מאמר שיטה

שיטת HPLC-QQQ-MS יעילה ומהירה לכימות אלקלואידים טרופאן בצמחי מרפא

DOI:

10.3791/70510

⸱

12 ביוני 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה פיתח כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשילוב עם שיטת ספקטרומטריית מסה משולשת (HPLC-QQQ-MS) לזיהוי וכימות אלקלואידים של טרופן (היוסציאמין, אניסודמין, סקופולמין) ב-Anisodus tanguticus. השיטה הוכיחה את עצמה כמהירה, מדויקת ואמינה לניתוח מהיר של צמחי מרפא.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anisodus tanguticus הוא צמח מרפא טיבטי חשוב. האלקלואידים הטרופאניים (TA), כגון היוסציאמין, אניסודאמין וסקופולאמין, מציגים פעילויות פרמקולוגיות משככות כאבים וסדטיביות משמעותיות, מה שהופך מין זה למקור טבעי חשוב להפקת תרכובות ביואקטיביות אלו. עם זאת, ההרכב הכימי של A. tanguticus מורכב מאוד. הוא כולל מספר רב של תרכובות ללא מבנים ברורים, מה שהופך את הזיהוי השיטתי ואפיון המבני של מרכיביו הפעילים לחשובים במיוחד. למרות שכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) שימשה באופן נרחב להפרדת תמציות מצמח זה, רכיבים רבים שאינם ידועים עדיין מאתגרים לזיהוי מדויק, אפילו עם התאמת מסדי נתונים ספקטרליים.

מחקר זה קבע שיטה אנליטית המבוססת על כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשילוב עם ספקטרומטריית מסה משולשת (HPLC-QQQ-MS) לקביעת אלקלואידים טרופאנים ב-A. tanguticus. השיטה כוללת סדרה של הליכים שיטתיים, כולל הכנת דגימות סטנדרטית, קונפיגורציה של פרמטרי ספקטרומטרי מסה, איזון מוקדם של LC, הקמת שיטה, רכישת נתוני MS, סריקת ספקטרומטריית מסה רב-שלבית (MSⁿ), ופרשנות ידנית של נתונים. באמצעות אסטרטגיה זו, זיהינו בהצלחה שלושה אלקלואידים מייצגים של טרופאן ב-A. tanguticus: היוסציאמין, אניסודאמין וסקופולאמין. בנוסף, היא מאשרת את דיוק השיטה המוכרת HPLC-QQQ-MS, ומאשר שהשיטה מהירה, רגישה, ישימה ומדויקת לקביעה כמותית של אלקלואידים טרופאנים (TAs) ב-A. tanguticus. הגישה המבוססת מפגינה גמישות ואמינות טובה, ומתאימה לזיהוי וכימותים בקצב גבוה של אלקלואידים טרופאניים ב-A. tanguticus ובצמחי מרפא נוספים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

היעילות הטיפולית של הרפואה הסינית המסורתית (TCM) תלויה במידה רבה במטבוליטים המשניים שלה, כגון אלקלואידים, פלבנואידים, טרפנואידים ורכיבים פעילים נוספים 1,2,3. כתוצאה מכך, הניתוח האיכותי והכמותי המדויק והרגיש של מטבוליטים יעדיים ספציפיים בתערובות מורכבות אלו הוא צעד מרכזי בהבטחת איכות ה-TCM, בהבהרת הבסיס החומרי ליעילותו וקידום המחקר המודרני3. עם זאת, המגוון והמורכבות של רכיבי הרפואה הסינית הסינית, יחד עם ריכוזים נמוכים מאוד של רכיבים פעילים מרכזיים רבים, מציבים אתגרים משמעותיים להשגת גילוי יעיל ומדויק.

