הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

Ki-67 עם יחס נויטרופיל-ללימפוציטים ויחס חיובי CD4/CD8 חיובי מנבא תגובה מוקדמת בסרטן ריאות לא קטן

229 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70014

⸱

20 במרץ 2026

 ,  ,  , 
1Department of Oncology, Binhaiwan Central Hospital of Dongguan, 2Department of internal medicine, Binhaiwan Central Hospital of Dongguan

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מאחד את הערכת התגובה המוקדמת בקרב מטופלי NSCLC המקבלים מעכבי PD-1/PD-L1 על ידי שילוב NLR בסיסי, יחס זרימה-ציטומטרי CD4/CD8, דירוג אימונוהיסטוכימיה של גידול Ki-67, והערכת RECIST 1.1 לאחר שני מחזורים, עם נקודות ביקורת איכותיות ממוקדות שחזור לאורך כל התקופה.

תקציר

מחקר זה העריך את הערך החיזוי המשולב של מצב ביטוי Ki-67 בגידול, יחס נויטרופילים ללימפוציטים בדם ההיקפי (NLR), ויחס תאי T חיוביים CD4/CD8 חיוביים להערכת תגובה קצרה טווח בחולים עם סרטן ריאות לא תאים קטנים המקבלים טיפול במעכב PD-1/PD-L1. ניתחנו בדיעבד 102 מטופלים רצופים שטופלו בבית החולים המרכזי בינהייוואן בין ינואר 2021 לאוקטובר 2023 והשלימו שני מחזורי טיפול. התגובות הוערכו באמצעות קריטריוני הערכת תגובה בגידולים מוצקים (RECIST), גרסה 1.1: 13 מטופלים השיגו תגובה מלאה, 26 תגובה חלקית, 54 מחלה יציבה ו-9 מחלה מתקדמת. לצורך הניתוח, הגדרנו תגובה כתגובה מלאה בתוספת תגובה חלקית ואי-תגובה כמחלה יציבה בתוספת מחלה מתקדמת. סקר חד-משתני זיהה מנבאים מועמדים הקשורים למצב התגובה, אשר הוזנו ברגרסיה לוגיסטית רב-משתנית מותאמת לגיל, מצב ביצועי קבוצת האונקולוגיה השיתופית המזרחית והיסטוריית עישון, וזיהוי מצב Ki-67, NLR ויחס CD4 חיובי/חיובי ל-CD8 כמנבאים עצמאיים לסיווג תגובה קצר טווח. ניתוח מאפייני תפעול מקלט תמך בהבחנה משופרת במודל הביומרקרים המשולב בהשוואה לסמנים בודדים, והדגיש גישה מעשית וזעיר-פולשנית לסטרטיפיקציה מוקדמת של תגובה בהקשר קליני זה.

מבוא

סרטן הריאות הלא-תאים קטנים (NSCLC) מהווה כמעט 85% מהמאירויות הריאתיות, והוא תת-הסוג ההיסטולוגי הנפוץ ביותר ומשפיע בעיקר על מבוגרים בגיל העמידה והמבוגריםבסין. האטיולוגיה שלו היא רב-גורמית וכוללת חשיפה לטבק, מגע ממושך עם אבק תעשייתי או מזהמים, רגישות תורשתית וחשיפה כרונית לחומרים מסרטנים סביבתיים2˒3. NSCLC בשלב מוקדם מציג לעיתים תסמינים נשימתיים לא ספציפיים וניתן לייחס אותו בטעות לבעיות דרכי נשימה נפוצות ברפואה ראשונית, מה שתורם לעיכוב בזיהוי ולשיעור גבוה של מטופלים שאובחנו בשלבים מתקדמים4-5.

בשנים האחרונות, חסימת נקודות ביקורת חיסונית הפכה לרכיב מרכזי בטיפול מערכתי ל-NSCLC מתקדם. מעכבי מוות מתוכנת 1 (PD-1) וליגנד מוות מתוכנת 1 (PD-L1) הראו תועלת קלינית מתמשכת ושיפור בהישרדות במטופלים נבחרים6. עם זאת, ההטרוגניות בתגובות נותרה משמעותית, והעומס הכלכלי והפוטנציאל לרעילות של טיפול ממושךאינם טריוויאליים. מנבאים קליניים כמו אימונוהיסטוכימיה של PD-L1 ועומס מוטציות גידול (TMB) מספקים מידע חשוב, אך לשניהם יש מגבלות מעשיות שמגבילות את הפריסה האחידה שלהם. הערכת PD-L1 יכולה להיות מושפעת מהטרוגניות תוך-גידולית ושונות בבדיקות ופלטפורמה, בעוד ש-TMB בדרך כלל דורש משאבי ריצוף, תחזור ארוך יותר ועלויות גבוהותיותר 9. מגבלות אלו הופכות את פיתוח זרימות העבודה המשתמשות בחומרים זמינים באופן שגרתי וניתנות לביצוע באמצעות בקרת איכות סטנדרטית במרכזים עם קיבולת מעבדה משתנה לרלוונטי קלינית.

