מאמר שיטה

יצירת מבנים אורגנואידיים שמקורם בתאי גזע מזנכימליים ממח עצם מרקמת לבלב טרייה

DOI:

10.3791/70717

⸱

5 ביוני 2026

 ,  , 
1Department of Histology and Embryology, School of Basic Medicine Science, Guangxi Medical University, 2Department of Surgical Nursing, Nursing College of Guangxi Medical University, 3Department of Human Anatomy, School of Basic Medical Sciences, Guangxi Medical University, 4Key Laboratory of Human Development and Disease Research, Education Department of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Guangxi Medical University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להבדיל תאי גזע מזנכימיים במח עצם (BMSCs) למבנים דמויי אורגנואידים באי הלבלב באמצעות ליזאט רקמת הלבלב של החזיר. מבנים דמויי אורגנואידים נוצרים לאחר 22 ימים. שיטה פשוטה וחסכונית זו יוצרת מבנים דומים מורפולוגית לאיי לבלב למחקרים במבחנה ולסקר תרופות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמחלה כרונית נפוצה ברחבי העולם, סוכרת (DM) מתאפיינת בהפרעה באיזון הגלוקוז בגוף. בסוכרת סוג 1 (T1DM), תגובות אוטואימוניות משמידות לחלוטין את תאי β הלבלב, וגורמות לחוסר ספיקת אינסולין מוחלטת. מטופלים עם מצב זה זקוקים לטיפול אינסולין משלים לכל החיים. המחקר הנוכחי נועד ליצור פלטפורמת תרביות אמינה וחסכונית ליצירת מבנים דמויי אורגנואידים באי הלבלב מתאי גזע מזנכימיים של מח עצם (BMSCs). פלטפורמה זו יכולה לא רק להקל על המחסור באיים תורמים להשתלה, אלא גם לשמש מודל חוץ גופי למחקר הקשור לסוכרת.

על ידי אופטימיזציה של תהליך ההכנה של ליזאט רקמת הלבלב החזירי (צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 30 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, ואחריה סינון של 0.22 מיקרון לעיקור), הושרה בהצלחה ב-BMSCs למבנים דמויי אורגנואידים של איים בלבלב. אימות מורפולוגי אישר שרק BMSCs מושרים יוצרים אגרגטים דמויי איים קומפקטיים, מלאים ושקופים מאוד, בעוד ש-BMSCs לא מושרים הראו ואקואליזציה משמעותית ושקיפות מופחתת.

הניטור הדינמי הראה כי אגרגטים של תאים (בקוטר 50–100 מיקרון) נוצרו ביום ה-16 של התרבית והתפתחו למבנים דמויי קפסולה (בקוטר 200–300 מיקרון) עד היום ה-22. שיטה זו פשוטה לתפעול, חסכונית ואינה דורשת ציוד מורכב. האורגנידים המתקבלים דומים מורפולוגית לאיי לבלב, ומספקים כלי למחקרים במבחנה ולסקר תרופות נלווים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמערכות מודל תלת-ממדיות (3D) במבחנה, מבנים דמויי אורגנואידים באי הלבלב הפכו לכלים חיוניים במחקר סוכרת ורפואה רגנרטיבית, בזכות יכולתם לחקות מקרוב את ההרכב הרב-תאי והמבנה המרחבי של איים לבלב מקומיים1. מודלים כאלה לא רק מספקים פלטפורמה ייחודית להבנת ביולוגיית התפתחות האיים והמנגנונים הפתולוגיים של סוכרת 2,3, אלא גם תומכים בפיתוח טיפולי החלפת תאים ומערכות סקר תרופות4. עם המשך עלייה בשכיחות הסוכרת העולמית — במיוחד המחסור המוחלט באינסולין הנגרם מנזק בלתי הפיך לתאי β בסוכרת סוג 1 — טיפול תחליפי אינסולין קונבנציונלי יכול לשלוט בתסמינים אך אינו יכול לרפא את המחלה. בינתיים, השתלת איים מתמודדת עם מחסור חמור בתורמים, מה שהופך את פיתוח מקורות איים חלופיים בקנה מידה לעדיפות דחופה 1,5. על ידי ניצול פוטנציאל התמיינות מכוון של תאי גזע פלוריפוטנטיים או תאי גזע בוגרים, טכנולוגיית אורגנואידים בסגנון איים לבלביים עשויה לסייע בהתמודדות עם מגבלה זו 6,7,8.