Anisodus tanguticus (מקס) פאשר מהווה מקור בוטני עיקרי לאלקלואידים טרופאניים (TAs)4, הידועים בתכולה העשירה של תרכובות מסוג טרופאן פעילות פרמקולוגית5. אלקלואידים מאפיינים מרכזיים כוללים אניזודמין, סקופולמין והיוסיאמין, החולקים ליבת טרופאן משותפת אך מציגים החלפות קבוצות פונקציונליות מובחנות (איור 1), מה שמוביל לפרופילים פרמקולוגיים שונים 6,7,8. בעוד שהדמיון המבני שלהם מסבך את הרזולוציה הכרומטוגרפית, הם גם מציעים מודל חשוב לחקירות פיטוכימיות ומטבוליות השוואתיות. מחקרים עדכניים חקרו את ההרכב הכימי והשינויים הגאוגרפיים של A. tanguticus באמצעות גישות מטבולומיות ופרמקולוגיה רשתית 9,10. הגישות האנליטיות הנוכחיות למטבוליטים של A. tanguticus מסתמכות בעיקר על כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC)11. עם זאת, רמות האלקלואידים הטרופאניים בשלב הזרע A. tanguticus יכולות להגיע עד 0.01% (חלק אחד לעשרת אלפים), ושיטות HPLC קונבנציונליות מוגבלות לעיתים קרובות על ידי רזולוציה, רגישות וקצב אנליטי מוגבל. מגבלות אלו מונעות את ההפרדה המלאה של הומולוגים אלקלואידיים בעלי מבנה אנלוגי ומקשים על זיהוי רכיבי עקבות, ובכך פוגעות בדיוק אנליטי ומגבילות את התמיכה ביישומים מחקריים מתקדמים יותר. בשנים האחרונות, התקדמות ב-HPLC יחד עם ספקטרומטריית מסה טנדם סיפקה כלים רבי עוצמה להתמודדות עם צווארי בקבוק אנליטיים אלה. כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים - ספקטרומטריית מסה מרובעת משולשת (HPLC-QQQ-MS), מציעה רזולוציה כרומטוגרפית משופרת משמעותית, יעילות הפרדה ורגישות יוצאת דופן 12,13,14. טכנולוגיה זו הפכה לפלטפורמה מתקדמת לחקר מטבוליטים משניים ב-TCM, ומאפשרת אישור וכימות יעיל ומדויק של אנליטים עקבתיים במטרה בתוך מטריצות ביולוגיות מורכבות 11,15,16,17. בהתאם לכך, היא מספקת בסיס טכני איתן לפרופילינג כימי מקיף ולהערכת איכות של צמחי מרפא כמו A. tanguticus. במחקר זה, אנו מתמודדים עם האתגרים המתמשכים בזיהוי אלקלואידים טרופאניים ב-A. tanguticus, תוך דגש על זיהוי וכימות מדויקים של רכיבים ברמת עקבות. על ידי אופטימיזציה שיטתית של תנאי כרומטוגרפיה וספקטרומטריות מסה, פיתחנו ואימתנו שיטה חדשנית HPLC-QQQ-MS לקביעת אלקלואידים טרופאניים עיקריים במקביל. הגישה האופטימלית משפרת משמעותית את הרגישות, הסלקטיביות והחוסן המתודולוגי, ובכך מתגברת על מגבלות נפוצות הקשורות לבדיקות מבוססות ספקטרומטריית מסה קונבנציונליות – כגון רגישות לא מספקת, השפעות מטריציות והפרעות קו-אילויציה – הנפוצות בניתוח תרכובות אלקלואידיות זעיירות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת דגימה