מבחינה מעשית, גישה מונחית פרוטוקול המשלבת מספר קטן של סמנים ביולוגיים נגישים עשויה לתמוך בתכנון מעקב מוקדם לאחר תחילת הטיפול. לדוגמה, דגימה בסיסית סטנדרטית לפני העירוי הראשון וחלון הערכה דו-מחזורי מוגדר יכולים לסייע לרופאים לזהות מטופלים שדורשים מעקב צמוד יותר או הערכה מחודשת מוקדמת יותר, תוך שמירה על שקיפות לגבי השלבים הנדרשים לשחזור המדידות באתרים שונים. הדגש על היתכנות ושחזור רלוונטי במיוחד למאמרי פרוטוקול JoVE, שבהם השלבים המתודולוגיים ונקודות הבדיקה האיכותיות שלהם הם מרכזיים לתרומה.

Ki-67 הוא סמן התרבות גרעינית המשקף דינמיקת גדילה של גידול ונדון בהקשר למרקם החיסוני. עולה ב-Ki-67 דווח כקשור לביטוי PD-L1 וייתכן שהוא קשור לפנוטיפים של בריחה חיסונית שמעצבים את הרגישות למעכבי נקודות ביקורת חיסונית (ICIs)10. במקביל, יחס נויטרופילים ללימפוציטים (NLR) הוא אינדקס נגיש למצב דלקתי מערכתית ונחקר רבות כגורם פרוגנוסטי או מנבא בקרב מטופלים המקבלים טיפול מעכב PD-1/PD-L111. NLR גבוה יותר מתפרש בדרך כלל כמשקף סביבה מדכאת חיסון — דרך נויטרופיליה יחסית ו/או לימפופניה — ונקשר לתגובה ירודה יותר וירידה בהישרדות במספר קבוצות12. היחס ההיקפי של תאי T בין CD4 ל-CD8 חיובי מספק חלון נוסף להומאוסטזיס חיסוני אדפטיבי, והאיזון התפקודי בין תא העזר לתאי T העוזרים והציטוטוקסיים רלוונטי מבחינה מכנית לחסינות אנטי-גידולית יעילה תחת חסימת PD-1/PD-L113.

למרות ש-Ki-67, NLR ויחס CD4-חיובי/חיובי-CD8 הראו ערך פוטנציאלי כסמנים נפרדים, השימוש המשולב בהם כתהליך פעולה תפעולי ומינימלי פולשני להערכת תגובה מוקדמת ב-NSCLC נותר לא מאופיין מספיק. לכן, מחקר זה בדק האם שילוב מצב ביטוי Ki-67 של גידול עם NLR דם היקפי ויחס CD4-חיובי/חיובי CD8 משפר את סיווג התגובה לטווח קצר לאחר שני מחזורים של טיפול במעכבי PD-1/PD-L1, במטרה להנחות את הדרגת הסיכון המוקדמת ולתמוך בהערכה קלינית מחודשת בזמן בפרקטיקה שגרתית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. אתיקה ועמידה ברגולציה

  1. לקבל אישור מוועדת האתיקה של בית החולים המרכזי בבינהאיוואן בדונגגואן (אישור מס' 2021045).
  2. ודא שכל הנהלים עומדים בהצהרת הלסינקי.
  3. אשר כי ההסכמה המודעת בכתב התקבלה לפני הטיפול ותעד את סטטוס ההסכמה בתיק המחקר.

