בדיקת סובלנות ניקוטין ב כנימות באמצעות ניסוי דיאט מלאכותית

Summary

בסרטון זה assay הוא הוכיח כי הבדיקות סובלנות של ניקוטין שני סוגים של כנימות אחד פושט צמחי טבק בתחום ואחד לא.

Abstract

צמחים עשויים upregulate הייצור של מטבוליטים רבים seconday שונה בתגובה האכלה חרקים. אחד מהם מטבוליטים, ניקוטין, הוא יודע היטב יש תכונות חרקים. תגובה אחת של צמחי טבק herbivory, או להיות מכורסם על ידי חרקים, היא להגדיל את הייצור של אלקלואיד זה neurotoxic. כאן, נדגים כיצד להגדיר ניסוי לכתובת זו השאלה האם טבק מותאם זן של הכנימה אפרסק ירוק, persicae Myzus, יכולים לסבול רמות גבוהות של ניקוטין מאשר זן של חרק זה לא טבק שורצים ב השדה.

Protocol

בניסוי זה, 4 כנימות מבוגר מוקפים כוס פלסטיק קטנה. הם ניזונים מהתזונה נוזלי pipetted בין 2 שכבות של parafilm נמתח מעל הכוס. אחרי 3 ימים האכלה, הרעילות של תזונה המכילה ריכוזים שונים של ניקוטין לעומת שליטה דיאטות ידי ספירת מבוגרים כנימות הזחל בכוס אחד.

1. הפוך את פתרונות המכיל סוכרוז 20 חומצות אמינו. כנימות יכול להתקיים על דיאטה זו, להתרבות על רמות נורמליות, במשך שבוע לפחות 1. אנא ראה קובץ מצורף על הדיאטה מלאכותית.
2. Aliquot 1 מ"ל של דיאטה זו תוך 6 צינורות שונים Eppendorf המכיל ניקוטין. לייבל אליהם בכבוד לריכוזים שונים של ניקוטין המשמש, החל 0-500μM.
3. בחר 4 כנימות, אדום או ירוק, והכניסו אלה כוסות ניסיוני.
4. בעת בחירת כנימות, חשוב שהם יהיו בגיל עקבי. בדרך כלל, לחפש כנימות בגודל דומה ובצבע (את הכנימות לקבל אדום כהה כאשר הם ישנים).
5. מכסים את הכוס עם חתיכת parafilm. הקף את הדיאטה בין 2 חתיכות parafilm. חלקית למתוח את רמת parafilm שנייה על שולי הכוס. Aliquot דיאטת נוזלים בין השכבות, ואת החותם את השכבה העליונה כלפי מטה.
6. שמור אלה כוסות בחדר חרק תחת האורות photoperiod ארוכת יום במשך 3 ימים, לאחר זמן את הנתונים עבור הניסוי ניתן לאסוף.

בקר ביקורות שנתי של ביולוגיה הצמח לקבלת מידע נוסף על חסינות פרוטוקול צמח זה herbivory חרקים.