הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

חקר המנגנון של נוסחת סאן ג'יה טונג מאי נגד טרשת עורקים באמצעות פרמקולוגיה רשת ופרוטאומיקה

198 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70080

⸱

17 באפריל 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, the Third Affiliated Clinical Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Department of Respiratory, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 3The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מראה כי נוסחת San Jie Tong Mai מפחית את טרשת עורקים בעכברי ApoE-/- על ידי ויסות מטבוליזם גלוקוקורטיקואידים המתווך על ידי Hsd11b1, ובכך משפרת דיסליפידמיה ודלקת כלי דם. פרמקולוגיה משולבת ברשת, פרוטאומיקה וניתוחים של עגינה מולקולרית חושפים מנגנון סינרגטי רב-רכיבי ורב-מטרות הבסיס להשפעתו האנטי-טרשת עורקים.

תקציר

מחקר זה נועד להבהיר את המנגנון של נוסחת San Jie Tong Mai (SJTMF) נגד טרשת עורקים (AS), אחת הסיבות המובילות לתחלואה קרדיווסקולרית. באמצעות מודלים של עכברים ב-ApoE, הראינו ש-SJTMF מעכב משמעותית את התקדמות פלאק AS. באמצעות אסטרטגיית פרמקולוגיה רשת משולבת ופרוטאומיקה, זוהו חמישה רכיבים ביואקטיביים מרכזיים: בטא-סיטוסטרול, נרינגנין, לוטאולין, איזורמנטין, ו-3beta-hydroxy-24-methylene-8-lanostene-21-oic acid. במקביל, הפרוטאומיקה חשפה 129 חלבונים הקשורים ל-AS שהובאו באופן שונה. עגינה מולקולרית אישרה אינטראקציות קשירה בזיקה גבוהה בין רכיבים אלו לבין היעד המרכזי Hsd11b1, כאשר אנרגיות הקישור שלהם כולן מתחת ל-5- קקלוריות/מול. מחקרים מכניים גילו עוד כי SJTMF עשוי לווסת את חילוף החומרים של גלוקוקורטיקואידים המתווכים על ידי Hsd11b1. ויסות זה תורם להקלה משמעותית הן בדיסליפידמיה והן בדלקת כלי דם, ובכך מדכא התפתחות AS. ביחד, עבודה זו מדגימה, לראשונה, את המנגנון החדשני שבו נוסחת רפואה סינית מסורתית מפעילה אפקטים אנטי-AS באמצעות ויסות סינרגטי רב-רכיבי של יעד HSD11b1 , ומציעה תובנות חדשות להתערבות טיפולית.

מבוא

טרשת עורקים (AS), מחלה דלקתית כרונית הפוגעת בכלי דם מערכתיים, מהווה את הבסיס הפתולוגי הראשי לאירועים קרדיווסקולריים וכלי דם מוחיים1. הפתוגנזה שלו כוללת אינטראקציות מורכבות בין גורמים גנטיים, סביבתיים, פסיכוסוציאליים ופתולוגיים רב-גורמיים, המפגינים תכונות רב-שלביות ופוליגניות. למרות שהאסטרטגיות הטיפוליות הנוכחיות – במיוחד סוכנים להורדת שומנים כמו סטטינים ומעכבי Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 (PCSK9) – מפחיתות ביעילות את רמות הכולסטרול LDL-C בצפיפות נמוכה, הן אינן מטפלות במלואן בסיכון הדלקתי השארי שמניע אירועים קרדיווסקולרייםחוזרים 2. יתרה מזאת, תופעות לוואי הקשורות לטיפול (למשל, סוכרת חדשה, מיוטוקסיות, פגיעה בכבד) מגבילות את השימוש ארוך הטווח ואת ההעצמה של טיפול מוריד שומנים 3,4. מגבלות אלו מדגישות את הצורך בגישות משלימות הממוקדות ישירות בדלקת כלי דם, כולל טיפולים אנטי-דלקתיים, כדי להפחית עוד יותר את הסיכון הקרדיווסקולרי מעבר להורדת שומנים בלבד.

ברפואה הסינית המסורתית (TCM), AS משתייכת לקטגוריות של "הפרעה בחזה" (שיונג בי) ו"הצטברות כלי דם" (מאי ג'י), כאשר "שזירה ליחה-סטזיס" (טאניו הוג'יה) מוכרת כפתוגנזה המרכזית שלו. בהנחיית עקרון "הידרותרפיה הממירה-סטזיס" (יוננג חואשוי), קבוצת המחקר שלנו פיתחה את "נוסחת סן ג'יה טונג מאי (SJTMF)" המורכבת מ-14 צמחים, כולל סלויה מילטיאוריזה (דנשן) ווויטמניה פיגרה ויטמן (שואיז'י), כדי לפתור סינרגטית עכירות ליחה, לפזר סטאזיס ולקדם שתן. מחקרים קליניים ראשוניים הראו את יעילות SJTMF בשיפור משמעותי בפרופילי השומנים ובייצוב/הפיכת פלאקים אטרוסקלרוטיים במטופלים מבוגרים עם ASקרוטיד 5. מחקרים ניסיוניים חשפו עוד את יכולתו לעכב את התקדמות AS על ידי ויסות קיטוב מקרופאגים ונתיבי אוטופגיה 6,7. עם זאת, המאפיינים הרב-רכיבים, הרב-יעדיים ורב-המסלולים של נוסחאות הרפואה הסינית מציבים אתגרים בהבהרה שיטתית של מנגנוני הרגולציה המשולבים שלהן באמצעות גישות רדוקציוניסטיות קונבנציונליות.

כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המתווכים את ההשפעות האנטי-טרשת של SJTMF ולטפל באתגרים, המחקר השתמש באסטרטגיה רב-תחומית משולבת. פרמקולוגיית הרשתות, שהוגברה על ידי הופקינס 8,9, שימשה לבניית רשת רב-ממדית של "רכיב צמחי-יעד-מסלול מחלה". גישה זו אפשרה את חיזוי התרכובות הפעילות העיקריות של SJTMF ואת היעדים הטיפוליים הפוטנציאליים להתערבות ב-AS, בהתאם לתכונות הרגולטוריות ההוליסטיות של ה-TCM. בנוסף לכך, טכנולוגיית הפרוטאומיקה, תוך ניצול ניתוח חלבונים איכותי וכמותי בקצב גבוה ודיוק רב10, ניטרה באופן דינמי שינויים בפרופיל ביטוי החלבונים הקשור ל-AS לאחר התערבות SJTMF במודלים בעלי חיים. דבר זה אפשר זיהוי מולקולות אפקטור מרכזיות ואירועי איתות, ובכך סיפק ראיות ניסיוניות לחקר מכניסטי. בהמשך, בוצעו סימולציות עגינה מולקולרית מדויקות להערכת מצבי הקישור והאנרגיות הקשירה בין היעדים המרכזיים שחזו פרמקולוגיית הרשת לבין הרכיבים הביואקטיביים המרכזיים, וסיפקו בסיס תיאורטי לאינטראקציות פוטנציאליות בין רכיב למטרה11. בהשוואה לגישות חלופיות, כמו הסתמכות בלעדית על תחזיות פרמקולוגיה ברשתות (נוטות לשיעורי חיוביות שגויות גבוהות וחוסר אימות ניסוי)12 או שילוב של פרוטאומיקה בלבד עם עגינה מולקולרית (שעשויה להיכשל בלתפוס אינטראקציות ברמת המערכת שנחזות על ידי ניתוח רשת), אסטרטגיה משולבת זו מתמודדת בסינרגיה עם מגבלות מובנות אלו13.

באמצעות שילוב טכניקות רב-ממדיות, מחקר זה שואף להבהיר באופן שיטתי את הבסיס המרכזי של חומר פרמקודינמי, רשת היעד המרכזית ומנגנוני הסינרגיה הרב-מסלולים של SJTMF. כך מספקים תמיכה תיאורטית מונעת מנגנון לקידום המודרניזציה של הרפואה הסינית הסינית ופיתוח תרופות חדשניות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו באישור ועדת הניסויים של בעלי החיים של אוניברסיטת צ'אנגצ'ון לרפואה סינית (אישור אתיקה מס' 2023521). זכרים ספציפיים ללא פתוגן (SPF) C57BL/6J ועכברים מסוג ApoE⁻/⁻ (בני 5 שבועות, 18-22 גרם) נכללו במחקר (רישיון שימוש בבעלי חיים במעבדה מס' SCXK (JI) 2023-002 ו-SCXK (SU) 2021-0013). מידע בנוגע לריגנטים ולמכשור מסופק בטבלת החומרים.

1. פרמקולוגיה רשתית

  1. חיזוי רכיבים פעילים ומטרות של SJTMF
    1. סקר את הרכיבים הפעילים של Salvia miltiorrhiza, Panax notoginseng, Artemisia scoparia, Poria cocos, Alisma plantago-aquatica L, Amomum villosum, Santalum albumL, Citrus aurantium ו-Citrus reticulata Peel באמצעות זמינות ביולוגית דרך הפה (OB) ≥ 30% ודמויות תרופה (DL) ≥ 0.18 כקריטריונים.
    2. סננו את הרכיבים הפעילים של Whitmania pigra Whitman, Bombyx batryticatus, Periostracum cicadae, Caulis Bambusae ב-Taeniam, ו-Ophicalcitum על ידי יישום חוק החמישה של ליפינסקי, עם הפרמטרים הבאים: miLogP ≤ 5, nOHNH ≤ 5, ו-nOH ≤ 10.
    3. שלבו את התרכובות המסודרות עם קודי SMILES שלהם כדי לחזות מטרות תרכובות.
      הערה: לפרטים על שני מאגרי המידע שהוזכרו לעיל, ראו את טבלת החומרים.
  2. חיזוי מטרות הקשורות ל-AS ובניית רשת "רכיב-תרופות-יעד".
    1. השתמש במסד הנתונים של GeneCards כדי לאסוף מטרות מחלות הקשורות ל-AS באמצעות מונחים סטנדרטיים של מחלה.
    2. השתמשו בתוכנת Venny 2.1 כדי לזהות את המטרות החוצות בין SJTMF ל-AS כמטרות טיפוליות פוטנציאליות ל-SJTMF עבור AS.
    3. השתמש ב-Cytoscape 3.9.1 כדי לבנות דיאגרמת רשת של "רכיב תרופות-מטרה".
      הערה: לפרטים על מסדי הנתונים שהוזכרו לעיל, ראו טבלת חומרים.