2. זיהוי מטופלים וסינון זכאות

  1. זהה מטופלים עוקבים שאובחנו עם סרטן ריאות לא קטן שהחלו טיפול במעכב חלבון מוות תאי מתוכנת 1/מעכב מוות מתוכנת 1 בין ינואר 2021 לאוקטובר 2023 במרכז המחקר.
  2. אשר אבחנה פתולוגית על ידי עיון בדוח הפתולוגיה.
  3. אשר סיום שני מחזורי טיפול והגדר מחזור אחד כ-3 שבועות.
  4. יישמו קריטריוני הכללה.
    1. אשר גיל 35–80 בתחילת הטיפול.
    2. אישור היעדר גרורות כבדיות בהדמיה בסיסית.
    3. אשר היעדר ממאיריות ראשונית אחרת.
    4. אשר זמן ההישרדות הצפוי המתועד >-12 חודשים בתיק הרפואי.
    5. לאשר זמינות של רשומות רפואיות בסיסיות מלאות ונתוני הדמיה בסיסיים.
  5. יישם קריטריונים להחרגה (הדרלה).
    1. להחריג מטופלים שעברו ניתוח לב-חזה בתוך 6 חודשים לפני תחילת הטיפול.
    2. להחריג מטופלים עם תועדה לקויה המתועדת במעקב מעקב.
    3. החריג מטופלים עם הפרעות פסיכיאטריות חמורות הפוגעות בעמידה בפרוטוקול.
    4. יש להוציא מטופלים עם חריגות המטולוגיות או קרישיות בהערכה הבסיסית.
    5. להוציא מטופלים עם זיהום פעיל חמור בתחילת הדרך.
    6. להחריג מטופלים שקיבלו אימונותרפיה או טיפול ממוקד בתוך 30 יום לפני ההרשמה.
    7. להחריג מטופלים שמפסיקים טיפול במהלך חלון ההערכה הדו-מחזורי עקב העברה, מגבלות כלכליות או מוות.
  6. הקצה מזהה מחקר ייחודי לכל מטופל זכאי והסר את כל הרשומות לפני הניתוח.
  7. אמת זכאות באופן עצמאי על ידי שני חוקרים ופתור אי-התאמות בהסכמה.
  8. רשמו את ההכרעה ביומן סינון הכולל מזהה מחקר, פריט שנבדק, תיאור אי-התאמה, שופטים ותאריך.
    הערה: יש לרשום מצבים בסיסיים שסביר להזיז את סמני הדלקת (למשל, חום, חשד קליני לזיהום או חשיפה מערכתית לקורטיקוסטרואידים) ביומן הסקר כדי לתמוך בהחלטות הדרה ופרשנות14.

3. חילוץ נתונים קליניים בסיסי

  1. שלפו משתנים בסיסיים ממערכת התיקים הרפואית האלקטרונית.
  2. רשום מין, גיל, מדד מסת גוף, רמת השכלה, מיקום הגידול, קוטר הגידול המקסימלי, שלב הגידול–קשר–גרורות, שיטת טיפול, היסטוריית עישון ומצב ביצועי קבוצת האונקולוגיה השיתופית המזרחית.
  3. ייצא את כל משתני הבסיס לגיליון אלקטרוני שלא מזוהה.
  4. נעול את מאגר הנתונים לניתוח על ידי שמירת עותק לקריאה בלבד עם חותמת זמן.
  5. אמת את דיוק הנתונים על ידי השוואה בין לפחות 10% מהערכים לרשומות המקור.
  6. רשמו תיקונים ביומן תיקונים הכולל שם שדה, ערך מקורי, ערך מתוקן, ראשי תיבות של הסוקר ותאריך.
  7. לסכם מאפייני בסיס לפי מצב תגובה ולהכין את טבלת מאפייני הבסיס לדיווח כטבלה 1.

4. איסוף דם היקפי בסיסי ויחס נויטרופילים ללימפוציטים שמקורו בהמטולוגיה

  1. איסוף דם ורידי בצום מוריד בגפה עליונה בתוך שעתיים לפני מתן המעכב הראשון באמצעות צינורות נוגדי קרישה של EDTA (ראו טבלת חומרים).
  2. הפוך כל צינור 8–10 פעמים מיד לאחר האיסוף.
  3. יש לבצע בדיקות ספירת דם מלאה בתוך שעתיים מהאיסוף באמצעות אנלייזר המטולוגיה אוטומטי (מודל שמופיע בטבלת החומרים).
  4. אמתו את מצב בקרת האיכות היומי הפנימי של האנלייזר לפני בדיקות הדגימה ורשמו את מצב העברה/כישלון בקרת האיכות, רמת הבקרה, המפעיל ומודל האנלייזר ביומן המחקר.
  5. רשם ספירת נויטרופילים מוחלטת וספירת לימפוציטים מוחלטת מהאנלייזר.
  6. חשב את יחס הנויטרופילים ללימפוציטים באמצעות הנוסחה NLR = ספירת נויטרופילים מוחלטת / ספירת לימפוציטים מוחלטת.
  7. דגימות עם קרישה או המוליזציה אינן תקינות ביומן המחקר.
  8. חזרו על בדיקת הדם באותו חלון לפני טיפול כאשר זה אפשרי קלינית ותיעדו את הסיבה לכל תוצאה חסרה או לא תקפה.
  9. רשמו את זמן איסוף הדם ואת זמן הריצה של CBC כדי לתעד את חלון הניתוח הקדם-אנליטי של ≤ שעתיים.