בשנים האחרונות הושגה התקדמות משמעותית במערכות תרבית דמויי אורגנואידים באי הלבלב המבוססות על תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) ותאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs)9. מחקרים רבים אישרו כי על ידי אופטימיזציה של פרוטוקולי השראה ותנאי תרבית, תאי גזע יכולים להתמיין לתאים דמויי איים עם פונקציות הפרשת אינסולין המגיבות לגלוקוז10. פריצות דרך בטכנולוגיית התכנות מחדש הכימי אפשרו יצירת hiPSCs ללא מניפולציה גנטית, מה ששיפר את הפוטנציאל התרגומי11. מבחינת מערכות תרבית, תרבית תלת-ממדית בשילוב עם שילובים ספציפיים של מטריצה חוץ-תאית וגורמי גדילה יכולים לקדם את הארגון העצמי של תאי קדם-האיים למבנים אורגנואידיים המורכבים מתאי α, β ו-δ12. עם זאת, הטכנולוגיות הקיימות עדיין מתמודדות עם אתגרים רבים, כולל יעילות התמיינות לא יציבה, בגרות פונקציונלית לא מספקת, והיעדר רשתות כלי דם ומיקרוסביבה חיסונית — גורמים מגביליםמרכזיים 13 שמגבילים יישום רחב יותר.

למרות ההתקדמות במחקר על מבנה אורגנואידי איים של איים בלבלב, מספר סוגיות מדעיות קריטיות בתחום זה עדיין יש לטפלבהן 14. ראשית, היעדר הגדרות סטנדרטיות של אורגניאידים ונהלי בנייה מקשה על השוואה ישירה בין תוצאות בין מעבדותשונות. שנית, מערכות התרביות הנוכחיות אינן יכולות לשחזר במלואן את ההרכב התאים המורכב ואת הסידור המרחבי המדויק של איי הלבלב הילידים16. שלישית, נושאים מרכזיים כמו יציבות תפקודית במהלך תרבית אורגנואידים ארוכת טווח והישרדות לאחר ההשתלה עדיין אינם מאופיינים כראוי17. בנוסף, רוב הפרוטוקולים הקיימים עדיין מסתמכים על חומרים מטריצתיים שמקורם בבעלי חיים, הסובלים מהרכב לא מוגדר ומשונות גדולה בין אצוות, מה שמקשה על בקרת איכות ביישומים קליניים18. פערי הידע והטכנולוגיה הללו מפריעים קשות להעברת מבנים דמויי אורגנואידים באיי הלבלב ממחקר בסיסי לפרקטיקה קלינית.

פרוטוקול זה נועד לבנות גישה יציבה, משתלמת וניתנת לשחזור ליצירת מבנים אורגנואידים דמויי אי הלבלב באמצעות תאי גזע מזנכימליים של מח עצם (BMSCs). השיטה המקובלת מיועדת למחקר ניסיוני במעבדה וליישומי סקר תרופות טרום-קליני. האסטרטגיות הנוכחיות להבדלת איים המושרה על ידי BMSC סובלות ממספר מגבלות, כולל עלויות מופרזות, סטנדרטים תפעוליים לא עקביים ויישום מוגבל. רוב מערכות ההשראה הקיימות מסתמכות על ציטוקינים רקומביננטיים יקרים, מטריצות תרבית מקצועיות ומכשירי תרבית מדויקים מאוד, שמגבילים מאוד את השימוש הנרחב בהן. כדי לפתור את החסרונות הללו, הפרוטוקול הנוכחי מאמץ את ליזאט רקמת הלבלב החזירי כגורם ההשראה המרכזי. אסטרטגיית תרביות אופטימלית ומפושטת זו מאפשרת הבדלה יעילה של BMSCs למבנים דמויי איים עם ציוד ותנאים מעבדה שגרתיים בלבד.

בהשוואה לשיטות המסורתיות המבוססות על hESCs, iPSCs או קוקטיילי גורמי צמיחה יקרים, האסטרטגיה הנוכחית מציעה מספר יתרונות מעשיים ברורים. הוא מבטל את הצורך בתגובות יקרות ובמערכות תרביות מורכבות, מפחית עלויות ניסוי, ומאפשר תוצאות עקביות עם שונות מינימלית בין אצווה 10,11,12,13. בניגוד למערכות מבוססות מטריצה קסנוגנית, פרוטוקול זה עושה שימוש בליזאט רקמות פשוט, המשפר את יכולת השליטה והשחזור בניסוי במעבדות 15,16,17,18. יתרה מזאת, תאי גזע BMSC נגישים בקלות, יציבים בתרבות וללא מגבלות אתיות הקשורות לתאי גזע פלוריפוטנטיים, מה שהופך גישה זו למתאימה במיוחד לשימוש שגרתי במעבדה.

