Method Article

גישה טכנית לניתוח מבני של תרכובת לא ידועה בנוזל פה של Huoxiang Zhengqi בהתבסס על ספקטרומטריית מסה של מלכודת יונים ליניארית

DOI:

10.3791/70672

⸱

April 3rd, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1General Surgery, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Cardiology, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine, 3Chongqing Taiji Industry, 4Chongqing Clinical Research Center for Dermatology, Department of Dermatology, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים פרוטוקול סטנדרטי המשלב עצי ספקטרומטריית מסה רב-שלביים עם תהליך פיצול המבוסס על נוזל אוראלי Huoxiang Zhengqi.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תרכובות צמחיות סיניות (CHCs) ממלאות תפקיד בלתי ניתן להחלפה ברפואה הסינית, וזיהוי המרכיבים המורכבים שלהן היה מוקד מחקר משמעותי בשנים האחרונות. נוזל הפה הואושיאנג ג'נגצ'י הוא תרופה פטנטית סינית קלאסית שההרכב הכימי שלה דורש מחקר נוסף ברמה המולקולרית. ספקטרומטרי מסה מסורתיים, כמו זמן טיסה ו-Orbitrap, מספקים בדרך כלל רק מידע על פיצול משני. בהתבסס על ספקטרומטר מסה מלכודת יונים ליניארי, ניתן היה לפרק תרכובות בצורה יסודית יותר, ובכך לקבל מידע עמוק יותר על השברים. מאמר זה מפתח טכניקת חקירה מבנית לתרכובות לא ידועות ב-CHCs, הכוללת טיפול מקדים בדגימות, הכנת כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים, הכנת ספקטרומטריית מסה, בדיקות ספקטרומטריה מלאה, בדיקות ספקטרומטריית מסה משנית, בדיקות ספקטרומטריית מסה רב-רמתית וניתוח תוצאות. תוצאות מייצגות מדגימות את תהליך הגזירה של מבנה התרכובת. אנו דנים בגורמים המשפיעים על טכניקת הניסוי, כגון איזומרים, תרכובות פוליהידרוקסי ורזולוציית מכשירים. בהתבסס על הפקת המבנה המולקולרי המיקרוסקופי של תרכובות לא ידועות באמצעות פיצול ספקטרומטריית מסה רב-שלבית, השיטה הניסויית המבוססת היא גמישה וישימה לאפיון מבני של מולקולות קטנות ביואקטיביות ברפואה הסינית המסורתית ולקשרן למנגנונים פרמקולוגיים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תרכובות צמחיות סיניות (CHCs), כנכסים יקרי ערך של הרפואה הסינית המסורתית (TCM), צברו אלפי שנים של ניסיון קליני מאומת1. הם ממלאים תפקיד שאין לו תחליף במניעת מחלות, התערבות טיפולית ושיקום. באמצעות סינרגיה רב-צמחית, CHCs מטפלים בגוף האדם באופן הוליסטי, ומממשים את עקרונות הליבה של טיפול מבוסס הוליזם ותסמונות3. במסגרת הרפואית העכשווית, CHCs זוכים להכרה עולמית בזכות המנגנונים הפוליפרמקולוגיים שלהם הכוללים מסלולים מרובי מטרות4, עם יישומים רחבים הכוללים הפרעות עיכול, זיהומים נשימתיים ואימונומודולציה5. נוזל הפה של Huoxiang Zhengqi (HXZQ) מגלם את הנוסחאות הקלאסיות של CHC6. הרכבו משלב עשבי מרפא רבים כגון פצ'ולי, עלה פרילה, אנג'ליקה דהוריקה, אטרקטילודים, פוריה וקליפת קלמנטינה מיובשת. הוא ידוע ביכולתו להעניק תכונות דיאפורטיות, מנקות חום, חיזוק לחות וחיזוק את הטחול בקיבה7. HXZQ מיושם קלינית נגד תסמונות דמויי שפעת הנגרמות מרטיבות, נפיחות אפיגסטרית, הקאה ומצבים של שלשול8. התקדמות טכנולוגית העבירה את מחקר ה-CHC מתצפית פנומנולוגית לחקירות מולקולריות, מכניות ורמות תרכובות.9, כגון שימוש בטכניקות פרוטאומיקה ומטבולומיקה לזיהוי הרכיבים הפעילים, ובכך הניחו יסודות מדעיים לגלובליזציה של הרפואה הסינית הסינית (TCM). כתוצאה מכך, ניתוח קפדני של המרכיבים הכימיים והפרמקודינמיקה של HXZQ לא רק מקדם את תקנון CHC אלא גם מזרז גילוי תרופות חדשני10.

