מאמר שיטה

פיתוח ואימות של שיטת LC-MS/MS מהירה לכימות קרפילזומיב בפלזמה מחולי מיאלומה מרובה

DOI:

10.3791/70167

⸱

12 במאי 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Yunnan University of Chinese Medicine, 2Department of Pharmacy, Second Affiliated Hospital of Naval Medical University, 3Department of Rehabilitation, Second Affiliated Hospital of Naval Medical University, 4School of Pharmacy, Shanghai University of Medicine and Health Sciences

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נועד לפתח ולאמת שיטת LC-MS/MS, כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם (LC-MS/MS) מהירה ורגישה לכימות קרפילזומיב בפלזמה אנושית. השיטה המאומתת במלואה תומכת בניטור תרופתי טיפולי אצל מטופלים עם מיאלומה נפוצה, ובכך מאפשרת אופטימיזציה מותאמת אישית של מינון.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קרפילזומיב, מעכב פרוטאזום דור שני, דורש ניטור תרופתי (TDM). מחקר זה נועד לפתח ולאמת שיטת כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם (LC-MS/MS) רגישה ועמידה לכימות קרפילזומיב בפלזמה אנושית. דגימות פלזמה עובדו באמצעות השקעת חלבון עם אצטוניטריל (ACN). הפרדה כרומטוגרפית הושגה בעמודהשל C18 (2.1 מ"מ × 100 מ"מ, 3.5 מיקרון) שנשמרה על 40 מעלות צלזיוס, עם פאזה ניידת המורכבת מ-ACN ו-10 mmol/L אמוניום אצטט במים (80:20, v/v) שסופקה בקצב זרימה של 0.35 מ"ל/דקה. השיטה הראתה ליניאריות מצוינת בטווח ריכוז של 2.00-1000.00 ng/mL. בנוסף, נצפו דיוק ודיוק גבוהים בתוך היום ובין היום, כאשר שיעורי ההתאוששות מקרפילזומיב נעו בין 84.1% ל-93.0%. שיטת LC-MS/MS מאומתת זו מאפשרת קביעה מדויקת, יעילה ורגישה של ריכוזי קרפילזומיב בפלזמה אצל מטופלים עם מיאלומה נפוצה, ובכך תומכת באופטימיזציה של טיפול מבוסס קרפילזומיבי.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מיאלומה נפוצה (MM) היא ממאירות המטולוגית המתאפיינת בהתרבות קלונית של תאי פלזמה במח עצם1. היא מייצגת את הממאירות ההמטולוגית השנייה השכיחה ביותר בעולם2, ומהווה כ-10% מכלל סוגי הסרטן ההמטיים3. במהלך השנים, התקדמות בטיפול תרופתי, כולל הכנסת מעכבי פרוטאזום, תרופות אימונומודולטוריות ונוגדנים מונוקלונליים, הובילה לתוצאות טיפוליות משופרות. עם זאת, אחוז משמעותי (20%-30%) מחולי MM ממשיך לחוות אתגרים כגון הישרדות קצרה ללא התקדמות (PFS)4,5 תגובות לוואי (ADR), עמידות לתרופות והישנות6.

בורטזומיב, מעכב הפרוטאזום הראשון בסדרה7, שינה את הנוף הטיפולי של MM. למרות יעילותה, רוב המטופלים מפתחים בסופו של דבר מחלה חזרה או עמידה, לעיתים קרובות מלווה בעמידות לבורטסומיב 8,9 וירידה בשיעורי התגובה וההישרדות של הטיפול10,11. אתגרים אלו מדגישים את הצורך הדחוף בגישות טיפול חדשניות לשיפור התוצאות ב-MM. קרפילזומיב, מעכב פרוטאזום דור שני שאושר על ידי ה-FDA, מספק פרופיל פרמקוקינטי יציב יותר, המאפשר דיכוי מתמשך של פעילות דמוית כימוטריפסין ומספק השפעות אנטי-מיאלומה חזקות. הוא מומלץ בדרך כלל לחולי MM שעברו לפחות שני קווי טיפול קודמים, כולל טיפול בבורטזומיב ותרופה אימונומודולטורית 1,11. מחקרים הראו כי קרפילזומיב משיג עיכוב פרוטאזום חזק יותר בתאי מיאלומה מאשר בורטסומיב ומחזיק ביכולת להתגבר על עמידות לבורטסומיב12,13.