  1. הכנת פתרונות סטנדרטיים
    1. שקלו בדיוק 10.0 מ״ג כל אחד מתקני ייחוס היוסציאמין, אניזודאמין הידרוברומיד וסקופולמין הידרוברומיד באמצעות איזון אנליטי של עשירית אלף, והניחו אותם בבקבוקי נפח נפרדים בנפח 10 מ"ל, בהתאמה.
    2. הוסף מתנול בדרגת כרומטוגרפיה לקו המסומן, והמיס היטב את התקנים באמצעות טיפול אולטרסוני להכנת תמיסות סטנדרטיות בודדות בריכוז של 1.0 מ"ג/מ"ל.
    3. העבר את התמיסות המקוריות לבקבוקי תגובה חומים, ואחסן אותם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בחושך.
      הערה: האלקלואידים בהם משתמשים הם רעילים מאוד. נקוט אמצעי זהירות בעת טיפול בדגימות הסטנדרטיות. כל התמיסות הוכנו טרי לפני הניתוח ונשמרו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בחושך כדי למנוע התדרדרות.
  2. הכנת פתרונות עבודה מעורבים
    1. פיפט 100 מיקרוליטר מכל תמיסה שהוזכרה לבקבוק נפחי בנפח 10 מ"ל, ומדלל לקו המסומן עם מתנול כרומטוגרפי להכנת תמיסה ביניים סטנדרטית מעורבת של 10 מיקרוגרם/מ"ל.
    2. בהתאם לדרישות הטווח הליניארי, יש לדלל עוד יותר את התמיסה הבינונית עם מתנול כדי לקבל סדרה של פתרונות עבודה מעורבים.
    3. קחו 50 מיקרוליטר, 200 מיקרוליטר ו-500 מיקרוליטר, בהתאמה. השגת ריכוזים של 0.5 מיקרוגרם/מ"ל, 2 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל, ו-10 מיקרוגרם/מ"ל. הכן טרי לפני השימוש.
    4. העבר 100 מיקרוליטר מתמיסה ביניים של 10 מיקרוגרם/מ"ל לבקבוק נפחי בנפח של 1 מ"ל להכנת תמיסה מדוללת של 1 מיקרוגרם/מ"ל.
    5. לאחר מכן, העבר 100 מיקרו-ליטר מהתמיסה של 1 מיקרוגרם/מ"ל לבקבוק נפחי נוסף של 1 מ"ל ומדלל אותו לנפח עם מתנול.
  3. טיפול מקדים בדגימה
    1. מבצעים ייבוש בהקפאה של חומרים טריים של Sophora flavescens ולאחר מכן טחינה לאבקה הומוגנית באמצעות מטחנה מהירה.
    2. סנן את האבקה דרך מסננת בדיקה סטנדרטית בקוטר 0.25 מ"מ. שקלו בדיוק 20 מ"ג של אבקה זו, העבירו אותה לבקבוק נפחי בנפח של 100 מ"ל, והוסיפו מתנול בדרגת כרומטוגרפיה כמעט לקו המסומן.
    3. בצע חילוץ אולטרסוני בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. לאחר החילוץ, מוציאים את הבקבוקון הנפחי, מאפשרים לו להתקרר ל-25 מעלות צלזיוס בטמפרטורת החדר, ממלאים מתנול כרומטוגרפי לקו המסומן של 100 מ"ל, וערבבו במערבולת למשך 2 דקות.
    4. פיפט של 1 מ"ל מהתמצית הנ"ל לתוך בקבוק נפחי של 100 מ"ל, ומדלל לקו המסומן עם מתנול (דילול פי 100). לאחר ניעור טוב, הוא משמש כפתרון האם להזרקת HPLC (איור 2).
      הערה: בעת הפעלת מכונת הטחינה המהירה, חיוני להרכיב משקפי מגן ומסכת אבק; שלוט בכמות ובזמן הטחינה כדי למנוע התחממות יתר.
  4. סינון ואחסון דגימות
    1. הכינו מזרק חד-פעמי ללא מחטים בנפח 1 מ"ל (מתמחה בכרומטוגרפיה, לא סופג) וממברנה מיקרופורית בשלב אורגני של 0.22 מיקרון.
    2. שאופים 1.2 מ"ל מהתמיסה האם להזרקה, ודחפו לאט לסינון.
    3. אסוף את הסינון הבא לתוך בקבוקון דגימה בנפח 2 מ"ל עם תוספת פנימית, ואטום היטב עם מכסה.
      הערה: תדר המנקה האולטרסוני קבוע על 40 קילוהרץ. הימנעו משחרור מכסה הבקבוק הנפחי במהלך החילוץ כדי למנוע נדידות של הממס. כוונן את גורם הדילול בהתאם לתגובת שיא הדגימה בניסוי המקדים כדי לוודא ששטח שיא היעד נמצא בטווח הליניארי של העקומה הסטנדרטית. כל הדגימות חייבות להישמר מיד במקרר בטמפרטורה של 4°C.