2. הסתגלות

  1. יש לאחסן את כל העכברים במתקני SPF (24 °C; 50-60% לחות; מחזור אור/חושך של 12 שעות). להציע אוכל ומים סטנדרטיים אד ליביטום. תן 7 ימים להסתגלות לפני הניסויים.

3. הכנת SJTMF

  1. הכינו את הנוסחה בת 14 עשבי תיבול הכוללות: Salvia miltiorrhiza (Dan Shen) 30 גרם, Artemisia scoparia (יין צ'ן) 10 גרם, Panax notoginseng (סן צ'י) 10 גרם, Poria cocos (פו לינג) 10 גרם, Amomum villosom (שא רן) 10 גרם, Alisma plantago-aquatica L (Ze Xie) 30 גרם, Santalum albumL (טאן שיאנג) 10 גרם, קליפת רטיקולטה הדרים (Chen Pi) 10 גרם, אורנטיום הדרים (Zhi Qiao) 10 גרם, Whitmania pigra Whitman (Shui Zhi) 10 גרם, ציקדות פריוסטרקום (Chan Tui) 10 גרם, Bombyx batryticatus (ג'יאנג קאן) 10 גרם, Caulis Bambusae בטאניאם (Zhu Ru) 10 גרם, ואופיקלציטום (Hua Rui Shi) 30 גרם.
  2. חומרים צמחיים עם דקוקט (סה"כ 1,800 גרם) 3× עם 8 נפחי מים מזוקקים (1.5 שעות לכל חילוץ).
  3. לסנן דרך גזה וניילון 100 רשת.
  4. סינון מרוכז בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס (צפיפות: 1.23-1.27). ריכוז יבש תחת לחץ מופחת בטמפרטורה של 70 מעלות צלזיוס.
  5. טחנו תמצית מיובשת באמצעות מסננת 80 רשתות (תפוקה: 20.6%).
    הערה: לאחר דוחשפורסם קודם לכן 7, העכברים קיבלו 3.56 גרם ק"ג⁻¹∙יום⁻¹ של תמצית SJTMF (מנורמלת לפי שטח פני הגוף).

4. הקמת דגם

  1. השרה AS בעכברים של ApoE באמצעות תזונה עתירה שומן של 12 שבועות (HFD; 20% שומן, 1.25% כולסטרול). מדוד את משקל הגוף במרווחי 7 ימים לצורך ניטור מטבולי.
  2. שייך עכברים C57BL/6J לקבוצת הביקורת (ביקורת, תזונה רגילה + סליין). חלק באקראי עכברים מודלים מוצלחים לארבע קבוצות: קבוצת מודל, קבוצת אטורווסטטין (0.0026 מ"ג/גרם טורבסטטין), קבוצת SJTMF-L (מינון נמוך של SJTMF, 3.56 גרם-ק"ג-1∙יום-1), קבוצת SJTMF-H (מינון גבוה של SJTMF, 7.12 גרם∙ק"ג-1∙יום-1)7. תן את כל ההתערבויות באמצעות תרמיל סטנדרטי של 0.4 מ"ל בבוקר למשך 4 שבועות.
    הערה: פתרונות המלאי של SJTMF הוכנו בהתאם לפרוטוקול7 שנקבענו. התערבויות ניסיוניות החלו בשבוע 9, כאשר מינון הבוקר שמר על קצב זמני קליני. עכברים הוגדרו כמודלים מוצלחים כאשר נצפו פלאקים אטרוסקלרוטיים ברורים באאורטה על ידי צביעת Oil RedO 7.

5. איסוף דגימות, קציר ושימור האאורטות

הערה: לאחר 4 שבועות של מתן תוך-קיבה, צם את כל העכברים במשך 12 שעות (מים אד ליביטום). מדדו את משקלי הגוף הסופיים, ואז מקריבים אותם באמצעות ניתוק צוואר הרחם תחת הרדמה.

  1. חתך את בטן העכבר עד לתהליך הזיקפואיד.
  2. בודדו את האאורטה משורש האאורטה לפיצול העורק האילי המשותף.
  3. הסר את רקמת השומן העודפת וחתך את האאורטה כ-1 ס"מ רחוק מקשת האאורטה.
  4. תקבע את האאורטה בפרפורמלדהיד או הקפיא אותה בחנקן נוזלי.
    הערה: אספו את הסרום ואחסנו את רקמות האאורטה בטמפרטורה של -80°C לניתוח עתידי.
  5. הוא מכתים
    1. הנח חתכים בקסילן ברצף למשך 20 דקות כל אחד, פעמיים בסך הכל; ואז להעביר לאתנול מוחלט למשך 10 דקות כל אחד, פעמיים בסך הכל. הידרט מקטעים על ידי מעבר דרך סדרת אתנול מדורגת יורדת (95%, 90%, 80%, 70%), 5 דקות לריכוז.
    2. צבעו ברצף עם 0.4% המטוקסילין למשך 3-8 דקות, ואז עם תמיסת אאוזין של 0.5% למשך 1-3 דקות.
      הערה: שטוף היטב עם מים מזוקקים בין השלבים.
    3. ייבוש מקטעים באמצעות סדרת אתנול עולה (95% לאתנול מוחלט), 5 דקות לכל ריכוז. ניקוי קטעים בקסילן למשך 5 דקות כל אחד, פעמיים בסך הכל. תן להתייבש באוויר לגמרי, ואז להתקין אותו עם שרף נייטרלי.
    4. התבונן תחת מיקרוסקופ וצלם תמונות.