5. ציטומטריית זרימה ליחס תאי T חיוביים ל-CD4/CD8 חיובי

  1. Aliquot 50 מיקרו-ליטר EDTA - דם מלא נוגד קרישה לצינור זרימה בקוטר 12 ×-75 מ"מ (ראו טבלת חומרים).
  2. הוסף 20 מיקרוליטר של תגינת תת-קבוצה של תאי T בעל ארבעה צבעים המזהה את CD3, CD4, CD8 ו-CD45 באמצעות ארבעה פלואורוכרומים (ראו טבלת חומרים).
  3. מערבולת למשך 1–2 שניות ודגירה במשך 15 דקות בטמפרטורה של 20–25 מעלות צלזיוס, מוגנת מאור.
  4. הוסף 450 מיקרוליטר של תמיסת ליסינג תאי דם אדומים 1× שהוכנה מריכוז של 10× (ראו טבלת חומרים).
  5. מערבבים בהפיכה עדינה ודגרו במשך 10 דקות בטמפרטורה של 20–25 מעלות צלזיוס מוגנים מאור.
  6. הוסף 2 מ"ל מלח מפופר בפוספט (ראו טבלת חומרים) וערבב בהיפוך 3–5 פעמים.
  7. צנטריפוגה ב-350 × גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
  8. להשליך את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור.
  9. החזירו את הכדור לתלייה ב-300–500 מיקרוליטר מלח מפוזר פוספט לצורך רכישה.
  10. בצע בדיקות ביצועי ציטומטר יומיות בהתאם לזרימת העבודה של המכשיר ולרשום סטטוס מעבר/כישלון בגיליון הריצה.
  11. הגדר את מתחי הפוטומולטיפלייר באמצעות שפופרת לא מוכתמת.
  12. הרץ בקרות צבע יחיד (תאים או חרוזים) לכל פלואורוכרום.
  13. חשב את הפיצוי בתוך תוכנת הרכישה באמצעות בקרות צבע יחיד.
  14. שמור על אותן הגדרות מתח ומטריצת פיצוי לכל הדגימות באותה אצווה ותאריך רישום ותאריך, מפעיל, תמונת מצב מתח ושם קובץ הפיצוי.
  15. אספו כל דגימה בקצב זרימה נמוך עד בינוני ואספו לפחות 10,000 אירועי לימפוציטים בכל דגימה.
  16. לימפוציטים שערים המשתמשים ב-CD45 מול פיזור צדדי.
  17. סינגלטים של שער המשתמשים בשטח פיזור קדמי לעומת גובה פיזור קדמית.
  18. תאי T חיוביים ל-CD3 בשער.
  19. כמת תת-קבוצות חיוביות ל-CD4 וחיובי ל-CD8 בתוך אירועים חיוביים ל-CD3.
  20. חישבו יחס חיובי ל-CD4 / חיובי ל-CD8 באמצעות הנוסחה יחס חיובי ל-CD4 / יחס חיובי ל-CD8 = (% חיובי ל-CD4 בין חיובי ל-CD3) / (% חיובי ל-CD8 בין חיובי ל-CD3).
  21. אימות הפרדה בין אוכלוסיות חיוביות ל-CD4 וחיוביות ל-CD8 בגרפים דו-משתניים.
  22. חשב מחדש את הפיצוי ובקרות הרצה חוזרת לאחר הבחנה בחפיפה שאינה תואמת את הפרדת האוכלוסייה הצפויה.
  23. שמור גרפים מייצגים לכל אצווה (CD45/SSC, סינגלטים, שער CD3, CD4 מול CD8) וארכב אותם עם מזהה אצווה ותאריך.
    הערה: רשמו מספרי ריאגנטים ותאריכי ריצה בגיליונות הרצה פנימיים כדי לתמוך במעקב אצווה15.