2. קדם-הרצה של HPLC, הקמת שיטות ורכישת MS

  1. הכנת שלבים ניידים
    1. הכינו את שלב הנייד A: מדו 1000 מ"ל מים אולטרה-טהורים, הוסיפו 1.0 מ"ל חומצה פורמית בדרגת כרומטוגרפית (שבר נפח: 0.1% v/v), וערבבו באופן אחיד באמצעות ערבוב מגנטי למשך 10 דקות.
    2. הכנת שלב B נייד: השתמש במתנול כרומטוגרפי ישירות ללא טיפול נוסף.
    3. שפוך את פאזות A ו-B למכשירי דה-גזים אולטרסוניים, בהתאמה, ומבצעים דה-גזים אולטרסוניים ב-40 קילוהרץ למשך 15 דקות.
    4. העבר מיד את הפאזות הניידות המופרזות לבקבוקי ממס לאחר ההסרה, אטום אותם וחבר אותם לקווי הממס A ו-B המתאימים של מערכת HPLC.
      הערה: כל הממסים הם בדרגת כרומטוגרפיה ויש לסנן אותם דרך ממברנה מיקרופורית בפאזה אורגנית של 0.45 מיקרון לפני השימוש. עקוב אחרי לחץ המערכת באופן קבוע. אם תנודת הלחץ עולה על ±±5%, יש לבדוק אם יש סיכום עמוד או בועות אוויר בצנרת.
  2. הגדרת תנאי HPLC
    1. השתמשו בעמודת C₁₈ (2.1 מ"מ × 100 מ"מ, 2.7 מיקרון) להפרדה כרומטוגרפית. איזון את העמודה עם מתנול:מים = 80:20 (v/v) למשך 30 דקות לפני השימוש, עם קצב זרימה של 0.3 מ"ל לדקה בזמן שיווי משקל. כוונו את טמפרטורת תנור העמודה ל-30 מעלות צלזיוס, והתחילו לחמם מראש 10 דקות מראש.
    2. אופטימיזציה של תוכנית שחרור גרדיאנט כך: 0–10.0 דקות, 5% עד 10% B; 10.0–15.0 דקות, 10% עד 35% B; 15.0–20.0 דקות, 35% עד 60% B; 20.0–25.0 דקות, 60% עד 95% B. הגדר את קצב הזרימה ל-0.60 מ"ל/דקה, נפח ההזרקה ל-2 מיקרוליטר, ואורך גל גילוי ל-210 ננומטר.
  3. תנאי ספקטרומטריית מסה
    1. לבצע זיהוי ספקטרומטרי מסה (MS) באמצעות ספקטרומטר מסה משולש קוואדרופול (QQQ) המצויד במקור יינון אלקטרוספריי (ESI) הפועל במצב יוניזציה חיובית (ESI+).
    2. הגדר את פרמטרי הפעולה כך: לחץ הנבולייזר: 15 psi; מתח קפילרי: 4000 וולט; טמפרטורת גז: 300 מעלות צלזיוס; וזרימת הגז: 11 ליטר לדקה.
    3. אופטימיזציה שיטתית של פרמטרי MS/MS לכל אנליט.
      1. ראשית, לזהות יוני קדם על ידי החדרה ישירה של פתרונות סטנדרטיים בודדים במצב סריקת MS2 .
      2. אופטימיזציה של מתח הפרגמנטור עבור כל יון קדום לעוצמת אות מקסימלית באמצעות מצב SIM של MS2.