6. הכנת חלבון כוללת מדגימות רקמת האאורטה

הערה: חלבונים בודדו מרקמות האאורטה של כל אחת משלוש קבוצות הניסוי (קבוצת הביקורת, קבוצת המודל, קבוצת SJTMF-H).

  1. הומוגניזציה של רקמות האאורטה בבופר ליזיס (1.5% SDS/100 mM Tris-HCl, pH 8.5), ואז דגירה ב-95 °C למשך 15 דקות להשגת דנאטורציה של חלבון.
  2. קיררו את הדגימות, ואז צנטריפוגות אותן ב-12,000 × גרם ו-4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות ואספו את הסופרנטנט. השקיעו את החלבונים בסופרנטנט באמצעות שיטת המשקעים באצטון.
  3. המיס מחדש את משקע החלבון (8 M אוריאה/100 מ"מ טריס-HCl, pH 8.5), ואז הכין את ערכת הבדיקה BCA לפי הוראות היצרן וקבע את ריכוז החלבון הכולל (ראו טבלת חומרים).
    הערה: עם אותה כמות חלבון בין דגימות שונות, התמיסה המומסת שימשה למילוי כל הדגימות לאותו נפח.
  4. לבצע הפחתת חלבון ואלקילציה עם TCEP ו-CAA בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה.
  5. הוסיפו טריפסין (1:50) לדגימת החלבון ודוגרו בטמפרטורה של 37°C למשך 24 שעות (ראו טבלת חומרים).
  6. השתמש ב-TFA כדי לכוון את ה-pH ל-6.0 כדי לסיים את העיכול. צנטריפוגה את הדגימה ב-12,000 × גרם למשך 15 דקות, ואז טיהור הפפטידים מהסופרנטנט באמצעות עמודת הסרת מלח SDB-RPS שיצרה בעצמך (ראו טבלת חומרים).
    הערה: הפפטיד אלואט יובש בוואקום ואוחסן בטמפרטורה של -20°C לשימוש מאוחר יותר.

7. כרומטוגרפיה נוזלית - ספקטרומטריית מסה טנדם (LC - MS/MS)

  1. הזרקו 200 ng של עיכול פפטידי בנפח הזרקה של 1 מיקרוליטר לעמודת מלכודת C18 (75 מיקרון × 2 ס"מ, 3 מיקרון, 100 אנגומטרו). הפפטידים הופרדו לאחר מכן על עמודת ניתוח C18 בפאזה הפוכה (75 מיקרון × 15 ס"מ, 1.7 מיקרון, 100 Å) בקצב זרימה של 0.3 מיקרוליטר/דקה.
  2. השתמש במים המכילים 0.1% חומצה פורמית (FA) כשלב A נייד ובאצטוניטריל (ACN) המכיל 0.1% FA כשלב נייד B (ראו טבלת חומרים). יש להניח גרדיאנט ליניארי מ-12% ל-30% B במשך 0-12 דקות, ואחר כך להעלות מ-30% ל-80% B במשך 12-15 דקות, ולשמור על 80% B בין 15-18 דקות לשטיפת עמודה. הגדר את קצב הזרימה ל-0.300 מיקרוליטר/דקה מ-0-15 דקות, ואז הגדילו אותו ל-0.400 מיקרוליטר לדקה מ-16-18 דקות. כוון את מתח הנימים ל-1500 וולט.
  3. רכוש ספקטרום MS ו-MS/MS בטווח של 100 עד 1700 מ'/z.
  4. סרוק את ניידות היונים בטווח של 0.6 עד 1.6 Vs/cm². הגדר את זמן ההצטברות וזמן הרמפה ל-50 מילישניות.

8. ניתוח תפקוד חלבון

הערה: חלבונים מבוטאים באופן שונה (DEPs) מפרוטאומיקה נחתכו עם מטרות מרכזיות מפרמקולוגיית רשת, וחלבוני המטרה החופפים נבחרו לאנוטציה פונקציונלית של אונטולוגיית גנים (GO) ולניתוח העשרת מסלולים של אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG). קטגוריות פונקציונליות ונתיבים עם P < 0.05 נחשבו למובהקים.

