות מקומיות. השיטה כוללת הכנה מדוקדקת של כלי התורם והמקבל, וכן מיקרו-אנסטומוזה מקצה לקצה של העורק הקרוטידי ושל הווריד היורדי החיצוני. בנוסף, מתבצעות הערכת פטנטיות תוך ניתוח ומעקב לאחר הניתוח. בפועל, מודל צוואר הרחם ללא שרוול זה מיושם כאשר נדרש שתל לב משני לבדיקת סבילות ספציפית לתורם לאחר שתל בטני עם הישרדות ארוכת טווח, במיוחד בעכברים טרנסגניים או מדוכאים חיסונית עם כלי דם קטנים. עם זאת, הטכניקה דורשת גם מומחיות מיקרוכירורגית מתקדמת וגישה למיקרוסקופ ניתוח; מגבלות נוספות הקשורות לקשירת עורק ובחירת הנמען נדונות להלן. על ידי מתן פלטפורמה ניתנת לשחזור, טכניקה זו משפרת הן את אמינות מודלי ההשתלה המשניים ותומכת במחקרים מכניים של סבילות ייחודית לתורם במערכות עכברים. פרוטוקול זה עושה שימוש באנסטומוזה מקצה לקצה על ידי חיבור עורק הקרוטיד של המקבל לאאורטה העולה של התורם ולוריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל לגזע הריאתי של התורם, ובכך מספק פרפוזיה כלילית חזקה של השתל (איור 1B). אנסטומוזות קצה לקצה יוצרות דפוס פשוט של זרימה ויציאה, התומך באופן אמין בפרפוזיה כלילית במודל זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
עכברים נרכשו ממעבדת ג'קסון. גם עכברים זכרים וגם נקבות, בגילאי 6-10 שבועות ומשקלם 20-30 גרם בזמן השתלת הלב הראשונה בבטן, נכללו במחקר זה. התורמים והמקבלים שוכנו בתנאים מסוימים ללא פתוגנים (SPF) במתקן המכרסמים של בית החולים הכללי של מסצ'וסטס. כל ההליכים בוצעו באופן הומני בהתאם להנחיות NIH לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה. כל הניסויים בבעלי חיים אושרו ונערכו תחת פיקוח ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדית (IACUC) בבית החולים הכללי של מסצ'וסטס (מספר פרוטוקול 2020N000125). טבלת החומרים מפרטת את כל המגבים, המכשירים והציוד המשמשים בפרוטוקול זה. נדרש אישור IACUC לפני תחילת הניסויים. מאכלס ומתחזק את כל העכברים בהתאם להנחיות המוסדיות ולתקנים הרגולטוריים החלים.
1. הכנת בעלי חיים וכלים
- לפני הניתוח, יש לחטא את כל הכלים על ידי חשיפתם לאדים רוויים בטמפרטורה של 250 מעלות פרנהייט (121 מעלות צלזיוס) בלחץ למשך 20 דקות. הכלים המיקרוכירורגיים הנדרשים מוצגים באיור 2. הגן על קצות כלי המיקרוכירורגיה כדי למנוע נזק. החלף מיד כלים שבורים או מעוותים כדי לשמור על שיעורי הצלחה ניתוחיים מיטביים.
- טיפול טרום-ניתוחי למקבל
- פרוטוקול זה עושה שימוש בעכברים מקבלים שהושתלו בעבר בשתל לב הטרוטופיבטני 10,11,12. ודאו שהמקבלים בריאים, שהחתך הראשי החלים לחלוטין ונקי מזיהום, ושהשתל הבטני ממשיך לפעום. בצע את השתלת צוואר הרחם המשנית בין היום שלאחר הניתוח (POD) 50-100 לאחר השתל הבטני. משתמשים רק בנמענים עם שתל בטן מתפקד, שכן זהו פרוטוקול סבילות 8,17.
- עכברים מהירים במשך שעה עד שעתיים לפני ההליך כדי למזער את הסיכון לשאיבה. ניתן לתת אתיקה XR (בופרנורפין בשחרור ארוך, 3.25 מ"ג/ק"ג) ומלוקסיקאם (5 מ"ג/ק"ג) תת-עורית לטיפול באנלגזיה. אתיקה XR מספק הקלה ממושכת לכאבים עד 72 שעותו-30 שעות.