      3. לאחר מכן, יש להשתמש במצב סריקת יוני המכפלה כדי לקבוע את יוני המכפלה האופייניים. אופטימיזציה שיטתית של אנרגיית ההתנגשות (CE) עבור היון הקדום כדי למקסם את עוצמת אות המכפלה-יוני.
      4. בחר את יון המכפלה האינטנסיבי ביותר לצורך כמות, והשתמש ביון השני בעוצמתי ביותר לאישור איכותי.
        הערה: זהה יוני קדם-משה באמצעות הזרקה ישירה של תמיסות סטנדרטיות בודדות במצב סריקת MS2. ודא שריכוז התמיסה הסטנדרטי מתאים כדי למנוע רוויה באות. כייל את המכשיר באופן קבוע כדי למנוע סטייה בפרמטרים.
  4. אימות שיטה
    1. ספציפיות
      1. הזריק ממס ריק (מתנול), ערבב תמיסה סטנדרטית ותמצית דגימה בנפרד, והשווה את הכרומטוגרמות.
      2. ודא שהדרישות הבאות מתקיימות: אין שיאים מפריעים בממס הריק; זמן השמירה של רכיבי המטרה במדגם תואם לזה של התקן (סטייה ≤ ±±0.1 דקות); יחס שטח השיא של יון הכמת ליון המבטא תואם לזה של התקן (סטייה ≤ ±±10%).
    2. ליניאריות
      1. הזרקו את סדרת התמיסות המעורבות שהוכנו בשלב 1.1 (0.1, 0.5, 2, 5, 10 μg/mL) ברצף בתנאי HPLC-MS שהוזכרו, עם 3 הזרקות לכל ריכוז.
      2. צייר את העקומה הסטנדרטית עם הריכוז (x, μg/mL) של כל רכיב כבסיס ושטח השיא הממוצע (y) של יון הכמותים כאורדינטת. לבצע ניתוח רגרסיה ליניארית, הדורש מקדם קורלציה (R2) ≥ 0.995.
    3. דיוק ודיוק
      1. דיוק תוך יום (חזרתיות): ניתוח 6 שכפולים של דגימות בקרת איכות (QC) בשלוש רמות ריכוז (2 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל, ו-10 מיקרוגרם/מ"ל) בתוך יום אחד, וחישוב סטיית התקן היחסית (RSD%).
      2. דיוק בין-יומי (דיוק ביניים): הכינו באופן עצמאי דגימות בקרת איכות מאותה אצווה של חומר גלם מיובש ומנתחים אותן על ידי מפעילים שונים בשלושה ימים רצופים. ומחשב RSD%. תוודא ש-RSD ≤ 10% לשניהם.
      3. הערך דיוק באמצעות מבחן התאוששות קוצנית, והביע את הדיוק כקצב התאוששות (%). ודאו ששיעור ההתאוששות הממוצע של ריכוזים נמוכים, בינוניים וגבוהים נע בין 85% ל-115%, עם RSD ≤ 5%.
        הערה: הטווח הליניארי חייב לכסות את טווח הריכוז הצפוי של רכיבי המטרה בדגימות בפועל (כולל רמות נמוכות, בינוניות וגבוהות) כדי לשקף את היישום המעשי. כל ניסויי האימות בוצעו בשלושה עותקים, והתוצאות הוצגו כערך ממוצע.