השיטות הנפוצות ביותר לכימות ריכוזי תרופות במטריצות ביולוגיות כוללות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים-זיהוי אולטרה סגול (HPLC-UV), בדיקת אימונוסורבנט מקושרת באנזימים (ELISA), וכרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם (LC-MS/MS)14. למרות ש-HPLC-UV מציע פשטות תפעולית ועלות נמוכה, השימושיות שלו מוגבלת בשל רגישות וסלקטיביות יחסית נמוכה. כתוצאה מכך, כימות מדויק של אנליטים מטרה, במיוחד בריכוזים נמוכים או בתוך מטריצות ביולוגיות מורכבות, נותר מאתגר15. ELISA מראה רגישות גבוהה. עם זאת, יישומו מתמודד עם מספר מגבלות, כולל תהליך פיתוח ממושך, הסתמכות על נוגדנים איכותיים ורגישות לריאקטיביות צולבת עם תרכובות דומות מבנית בדגימה. גורמים אלה יחד פוגעים בספציפיות של המבחן16. לעומת זאת, LC-MS/MS מציע סלקטיביות יוצאת דופן, רגישות עליונה ותפוקה אנליטית מהירה. יתרונות אלו מבססים אותה כמתודולוגיה הסטנדרטית לניטור תרופות טיפולי (TDM) ולחקירות פרמקוקינטיות17. לקרפילזומיב יש מאפיינים של קישור נרחב לחלבוני פלזמה, יציבות ירודה ב-vivo ואינדקס טיפולי צר. טכנולוגיית LC-MS/MS יכולה לבצע ניתוח כמותי מהיר של התרכובת היעד, להפחית ביעילות את אפקט המטריצה, ולספק בסיס מדעי למתן תרופה קליני מדויק.

רמת החשיפה לתרופות בקרפילזומיב קשורה קשר הדוק להשפעה הטיפולית שלו ול-ADRs18,19. לקרפילזומיב תכונה תלויהבמינון 20, ורמת החשיפה שלו עולה לטובה עם המינון בגוף, מה שעשוי להשפיע ישירות על השפעתו הטיפולית. מחקר הראה כי שיעור התגובה המלאה (CR) של קרפילזומיב בטיפול ב-MM היה 28%, שיעור תגובה חלקית טובה מאוד (VGPR) היה 73%, ושיעור התגובה הכולל (ORR) היה 93%21. בנוסף, בהשוואה לקבוצת הביקורת, שכיחות הקרדיוטוקסיות בקרב מטופלים שטופלו בקרפילזומיב עלתה באופן משמעותי, בעוד שלא נרשמה שינוי מובהק בנוירופתיה פריפרית. מחקר נוסף גם הזכיר את היעילות והבטיחות של קרפילזומיב בטיפול ב-MM ואישר כי קרפילזומיב עשוי להעלות את הסיכון לקרדיוטוקסיות תוך שיפור ההשפעה הטיפולית22. לכן, היעילות וה-ADR של קרפילזומיב קשורים לרמת החשיפה. עד כה, דווחו מעט מאוד שיטות LC-MS/MS מאומתות לכימות קרפילזומיב בפלזמה אנושית, במיוחד כאלה שעומדות בקריטריוני אימות ביואנליטיים מחמירים (למשל, הנחיות ה-FDA). מחקרים קיימים מתמקדים בעיקר במודלים של בעלי חיים או במטריצות ביולוגיות אחרות23,24, ומדגישים פער במבחנים קליניים רלוונטיים ל-TDM בחולי MM.