6. הקצאת אימונוהיסטוכימיה של גידול Ki-67 ומצב בינארי

  1. חתכו חתכי רקמת גידול מוטמעים בפרפין בפורמלין בעומק 4 מיקרון והתקינו חתכים על שקופיות טעונות (ראו טבלת חומרים).
  2. דה-פרפין מקטעים בקסילן והחזר את המים באמצעות אתנול מדורג למים.
  3. בצע שחזור אפיטופים מושרה על ידי חום באמצעות בופר שאיבת ציטראט, pH 6 (ראו טבלת חומרים).
  4. חממו מראש את בופר השליפה לטמפרטורה קרובה לרתיחה לפני התזמון.
  5. החום מחליק בבופר השליפה למשך 20 דקות.
  6. מזיקים קרים בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות.
  7. שטוף שקופים עם בופר שטיפה כדי להסיר את שאריות תמיסת השאיבה.
  8. דגרו חלקים עם 3% מי חמצן למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
  9. שטיפה שלוש פעמים עם בופר כביסה למשך 1–2 דקות בכל שטיפה.
  10. דגרו חתכים עם נוגדן ראשוני Ki-67 (שיבוט MIB-1; נוסחה מוכנה לשימוש; ראו טבלת חומרים) למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.
  11. שטיפה שלוש פעמים עם בופר כביסה למשך 1–2 דקות בכל שטיפה.
  12. יישם מערכת זיהוי מבוססת HRP ומפתח כרוגן עם DAB בהתאם להוראות היצרן (ראו טבלת חומרים).
  13. עצרו את התפתחות הכרומוגנים על ידי שטיפה במים כאשר צביעת גרעינית נראית בבירור והרקע נשאר נמוך.
  14. מקטעי נגד צבע עם המטוקסילין, שטוף, כחול, ייבוש באמצעות אתנול מדורג, ניקוי בקסילן, והרכבה עם מדיום התקנה קבוע (ראו טבלת חומרים).
  15. בדוק חתכים תחת מיקרוסקופיית שדה בהיר ב-400×.
  16. בחר חמישה שדות גידולים שאינם חופפים והימנע מנמק, ארטיפקטים של ריסוק ותופעות קצה.
  17. ספירת לפחות 100 גרעיני גידול בכל שדה ורשמה את מספר הגרעינים עם צביעת גרעינית חומה חד-משמעית.
  18. יש לספור לפחות 500 גרעיני גידול בכל מקרה בחמשת התחומים.
  19. חשב את מדד הסימון Ki-67 ברמת המקרה באמצעות מדד תיוג הנוסחה (%) = (סך גרעיני הגידול החיוביים / סך גרעיני הגידול שנספרו) × 100%.
  20. דירוג עוצמת הצביעה לכל מקרה כ-0 (אין), 1 (צהוב בהיר), 2 (חום-צהוב) או 3 (חום כהה) תוך שימוש בעוצמה הדומיננטית על פני גרעיני הגידול שנספרו.
  21. ציון אחוז התאים החיוביים לכל מקרה כ-0 (0–5%), 1 (6–25%), 2 (26–50%), 3 (51–75%) או 4 (>75%) באמצעות מדד התיוג ברמת המקרה.
  22. חשב ציון אימונו-אקטיבי באמצעות IRS = ציון עוצמה × ציון אחוז.
  23. הקצה את מצב הביטוי Ki-67 לניתוח כ-Ki-67 שלילי ל-IRS 0–4 ו-Ki-67 חיובי ל-IRS 5–12, והשתמש בסטטוס בינארי זה באופן עקבי לאורך כל טבלאות 1–4 ופלטי המודלים.
  24. לבצע ניקוד עיוור על ידי שני פתולוגים.
  25. עיוור את שני הפתולוגים לתוצאות קליניות ולערכי סמן ביולוגי בדם.
  26. לפתור מחלוקות דירוג באמצעות סקירה משותפת ולרשום את הסיווג הסופי והתאריך.
  27. ארכיון תמונות מייצגות לכל מקרה עם זיהוי מחקר והגדלה.
  28. כלול רקמת בקרה חיובית ידועה וביקורת שלילית (השמטת נוגדן ראשוני) בכל ריצת צביעה.
  29. צביעה חוזרת במקרה של כשל בקרה או צביעה ברקע, מונעת פרשנות.
    הערה: ארכוב את גיליון הניקוד הכולל ספירות של חמישה שדות, מדד סימון, ציון עוצמה, ציון אחוזים, IRS ומצב שלילי/חיובי סופי עבור יכולת ביקורת16.