ה-HXZQ הוא נוסחה רב-עשבונית, שהמורכבות הכימית הטבועה בה נובעת מהרכיבים הבוטניים המורכבים11. מאופיין במגוון רחב של קטגוריות פיטוכימיות — כולל שמנים נדיפים, קומרינים, ליגננים, פוליסכרידים ואלקלואידים — HXZQ מכיל גם תרכובות ביואקטיביות מאופיינות היטב וגם מאגר משמעותי של רכיבים מבניים ללא הערות12. תנודות דינמיות ברכיבים מרכזיים (למשל, שמנים נדיפים, פלבנואידים, אלקלואידים) עלולות להתרחש עקב שינויים בפרוטוקולי החילוץ ובתנאי האחסון, מה שמדגיש את הצורך הקריטי בפרופילינג כימי שיטתי6. במסגרת המודרניזציה של הרפואה הסינית המסורתית (TCM), ניתוח הרכב מעמיק של נוסחאות קלאסיות כמו HXZQ לא רק מבהיר את הבסיס הבסיסי ליעילות הטיפולית שלהן, אלא גם מספק תמיכה אמפירית לבקרת איכות, ייצור סטנדרטיוניטור אירועים שליליים. בעוד שתרכובות בעלות שפע גבוה ב-HXZQ תועדו בהרחבה, חלק משמעותי מהרכיב הכימי שלהן נותר לא מאופיין13. המגוון המבני של מרכיביו, יחד עם השפע הנמוך של מולקולות ביואקטיביות פוטנציאליות, מציבים אתגרים משמעותיים לזיהוי מקיף באמצעות טכניקות אנליטיות קונבנציונליות כמו כרומטוגרפיה וספקטרוסקופיהבלבד. ראוי לציין כי איזומריזם נפוץ במספר מחלקות פיטוכימיות ב-HXZQ, כולל קומרינים, ליגננים ופוליסכרידים, מה שמסבך עוד יותר את ההבדלות המבנית15. מחסומים נוספים להערות תרכובות מדויקות כוללים שפע אנליטים נמוך והשפעות הפרעות מטריצות. ביחד, גורמים אלו מדגישים חזית מרכזית במחקר HXZQ: פיתוח אסטרטגיות אנליטיות חזקות להשגת זיהוי מדויק ורחב כיסוי של השלמה הכימית המלאה שלו.