3. רכישת נתונים

  1. ביצוע איסוף נתונים במצב ניטור תגובה מרובה (MRM). עיין בטבלה 1 לפרמטרי MRM האופטימליים - כולל יון מקדים, מעברי יוני מוצר, מתח פרקטור ואנרגיית התנגשות (CE) - עבור כל אנליט.
  2. חשב את זמן השהייה כדי להבטיח מספר מספק של נקודות נתונים בכל שיא כרומטוגרפי לכל מעבר תוך שמירה על זמן מחזור מתאים.

4. ניתוח נתונים

  1. הפעל את תוכנת הניתוח האיכותני , לחץ על קובץ > ייבוא נתונים, וייבא את כל קבצי הנתונים שנאספו (פורמט .d).
  2. חילוץ כרומטוגרמות יונים (EICs): במודול הכמות , בחר ב-MRM Transition, הזן את זוגות היונים הקדומים-תוצר היונים של כל רכיב, וחלץ את ה-EICs המתאימים.
  3. אימות ואינטגרציה של שיאים: בדוק את סימטריית השיא ועקביות זמן השימור (סטייה ≤ ±±0.1 דקה בהשוואה לסטנדרט) של השיאים היעד בכל מרכז שיא (EIC).
  4. התוכנה מבצעת אינטגרציה אוטומטית כברירת מחדל; אם קיימים סטייה בסיסית או שיאים מפריעים, יש להתאים ידנית את פרמטרי האינטגרציה (נקודות התחלה וסיום האינטגרציה) כדי להבטיח אינטגרציה מדויקת.
  5. חשב את הריכוז של כל רכיב בדגימות לא ידועות באמצעות עקומה סטנדרטית. לחץ על דוח > יצירת דוח, בחר בפורמט Excel לייצא את הדוח. הדוח כולל את שם התרכובת, זמן השימור, אזור השיא, ריכוז, RSD%, ועוד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרדה וזיהוי כרומטוגרפי של HPLC-QQQ-MS של TA
כרומטוגרם MRM טיפוסי המתקבל מניתוח תערובת סטנדרטית ותמצית שורש A.tanguticus מוצג באיור 3 ובאיור 4. בתנאי ה-HPLC האופטימליים, כל שלושת האלקלואידים הטרופאניים היעדיים: היוסציאמין, אניסודאמין וסקופולאמין, הופרדו בהצלחה בתוך 20 דקות, מה שמדגים את היעילות הגבוהה של השיטה שפותחה. הרזולוציה (Rs) בין סקופולמין לאניזודמין נקבעה כ-8.67, בעוד שהרזולוציה בין אניזודמי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עם העניין הגובר במטבוליטים משניים של צמחים, טכניקות אנליטיות לזיהוי אלקלואידים זכו לתשומת לב רבה. בעוד שמערכת כרומטוגרפית בסיסית לניתוח אלקלואידים טרופאנים (TAs) הוקמה18, התקדמויות אחרונות כגון אימוץ אלקטרופורזה קפילרית (CE), שיפור הביצועים הכלים ב-GC–MS ו-HPLC–MS, וזיהוי תרכובות מבניות חדשות הכוללות רעלים קונבולביניים ודמויי טרופינון מדגישים את הצורך בסקירה שיטתית של מתודולוגיות כרומטוגרפיות קיימות עבור אלקלואידים אלו11,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכת על ידי המינהל המחוזי של הרפואה הסינית המסורתית של סצ'ואן (מס' 2024MS562) ותוכנית הכישרונות שינגלין של אוניברסיטת צ'נגדו ב-TCM (מס' MPRC2022035). הערכנו מאוד את התמיכה מהמכון החדשני לרפואה סינית ורוקחות, אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תוכנת Agilent MassHunterAgilent Technologies
עמודה Agilent ZORBAX SB-C18Agilent Technologies880975-902עמודה C18 בשלב הפוך, 4.6 × 250 ממ, 5 מיקרומטר
Anisodamine hydrobromideChengdu glip Biotechnology Co., Ltd101-31-5HPLC>98%
חומצה פורמיתSigma-Aldrich5.33002
מייבש הקפאהEYELA, טוקיו, יפןFDU-2110
מטחנת אוניברסלית במהירות גבוההTaisite Instrument Co., Ltd., טיינג'ין, סין6010210100FW-100,24,000 סל"ד, קיבולת 100 גרם, 80 מסך
HyoscyamineChengdu glip Biotechnology Co., Ltd55449-49-5HPLC>98%
מתנולThermo Fisher Scientific022909.K2
ממברנה מיקרופורית 0.22μמMilliporeSLGV033RB
מערכת מים Milli-Q Direct 8MilliporeSigma, Burlington, MA, ארה"בZRQSVP0JP
Scopolamine hydrobromideChengdu glip Biotechnology Co., Ltd114-49-8HPLC>98%