לכן, יש צורך דחוף להקים בדיקה מהירה, מדויקת ורגישה למעקב אחר ריכוזי קרפילזומיב בחולי MM כדי למקסם את התועלת הטיפולית ופרופיל הבטיחות שלו. בעבודה זו פיתחנו ואימתנו שיטת LC-MS/MS אמינה המסוגלת לכמת קרפילזומיב בפלזמה אנושית בתוך 3 דקות, והפגינה רגישות ושחזור מצוינות. פותחה עבור TDM של קרפילזומיב ב-MM, שיטה זו תומכת באופטימיזציית מינון והערכת תגובת חשיפה. המשתמשים חייבים להיות מודעים לאי-היציבות של התרופה בפלזמה; כימות מדויק מחייב עיבוד דגימה בתוך 4 שעות מלקיחת הדם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים השני של האוניברסיטה הרפואית הימית (בית החולים צ'אנגג'נג בשנגחאי). כל המטופלים שנרשמו למחקר חתמו על הסכמה מדעת.

1. מדידת LC-MS/MS

  1. השתמש במערכת כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UHPLC) המחוברת לספקטרומטר מסה משולש קוודרופולי המצויד במקור יינון אלקטרוספריי (ESI) לביצוע פיתוח שיטה וניתוח דגימות.
  2. הגדר את מערכת UHPLC כך שתכלול דגזר מקוון, משאבה בינארית, אוטוסמפלר ותנור עמוד.
  3. לבצע איסוף ועיבוד נתונים באמצעות תוכנת רכישת הנתונים של יצרן המכשיר.

2. תנאים כרומטוגרפיים נוזליים

  1. השגת הפרדה כרומטוגרפית באמצעות עמודת ZORBAX-SB C18 (2.1 מ"מ × 100 מ"מ, 3.5 מיקרון).
  2. שמור על טמפרטורת העמודה ב-40 מעלות צלזיוס.
  3. להוליך שחרור איזוקרטי עם פאזה ניידת הכוללת 20% 10 mmol/L אצטט אמוניום במים ו-80% ACN.
  4. הגדר את קצב הזרימה ל-0.35 מ"ל לדקה.
  5. יש להבטיח צורות שיא סימטריות וזמני שמירה מתאימים הן לאנליט והן לתקן הפנימי (IS) בתנאים אלו.
    הערה: Carfilzomib-d8 נבחר כ-IS בשל הדמיון המבני שלו לקרפילזומיב, שמבטיח התאוששות השוואה, התנהגות כרומטוגרפית ויעילות יינון.
  6. הגדר את זמן הריצה הכולל ל-3.0 דקות.

3. תנאי ספקטרומטריית מסה

  1. הפעל את ספקטרומטר המסה במצב ESI שלילי.
  2. הגדר את מתח הנימים ל-6000 וולט.
  3. השתמשו בחנקן גם כגז הנוזל וגם כגז הייבוש.
  4. השתמש בחנקן טהור גבוה כגז התנגשות בלחץ של 0.2 מגה-פסקל.
  5. שמור על לחץ הנבולייזר על 20 psi.
  6. חממו את גז הייבוש ל-400 מעלות צלזיוס והעבירו אותו בקצב זרימה של 10 ליטר לדקה.
  7. הגדר את טמפרטורת גז המעטפת ל-350 מעלות צלזיוס, עם קצב זרימה של 12 ליטר לדקה.
  8. איסוף נתונים במצב ניטור תגובה מרובה (MRM).
  9. רכשו ספקטרום יוני מוצר של קרפילזומיב (איור 1A) ו-IS (איור 1B) כדי להמחיש את דפוסי הפיצול שלהם.
  10. השתמש במצב הסריקה MS2 כדי לזהות את יון האב.
  11. השתמש במצב SIM של MS2 כדי לאופטימיזציה של מתח Fragmentor.
  12. השתמשו במצב יוני המכפלה כדי לקבוע את אנרגיית ההתנגשות האופטימלית (CE).
  13. פירוט את פרמטרי ספקטרומטריית המסה האופטימליים עבור קרפילזומיב ו-IS (טבלה 1).