  1. נתח את נתוני ה-DIA הגולמיים במצב ללא ספרייה.
  2. חפש את קבצי הספקטרום מול מסד הנתונים של רצפי חלבוני העכבר.
  3. הגדר את פרמטרי החיפוש הראשיים.
    1. הפעל אפשרויות יצירת יוני קדם ליצירת ספריית ספקטרלית צפויה על ידי סיליקון.
    2. יש לציין את האנזים עם מקסימום של 2 חיתוכים שפספסו מותר (ראו טבלת חומרים).
    3. הגדר את קרבאמידומטילציה של ציסטאין (C) כשינוי קבוע.
    4. הגדר את חמצון המתיונין (M) ואצטילציה של חלבון בקצה N כשינויים משתנים.
    5. הגדר את דיוק המסה של הקדם-קורקור ואת דיוק המסה של MS1 ל-15 ppm.
    6. אפשר התאמה בין ריצות והסקת חלבון היוריסטית.
    7. הגדר את סף גילוי השגוי (FDR) ל-1% לזיהוי אמין.
  4. הרץ את ניתוח DIA-NN (1.8.2 beta 11).
    הערה: לבצע כימות ברמת חלבון באמצעות DIA-NN, וביצוע ניתוח ביואינפורמטי והדמיה באמצעות R. באופן משמעותי, DEPs נקבעו על ידי ערך P מבדיקת t וספי שינוי הקיפול של סטודנט.

9. עגינה מולקולרית

  1. הורידו את המבנה הגבישי התלת-ממדי של חלבון היעד ממסד הנתונים של RCSB PDB ושמרו אותו בפורמט PDB; בינתיים, הורידו את המבנה המולקולרי של הרכיב הפעיל המרכזי של SJTMF ממסד הנתונים PubChem ושמרו אותו בפורמט SDF.
  2. השתמש ב-PyMOL 2.6.0 לביצוע הסרת מים והידרוגנציה על מבנה החלבון המטרה, הסרת ליגנדים אנדוגניים לא רלוונטיים, ושמירה על מבנה החלבון המעובד בפורמט PDB; קבל את פרמטרי כיס העגינה דרך תוסף Getbox של PyMOL, כאשר פרמטרי תיבת הרשת מוגדרים כך: center_x = -7.2, center_y = 53.4, center_z = 30.6, size_x = 73.7, size_y = 85.9, size_z = 67.2, ומספר קונפורמציות העגינה num_modes = 10.
  3. ייבא את קובץ החלבון המעובד ואת קובץ הקובץ המורכב המרכזי של SJTMF בנפרד ל-AutoDock Tools 1.5.6 כדי להמיר את שני הקבצים לפורמט PDBQT, ואז לבצע עגינה מולקולרית עם AutoDock Vina 1.1.2 בהתבסס על פרמטרי תיבת הרשת שהוגדרו לעיל.
  4. הצג את תוצאות העגינה המולקולרית באמצעות PyMOL.

10. סטטיסטיקות

  1. בצע ניתוח סטטיסטי.
  2. מבטאים תוצאות כסטיית תקן ממוצעת ± (SD).
  3. לציין את השימוש במבחן ההבדל המשמעותי הכנה (HSD) של טוקי לניתוח פוסט-הוק לאחר אנובה חד-כיוונית כאשר הנתונים עמדו בנורמליות ובהומוגניות של השנות; יישם את מבחן Games-Howell עבור נתונים הטרוסקאדסטיים. נחשוב על p < 0.05 כמובהק סטטיסטית.
  4. הצג את הנתונים באמצעות GraphPad Prism8.0.2.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

SJTMF מדכא היווצרות פלאק אטרוסקלרוטי בעכברי ApoE-/-
כדי לחקור את ההשפעה המעכבת של SJTMF על AS, נעשה שימוש במודל עכבר ApoE למעקב אחר שינויים במשקל הגוף ולצפייה בשינויים היסטופתולוגיים באאורטה. בהשוואה לקבוצת המודל, התערבות SJTMF שיפרה את עליית המשקל בעכברים הזונו ב-HFD עם ApoE-/- (איור 1A). במיוחד, מינונים שונים של SJTMF הראו מגמה של ירידה במשקל הגוף כבר בשבוע השני של הטיפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