גישות מחקר קיימות מקוטבות בתחום המידול האורגני של הלבלב: פלטפורמות אורגנואידיות מתקדמות לטרנספורמציה קלינית יקרות ומורכבות מבחינה טכנית, בעוד שמודלים חלופיים מפושטים אינם תומכים בניתוח פונקציונלי מעמיק. הפרוטוקול המוצע בעבודה זו מגשר על פער המחקר הזה על ידי הצעת תוכנית טכנית סטנדרטית ובינונית. גישה זו שומרת על התכונות הפיזיולוגיות המרכזיות של איי הלבלב ותואמת לחלוטין לסביבות מעבדתיות בסיסיות קונבנציונליות. הוא משמש ככלי מעשי לחוקרים המתמקדים במנגנוני התפתחות של איים, מודלים של מחלות סוכרת והערכת מועמדים ראשונית לתרופות, במיוחד עבור צוותים המצוידים בתשתית תרביות תאים שגרתית אך חסרים פלטפורמות מקצועיות לתרבית תאי גזע. למרות ששיטה זו אינה יכולה לייצר אורגנידים בעלי כלי דם מלאים או בעלי יכולת אימונולוגית למחקר מתקדם ספציפי, היא מתאימה במיוחד לסינון ניסיוני ראשוני, חקירה מכנית והכשרה אקדמית במחקר ביולוגי לאיים.

עבודה זו מתמקדת בבניית מערכת תרביות כלכלית וסטנדרטית למבנים אורנואידיים של איים בלבלב, במטרה להציע מודל מחקר תלת-ממדי אמין למחקרים הקשורים לסוכרת. על ידי ניתוח שיטתי של האופן שבו משטרי אינדוקציה מגוונים וסביבות תרביות משפיעים על יעילות היווצרות האורגנידים ועל תכונות מורפולוגיות, מחקר זה מנסה לפרוץ את המכשולים הטכניים המרכזיים שמגבילים את ההתקדמות בתחום זה. מטרות הליבה במחקר כוללות שלושה היבטים מרכזיים: הקמת פרוטוקול תרבית אוניברסלי המיושם במעבדות בסיסיות רגילות ללא מכשירים מתקדמים, גיבוש תקני הערכה כמותיים להערכת איכות אורגנואידים, ואופטימיזציה של אסטרטגיות תרבית לשמירה על היציבות המורפולוגית והתפקודית של אורגנואידים במהלך דגירה ארוכת טווח. ממצאי מחקר זה יכולים לספק תמיכה טכנית מוצקה לחקר ניסויי במבחנה, תוך בניית מודל מעשי ואמין למחקר על מנגנוני התפתחות איים וסינון תרופות היפוגליקמיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים הניסיוניים עמדו בהנחיות לרווחת בעלי חיים במעבדה שאושרו על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת גואנגשי לרפואה (מס' אישור: SYXK 2014-0003), ועמדו בקודים האתיים לטיפול ושימוש בבעלי חיים כפי שנקבעו בעקרונות המנחים הבינלאומיים למחקר ביו-רפואי הכולל בעלי חיים, שנוסחו על ידי המועצה לארגונים בינלאומיים למדעי הרפואה (CIOMS).

כל הפעולות הכוללות עיבוד רקמות והכנת תגובות חייבות להתבצע בארון בטיחות ביולוגית מסוג II כדי למנוע זיהום. יש לאפשר לפחות 8 שעות להשלמת עיבוד רקמות טריות והכנת מעורר מבנה אורגנואידי דמוי איים בלבלב. השאירו את כל הדגימות והתגובות על הקרח לאורך כל הניסוי.