4. דגימות כיול ובקרת איכות

  1. הכינו תמיסה מלאית של קרפילזומיב (1.0 מ"ג/מ"ל) על ידי שקילה מדויקת של 2.0 מ"ג קרפילזומיב לתוך בקבוק נפחי בנפח 2 מ"ל והמסה ב-2 מ"ל מתנול (MeOH).
    אזהרה: MeOH דליק ורעיל. בעת הפעלה, יש לבצע זאת במכסה אדים כדי למנוע שאיפת אדים או מגע עם העור. השתמשו בציוד מגן אישי מתאים, כולל כפפות והגנה על עיניים/פנים.
  2. אחסן את התמיסה המקורית בטמפרטורה של -80°C.
  3. יצירת פתרונות עובדים באמצעות דילול סדרתי של תמיסת המלאי עם 10% MeOH כדי להגיע לריכוזים של 100.0 מיקרוגרם/מ"ל, 10.0 מיקרוגרם/מ"ל, ו-1.0 מיקרוגרם/מ"ל.
  4. קבעו תקני כיול על ידי הזרמת פלזמה ריקה עם הפתרונות העובדים.
  5. דילל את הפלזמה המחודדת עם פלזמה ריקה ביחס של 1:9 (v/v) לקבלת ריכוזים סופיים של 2.0, 5.0, 50.0, 200.0, 500.0, 750.0 ו-1000.0 ng/mL.
  6. הכינו באופן עצמאי דגימות בקרת איכות (QC) באותה שיטה בריכוזים של 5.0 ng/mL (נמוכים), 200.0 ng/mL (בינוניים) ו-750.0 ng/mL (גבוהים).

5. הכנת דוגמאות

  1. לטפל מראש בדגימות פלזמה (100 מיקרוליטר) על ידי הוספת 20 מיקרוליטר של תמיסת חומצה זרחנית 4%.
    אזהרה: חומצה זרחנית היא קורוזיבית. לבש כפפות, משקפי מגן וחלוק מעבדה כדי למנוע מגע עור ועין. במקרה של מגע, שטוף מיד בכמויות גדולות של מים.
  2. ערבוב מערבולת של הדגימה במשך 2 דקות במהירות מקסימלית באמצעות מערבל מערבולת מעבדה סטנדרטי.
  3. הוסף 200 מיקרוליטר של ACN, כדי לוודא שהוא מכיל תמיסת IS בריכוז של 200.0 ng/mL, לתערובת25.
    אזהרה: ACN דליק, נדיף ורעיל. כל הפעולות חייבות להתבצע בתוך מכסה אדים ולשמור על הרחק ממקורות חום ולהבות. השתמשו בציוד מגן אישי מתאים, כולל כפפות והגנה על עיניים/פנים.
  4. מערבולת שוב את התערובת המשולבת.
  5. צנטריפוגה את התערובת ב-12,500 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוסו-25 מעלות צלזיוס.
  6. אסוף 100 מיקרו-ליטר מהסופרנטנט.
  7. שלבו את הסופרנטנט של 100 מיקרוליטר עם 100 מיקרוליטר מים.
  8. העבר את התמיסה המתקבלת לבקבוקון HPLC המצויד בתוספת זכוכית.
  9. הזרקו 10 מיקרוליטר מהתמיסה הסופית למערכת LC-MS/MS לניתוח.