למרות שמחקרים קודמים הראו ש-SJTMF מפעיל השפעות אנטי-דלקתיות ומעורר קיטוב מקרופאגיםבמודלים של עכברים מסוג ApoE⁻/⁻ 6,7, המנגנונים המולקולריים הספציפיים שמאחורי פעילותו האנטי-טרשת עורקים עדיין אינם ברורים. עקרון "אותו טיפול במחלות שונות" ברפואה הסינית המסורתית נובע מההשפעות הסינרגטיות של רגולציה רב-רכיבית, רב-מטרתית ורב-מסלולים. פרמקולוגיה רשתית, עם תכונותיה ההו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי קרן המדע הטבעי של מחוז ג'ילין (מס' YDZJ202401644ZYTS).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2-כלורואצטמיד (CAA)סיגמא-אלדריץ'C0627-100G
4% Paraformaldehyde Fix SolutionSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.80096618
0.5– 10 ומיקרו; L מיקרופיפטהאפנדורף4924000029
10 & ndash; 100 ומיקרו; L מיקרופיפטהאפנדורף4924000053
20 & ndash; 200 ומיקרו; L מיקרופיפטהאפנדורף4924000061
100 & ndash; 1,000 ומיקרו; L מיקרופיפטהאפנדורף4924000088
1000 ומיקרו; טיפים ל-L Pipetteחברת NEST Life Science בע"מ.303216
10 ומיקרו; טיפים ל-L Pipetteחברת NEST Life Science בע"מ.301016
20 ומיקרו; טיפים ל-L Pipetteחברת NEST Life Science בע"מ.302106
צינור צנטריפוגה 15 מ"לחברת NEST Life Science בע"מ.601052
צינור צנטריפוגה 1.5 מ"לחברת NEST Life Science בע"מ.615601
ניסוי בעל תפוקה גבוהה - ומאגר מידע מונחה של רפואה סינית מסורתית (HERB)/http://herb.ac.cn/v2
אצטוניטריל (LC-MS)תרמו פישר סיינטיפיקA955-4
אצטון אצטוןSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10000418
מי אמוניהSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10011028
אוטוקלאבShanghai Sanshen Medical Devices Co., Ltd.YM75
אקלים PepMap (75&מיקרו; m*2 ס"מ, C18, 3&מיקרו; m, 100Å)תרמו164535
AURORA ULTIMATE (75&מיקרו; מטר*25 ס"מ, 1.6&מיקרו; m, 100Å)אורורהAUR3-25075C18-CSI
ערכת בדיקת חלבון BCAסאנגון ביוטק (שנגחאי) בע"מ.C503021-0500
צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוהה על שולחן שולחןחברת הציוד האלקטרוני של חונאן קצ'נג בע"מ.H1 - 16KR
ברומופנול כחולSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.71008060
מחמם בלוקהאנגג'ואו מיו אינסטרומנטסDKT-100
כלורופורםSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10006818
מערכת הדמיה כימלומינסצנטיתחברת טכנולוגיה האנגג'ואו שנחואה בע"מSH - 523
ספסל נקיחברת הציוד סוז'ואו ג'ינגחואה בע"מ.SW-CJ-2D
כיסוי זכוכיתחברת ציוד ניסיוני ג'יאנגסו שיטאי בע"מ.10212450C
Cytoscape v3.9.1//
DIA-NN (V1.8.1)מכון פרנסיס קריקgithub.com/vdemichev/DiaNN
תצוגה דיגיטלית אמבט מים בטמפרטורה קבועהצ'אנגג'ואו ג'ינאן לייצור מכשירים בע"מ.HH - W600
שייקר דה-סטיינינגחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.TSY-B
מכונת ייבוש מיםווהאן ג'ונג'י אלקטרוניקס בע"מJT-12J
אאוסיןחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.E8090
הטמעת פרפיןSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.69019361
אתנול אבסולוטSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10009218
מכונת הטמעהווהאן ג'ונג'י אלקטרוניקס בע"מJB-P5
פריזמת GraphPad/8.0.2
חומצה אצטית קרחוניתSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10000218
ג'ינקארדס/https://www.genecards.org/
גליצרולSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10010618
גליציןBiofroxx1275GR500
אונטולוגיית גנים (GO)/geneontology.org
המטוקסיליןחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.G1140
שייקר אופקיחברת היימן קילינבייר לייצור כלי נגינה, בע"מ, ג'יאנגסוTS - 1
עט מחסום הידרופוביסרוויסביוWG1066-1
HCIמפעל החומרים הכימיים של שיניונגGB622-89
כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהיםאג'ילנט1200
איזופרופילנוSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.80109218
Image-Pro Plusסייברנטיקה של מדיהגרסה 6.0
מערכת הדמיהניקוןDS-Fi3
מספריים מיקרו-דקים לניתוח IRISRWD Life Science Co., Ltd.S12004-09
אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG)/www.genome.jp/kegg/
סלייד מיקרוסקופחברת מדעי החיים ננטונג מיד בע"מ.PC2-301
מיקרוגלגלנז מיקרוגל למכשירים חשמליים בע"מ.P70D20TL-P4
מיני צנטריפוגהמעבדת הדרקוןD1008E
שרף נייטרליחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.G8590
NaClSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10019318
NCBI/www.ncbi.nlm.nih.gov
מטחן תאים אולטרסוניים ללא מגעSCIENTZ08-III
n-בוטנולSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.100052190
תנורשנחאי חויטאי אינסטרומנטור מפקטורינג בע"מDHG-9140A
PubChem/https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
אבקת בופר פוספט PBSחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.P1010
מיקרוטום פתולוגילייקה אינסטרומנטס בע"מ (שנגחאי)RM2016
צנטריפוגה ניידתחברת ווהאן לינגסי ביוטכנולוגיה בע"מ.D1008
R 4.5.1//
RIPA Lysis Buffer (1.5 ML)מיילונביוMA0151
נתרן דודציל סולפט (SDS)סיגמא-אלדריץ'L3771-500G
SpeedVacגמיCV200
תוכנת SPSSסטטיסטיקה של IBM SPSSגרסה 22
קשירת מלקחיים בקשירת תפריםRWD Life Science Co., Ltd.FC11001R-11
מיקרוסקופ ניתוח סטריאוRWD Life Science Co., Ltd.77001S
עמודות ספין RMCWBIOCW0597S
timsTOF Pro ספקטרומטר מסהברוקר דלטוניקסtimsTOF Pro
מסד הנתונים ופלטפורמת הניתוח של מערכות פרמקולוגיה ברפואה סינית מסורתית (TCMSP)/https://tcmspw.com/tcmsp.php
מיקסר תרמוהאנגג'ואו מיו אינסטרומנטסMTC-100
חומצה טריפלואורואצטית (TFA)סיגמא-אלדריץ'299537-500G
טריס(2-קרבוקסיאתיל)פוספין הידרוכלוריד (TCEP)סיגמא-אלדריץ'C4706-10G
טריפסיןסיגמא-אלדריץ'T575-31N-10
הומוגניזר רקמותהאנגג'ואו מיו אינסטרומנטסMT-30K
טריס(הידרוקסימתיל)אמינומתאן (בסיס טריס)סיגמא-אלדריץ'T1503-1KG
מערכת UltiMate 3000 RSLCnanoתרמו-סיינטיפיקאולטימייט 3000 RSLCnano
UniProt (2023-01-03)מכון פרנסיס קריקgithub.com/vdemichev/DiaNN
אוריאהסיגמא-אלדריץ'51456-500G
Venny2.1/https://www.bioinformatics.com.cn/static/others/jvenn/example.html
מערבל מערבולתקיילין-בלVORTEX-5
מספריים קפיציים עם ואנאסRWD Life Science Co., Ltd.S11001-08
מים (LC-MS)תרמו פישר סיינטיפיקW6-4
קסילןSinopharm Chemical Regain Co., Ltd.10023418