פלטפורמות ספקטרומטריית מסה עכשוויות (MS) נתקלות במגבלות מובנות בעת אפיון מטריצות מורכבות, כולל ארטיפקטים של קו-אילוטציה של יונים וכיסוי מסד נתונים ספקטרלי לא שלם16. בהקשר זה, ספקטרומטריית מסה טנדם (MS/MS) וספקטרומטריית מסה רב-שלבית (MSn) הופיעו כאסטרטגיות אנליטיות חיוניות להבהרה מבנית דה נובו של תרכובות לא ידועות17. בעוד שמערכות MS ברזולוציה גבוהה קונבנציונליות כמו Q-TOF) MS ו-Orbitrap MS מייצרות נתוני קטעי MS/MS באיכות גבוהה, השימושיות שלהן מוגבלת לאירועי פיצול חד-שלבי. למרות מגבלה זו, פלטפורמות אלו מספקות תובנות מבניות עשירות עם רגישות ורזולוציה יוצאות דופן, במיוחד בניתוח תערובות מורכבות18. לעומת זאת, מלכודת יונים ליניארית (LIT) MS משתמשת במצב דיסוציאציה מושרה התנגשות (CID) רב-שלבי המאפשר פיצול סדרתי ואיטרטיבי של יונים מולקולריים. יכולת ייחודית זו מאפשרת ניתוח מדורג של שלדי תרכובות וקבוצות פונקציונליות, ומאפשרת זיהוי איכותי חד-משמעי של אנליטים לא ידועים מגוונים מבנים19. כדי להתמודד עם הצורך הבלתי מסופק באפיון מקיף של מטריצות CHC מורכבות, מחקר זה מציג תהליך אנליטי מבוסס LIT-MS המותאם לזיהוי תרכובות לא ידועות. באמצעות יעילות לכידת היונים הגבוהה של ה-LIT ומהירות הסריקה המהירה שלו, גישה זו משפרת את קצב התפוקה והדיוק של ההערה המבנית החדשה . יישום זרימת עבודה זו ב-HXZQ שואף ל: (1) להשלים מתודולוגיות קיימות לפרופיל רכיבים כימיים לא מאופיינים ב-HXZQ; (2) להקים מסגרת טכנית לתמיכה במחקר תקינה עבור נוסחאות CHC אחרות; ו-(3) להאיץ את העברת הרפואה הסינית הסינית מפרקטיקה אמפירית לרפואה מבוססת ראיות ומדויקת.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. טיפול מקדים בדגימה

  1. פתח את האריזה של HXZQ המסחרי. העבר בדיוק 0.1 מ"ל HXZQ לבקבוק דגימה של 2 מ"ל, ואז הוסיף 0.9 מ"ל מים. נער את התמיסה עד שהיא מתערבבת היטב.
  2. הכינו מזרק הזרקה (1 מ"ל) ומסנן ממברנה מיקרופורית (0.22 מיקרון). סנן את התמיסה לבקבוק דגימה חדש בנפח 2 מ"ל.
    הערה: נקטו אמצעי זהירות אישיים מתאימים במהלך ההליכים הניסיוניים.

2. הכנת כרומטוגרפיה נוזלית (UPLC) בעלת ביצועים אולטרה-ביצועיים

  1. לחצו פעמיים על תוכנת Xcalibur . לחץ על מוכן להורדה, ואז לחץ על כפתור השליטה הישירה . לחץ על עמודת מודול המשאבה בחלון הקופץ, הגדר את %B ל-50, %C ל-0, ו-%D ל-0 (איור 1).
  2. לחץ על כפתור המנוע כדי לעבור למצב הדלקה. לחץ על כפתור More Options , הגדר את הזרימה ל-5 [mL/דקה] ואת הזמן ל-180 [s] בחלון הקופץ. לחצו על כפתור הטיהור , ואז לחצו על כפתור האישור בחלון הקופץ.
    הערה: הפאזה הניידת קבועה ב-0.3 מ"ל לדקה עם 50% A (תמיסת חומצה פורמית 0.1%) ו-50% B (אצטוניטריל) ללא טמפרטורת עמודה בהיעדר עמודה כרומטוגרפית. נפח ההזרקה ברירת המחדל הוא בדרך כלל 1 מיקרוליטר.

3. הכנה לטרשת נפוצה

  1. חזרו לחלון הראשי של התוכנה, לחצו על כפתור Sequence Setup View . לחץ על כפתור הפתיחה כדי לייבא את התבנית שכבר ערכה, ולחץ קליק ימני על שם השיטה ולחץ על כפתור פתיחת הקובץ כדי לפתוח את קובץ השיטה.
  2. בחלון Instrument Setup הקופץ, הגדר את המסה הראשונה (m/z) ל-100 ואת המסה האחרונה (m/z) ל-1200. לחץ על כפתור השמירה כדי לשמור את השיטה.
    הערה: תנאי ה-MS ברירת המחדל כללו טמפרטורת מקור יונים ב-350 מעלות צלזיוס, טווח MS התחלתי בין 80 ל-1200 ד"א, מצב התנגשות בפירוק מושרה התנגשות (CID), ואנרגיית התנגשות ב-35.