6. הערכת ספציפיות

  1. הערכו את הספציפיות על ידי השוואת תגובות הקרפילזומיב וה-IS בשש קבוצות שונות של פלזמה ריקה, פלזמה מחודדת ב-IS, דגימת הגבול התחתון של כימות (LLOQ) ודגימות פלזמה אותנטיות.
  2. נחשב להפרעה מקובלת אם התגובה היא פחות מ-15% מה-LLOQ של האנליט ופחות מ-5% מהתגובה של IS.

7. הערכת ליניאריות

  1. הערכת הליניאריות על ידי ניתוח שלוש מערכות תקני כיול בימים שונים (לפחות יומיים).
  2. השתמשו במודל רגרסיה ליניארי משוקלל של מינימום ריבועים כדי ליצור עקומות כיול המבוססות על לפחות שישה תקני כיול.
  3. הגדר את תקן הריכוז הנמוך ביותר כ-LLOQ.
  4. נדרש ריכוזים מחושבים לאחור לכל תקן להיות בטווח ±-15% מהערכים הנומינליים שלו, עם סבילות של ± 20% עבור ה-LLOQ.

8. קביעת דיוק ודיוק

  1. קבעו את הדיוק והדיוק התוך-יומי ובין היום על ידי ניתוח חמש שכפולים של דגימות בקרת איכות בשלוש רמות ריכוז ודגימת LLOQ לפחות בשני ימים שונים.
  2. הדיוק הביע כסטיית תקן יחסית (RSD%), מה שדורש ≤ 15% לדגימות QC ו-20% ≤ ל-LLOQ.
  3. הדיוק מצביע על השגיאה היחסית (RE%), מה שמחייב להיות בטווח ±-15% לדגימות QC ו-± 20% עבור LLOQ.

9. התאוששות וקביעת אפקט מטריצה

  1. קבעו התאוששות על ידי השוואת אזור השיא של קרפילזומיב שנכנס לפלזמה לפני ההוצאה לבין אזור השיא של קרפילזומיב שנכנס למטריצה המופקת באותו ריכוז.
  2. הערך את אפקט המטריצה על ידי השוואת שטח השיא של קרפילזומיב שנקבע לתוך המטריצה המופקת עם שטח השיא של קרפילזומיב בתמיסה מסודרת באותו ריכוז.
  3. הצביעו על השפעה עקבית של מטריצת הפלזמה הריקה על אות האנליט אם אחוז ה-RSD של גורם ההשפעה של המטריצה הוא פחות מ-15%.

10. הערכת המשך

  1. העריך את ההעברה על ידי הזרקת דגימה ריקה מיד לאחר תקן הכיול הגבוה ביותר כדי לזהות כל אות אנליט שאריתי מההזרקה הקודמת.
  2. נחשוב על המעבר כמקובל אם תגובת הקרפילזומיב בדגימה הריקה היא פחות מ-20% מ-LLOQ ופחות מ-5% מתגובת ה-IS.

11. הערכת אפקט הדילול

  1. הערכת אפקט הדילול על ידי דילול דגימות פלזמה מחודדות בריכוזים העולים על גבול הכימות העליון (ULOQ) באמצעות פלזמה ריקה כדי לקדם את הריכוז לטווח הכיול.
  2. השווה את הריכוז הנמדד לריכוז הנומינלי.

12. הערכת יציבות

  1. הערכת יציבות על ידי ניתוח דגימות בקרת איכות בשלוש רמות ריכוז בתנאי אחסון שונים.
  2. אחסן דגימות בקרת איכות בטמפרטורת החדר ונתח אחרי 6 שעות.
  3. אחסן דגימות מעובדות באוטוסמפלר ונתח ב-0, 2, 4 ו-6 שעות.
  4. הנבדקים דגימות בקרת איכות לשלושה מחזורי הקפאה-הפשרה על ידי אחסון לסירוגין בטמפרטורה של −20 מעלות צלזיוס וטמפרטורת החדר, ואז ניתוח.
  5. אחסן דגימות בקרת איכות בטמפרטורה של −80°C למשך חודשיים, ואז לנתח.
  6. השוו ריכוזים שנמדדו לערכים נומינליים ואשרו שהסטיות הן בטווח של ±15% (RE%).