1. הכנה ניסיונית

  1. הורד את עכברוש היונק של ספרג דולי בן 7 ימים באמצעות ניתוק צוואר הרחם. הרדימו חזירים ביתיים באמצעות הזרקה תוך-ורידית של פנטוברביטל נתרן במינון של 20 מ"ג/ק"ג, ואשרו הרדמה מספקת על ידי היעלמות רפלקס הגמילה של הדוושה וקצב נשימה יציב.
  2. עיבוד רקמת לבלב חזיר בארון בטיחות ביולוגית מסוג Class II בתנאים סטריליים. לעבד רקמת לבלב חזיר טרייה תוך 24 שעות מהאיסוף. אחסנו דגימות רקמה שנאספו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במדיום DMEM מלא (כפי שמוצג בטבלה 1) עד לעיבוד.
  3. הגדר מראש את הצנטריפוגה המקוררת ל-4 מעלות צלזיוס ובחר במצב צנטריפוגה במהירות נמוכה כדי למנוע נזק להכנות התאים. יש לאחסן קצות פיפטה בנפח 1000 מיקרוליטר, קצות פיפטה של 200 מיקרוליטר וצינורות צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל במקפיא בטמפרטורה של −20 מעלות צלזיוס עד לשימוש בניסוי. הכינו מספיק מסנני סטריל של 0.22 מיקרון ומזרקים סטריליים חד-פעמיים של 20 מ"ל. חיטא מספריים עיניים, מלקחיים מעוקלים, צלחות פטרי מזכוכית ואמפולות באמצעות אוטוקלבינג בטמפרטורה גבוהה (121 מעלות צלזיוס, 20 דקות).
  4. לפני השימוש הניסיוני, יש לעבור את ליזאט רקמת הלבלב המוכנה במלואה. לעקביות ניסויית מיטבית, ניתן להעביר פיפטה של 100 מיקרוליטר מהומוגנט לצינורות מיקרוצנטריפוגה נפרדים בנפח 1.5 מ"ל לאחסון נפרד ולשימוש מאוחר יותר.

2. עיבוד רקמת לבלב טרייה להכנת מבנה אורגנואידי באי הלבלב

  1. קצור דגימות לבלב חזיר טריות והעבר אותן מיד לקרח יבש כדי לשמור על פעילות ביולוגית של הרקמות. הרקמות שנרכשו נשטפות תחילה שוב ושוב עם מי מלח סטריליים רגילים באמצעות פיפטינג. לאחר שלבי הניקוי הראשוניים, נעשה שימוש ב-3 מ"ל של מי מלח סטריליים עם בופר פוספט (PBS) לשטיפה יסודית נוספת כדי להסיר לחלוטין כתמי דם שנותרו ומזהמי רקמה.
  2. הסר והשליך נוזלים שנותרו מצלחות תרבית סטריליות, ואז הוסיפו להן 2 מ"ל מדיום DMEM. רקמות הלבלב המטופלות מראש מפורקות לחתיכות אחידות בגודל 1 מ"ק באמצעות מספריים עיניים סטריליים (איור 1A,B). כל חלקי הרקמה הטחוצים נאספים לצינור צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל, ואחריהם פיפטינג עדין למעלה ולמטה במשך 10 פעמים להשגת ערבוב הומוגני.
  3. הומוגניזציה של הרקמות מתבצעת באמצעות עלי זכוכית סטרילי (איור 1C). במהלך תהליך הטחינה, שברי רקמת הלבלב מעורבבים באופן שווה עם מדיום DMEM ביחס נפח של 1:1. המתלה ההומוגני לחלוטין של הרקמה מועבר לצינור צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל ועובר צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוהה ב-21,600 × גרם למשך 30 דקות בתנאי טמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  4. לאחר הצנטריפוגה, הסופרנטנט המובהק מופרץ בהדרגה באמצעות פיפטה סטרילית. הסופרנטנט שנקטף עובר דרך מסנן סטרילי של 0.22 מיקרון כדי להסיר שאריות רקמה זעירות וזיהומים לא מומסים (איור 1D). הנוזל המטוהר מחולק לבסוף לצינורות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל עם נפח קבוע של 100 מיקרו ליטר לכל צינור לשימור אטום ולניסויים הבאים (איור 1E).
  5. אחסן את המבנה האורגנואידי של האי הלבלב הממומן בטמפרטורה של −20 מעלות צלזיוס.
    הערה: המזרז נשאר יציב למשך שנה בתנאי אחסון נאותים. הערכו את פעילות ההשראה של הליזאט המוכן באמצעות בדיקה ויזואלית ואינדוקציה פונקציונלית. לזהות את הליזאט הפעיל לפי מראהו הבהיר והבהיר ללא משקעים ברורים; מזהה אובדן פעילות עקב משקעים נראים וכישלון לגרום להיווצרות אורגנואידים טיפוסית של איים.