7. הערכת תגובה לאחר שני מחזורים

  1. לבצע הדמיה בסיסית לפני מחזור 1 במסגרת זרימת עבודה קלינית שגרתית.
  2. חזור על הדמיה לאחר שני מחזורי טיפול והגדר כל מחזור כ-3 שבועות.
  3. הערכת תגובת הטיפול באמצעות קריטריוני הערכת תגובה בגידולים מוצקים, גרסה 1.1. 14
  4. לבצע הערכה עיוורת עצמאית על ידי שני רדיולוגים.
  5. עיוור את שני הרדיולוגים לערכי סמנים ביולוגיים ולמידול משתנים קו-משתנים.
  6. לפתור חילוקי דעות בהסכמה ולרשום את פרטי ההכרעה (ראשי תיבות של הקורא, תאריך, החלטה סופית).
  7. סווג את קטגוריית התגובה כתגובה מלאה, תגובה חלקית, מחלה יציבה או מחלה מתקדמת לפי RECIST 1.1.
  8. הקצה תגובה מלאה + תגובה חלקית לקבוצת התגובה.
  9. שייך מחלה יציבה + מחלה מתקדמת לקבוצת הלא-תגובה.
  10. שמרו תאריכי בסיס ותאריכי הדמיה מעקב ואשרו שחלון ההערכה מתאים לשני מחזורים.
  11. ארכיון דפי מדידה של RECIST עם מזהה מחקר, קורא ותאריך לביקורת.

8. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות תוכנה סטטיסטית (ראו טבלת חומרים).
  2. הציגו משתנים רציפים בהתפזרות נורמלית כסטיית תקן ממוצעת ± והשוו קבוצות באמצעות מבחן t מדגם בלתי תלוי.
  3. הצג משתנים קטגוריים כספירות ואחוזים והשווה קבוצות באמצעות מבחן חי-ריבוע או מבחן פישר המדויק, לפי הצורך.
  4. קודד משתנים בלתי תלויים לפי סכמת הקידוד שנקבעה מראש ומקפל את טבלת הקידוד כטבלה 2.
  5. חיזוי מסך המשתמשים בניתוחים חד-משתנים ובחירת משתנים העומדים בקריטריון שנקבע מראש למידול רב-משתני.
  6. מתאים מודל רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית המשתמש בתגובה = 0 ואי-תגובה = 1 כמשתנה התלוי.
  7. התאימו את המודל הרב-משתני לגיל, מצב ביצועי קבוצת האונקולוגיה השיתופית המזרחית והיסטוריית עישון.
  8. דווח על הערכות המודל המתוקן הסופיות בטבלה 3.
  9. יצירת עקומות מאפיינים תפעוליים של מקלט עבור מנבאים בודדים ועבור המודל המשולב.
  10. קבעו ספים מבוססי ROC באמצעות מדד Youden ל-NLR ויחס חיובי/חיובי CD4 ל-CD8 ויישום הספים הנגזרים באופן עקבי בניתוחים הדיכוטומיים שדווחו בטבלה 4.
  11. סיכום ביצועי אפליה וסיווג עבור מנבאים בודדים והמודל המשולב בטבלה 4.
  12. לבצע ניתוחי רגישות תוך טיפול ביחס נויטרופילים-לימפוציטים וביחס חיובי CD4/חיובי CD8 כמנבים רציפים תחת אותו סט קידוד והתאמה לתוצאה.
  13. דווח על תוצאות ניתוח רגישות בטבלה משלימה S1.
  14. אמת את העקביות בין הערכים בטקסט כתב היד לבין הטבלאות והאיורים המתאימים, וארכב את קבצי הפלט הסופיים ואת גרסת התוכנה שבה השתמשו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מאפייני בסיס
המאפיינים הקליניים הבסיסיים של 102 מטופלים עם סרטן ריאות לא תאים קטנים מסוכמים בטבלה 1. קבוצת התגובה (תגובה מלאה + תגובה חלקית) כללה 30 גברים ו-9 נשים, בעוד שקבוצת התגובה (מחלה יציבה + מחלה מתקדמת) כללה 50 גברים ו-13 נשים (p = 0.771). בקבוצת התגובה, 79.49% מהמטופלים היו מתחת לגיל 65, לעומת 66.67% בקבוצת הלא-תגובה. לא נצפו הבדלים מובהקים סטטיסטית בין קבוצות במדד מסת הגוף, רמת השכלה, שלב הגידול–קשר–גרורות, ספירת טסיות או קוטר הגידול המרבי ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