מקורות

  1. Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. The global burden of cardiovascular diseases and risk factors: 2020 and beyond. J Am Coll Cardiol. 74 (20), 2529-2532 (2019).
  2. Sampson, U. K., Fazio, S., Linton, M. F. Residual cardiovascular risk despite optimal LDL cholesterol reduction with statins: The evidence, etiology, and therapeutic challenges. Curr Atheroscler Rep. 14 (1), 1-10 (2012).
  3. Katzmann, J. L., Packard, C. J., Chapman, M. J., Katzmann, I., Laufs, U. Targeting rna with antisense oligonucleotides and small interfering RNA: JACC state-of-the-art review. J Am Coll Cardiol. 76 (5), 563-579 (2020).
  4. Ward, N. C., Watts, G. F., Eckel, R. H. Statin toxicity. Circ Res. 124 (2), 328-350 (2019).
  5. Xie, T., Guo, J. The effect of the San Jie Tong Mai formula on elderly patients with carotid arteriosclerosis. Chinese Journal of Gerontology. 38 (22), in Chinese 5395-5397 (2018).
  6. Li, P., et al. San Jie Tong Mai Fang protects against atherosclerosis progression by regulating macroautophagy through the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway. J Cardiovasc Pharmacol. 82 (4), 333-343 (2023).
  7. Han, H., et al. Mechanism of san jie tong mai fang in atherosclerosis attenuation by JAK/STAT-mediated inhibition of macrophage M1 polarization. J Vis Exp. (221), e68546(2025).
  8. Hopkins, A. L. Network pharmacology. Nat Biotechnol. 25 (10), 1110-1111 (2007).
  9. Hopkins, A. L. Network pharmacology: The next paradigm in drug discovery. Nat Chem Biol. 4 (11), 682-690 (2008).
  10. Vogel, C., Marcotte, E. M. Insights into the regulation of protein abundance from proteomic and transcriptomic analyses. Nat Rev Genet. 13 (4), 227-232 (2012).
  11. Pinzi, L., Rastelli, G. Molecular docking: Shifting paradigms in drug discovery. Int J Mol Sci. 20 (18), (2019).
  12. Huang, T., et al. Approaches in studying the pharmacology of Chinese medicine formulas: Bottom-up, top-down-and meeting in the middle. Chin Med. 13, 15(2018).
  13. Zhao, P., et al. Integration of transcriptomics, proteomics, metabolomics, and systems pharmacology data to reveal the therapeutic mechanism underlying the Chinese herbal BuFei Yishen formula for the treatment of chronic obstructive pulmonary disease. Mol Med Rep. 17 (4), 5247-5257 (2018).
  14. Geng, X., et al. Determining the mechanism of action of the qishan formula against lung adenocarcinoma by integration of network pharmacology, molecular docking, and proteomics. Medicine (Baltimore). 102 (13), e33384(2023).
  15. Ru, J., et al. TCMSP: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13(2014).
  16. Li, H., et al. A network pharmacology approach to determine active compounds and action mechanisms of ge-gen-qin-lian decoction for treatment of type 2 diabetes. Evid Based Complement Alternat Med. 2014, 495840(2014).
  17. El Omari, N., et al. Unveiling the molecular mechanisms: Dietary phytosterols as guardians against cardiovascular diseases. Nat Prod Bioprospect. 14 (1), 27(2024).
  18. Feng, S., et al. Intake of stigmasterol and β-sitosterol alters lipid metabolism and alleviates NAFLD in mice fed a high-fat western-style diet. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1863 (10), 1274-1284 (2018).
  19. Bodet, C., La, V. D., Epifano, F., Grenier, D. Naringenin has anti-inflammatory properties in macrophage and ex vivo human whole-blood models. J Periodontal Res. 43 (4), 400-407 (2008).
  20. Chtourou, Y., Slima, A. B., Makni, M., Gdoura, R., Fetoui, H. Naringenin protects cardiac hypercholesterolemia-induced oxidative stress and subsequent necroptosis in rats. Pharmacol Rep. 67 (6), 1090-1097 (2015).
  21. Luo, Y., Shang, P., Li, D. Luteolin: A flavonoid that has multiple cardio-protective effects and its molecular mechanisms. Front Pharmacol. 8, 692(2017).
  22. Luo, Y., et al. Isorhamnetin attenuates atherosclerosis by inhibiting macrophage apoptosis via PI3K/Akt activation and HO-1 induction. PLoS One. 10 (3), e0120259(2015).
  23. Xu, S., et al. Exploring the mechanisms of guizhifuling pills in the treatment of coronary spastic angina based on network pharmacology combined with molecular docking. Medicine (Baltimore). 103 (29), e39014(2024).