- הכנת תורם
- בחרו עכברים תורמים תואמים למין ולגיל מהזן המתאים בהתאם לעיצוב המחקר. במחקרי סבילות חיסונית אלוגראפט קרדיאלית, קבוצות תורם עשויות לכלול סינגני (אותו זן כמו המקבל), תורם אלוגני (אותו זן כמו תורם ההשתלה הבטנית הראשי), וגורם שלישי אלוגני (זן שונה מתורם ראשי וממקבל).
- אשר את מצב הבריאות ותקופת ההסתגלות המתאימה של כל העכברים התורמים והמקבלים לפני ההרדמה.
2. הרדמה
- השראה והרדמה ותמיכה
- השרה הרדמה עם 1% - 2.5% איזופלוראן בחמצן (זרימת 1 - 2 ליטר לדקה) באמצעות מאייד מדויק בתא השראה. שמרו על הרדמה באמצעות קונוס אף או צינור אנדוטרכיאלי. מרחו את חומר הסיכה הווטרינרי על שתי עיני העכבר כדי למנוע ייבוש בקרנית תחת הרדמה.
- אשר עומק ההרדמה על ידי היעדר רפלקס גמילה מהפדל. הניחו את החיה על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף לאורך כל התהליך.
3. קציר לב תורם
- חשיפה לתורמים
- הנח את העכבר התורם במצב שכיבה ומאובטח את הגפיים עם סרט דבק. הסר שיער וחטא את העור 3 פעמים עם מטוש אלכוהול איזופרופיל 70%.
- בצע לפרוטומיה בקו אמצעי ואחריה סטרנוטומיה אמצעית באמצעות מספריים עדינים לחשיפת חלל הבטן והחזה. הזז בעדינות את המעיים לצד שמאל עם גזה לחה. הניחו גזה ספוגה במי מלח מתחת למעיים כדי לשמור על הידרציה.
- פרפוזיה וקציר לב מתורם
- הכינו מלח קר עם הפארין (125 IU/mL) וטעינו 0.2 - 0.3 מ"ל למזרק של 0.5 מ"ל.
- קנולציה עדינה לווריד הנבוב התחתון עם מחט או קטטר של 26 - 30 גרון. להרחיב לאט 2-3 מ"ל של מלח קר עם הפאריני במשך 30 שניות. המתן לפחות 1-2 דקות כדי למקסם את ההפריניזציה.
- בצע תורקוטומיה דו-צדדית כדי לחשוף את הלב עם הדמיה מרבית. הפרד את הכלוב הקדמי של בית החזה מהצד הגבי והחזר אותו כלפי מעלה, תוך אבטחת מחט או מהדק.
- נתח באופן ישיר את רקמת החיבור בין האאורטה העולה (AA) לגזע הריאתי (PT; איור 3א).
- לחבר את הווריד החור התחתון והעליון עם תפרי ניילון של 8 - 0 קרוב ללב וחתוך את כלי הדם הקשורים מרוחק הקשורים. נתח את הפיזיותרפיסט בצורה ישירה ככל האפשר.
- לחבר את הוורידים הריאתיים השמאלי והימני יחד עם תפר ניילון 6 - 0 ולחתוך את כלי הדם הקשורים מרוחק הקשורה.
- כריתת הלב, תוך שמירה על אורך מספק של ה-AA על ידי חתך במקור העורק הברכיוצפלי והפיזיותרפיה. שמרו על הדופן הקדמית של העורק הפיזיותרפי כמה שיותר זמן. גזור את ה-AA וה-PT כדי להבטיח אנסטומוזה בטוחה (איור 3B).
- הניחו את הלב בצלחת תרבית תאים בגודל 60 מ"מ מלאה במי מלח רגילים מקוררים, והעבירו בעדינות את הלב עם תוספת של 1 מ״ל מלח הפאריני קר (125 IU/mL) דרך ה-AA או הפיזיותרפיה כדי לשטוף שאריית דם. הימנע מהזרקות בלחץ גבוה כדי למנוע בצקת שריר הלב או פגיעה בכלי דם. גזם את הכלים על הפלטה המקוררת לפי הצורך.
- הניחו את הלב בתמיסת רינגר הקרירה על קרח עד להשתלה. הלב של התורם מומלץ להשתיל בתוך 90 דקות מאיסכמיה קרה ואסור לשמר אותו יותר מ-120 דקות.