עיכוב נקודות ביקורת חיסונית הפך לרכיב חיוני בטיפול מערכתית לסרטן ריאות מתקדם לא קטן (NSCLC), אך התועלת הקלינית המשמעותית נשארת מרוכזת בתת-קבוצה של מטופלים15˒16. הטרוגניות תגובה זו, יחד עם העלות והפוטנציאל הרעילות של טיפול ממושך, הופכות את הסטרטיפיקציה המוקדמת לרלוונטית קלינית לתכנון מעקב והערכה מחודשתבזמן 17. בפרוטוקול JoVE זה, אנו מתארים תהליך עבודה פרגמטי המשלב קריאה פרוליפרטיבית מבוססת רקמה (Ki-67 אימונוהיסטוכימיה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין אינטרסים פיננסיים מתחרים או מערכות יחסים אישיות שיכלו להשפיע על העבודה המדווחת במאמר זה.

תודות

אנו מודים למחלקה לפתולוגיה ולמעבדה המרכזית של בית החולים המרכזי ביןהאיוואן בדונגגואן על סיוע טכני באימונוהיסטוכימיה וזרימת ציטומטריה. עבודה זו נתמכה על ידי פרויקט קרן המחקר למדעי הרפואה והטכנולוגיה של גואנגדונג (מענק מס' B2022247).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אנלייזר המטולוגיה אוטומטיתאגיד SysmexXN-1000ספירת דם מלאה וחישוב NLR
מיקרוסקופ ברייטפילדאולימפוסBX53הערכה היסטולוגית
בופר שחזור אנטיגן ציטראט (pH 6.0)אבקאםab93678שליפת אנטיגן מושרה חום
ערכת מצע DABמעבדות וקטורSK-4100התפתחות כרומוגנית
צינור איסוף דם נוגד קרישה של EDTABD ביוסיינסס367525איסוף דם היקפי
ציטומטר זרימהBD ביוסיינססFACSCanto IIניתוח תת-קבוצה של תאי T
צינורות ציטומטריית זרימה (12 figure-materials-1 75 מ"מ)BD פלקון352058צינורות איסוף דגימות
חסימות רקמת גידול מוטמעות-פרפין בפורמליןארכיון פתולוגיה קליניתלא זמיןדגימות גידול של NSCLC
תגובת תת-קבוצה של תאי T בארבעה צבעים (CD3/CD4/CD8/CD45)BD ביוסיינסס340499לזיהוי תת-קבוצות לימפוציטים
כתם המטוקסיליןסיגמא-אלדריץ'H3136צביעת נגד גרעינית
ערכת זיהוי HRPדאקו (אג'ילנט)K5007מערכת זיהוי נוגדנים משנית
נוגדן ראשוני Ki-67 (שיבוט MIB-1)אבקאםab16667זיהוי אימונוהיסטוכימי
מיקרוטוםלייקה מיקרוסיסטמסRM2235חיתוך 4 figure-materials-2 מ מקטעי FFPE
סליין ממוגן בפוספט (PBS)תרמו פישר סיינטיפיק10010023שטיפת תאים והשעיה מחדש
סליידי מיקרוסקופ עם מטען חיוביתרמו פישר סיינטיפיקJ1800AMNZהתקנת חתך רקמה
תמיסת פירוק תאי דם אדומיםBD ביוסיינסס349202ליזיס אריתרוציטים לפני ציטומטריית זרימה
תוכנת ניתוח סטטיסטיIBMSPSS v26.0ניתוח נתונים