  24. Khalaf, K., et al. Cellular aspects of immunity involved in the development of atherosclerosis. Front Immunol. 16, 1461535(2025).
  25. Kadowaki, T. Insights into insulin resistance and type 2 diabetes from knockout mouse models. J Clin Invest. 106 (4), 459-465 (2000).
  26. Ginsberg, H. N. Insulin resistance and cardiovascular disease. J Clin Invest. 106 (4), 453-458 (2000).
  27. Taskinen, M. R. Diabetic dyslipidaemia: From basic research to clinical practice. Diabetologia. 46 (6), 733-749 (2003).
  28. Kamagate, A., et al. Foxo1 mediates insulin-dependent regulation of hepatic VLDL production in mice. J Clin Invest. 118 (6), 2347-2364 (2008).
  29. Mulvihill, E. E., et al. Nobiletin attenuates VLDL overproduction, dyslipidemia, and atherosclerosis in mice with diet-induced insulin resistance. Diabetes. 60 (5), 1446-1457 (2011).
  30. Rask-Madsen, C., King, G. L. Mechanisms of disease: Endothelial dysfunction in insulin resistance and diabetes. Nat Clin Pract Endocrinol Metab. 3 (1), 46-56 (2007).
  31. Han, S., et al. Macrophage insulin receptor deficiency increases ER stress-induced apoptosis and necrotic core formation in advanced atherosclerotic lesions. Cell Metab. 3 (4), 257-266 (2006).
  32. Rask-Madsen, C., et al. Loss of insulin signaling in vascular endothelial cells accelerates atherosclerosis in apolipoprotein E null mice. Cell Metab. 11 (5), 379-389 (2010).
  33. Braverman, J., Stanley, S. A. Nitric oxide modulates macrophage responses to mycobacterium tuberculosis infection through activation of hif-1α and repression of nf-κb. J Immunol. 199 (5), 1805-1816 (2017).
  34. Cao, C., et al. Ikkε knockout prevents high-fat diet-induced arterial atherosclerosis and NF-κB signaling in mice. PLoS One. 8 (5), e64930(2013).
  35. Gliozzi, M., et al. Modulation of nitric oxide synthases by oxidized LDLs: Role in vascular inflammation and atherosclerosis development. Int J Mol Sci. 20 (13), (2019).
  36. Chantong, B., Kratschmar, D. V., Nashev, L. G., Balazs, Z., Odermatt, A. Mineralocorticoid and glucocorticoid receptors differentially regulate NF-κB activity and pro-inflammatory cytokine production in murine BV-2 microglial cells. J Neuroinflammation. 9, 260(2012).
  37. Rask, E., et al. Tissue-specific dysregulation of cortisol metabolism in human obesity. J Clin Endocrinol Metab. 86 (3), 1418-1421 (2001).
  38. Livingstone, D. E., et al. Understanding the role of glucocorticoids in obesity: Tissue-specific alterations of corticosterone metabolism in obese Zucker rats. Endocrinology. 141 (2), 560-563 (2000).
  39. Kipari, T., et al. 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 deficiency in bone marrow-derived cells reduces atherosclerosis. Faseb J. 27 (4), 1519-1531 (2013).
  40. Charo, I. F., Taubman, M. B. Chemokines in the pathogenesis of vascular disease. Circ Res. 95 (9), 858-866 (2004).
  41. Hadoke, P. W., Kipari, T., Seckl, J. R., Chapman, K. E. Modulation of 11β-hydroxysteroid dehydrogenase as a strategy to reduce vascular inflammation. Curr Atheroscler Rep. 15 (5), 320(2013).
  42. Allerheiligen, S. R. Next-generation model-based drug discovery and development: Quantitative and systems pharmacology. Clin Pharmacol Ther. 88 (1), 135-137 (2010).
  43. Fleisher, B., Brown, A. N., Ait-Oudhia, S. Application of pharmacometrics and quantitative systems pharmacology to cancer therapy: The example of luminal a breast cancer. Pharmacol Res. 124, 20-33 (2017).
  44. Leil, T. A., Ermakov, S. Editorial: The emerging discipline of quantitative systems pharmacology. Front Pharmacol. 6, 129(2015).
  45. Zha, X., Ji, R., Li, Y., Cao, R., Zhou, S. Network pharmacology, molecular docking, and molecular dynamics simulation analysis reveal the molecular mechanism of halociline against gastric cancer. Mol Divers. 29 (5), 4693-4703 (2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

מנגנון התפתחות טרשהאנליזה פרוטאומיתעכברי ApoE Knockoutרכיבים ביו-אקטיבייםעגינה מולקולרית (Molecular Docking)מטבוליזם של גלוקוקורטיקואידיםדלקת כלי דםHsd11b1 כמטרה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.