3. הכנת מדיום אינדוקציה

  1. הכינו את מדיום ההשראה ממש לפני פעולות תרבית התאים. שלבו את האורגנואיד האי הלבלב שהוכן בעצמו עם מדיום DMEM גבוה גלוקוז המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS-H-DMEM) בהתאם בדיוק ליחס המפורט בטבלה 1.
  2. הניחו את דגימות האורגנואיד של הלבלב המתרבות באינקובטור תאים הנשמרים בטמפרטורה קבועה של 37°C עם רוויה של 5% CO₂ לגידול רציף.

4. תצפית מורפולוגית ומעקב אחר גדילה של אורגנידים

  1. תצפית מיקרוסקופית מתבצעת בנקודות זמן מתוכננות לאורך תקופת התרבית, כולל יום 1, יום 3, יום 7, יום 10 ויום 15 לאחר זריעת התאים.
  2. מיקרוסקופ אור מאומץ למעקב אחר השינויים המורפולוגיים, תנאי הגדילה והחיוניות התאית של מבנים אורגנואידיים בלבלב במהלך כל מפגש גילוי, כדי לתעד את מאפייני הצמיחה הדינמיים של המבנים.

5. מעבר ושימור קריופאורטיבי של אורגנואידים

  1. מעבר זרעים 3 BMSCs בצפיפות של 1 × 105 תאים לבאר בלוחות תרבית של 6 בארות ותרבות במדיום מלא במהלך הלילה כדי לאפשר חיבור תאים לפני ההשראה.
  2. הוסף 1 מ"ל טריפסין המכיל 0.02% EDTA למערכת התרבות. יש פיפט עדין על פני השטח של תבנית התרביס 5–8 פעמים כדי לנתק אורגנואידים של הלבלב מהצלחת.
  3. הוסף 2 מ"ל מדיום H-DMEM-F12 של 10% כדי לסיים את עיכול הטריפסין. צנטריפוגה את התערובת ב-1,500 × גרם למשך 5 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס באמצעות צנטריפוגה מקוררת. שאופים והשליכו את הסופרנטנט לאחר הצנטריפוגה.
  4. הוסף פי שניים נפח של מדיום FBS-H-DMEM טרי של 10% לכדור התא כדי להגיע ליחס מעבר של 1:2.
  5. לבצע שימור קריופאורטיבי של תרביות אורגנואידים כך: החזירו את כדור התא שהושג ב-1 מ"ל של תמיסת שימור קריופורמציה ללא סרום. אחסן את האורגנידים המושבים בטמפרטורה של −80°C לשימור קצר טווח (עד שנה) ובחנקן נוזלי לאחסון ארוך טווח.
    הערה: כוון את עוצמת המדיום הטרי כדי להשיג יחס מעבר שונה. לדוגמה, השתמש באותו נפח של מדיום כמו הווליום ההתחלתי לקטע 1:1, או להוסיף פי 3 את עוצמת המדיה ההתחלתית לקטע 1:3.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רישום דינמיקת הגדילה של תרבויות אורגנואידיות איים של הלבלב לאורך זמן הוא קריטי, במיוחד בשבועות הראשונים של התרבית, שכן הוא מאפשר לחזות את ביצועי מערכת התרביות בניסויים הבאים. איור 2 מציג דוגמה של תרבית של 22 ימים, שבה BMSCs בודדו ביעילות מח עצם של חולדות יונקות בני 7 ימים ושימשו בהצלחה ליצירת מבנים דמויי אורגנואידים באי הלבלב. זהות BMSCs אושרה על ידי התמיינות תלת-קווית וביטוי סימני משטח (CD29+, CD90+, CD34−,...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סוכרת היא הפרעה מטבולית עולמית, המסווגת בעיקר לסוכרת סוג 1 (T1DM) וסוכרת סוג 2 (T2DM). T1DM היא מחלה אוטואימונית המאופיינת בהרס סלקטיבי של תאי β בלבלב, מה שמוביל למחסור מוחלט באינסולין19. מטופלים זקוקים לטיפול אינסולין חיצוני לכל החיים אך עדיין מתמודדים עם סיכונים להיפוגליקמיה חמורה וסיבוכים מיקרווסקולריים20. השתלת איים היא כיום השיטה הטיפולית היחידה שיכולה להחזיר הפרשת אינסולין אנדוגנית6, אך מחסור בתורמים ודחיית מער...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית ההכשרה לכישרונות צעירים מצטיינים של אוניברסיטת גואנגשי לרפואה וקרן מדעי הנוער של אוניברסיטת גואנגשי לרפואה (GXMUYSF202307), בניית תחום ברמה ראשונה—רפואה פרה-קלינית (DC2300011025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.22 & mu; מסנן סטרילי mמרק מיליפורSLGP033RBסינון סטרילי של ליזאט רקמת הלבלב להסרת זיהומים ופסולת