4. מבחן טרשת נפוצה מלא

  1. לחץ על כפתור רצף הרצה , ואז לחץ על כפתור האישור בחלון הקופץ. המתן להשלמת הזרקת הדגימה (איור 2).
    הערה: לפני הבדיקה, יש להניח את בקבוק הדגימה בנפח 2 מ"ל במגש הדגימה של הכלי.
  2. לחץ על כפתור תצוגת מפת הדרכים , ולחץ על אייקון דפדפן Qual כדי לפתוח את חלון דפדפן Qual. לחץ על כפתור הפתיחה , בחר את קובץ הנתונים בפורמט .raw בתיקייה, ולחץ פעמיים עליו כדי לפתוח את הקובץ.
  3. לחץ קליק ימני על חלון הכרומטוגרמה, ואז לחץ על כפתור הטווחים . בחלק מסנן הסריקה, בחר ESI Full MS. בחלק מסוג העלילה, בחר TIC. לחץ על כפתור אישור , ואז החלון יציג את הכרומטוגרמה היונית הכוללת של הדגימה.
  4. לחצו על כפתור Pushpin בפינה הימנית העליונה של חלון ספקטרום המסה.
  5. בחלון הכרומטוגרמה, לחץ והחליק כדי לבחור אזור זמן עם השפע היחסי החזק ביותר. חלון ספקטרום המסה יציג את יוני ספקטרום המסה המתאימים. רשמו את ערכי m/z לרמת ספקטרומטריית המסה הבאה.

5. מבחן MS/MS

  1. חזור לחלון הגדרת המכשירים. בעמודת המסה ההורה של שורת n=2, הזינו את ערך m/z של התרכובת שנרשם בשלב הקודם. לחץ על כפתור השמירה כדי לשמור את השיטה.
  2. חזור לחלון התוכנה. לחץ על כפתור Sequence Setup View , שנה את שם הקובץ, ואז לחץ על כפתור השמירה כדי לשמור את הרצף.
  3. לחץ על כפתור רצף הרצה , ואז לחץ על כפתור האישור בחלון הקופץ. חכה שהזרקת הדגימה תסתיים.
  4. חזרו לחלון הדפדפן של Qual. לחץ על כפתור הפתיחה , בחר את קובץ הנתונים בפורמט .raw בתיקייה, ולחץ פעמיים עליו כדי לפתוח את הקובץ
  5. לחץ קליק ימני על חלון הכרומטוגרמה, ואז לחץ על כפתור הטווחים . בחלק מסנן הסריקה, בחר ESI Full MS. בחלק מסוג העלילה, בחר TIC. לחץ על כפתור אישור , ואז החלון יציג את הכרומטוגרמה היונית הכוללת של הדגימה.
  6. לחצו על כפתור Pushpin בפינה הימנית העליונה של חלון ספקטרום המסה.
  7. בחלון הכרומטוגרמה, לחץ והחליק כדי לבחור אזור זמן עם השפע היחסי החזק ביותר. חלון ספקטרום המסה יציג את יוני ספקטרום המסה המתאימים. רשמו את ערכי m/z לרמת ספקטרומטריית המסה הבאה.

6. בדיקת MSn

  1. חזור לחלון ההגדרה של הכלים. בעמודת המסה ההורה של שורת n=3, הזינו את ערך m/z של התרכובת שנרשם בשלב הקודם. לחץ על כפתור השמירה כדי לשמור את השיטה.
  2. חזור על השלבים 4.2 עד 4.5 כדי להשלים את הזרקת הדגימה וצפייה בנתונים. עצור את ניתוח MSn ברגע שלא נצפו יוני מקטעים יציבים.