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ji, P., Yang, X., Zhao, X. Application of metabolomics in quality control of traditional Chinese medicines: a review. Front Plant Sci. 15, 1463666(2024).
  2. Li, S. -S., et al. Phytochemical variation among the traditional Chinese medicine mu dan pi from Paeonia suffruticosa (tree peony). Phytochemistry. 146, 16-24 (2018).
  3. Wang, N., et al. Pinelliae rhizoma alleviated acute lung injury induced by lipopolysaccharide via suppressing endoplasmic reticulum stress-mediated NLRP3 inflammasome. Front Pharmacol. 13, 883865(2022).
  4. Pughaih, T., et al. Tropane Alkaloids: Sources, Chemistry, Pharmacology and Biotechnology. , Nature, Springer. Singapore. (2025).
  5. Chen, C., Wang, B., Xiao, Y., Xiong, F., Zhou, G. Geographical origin discrimination of Anisodus tanguticus (Maxim.): chemometrics methods applied to ICP-OES analysis. Arab J Chem. 17 (5), 105730(2024).
  6. Cardillo, R., et al. Scopolamine, anisodamine and hyoscyamine production by Brugmansia candida hairy root cultures in bioreactors. Process Biochem. 45 (9), 1577-1581 (2010).
  7. Yuan, B., Zheng, C., Teng, H., You, T. Simultaneous determination of atropine, anisodamine, and scopolamine in plant extract by nonaqueous capillary electrophoresis coupled with electrochemiluminescence and electrochemistry dual detection. J Chromatogr A. 1217 (1), 171-174 (2010).
  8. Zhang, P., et al. Simultaneous determination of atropine, scopolamine, and anisodamine from Hyoscyamus niger L. in rat plasma by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetics study: liquid chromatography. J Sep Sci. 37 (19), 2664-2674 (2014).
  9. Chen, C., Wang, B., Li, J., Xiong, F., Zhou, G. Multivariate statistical analysis of metabolites in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher to determine geographical origins and network pharmacology. Front Plant Sci. 13, 927336(2022).
  10. Chen, C., et al. Multivariate statistical analysis of tropane alkaloids in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher from different regions to trace geographical origins. Acta Chromatogr. 34 (4), 422-429 (2022).
  11. Sawabe, Y., et al. Rapid determination of atropine and scopolamine content in Scopolia extract powder by HPLC. J Nat Med. 65 (2), 395-399 (2011).
  12. Baj, J., et al. Application of HPLC-QQQ-MS/MS and new RP-HPLC-DAD system utilizing the chaotropic effect for determination of nicotine and its major metabolites cotinine,and trans-3′-hydroxycotinine in human plasma samples. Molecules. 27 (3), 682(2022).
  13. Chen, D., et al. Qualitative and quantitative analysis of the major constituents in Shexiang tongxin dropping pill by HPLC-Q-TOF-MS/MS and UPLC-QqQ-MS/MS. Molecules. 20 (10), 18597-18619 (2015).
  14. Huang, Y. -F., et al. Simultaneous determination of twenty-nine active compounds in Fuzhengjiedu granules by HPLC-QQQ-MS/MS. Heliyon. 9 (2), e13675(2023).
  15. Zhang, K. -X., et al. Improved quality control method for prescriptions of Polygonum capitatum through simultaneous determination of nine major constituents by HPLC coupled with triple quadruple mass spectrometry. Molecules. 18 (10), 11824-11835 (2013).
  16. Ding, M., et al. Comprehensive chemical profiling and quantification of Shexiang xintongning tablets by integrating liquid chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-mass spectrometry. Arab J Chem. 16 (3), 104527(2023).
  17. Zhu, L., et al. The QuEChERS method coupled to HPLC-QQQ-MS/MS for the determination of 25 banned pesticide residues in ethnic medicines. Res Sq. , (2022).
  18. Cinelli, M. A., Cline, J., Watson, T. Applications of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in natural products research: Tropane alkaloids as a case study. J Vis Exp. (205), e66620(2024).
  19. Pang, Y., Huang, Y. -K., Li, F., Yang, F. -Q., Xia, Z. -N. Rapid screening and evaluation of antioxidants in alkaloid natural products by capillary electrophoresis with chemiluminescence detection. Anal Methods. 8 (35), 6545-6553 (2016).