4. חשיפה לאזור צוואר הרחם של המקבל
- חתך ובידוד כלי דם
- השרה הרדמה עם 1% - 2.5% איזופלוראן בחמצן (זרימת 1 - 2 ליטר לדקה) באמצעות מאייד מדויק בתא השראה. שמרו על הרדמה עם קונוס אף או צינור אנדוטרכיאלי. לאשר עומק הרדמה מספק בהיעדר רפלקס גמילה מהפדל. הזרקו 0.5 מ"ל של תמלח חם נורמלי תת-עורית לאזור הגב של המקבל לצורך מילוי נוזלים.
- הנח את המקבל על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. תגלח את כל אזור צוואר הרחם. מקם את העכבר במצב שכיבה כשהזנב פונה למפעיל. הקישו את הראש, הגפיים והזנב עם סרט דבק, כדי להבטיח קיבוע יציב ללא מתיחה מופרזת. מרחו טיפה אחת של חומר סיכה עיניים על כל עין כדי למנוע ייבוש. חטא את עור צוואר הרחם שלוש פעמים עם מקליות אלכוהול איזופרופיל 70%.
- בצע חתך עור לאורך עם צורת T הפוכה מעל הצוואר מהסטרנום לזווית הלסת התחתונה הימנית (איור משלים 1A).
- הניעו באופן ישיר את הווריד היוגולרי החיצוני הימני (EJV) מהבריח המדיאלי הימני אל המפגש הראשי שלו. צרוב וחתך ענפים קטנים של ה-EJV (איור 4B).
- בודדו את האונה הימנית של בלוטת התריס וחתכו אותה באמצעות צריבה. חתך את שריר הסטרנומסטואיד באמצעות צריבה כדי לחשוף את עורק התרדמה הימני (CA).
- הניעו באופן ישיר את ה-CA הימני ככל האפשר מעל הפיצול של הקרוטיד (איור 4C).
- הניחו מהדק וסקולרי קטן על החלק הפרוקסימלי של ה-CA. הניחו רצועת ניילון 10-0 סביב החלק הדיסטלי בגובה הפיצול של התרדמה כדי לחסום את זרימת הדם.
- מרח רצועת ניילון 10 - 0 על החלק הפרוקסימלי של ה-EJV ברמת קלימפ ה-CA. כאשר ה-EJV מתנפח, עצור את הדימום מאתרים של ענפים קטנים שנשרפו בעבר ונחתכו. זהה את המפגש של הוורידים הרטרומנדיבולריים והאוזניים האחוריים כאשר ה-EJV מתנפח ומרח קלמפ וסקולרי קטן במפגש זה כדי לחסום את הזרימה.
- הכנה לאנסטומוזה וסקולרית
- חתך את ה-EJV וה-CA בין הליגטורה לקלמפ באמצעות מספריים עדינים.
- שטוף את פתחי הכלי במי מלח רגילים להסרת דם וקרישי דם. שמור על לחות שדה הניתוח לאורך כל הליך ההשתלה.
5. השתלת שתל
- מיקום השתל
- הניחו את שתל הלב של התורם הפוך באזור צוואר הרחם של המקבל, כאשר הפיזיותרפיה מכוונת לרוחב והאאורטה העולה (AA) מכוונת מדיאלית.
- כסו את השתל בגזה רטובה, והשאירו את הפיזיותרפיסט וה-AA חשופים. גזה מגנה ומייצבת את השתל תוך שיפור הדמיה.
- אנסטומוזה של כלי הדם
- אנסטומוס של התורם AA מקצה לקצה ל-CA של המקבל באמצעות תפרי ניילון 11 - 0 בטכניקת שרוול, עם נשיכות AA שטחיות של התורם ל-CA של המקבל. הימנעו ממתח מופרז (איור 4D).
- אנסטומוס לתורם פיזיותרפיה מקצה לקצה ל-EJV של המקבל באמצעות תפרי ניילון 11 - 0 בטכניקת שרוול, עם נשיכות פיזיותרפיה שטחיות של התורם ל-EJV של המקבל. הימנע ממתח מופרז (איור 4E).
- הסר את הקלמפ הדיסטלי של ה-EJV. הסר את מהדק ה-CA הפרוקסימלי כדי לשחזר את זרימת הדם (איור 4F). השתל אמור להתמלא מיד בדם, להפוך לאדום ולהתכווץ תוך 1-2 דקות (סרטון משלים 1). מרחו כמה טיפות של מלח חם נורמלי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס על השתל כדי לסייע בשיקום ההתכווצות.