7. אופטימיזציה של פרמטרים

  1. חזור לחלון ההגדרה של הכלים. בעמודת סוג הפעולה, לחץ על CID ואז בחר PQD או ETD לשינוי מצב התנגשות.
  2. בעמוד אנרגיית ההתנגשות המנורמל, לחץ על 35 ואז הגדר ל-20 או 50 כדי לשנות את אנרגיית ההתנגשות.
    הערה: שלבו את כל השאריות הכימיות והממסים לתוך מיכל הפסולת האורגנית.

8. ניתוח תוצאות

  1. צייר ידנית את יון ההורה ואת יון השרטוט בתוכנת השרטוט, כולל מבנה יון האב, שם התרכובת וערך יחס מסה-מטען (m/z).
  2. לדוגמה, עבור התרכובת הלא ידועה עם m/z=623.21, יש להבחין בפירוק המתקבל. כאן, למקטע הביניים היה m/z=461.15 ב-MS/MS. הפרש המסה היה 162.06 ד'אטרון, התואם למבנה הקסוסה.
  3. אם ננתח זאת לעומק, השבר הביניים עם m/z=461.15 התפרק שוב ליצירת ניאוביאכנגליקול עם m/z=315.09 ב-MS3. הפרש המסה היה 146.06 דלטון, התואם למבנה דאוקסיהקסמתילוז. כלומר, הבינוני עם m/z=461.15 הכיל יחידת דאוקסיהקסמאתילוז אחת יותר מ-neobyakangelicol.
  4. במבנה של neobyakangelicol, נתח את מיקום הקשר. כאן, קבוצת ההידרוקסיל החשופה הייתה המיקום הסביר ביותר להיות קשור לדאוקסיהקסמתילוז. באופן דומה, קבוצת ההידרוקסיל ב-C1 ביחידת דאוקסיהקסמתילוז הייתה הסבירה ביותר להיות קשורה להקסוזה. לבסוף, מקבלים את מבנה התרכובת הלא ידועה עם m/z=623.21.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצענו שכל המידע על m/z צריך להיאסף תחילה, ואז חישוב ערך הפרש המסה בין יון ההורה ליון הקטע. מצאתי את התרכובת שדווחה במאגר הנתונים או בספרות, ואז הסקתי את מבנה התרכובת הלא ידוע הפוך על סמך המבנה הידוע הזה.

כל התרכובות שזוהו ויוני השברים המתאימות להן הוצגו על ידי ערכי m/z. תת-קבוצה של יוני הפרגמנט הללו יכלה להיות מותאמת לתקני ייחוסמאומתים 20. מבני תרכובת מטרה לא ידועים הורכבו בהדרגה באמצעות שינויים שיטתיים בקבוצות פונקציונליות של ביניים אבחנתיים מבניים אלו.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השילוב בין LIT-MS לטכנולוגיית הפיצול של MSN מספק שיטה לזיהוי תרכובות לא ידועות ב-CHCs. בניגוד למצבי MS טנדם מסורתיים ב-Orbitrap ו-Q-TOF MS, מלכודת יונים ליניארית יכולה ללכוד יוני מטרה, ובכך למנוע הפרעות מאיונים23 שזורמים במשותף. שיטה זו משיגה דיוק ברמה המולקולרית, ומספקת מידע כימי מבני מדויק יחסית, ובכך מתמודדת חלקית עם האתגר של אימון תרכובות לא ידועות עקב פערים במאגרי הנתונים.