מקורות

  1. Chen, Z., et al. Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases. Nat. Rev. Cancer. 14 (8), 535-546 (2014).
  2. Kotecha, J., et al. Evaluating the delay prior to primary care presentation in patients with lung cancer: a cohort study. BJGPO Open. 5 (2), (2021).
  3. Cheng, E. S., Weber, M., Steinberg, J., Yu, X. Q. Lung cancer risk in never-smokers: An overview of environmental and genetic factors. Chin J Cancer Res. 33 (5), 548-562 (2021).
  4. Hamilton, W., Peters, T. J., Round, A., Sharp, D. What are the clinical features of lung cancer before the diagnosis is made. A population based case-control study. 60 (12), 1059-1065 (2005).
  5. Caswell, G., Seymour, J., Crosby, V. Lung cancer diagnosed following an emergency admission: Exploring patient and carer perspectives on delay in seeking help. Support Care Cancer. 25 (7), 2259-2266 (2017).
  6. Li, F., Liao, B., Wang, T., Qi, T., Wang, Y. Programmed cell death protein 1/programmed cell death protein ligand 1 immunosuppressants in advanced non-small cell lung cancer: Research progress in treatment. Front Pharmacol. 13, 918709(2022).
  7. Liao, W., Huang, J., Hutton, D., Li, Q. Cost-effectiveness analysis of first-line pembrolizumab treatment for PD-L1 positive, non-small cell lung cancer in China. J Med Econ. 22 (4), 344-349 (2019).
  8. Schneider, B. J., et al. Management of immune-related adverse events in patients treated with immune checkpoint inhibitor therapy: ASCO guideline update. J Clin Oncol. 39 (36), 4073-4126 (2021).
  9. Dong, A., Zhao, Y., Li, Z., Hu, H. PD-L1 versus tumor mutation burden: Which is the better immunotherapy biomarker in advanced non-small cell lung cancer. J Gene Med. 23 (2), e3294(2021).
  10. Mitchell, K. G., et al. Tumor cellular proliferation is associated with enhanced immune checkpoint expression in stage I non-small cell lung cancer. J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (3), 911-919.e6 (2019).
  11. Jiang, T., et al. Clinical value of neutrophil-to-lymphocyte ratio in patients with non-small-cell lung cancer treated with PD-1/PD-L1 inhibitors. Lung Cancer. 130, 76-83 (2019).
  12. Yang, T., et al. Prognostic value of derived neutrophil-to-lymphocyte ratio (dNLR) in patients with non-small cell lung cancer receiving immune checkpoint inhibitors: a meta-analysis. BMJ Open. 11 (9), e049123(2021).
  13. Su, S., et al. Predictive value of peripheral blood biomarkers in patients with non-small-cell lung cancer responding to anti-PD-1-based treatment. Cancer Immunol Immunother. 73 (1), 12(2024).
  14. Riley, L. K., Rupert, J. Evaluation of patients with leukocytosis. Fam Physician. 92 (11), 1004-1011 (2015).
  15. Cossarizza, A., et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. J Immunol. 51 (12), 2708-3145 (2021).
  16. Leung, S. C. Y., et al. Analytical validation of a standardized scoring protocol for Ki67: phase 3 of an international multicenter collaboration. NPJ Breast Cancer. 2, 16014(2016).
  17. Wang, J., Fan, X., Zhang, J. Clinical value of peripheral blood circulating tumor DNA in predicting the efficacy of immunotherapy for non-small cell lung cancer. Thorac Dis. 15 (5), 2659-2667 (2023).
  18. Li, H., van der Merwe, P. A., Sivakumar, S. Biomarkers of response to PD-1 pathway blockade. BR J Cancer. 126, 1663-1675 (2022).
  19. Sholl, L. M. Biomarkers of response to checkpoint inhibitors beyond PD-L1 in lung cancer. Mod Pathol. 35, 66-74 (2022).
  20. Narayanan, S., Guder, W. G. Preanalytical Variables and Their Influence on the Quality of Laboratory Results. EJIFCC. 13 (1), 9-12 (2001).
  21. Maecker, H. T., McCoy, J. P., Nussenblatt, R. Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol. 12 (3), 191-200 (2012).
  22. Dowsett, M., et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer working group. Natl Cancer Inst. 103 (22), 1656-1664 (2011).
  23. Eisenhauer, E. A., et al. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 45 (2), 228-247 (2009).
  24. Fenizia, F., et al. Measuring tumor mutation burden in non-small cell lung cancer: tissue versus liquid biopsy. Transl Lung Cancer Res. 7 (6), 668(2018).
  25. Royston, P., Altman, D. G., Sauerbrei, W. Dichotomizing continuous predictors in multiple regression: a bad idea. Stat Med. 25 (1), 127-141 (2006).
  26. Moons, K. G. M., et al. Transparent Reporting of a multivariable prediction model for Individual Prognosis or Diagnosis (TRIPOD): explanation and elaboration. Ann Intern Med. 162 (1), W1-W73 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

ביטוי Ki-67יחס נויטרופילים-לימפוציטיםיחס CD4 CD8מעכב PD-1מעכב PD-L1חיזוי תגובה מוקדמתסמנים ביולוגיים של גידולרגרסיה לוגיסטיתקריטריונים להערכת תגובה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.