13. רישום מטופלים ואיסוף דגימות

  1. קבל הסכמה מדעת בכתב מכל המטופלים.
  2. רשמו מטופלים עם MM וטפלו בהם בקרפילזומיב (קרפילזומיב).
  3. אסוף דגימות דם מיד לאחר מתן התרופה (עירוי תוך ורידי במשך 30 דקות).
  4. השגת דגימות פלזמה על ידי צנטריפוגה של דגימות דם שנאספו בצינורות EDTA-3K בטמפרטורה של 4500 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אופטימיזציה של LC-MS/MS

כדי למקסם את גילוי הקרפילזומיב, ערכי התגובה של האנליט הושוו הן במצבי יוניזציה חיוביים והן שליליים. מצב היינון השלילי הניב תגובה גבוהה יותר לקרפילזומיב מאשר למצב היינון החיובי, ולכן נבחר לניתוח מאוחר יותר. השווינו את ביצועי עמודות C8,C 18 ו-T3-C18 כדי לבחור את האופטימלית. עמודת C18 סיפקה את צורת השיא והתגובה הטובה ביותר לקרפילזומיב. באמצעות אופטימיזציה של גרדיאנט ההסרה, זמן השמ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בניגוד לשיטות HPLC-UV ו-ELISA המסורתיות, LC-MS/MS מספק סלקטיביות, רגישות ומהירות יוצאות דופן, ומתמודד ביעילות עם המגבלות של קודמיו. יתרונות אלו מחזקים את תפקידה כטכניקת הזהב לניתוח תרופות בביומטריצות מורכבות, במיוחד עבור TDM וחקירות פרמקוקינטיות17. פיתחנו ואימתנו שיטת LC-MS/MS לכימות קרפילזומיב בפלזמה אנושית. יתרון מעשי מרכזי של שיטה זו הוא הכנת הדגימה הפשוטה שלה. הוא כולל רק שלב משקע חלבון אחד המשתמש בנפח כפול של ACN ושלב דילול נוסף. תהליך עבודה יעיל זה מפספס את ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים ידועים או ניגודי עניינים אחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי קרן בת'ון: מימון בניית יכולות מחקר פרמצבטי של סין הזוהר (Z04JKM2023E040), פרויקטים לשיתוף פעולה וחילופי מידע בינלאומיים (מס' 2014DFA33010), ותוכנית הכישרונות המובילה של שנחאי בתוכנית הכישרונות המזרחית (SHSLJRC-TX)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אצטוניטריל (ACN)חברת מרק (דרמשטאדט, גרמניה)34888דרגת LC-MS
אצטט אמוניוםחברת מרק (דרמשטאדט, גרמניה)9689טוהר ניתוח: ≥ 99.0%
איזון ניתוחסארטוריוס (גרמניה))דיוק: 0.01 מ"ג
טור אנליטיAgilent Technologies (ארה"ב)Agilent ZORBAX SB-C18, 2.1 & פעמים; 100 מ"מ, 3.5 ומיקרו; m
קרפילזומיבביוטכנולוגיה יואניה של שנגחאי (שנחאי, סין)868540-17-4נתח את הדגימה הסטנדרטית, טוהר > 99%
קרפילזומיב-d8ביוטכנולוגיה יואניה של שנגחאי (שנחאי, סין)ניתח את הדגימה הסטנדרטית, טוהר > 98%
תוכנת רכישת נתוניםAgilent Technologies (ארה"ב)תוכנת עיבוד נתונים Agilent Masshunter (גרסה 6.0)
תוכנת ניתוח נתוניםAgilent Technologies (ארה"ב)תוכנת ניתוח כמותי Agilent MassHunter (גרסה 10.1)
מים מזוקקיםשנזן ווטסונס מים מזוקקים בע"מ (שנזן, סין)דרגת LC-MS
בקבוקי HPLC ובקבוקי HPLC תוספותShanghai Titan Technology Co., Ltd. (שנחאי, סין))-
מערכת כרומטוגרפיה נוזליתAgilent Technologies (ארה"ב)סדרת Agilent 1200 כוללת משאבות בינאריות, מסיר גזים מקוון, דוגם אוטומטי ותיבת טמפרטורה לעמודה.
מתנול (MeOH)חברת מרק (דרמשטאדט, גרמניה)1.06035דרגת LC-MS
מיקרופיפטותאפנדורף (גרמניה)טווחי מדידה מרובים (למשל, 10 ומיקרו; L, 100 ומיקרו; L, 200 ומיקרו; L, 1000 ומיקרו; L)
משרד & תוכנה סטטיסטית-Microsoft Office 365; GraphPad Prism 9.5
חומצה זרחניתחברת מרק (דרמשטאדט, גרמניה)49685טוהר ניתוח, 85% משקל
צנטריפוגה מקוררתאפנדורף (גרמניה)לדגימות עם צנטריפוגה בטמפרטורה של 4&00; C
ספקטרומטר מסה משולש מרובעAgilent Technologies (ארה"ב)G6475AAסדרת Agilent 1200, מצוידת במקור יינון אלקטרוספריי (ESI)
מערבל מערבולתLabnet  (ארה"ב)S0200מהירות מתכווננת