גליקוזידים, פוליסכרידים, פלבונואידים ותרכובות נו...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי פרויקט מיוחד לתמריץ ביצועים והכוונה של מכון המחקר המדעי בצ'ונגצ'ינג (cstc2022jxjl120005). פרויקט מחקר מדעי וטכנולוגי של ועדת החינוך העירונית של צ'ונגצ'ינג (KJZD-K202315102). פרויקט מחקר מדעי רפואי בצ'ונגצ'ינג (פרויקט משותף של ועדת הבריאות של צ'ונגצ'ינג ומשרד המדע והטכנולוגיה (2022DBXM007). בית חולים מיוחד של מלגאי שינגלין מאוניברסיטת צ'נגדו של TCM (YYZX202160).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
אצטוניטרילThermo ScientificCAS 75-05-8מצב נוזלי
חומצה פורמיתThermo ScientificCAS 64-18-6מצב נוזלי
נוזל אוראלי Huoxiang ZhengqiChongqing Taiji Industry (Group) Co., Ltd.קוד תקן תרופות Z50020409אובייקט של מחקר
ספקטרומטר מסה עם לכידת יונים לינאריתThermo ScientificLTQ XLמכשיר IT-MS
כרומטוגרף נוזליThermo ScientificU3000מכשיר UPLC
XcaliburThermo Scientificגרסה 2.0תוכנת הפעלה UPLC-IT-MS