  20. Voeten, R. L. C., Ventouri, I. K., Haselberg, R., Somsen, G. W. Capillary electrophoresis:trends and recent advances. Anal Chem. 90 (3), 1464-1481 (2018).
  21. Pellati, F., Benvenuti, S. Chromatographic and electrophoretic methods for the analysis of phenetylamine alkaloids in Citrus aurantium. J Chromatogr A. 1161 (1), 71-88 (2007).
  22. Cirlini, M., et al. A sensitive UHPLC-ESI-MS/MS method for the determination of tropane alkaloids in herbal teas and extracts. Food Control. 105, 285-291 (2019).
  23. Wojakowska, A., et al. Structural analysis and profiling of phenolic secondary metabolites of Mexican lupine species using LC-MS techniques. Phytochemistry. 92, 71-86 (2013).
  24. Shimizu, T., Watanabe, M., Fernie, A. R., Tohge, T. Targeted LC-MS analysis for plant secondary metabolites. Methods Mol Biol. 1778, 171-181 (2018).
  25. Mennickent, S., De Diego, M. Analytical Method Validation as the First Step in Drug Quality Control. Quality Management and Quality Control - New Trends and Developments. , IntechOpen. London, UK. (2019).
  26. Yang, S. H., Wang, J., Zhang, K. Validation of a two-dimensional liquid chromatography method for quality control testing of pharmaceutical materials. J Chromatogr A. 1492, 89-97 (2017).
  27. Zhang, X., et al. HPLC with chiral stationary phase for separation and kinetics study of aspartic acid epimerization in peroxiredoxin 2 active site peptide. J Pharm Biomed Anal. 247, 116247(2024).
  28. Lu, W., et al. Metabolite measurement: pittfalls to avoid and practices to follow. Annu Rev Biochem. 86, 277-304 (2017).
  29. Leopold, J., Popkova, Y., Engel, K. M., Schiller, J. Recent developments of useful MALDI matrices for the mass spectrometric characterization of lipids. Biomolecules. 8 (4), 173(2018).
  30. Parasuraman, S., et al. An overview of liquid chromatography-mass spectroscopy instrumentation. Pharm Methods. 5 (2), 47-55 (2014).
  31. Alanazi, S. Recent advances in liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS) applications in biological and applied sciences. Anal Sci Adv. 6 (1), e70024(2025).
  32. Cortese, M., et al. Compensate for or minimize matrix effects? Strategies for overcoming matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry technique: A tutorial review. Molecules. 25 (13), 30-47 (2020).
  33. Wang, L., et al. The interplay between herbal medicines and gut microbiota in metabolic diseases. Front Pharmacol. 14, 1105405(2023).
  34. Musharraf, S. G., et al. Screening of inhibitors of angiotensin-converting enzyme (ACE) employing high performance liquid chromatography-electrospray ionization triple quadrupole mass spectrometry (HPLC-ESI-QqQ-MS). Eur J Pharm Sci. 101, 182-188 (2017).
  35. Liu, H., et al. Integrating qualitative and quantitative assessments of Yougui pill, an effective traditional Chinese medicine, by HPLC-LTQ-orbitrap-MSn and UPLC-QqQ-MS/MS. Anal Methods. 9 (23), 3485-3496 (2017).
  36. Parks, H. M., et al. Redirecting tropane alkaloid metabolism reveals pyrrolidine alkaloid diversity in Atropa belladonna. New Phytol. 237 (5), 1810-1825 (2023).
  37. Yan, Z., et al. Triterpenoid saponins profiling by adducts-targeted neutral loss triggered enhanced resolution and product ion scanning using triple quadrupole linear ion trap mass spectrometry. Anal Chim Acta. 819, 56-64 (2014).
  38. Sosa-Ferrera, Z., Mahugo-Santana, C., Santana-Rodríguez, J. J. Analytical methodologies for the determination of endocrine disrupting compounds in biological and environmental samples. Biomed Res Int. 2013, 674838(2013).
  39. Heyde, B. J., Barthel, A., Siemens, J., Mulder, I. A fast and robust method for the extraction and analysis of quaternary alkyl ammonium compounds from soil and sewage sludge. PLoS One. 15 (8), e0237020(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Anisodus Tanguticus

מאמרים קשורים