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, J., Liu, J. Research progress in proteasome inhibitor resistance to multiple myeloma. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 46 (8), 900-908 (2021).
  2. Rajkumar, S. V., et al. International myeloma working group updated criteria for the diagnosis of multiple myeloma. Lancet Oncol. 15 (12), e538-e548 (2014).
  3. Mateos, M. V., San Miguel, J. F. Management of multiple myeloma in the newly diagnosed patient. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2017 (1), 498-507 (2017).
  4. Joseph, N. S., Gentili, S., Kaufman, J. L., Lonial, S., Nooka, A. K. High-risk multiple myeloma: Definition and management. Clin Lymphoma Myeloma Leuk. 17s, S80-S87 (2017).
  5. San Miguel, J. F. Introduction to a series of reviews on multiple myeloma. Blood. 125 (20), 3039-3040 (2015).
  6. Rafae, A., Van Rhee, F., Al Hadidi, S. Perspectives on the treatment of multiple myeloma. Oncologist. 29 (3), 200-212 (2024).
  7. Yan, H., et al. Identification of key candidate genes and pathways in multiple myeloma by integrated bioinformatics analysis. J Cell Physiol. 234 (12), 23785-23797 (2019).
  8. Shi, L. L., Zhai, Y. P. Research Progress on Molecular Mechanisms of Resistance to Bortezomib in Multiple Myeloma-Review. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 25 (5), 1576-1579 (2017).
  9. Wang, Y. R., Ma, Y. P. Research Progress on Mechanism of Bortezomib Resistance in Multiple Myeloma. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 31 (5), 1584-1587 (2023).
  10. Callander, N. S., et al. Nccn guidelines® insights: Multiple myeloma, version 3.2022. J Natl Compr Canc Netw. 20 (1), 8-19 (2022).
  11. Kumar, S. K., et al. Risk of progression and survival in multiple myeloma relapsing after therapy with imids and bortezomib: A multicenter international myeloma working group study. Leukemia. 26 (1), 149-157 (2012).
  12. Kuhn, D. J., et al. Potent activity of carfilzomib, a novel, irreversible inhibitor of the ubiquitin-proteasome pathway, against preclinical models of multiple myeloma. Blood. 110 (9), 3281-3290 (2007).
  13. Moreau, P., et al. Subcutaneous versus intravenous administration of bortezomib in patients with relapsed multiple myeloma: A randomised, phase 3, non-inferiority study. Lancet Oncol. 12 (5), 431-440 (2011).
  14. Shah, V. P., et al. Bioanalytical method validation--a revisit with a decade of progress. Pharm Res. 17 (12), 1551-1557 (2000).
  15. Mandal, V., Ajabiya, J., Khan, N., Tekade, R. K., Sengupta, P. Advances and challenges in non-targeted analysis: An insight into sample preparation and detection by liquid chromatography-mass spectrometry. J Chromatogr A. 1737, 465459(2024).
  16. Kizuki, K., et al. Enzyme-linked immunosorbent assays for human tissue kallikrein and analysis of immunoreactive kallikrein in the plasma by them. Adv Exp Med Biol. 247b, 211-216 (1989).