- דחסו בעדינות את האתרים האנסטומטיים עם קצות כותנה כדי להשיג המוסטזיס.
- סגירת כיס
- מקם את השתל היטב בתוך כיס צוואר הרחם מבלי לסובב או ללחוץ על כלי הדם וקנה הנשימה.
- סגור את החתך הצווארי עם 6 - 0 תפרים נספגים עם תפר פשוט מופרע (איור משלים 1B). אין לכסות את אתר הניתוח בתחבושת; להשאיר את האזור פתוח לאוויר.
6. טיפול ומעקב לאחר הניתוח
- ניטור מיידי
- הניחו את החיה בתא התאוששות חם למשך לפחות שעה. שימו לב להתנהגויות חריגות כמו בלבול, רעידות או אי תנועה.
- הזריקו 0.3 מ"ל של מי מלח חמים רגילים תת-עורית להחלפת נוזלים. העבר את המקבל לכלוב חדש ומעוקר עם ג'ל תזונתי. בעלי חיים מושתלים לבית באופן אישי ואינם מחזירים אותם לדיור קבוצתי עד להחלמה מלאה, כפי שמעידים תנועה והתנהגות תקינה.
- מתן מלוקסיקאם (5 מ"ג/ק"ג, תת-עורית) כל 12 שעות במשך 72 שעות לאחר הניתוח. המנתח והוטרינר בודקים את בעלי החיים באופן קבוע במהלך תקופת ההחלמה.
- יש לבצע המתת חסד אנושית אם החיה מראה > ירידה במשקל גוף של 20%, נפיחות חמורה באתר הניתוח, סימני זיהום, עייפות או סימנים אחרים למצוקה באמצעות שאיפת CO₂ בהתאם להנחיות המוסדיות.
7. נקודות קצה ניסיוניות
- איסוף רקמות
- קציר שתלים בנקודות זמן קבועות מראש לניתוח היסטופתולוגי או אימונולוגי. לצורך ציטומטריית זרימה והיסטופתולוגיה, יש לאסוף רקמות 2-3 ימים לפני הפסקת הדופק הצפוי, בהתבסס על ניסויים ראשוניים.
- אספו את השתל, הטחול, בלוטות הלימפה ודגימות הדם כפי שנדרש בתכנון המחקר.
- ניתוח הישרדות
- זמן ההישרדות של השתל, המוגדר כיום שבו הדופק המוחשי מפסיק. הגדר הישרדות ארוכת טווח (סבילות) בהשתלת לב צווארית משנית כדופק שתל תורם מתמשך מעבר ל-50 יום לאחר ההשתלה, כאשר ההיסטופתולוגיה מאשרת היעדר אזורים גדולים של נמק.
- שרטט עקומות הישרדות השתל באמצעות ניתוח קפלן-מאייר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
סקירה סכמטית של הליך השתלת לב הטרוטופית צווארית ללא שרוול מוצגת באיור 1. התמונה המיקרוסקופית של האנסטומוזה הווסקולרית מוצגת באיור 1A, כאשר האאורטה העולה של התורם מאנדסטומוסת מקצה לקצה לעורק הקרוטיד של המקבל, והגזע הריאתי של התורם מוחדר מקצה לקצה לווריד היוגולרי החיצוני של המקבל. איור 1B מציג את דפוס זרימת הדם דרך השתל. הדם נכנס לאאורטה העולה של התורם מהעורק הקרוטידי המקבל, מזרז את שריר הלב דרך העורק...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מודלים של השתלות לב בעכברים מילאו תפקיד קריטי בקידום ההבנה שלנו באימונולוגיה של השתלות. מאז פיתוח המודל הבטני ההטרוטופי המקורי, מערכות אלו שימשו לאפיון המנגנונים התאיים והמולקולריים של דחייה, בדיקת משטרים מדכאי חיסון חדשניים, והערכת שינויים גנטיים בזן תורם ומקבל 8,17,31. היכולת להשתמש בעכברים גנטיים וטרנסגניים מספקת הזדמנויות ייחודיות לנתח מסלולי חיסון בסביבה מבוקרת. ממצאים ממודלים של עכברים השפ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענק 23CDA1049388 של האגודה האמריקאית ללב ל-T.J.B. ומענק המכון הלאומי לבריאות R01AI143887 ל-L.V.R.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.5 מ"ל מזרקת אינסולינסינג' | Covidien | 8881600350 | הזרקה תת-עורית |
| הזרקת כלוריד נתרן של 0.9% | BD | 1727170103 | הזרקה תוך ורידית |
| תפר ניילון 10-0 | AROSurgical Instruments | T04A10N07-13 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| תפר ניילון 11-0 | אתיקון | 9016G | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| מזרק 1 מ"ל | BD | 309659 | הזרקה תוך ורידית |
| מחט 30G X 1/2 | BD | 305106 | הזרקה תוך ורידית |