0.25% טריפסין (בתוך 0.02% EDTA)Wisent325-043-CLדיסוציאציה קלה של אורגנואידים באי הלבלב לצורך פעולת מעבר
צינורות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"לקורנינג אקסיגןAXY-20-1500העלאת ואחסון ליזאט רקמת הלבלב (100 & mu; L לכל צינור)
10 & mu; טיפים ל-L Pipetteאפנדורף22491653העברת נוזלים עבור נוגדנים ותמיסות אנזימים בנפח קטן
1000 & mu; טיפים ל-L Pipetteאפנדורף22491651העברת נוזלים עבור תגובות ותליות תאים
-20 ודרגה מקפיאהיירHYC-326אחסון של מגיבים (למשל, FBS, טריפסין) וקצות פיפטות
200 & mu; טיפים ל-L Pipetteאפנדורף22491652העברת נוזל מדויקת עבור מגיבים בנפח קטן (למשל, אליקוטינג ליזאט)
10 & mu; טיפים ל-L PipetteהיירDW-86L626אחסון ארוך טווח של ליזאט רקמת הלבלב ואורגנידים שמורים בקריופרפרד
צינורות צנטריפוגה בנפח 50 מ"לקורנינג430829צנטריפוגה מהירה בטמפרטורות נמוכות של ליזאט רקמת הלבלב והשעיית תאים
לוחות גידול עם 6 בארותקורנינג3516תרבית של אורגנואידים של איי הלבלב ו-BMSCs
ארון בטיחות ביולוגית מחלקה IIהיירHR40-IIA2עיבוד סטרילי של רקמת לבלב חזיר ותרביות אורגנואידים
חממת CO2תרמו פישר סיינטיפיק3111דגירה של אורגנואידים באיים של הלבלב ב-37&°; C, 5% CO<תת->2
מלקחיים מעוקליםשנגחאי חואקי מדיקל אינסטרומנטס בע"מHQ-1302טיפול ברקמת הלבלב במהלך עיבוד, עיקור בטמפרטורה גבוהה
מדיום DMEM (גלוקוז גבוה)Wisent318-025-CLמשמש לתרבות אינדוקציה אורגנואידי באי הלבלב
DMEM בינוני (גלוקוז נמוך)Wisent319-015-CLמדיום בסיסי לתרבות BMSC ועיבוד רקמות
סרום בקר עוברי (FBS)גיבקו (תרמו פישר סיינטיפיק)10099141Cהוספתי ל-DMEM ביחס נפח של 10% לתרבות תאים וסיום עיכול
H-DMEM-F12 בינוניWisent315-080-CLמשמש לסיום עיכול טריפסין במהלך מעבר אורגנואידי
אוטוקלב בטמפרטורה גבוהההיירGR80DAעיקור כלים (121 מעלות; C, 20 דקות) וכלי זכוכית
מיקרוסקופ אוראולימפוסCX43תצפית ודימות של אורגנואידים באי הלבלב בהגדלות שונות (× 4, &פעמיים; 10, & 20)
מספריים עינייםשנגחאי חואקי מדיקל אינסטרומנטס בע"מHQ-1201חיתוך רקמת הלבלב של חזיר ל-1 מ"מ ומעלה; קטעים, שעברו עיקור על ידי אוטוקלבינג בטמפרטורות גבוהות
תמיסת פניצילין-סטרפטומיציןתרמו פישר סיינטיפיק15140122משמש ביחס נפח של 1% למניעת זיהום חיידקי במדיום תרבית
מלח ממוגן בפוספט (PBS)גיבקו (תרמו פישר סיינטיפיק)10010023בופר שטיפה לרקמת לבלב חזיר ושטיפת תאים
צנטריפוגה מקוררתאפנדורף5810Rצנטריפוגציה במהירות גבוהה ב-4&00; C להכנת ליזאט לבלב ואיסוף כדורי תאים
פתרון לשימור קריופרי ללא סרוםסוז'ואו שינסאימאי ביוטכנולוגיה בע"מ#C40050שימש לשימור קריופאוריבי של אורגנואידים באי הלבלב, השעיית כדורי תאים לפני -80°g; אחסון C

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

In Vitro

מאמרים קשורים