  17. Delguidice, C. E., Ismaiel, O. A., Mylott, W. R., Halquist, M. S. Jr Comparison of methods for quantitative analysis of ranibizumab and bevacizumab in human plasma using various bioanalytical techniques, including microfluidic immunoassay, triple quadrupole, and high-resolution liquid chromatography-tandem mass spectrometry approaches. J Pharm Biomed Anal. 217, 114823(2022).
  18. Fotiou, D., et al. Carfilzomib-associated renal toxicity is common and unpredictable: A comprehensive analysis of 114 multiple myeloma patients. Blood Cancer J. 10 (11), 109(2020).
  19. Mingrone, G., et al. Effects of carfilzomib therapy on left ventricular function in multiple myeloma patients. Front Cardiovasc Med. 8, 645678(2021).
  20. Stewart, A. K., et al. Carfilzomib, lenalidomide, and dexamethasone for relapsed multiple myeloma. N Engl J Med. 372 (2), 142-152 (2015).
  21. Luo, T., Xia, H. L. [efficacy and safety of carfilzomib in the treatment of multiple myeloma：a systematic evaluation]. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 27 (6), 1887-1893 (2019).
  22. Nakao, S., et al. Evaluation of cardiac adverse events associated with carfilzomib using a japanese real-world database. Oncology. 100 (1), 60-64 (2022).
  23. Min, J. S., et al. Quantitative determination of carfilzomib in mouse plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetic study. J Pharm Biomed Anal. 146, 341-346 (2017).
  24. Yang, J., et al. Pharmacokinetics, pharmacodynamics, metabolism, distribution, and excretion of carfilzomib in rats. Drug Metab Dispos. 39 (10), 1873-1882 (2011).
  25. Zhu, X., et al. A simple and rapid lc-ms/ms method for the quantification of nirmatrelvir/ritonavir in plasma of patients with covid-19. Int J Anal Chem. 2024, 6139928(2024).
  26. Kang, J. S., Lee, M. H. Overview of therapeutic drug monitoring. Korean J Intern Med. 24 (1), 1-10 (2009).
  27. Seger, C., Salzmann, L. After another decade: Lc-ms/ms became routine in clinical diagnostics. Clin Biochem. 82, 2-11 (2020).
  28. Mushtaq, A., et al. Efficacy and toxicity profile of carfilzomib based regimens for treatment of multiple myeloma: A systematic review. Crit Rev Oncol Hematol. 125, 1-11 (2018).
  29. Smrdel, L., Locatelli, I., Zver, S., Gobec, M. A systematic review and meta-analysis of carfilzomib-associated thrombocytopenia as an adverse event in patients with multiple myeloma. Ther Adv Hematol. 15, 20406207241292517(2024).
  30. Reichel, A., Lienau, P. Pharmacokinetics in drug discovery: An exposure-centred approach to optimising and predicting drug efficacy and safety. Handb Exp Pharmacol. 232, 235-260 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Carfilzomib QuantificationLC MS MS MethodPlasma SamplesMultiple MyelomaTherapeutic Drug MonitoringProtein PrecipitationChromatographic SeparationC18 ColumnAmmonium AcetateMethod Validation

מאמרים קשורים