| מזרק 3 מ"ל | BD | 309657 | הזרקה תוך ורידית |
| תפר ניילון 6-0 | אתיקון | J212H | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| לוח תרבית תאים באורך 60 מ"מ | פלקון | 353002 | לשימור השתלים |
| מעטפות אלומיניום צבעוניות | כלי המדע המדויק | 20330-04 | עבור עכברים, כלי חיטוי לניתוחים מיקרוסקופיים |
| טיפים לכותנה | פישרברנד | 14-960-3M | תפסיק לדמם |
| דומונט #5 מלקחיים | כלי המדע המדויק | 11251-20 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| אתיקה XR בופרופנור (CIII) VI | RX גנריות | 86084010030 | הקלה בכאבים |
| סיסורים טובים | כלי המדע המדויק | 15400-12 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| ספוגי גזה | MEDLINE | NON25334 | הגן על השתל והאינטרסטין |
| מנורת חום עם בסיס | סיינטפיק של בריינטרי | HL-1B | טיפול לאחר הניתוח |
| הפארין נתרן | Northstar Rxllc. | 72603-412-01 | הזרקה תוך ורידית |
| איזופלוראן | באקסטר אנסטטיקה & טיפול בקריט | 1001936060 | להרדמה |
| מטושי אלכוהול איזופרופיל | BD | 326895 | חיטא את העור לפני הניתוח |
| מיקרוסקופ | קרל צייס | 303294-9903 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| מיני-טרימר | סיינטפיק של בריינטרי | CLP-88 | להסרת שיער בעכברים |
| Optixcare Eye Lube Plus | AVENTIX | OPX-4252 | חומר סיכה עיניים להגנה על העיניים במהלך ניתוח |
| אלוקסאט פיבטלי (Meloxicam) | פיבטל | 21294589 | הקלה בכאבים |
| ערכת כלי קיטור ניידת | מקסון ארג'נט | 42295143 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
| רינגר' תמיסת לקטט עם מאגר | תרמו-סיינטיפיק | AAJ67572AP | לשימור השתלים |
| משטח חימום לבעלי חיים קטנים | ק & H | HM10 | לניתוחי עכברים |
| סרט ניתוחי לבן טרנספור | 3M | 7100115870 | תקן את הגפה, הראש והזנב של העכברים במהלך ההליך |
| מהדק כלי | כלי המדע המדויק | 00398-02 | לניתוחים מיקרוסקופיים בעכברים |
מקורות
- Johnson, M., et al. Heart transplantation in the United States, 1999-2008. Am J Transplantat. 10 (4), 1035-1046 (2010).
- Nelson, J., et al. Consensus recommendations for use of maintenance immunosuppression in solid organ transplantation: Endorsed by the American College of Clinical Pharmacy, American Society of Transplantation, and the International Society for Heart and Lung Transplantation. Pharmacother J Human Pharmacol Drug Ther. 42 (8), 599-633 (2022).
- Colvin, M. M., et al. Antibody-mediated rejection in cardiac transplantation: Emerging knowledge in diagnosis and management: A scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 131 (18), 1608-1639 (2015).
- Neuberger, J. M., et al. Practical recommendations for long-term management of modifiable risks in kidney and liver transplant recipients: A guidance report and clinical checklist by the consensus on managing modifiable risk in transplantation (commit) group. Transplantation. 101 (4S), S1-S56 (2017).
- Ezekian, B., et al. Contemporary strategies and barriers to transplantation tolerance. Transplantation. 102 (8), 1213-1222 (2018).
- Lee, K. M., et al. Tgf-β-producing regulatory b cells induce regulatory t cells and promote transplantation tolerance. Eur J Immunol. 44 (6), 1728-1736 (2014).
- Kawai, T., et al. Cd154 blockade for induction of mixed chimerism and prolonged renal allograft survival in nonhuman primates. Am J Transplantat. 4 (9), 1391-1398 (2004).