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chao, J., et al. Major achievements of evidence-based traditional Chinese medicine in treating major diseases. Biochem Pharmacol. 139, 94-104 (2017).
  2. Zou, Q., et al. The role and mechanism of TCM in the prevention and treatment of infectious diseases. Front Microbiol. 14, 1286364(2023).
  3. Zhou, X., et al. Synergistic effects of Chinese herbal medicine: a comprehensive review of methodology and current research. Front Pharmacol. 7, 201(2016).
  4. Li, X., et al. Advancing traditional Chinese medicine research through network pharmacology: strategies for target identification, mechanism elucidation, and innovative therapeutic applications. Am J Chinese Med. 53 (07), 2021-2042 (2025).
  5. Li, B. H., Li, Z. Y., Liu, M. M., Tian, J. Z., Cui, Q. H. Progress in traditional Chinese medicine against respiratory viruses: a review. Front Pharmacol. 12, 743623(2021).
  6. Xu, Q., et al. An evaluation strategy of high-quality traditional Chinese patent medicines with consistency as the core: A case study of Huoxiang Zhengqi Shui. Arabian J Chem. 18, 1302024(2025).
  7. Li, L., et al. Huoxiang Zhengqi dropping pills alleviate exertional heat stroke–induced multiple organ injury through sustaining intestinal homeostasis via regulating MAPK/NF-κB pathway and gut microbiota in rats. Front Pharmacol. 15, 1534713(2025).
  8. Wu, Y., et al. Unlocking the therapeutic potential of Huoxiang Zhengqi San in cold and high humidity-induced diarrhea: Insights into intestinal microbiota modulation and digestive enzyme activity. Heliyon. 10 (12), e32789(2024).
  9. Hua, H., et al. From traditional medicine to modern medicine: the importance of TCM regulatory science (TCMRS) as an emerging discipline. Chinese Med. 20 (1), 92(2025).
  10. Zhang, C., et al. Multi-component Chinese medicine formulas for drug discovery: state of the art and future perspectives. Acta Mater Med. 2 (1), 106-125 (2023).
  11. Li, X., et al. Integration of non-targeted multicomponent profiling, targeted characteristic chromatograms and quantitative to accomplish systematic quality evaluation strategy of Huo-Xiang-Zheng-Qi oral liquid. J Pharma Biomed Anal. 236, 115715(2023).
  12. Chen, Y., et al. Identification and quality control of isomers in Huo-Xiang-Zheng-Qi Mixture using ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry and inductive effects analysis. J Pharma Biomed Anal. 255, 116646(2025).
  13. Guo, H., Pang, X., Zhang, W., Jiang, W., Pang, X. Dissolution determination of five components in Huoxiang Zhengqi tablets using partitioned dispersive liquid-liquid microextraction combined with HPLC-UV. Anal Meth. 5 (11), 2674-2678 (2013).
  14. Bhadange, Y. A., Carpenter, J., Saharan, V. K. A comprehensive review on advanced extraction techniques for retrieving bioactive components from natural sources. ACS Omega. 9 (29), 31274-31297 (2024).
  15. Silva, A. S., et al. Evaluation of the status quo of polyphenols analysis: Part I—phytochemistry, bioactivity, interactions, and industrial uses. Comp Rev Food Sc Food Safety. 19 (6), 3191-3218 (2020).
  16. Kaufmann, A., Teale, P. Capabilities and Limitations of High-Resolution Mass Spectrometry (HRMS): Time-of-flight and Orbitrap. Chem Anal Non-antimicrob Vet Drug Resid Food. , 93-139 (2016).
  17. Vaniya, A., Fiehn, O. Using fragmentation trees and mass spectral trees for identifying unknown compounds in metabolomics. TrAC Trends Anal Chem. 69, 52-61 (2015).
  18. Belov, M. E., et al. From protein complexes to subunit backbone fragments: a multi-stage approach to native mass spectrometry. Anal Chem. 85 (23), 11163-11173 (2013).
  19. Ma, X. Recent advances in mass spectrometry-based structural elucidation techniques. Molecules. 27 (19), 6466(2022).
  20. Ridder, L., et al. Substructure-based annotation of high-resolution multistage MSn spectral trees. Rapid Comm Mass Spectr. 26 (20), 2461-2471 (2012).
  21. Tao, Y., et al. Abelmoschus manihot (L.) medik. seeds alleviate rheumatoid arthritis by modulating JAK2/STAT3 signaling pathway. J Ethnopharmacol. 325, 117641(2024).
  22. Liu, J., et al. Qi-Sai-Er-Sang-Dang-Song decoction inhibits pyroptosis and inflammation in THP-1 cells and alleviates rheumatoid arthritis by inhibiting the NLRP3-pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 148, 157481(2025).
  23. Jian, W. Modern liquid chromatography and mass spectrometry for targeted biomarker quantitation. Target Biomarker Quantitat LC–MS. , 45-63 (2017).
  24. Zeng, P., Li, J., Chen, Y., Zhang, L. The structures and biological functions of polysaccharides from traditional Chinese herbs. Progr Mol Biol Transl Sci. 163, 423-444 (2019).
  25. Abdel Tawab, M., et al. Electrospray mass spectrometry with consecutive fragmentation steps (ESI-MSn) as a tool for rapid and sensitive analysis of ginsenosides and their galactosyl derivatives. Helvetica Chim Acta. 83 (4), 739-747 (2000).
  26. Zhang, A., Sun, H., Yan, G., Wang, X. Recent developments and emerging trends of mass spectrometry for herbal ingredients analysis. TrAC Trends Anal Chem. 94, 70-76 (2017).
  27. Vukics, V., Guttman, A. Structural characterization of flavonoid glycosides by multi-stage mass spectrometry. Mass Spectr Rev. 29 (1), 1-16 (2010).
  28. Cortese, M., Gigliobianco, M. R., Magnoni, F., Censi, R., Di Martino, P. Compensate for or minimize matrix effects? Strategies for overcoming matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry technique: a tutorial review. Molecules. 25 (13), 3047(2020).
  29. Gerothanassis, I. P., Troganis, A., Exarchou, V., Barbarossou, K. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy: basic principles and phenomena, and their applications to chemistry, biology and medicine. Che Edu Res Pract. 3 (2), 229-252 (2002).
  30. Kumar, N., Jaitak, V. Recent advancement in NMR based plant metabolomics: techniques, tools, and analytical approaches. Crit Rev Anal Chem. 56 (1), 1-25 (2026).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Linear Ion TrapMass SpectrometryStructural AnalysisUnknown CompoundChinese Herbal CompoundsHuoxiang ZhengqiUltra Performance Liquid ChromatographyMultistage FragmentationMolecular Structure DerivationBioactive Small Molecules

Related Articles