- Borges, T. J., et al. Overexpression of pd-1 on t cells promotes tolerance in cardiac transplantation via icos-dependent mechanisms. JCI Insight. 6 (24), e142909(2021).
- Liao, M., et al. Pd-l1 on ex-vivo expanded toll-like-receptor-bregs prevents allograft rejection by breg viability promotion, cd4(+)t effector cell suppression, and tregs induction. Am J Transplant. , (2025).
- Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic heart transplantation in mice. J Vis Exp. (6), e238(2007).
- Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine Heterotop Heart Transplant Tech. J Vis Exp. (89), e51511(2014).
- Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. A modified method for heterotopic mouse heart transplantion. J Vis Exp. (88), e51423(2014).
- Yang, C., et al. Kidney-induced systemic tolerance of heart allografts in mice. JCI Insight. 5 (18), e139331(2020).
- Yin, D., et al. A half-century of heterotopic heart transplantation in mice: The spearhead of immunology research. Transplantology. 5 (4), 298-311 (2024).
- Lee, K. M., et al. Suppression of allograft rejection by regulatory B cells induced via TLR signaling. JCI Insight. 7 (17), e152213(2022).
- Liao, M., et al. Marchf1 deficiency attenuates antibody-mediated rejection by modulating b cell responses. Am J Transplantat. 25 (8), S312(2025).
- Borges, T. J., et al. The inhibitory receptor siglec-e controls antigen-presenting cell activation and t cell-mediated transplant rejection. Sci Translat Med. 17 (797), eads2694(2025).
- Efe, O., et al. A humanized il-2 mutein expands tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Investigat. 134 (5), e173107(2024).
- Mendiola Pla, M., Milano, C. A., Glass, C., Bowles, D. E., Wendell, D. C. Cardiac magnetic resonance imaging characterization of acute rejection in a porcine heterotopic heart transplantation model. Plos one. 19 (6), e0304588(2024).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
- Fang, J., et al. A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice. Am J Translat Res. 5 (5), 521(2013).
- Dun, H., et al. Cervical heterotopic heart transplantation in mice using a novel suture technique. JHLT open. 7, 100164(2025).
- Ratschiller, T., et al. Heterotopic cervical heart transplantation in mice. J Vis Exp. (102), e52907(2015).
- Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model. J Vis Exp. (180), e63504(2022).
- Li, W., et al. Mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs. J Vis Exp. (184), e64089(2022).
- Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-897 (1991).
- Rosendorf, J., et al. Experimental fortification of intestinal anastomoses with nanofibrous materials in a large animal model. Sci Rep. 10 (1), 1134(2020).
- Lazar, K. M., Shetty, S., Chilkoti, A., Collier, J. H. Immune-active polymeric materials for the treatment of inflammatory diseases. Curr Opin Colloid Interf Sci. 67, 101726(2023).
- Elezaby, A., Dexheimer, R., Sallam, K. Cardiovascular effects of immunosuppression agents. Front Cardiovasc Med. 9, 981838(2022).
- Chan, G., Si, C., Nichols, M. R., Kennedy, L. Assessment of the safety and efficacy of pre-emptive use of extended-release buprenorphine for mouse laparotomy. J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (4), 381-387 (2022).
- Mendes, D. M., Borges, T., Riella, L. Oral tributyrate promotes treg-mediated immune modulation and prolongs allograft survival in murine transplant models. Am J Transplantat. 25 (8), S243-S244 (2025).
- Miller, C. L., Madsen, J. C. Targeting il-6 to prevent cardiac allograft rejection. Am J Transplantat. 22, 12-17 (2022).
- Schmitz, R., et al. B cells in transplant tolerance and rejection: Friends or foes. Transpl Int. 33 (1), 30-40 (2020).
- Fillinger, M. F., Kerns, D. B., Bruch, D., Reinitz, E. R., Schwartz, R. A. Does the end-to-end venous anastomosis offer a functional advantage over the end-to-side venous anastomosis in high-output arteriovenous grafts. J Vasc Surg. 12 (6), 676-690 (1990).
- Ribaudo, J. G., et al. Sutureless vascular anastomotic approaches and their potential impacts. Bioact Mater. 38, 73-94 (2024).
- Alghoul, M. S., et al. From simple interrupted to complex spiral: A systematic review of various suture techniques for microvascular anastomoses. Microsurgery. 31 (1), 72-80 (2011).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
