פרוטוקול מטבולומיקה סטנדרטי לניתוח שינויים מטבוליים הנגרמות על ידי פעילות גופנית בקרב מתאגרפים מובילים באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר תהליך מטבולומיקה סטנדרטי של הסרום המבוסס על כרומטוגרפיה נוזלית, בשילוב עם ספקטרומטריית מסה טנדם של קוודרופול (LC-QTOF-MS/MS) וניתוח נתונים רב-משתניים לפרופיל שינויים מטבוליים חריפים וקצרי טווח הקשורים להחלמה אצל מתאגרפים גברים עילית.

תקציר

איגרוף עילית גורם לשינויים מטבוליים מהירים שאינם מתועדים במלואם במדידות פיזיולוגיות קונבנציונליות. תהליך עבודה סטנדרטי ובלתי ממוקד של מטבולומיקת הסרום המבוסס על כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם של זמן טיסה מרובע (LC-QTOF-MS/MS) יושם על דגימות שנאספו לפני האימון, מיד לאחר האימון, ו-24 שעות לאחר האימון בשבעה מתאגרפים גברים עילית. תהליך העבודה כלל איסוף דגימות סטנדרטי, ניטור בקרת איכות משותף, פרופיל מטבוליטים, ניתוח סטטיסטי רב-משתני ופרשנות מסלולים. ספארינג אקוטי היה קשור לשינויים במטבוליטים הקשורים לגליקוליזה וגלוקונאוגנזה, בעוד שנקודת הזמן של 24 שעות הייתה קשורה למטבוליזם גופרית.

פוספטידילינוזיטול PI(16:0/18:2(9Z,12Z)) הראה הבחנה חזקה במצב המיידי לאחר האימון, ותיוסולפט היה קשור למצב ההתאוששות של 24 שעות. ממצאים אלו תומכים בשימוש בזרימת עבודה זו לפרופיילינג שכפול של שינויים מטבוליים הקשורים לפעילות גופנית בקבוצה זו של שבעה מתאגרפים גברים עילית. הפרוטוקול מיועד למחקרים מבוקרים של קבוצות קטנות של פעילות גופנית חריפה והחלמה קצרה טווח, ומדגיש טיפול בדגימה שחוזרת, ניטור בקרת איכות משותף וניתוח ניתן לפרשנות במורד הזרם.

מבוא

איגרוף עילית, המאופיין בשלושה סבבים של 2 דקות של ספארינג בעצימות גבוהה, מתבסס על שילוב של מטבוליזם אנאירובי ואירובי ומפעיל שינויים מהירים במצעי האנרגיה, מתווכי לחץ חמצוני ומטבוליטים הקשורים לתיקון רקמות. הערכות מסורתיות (לקטט דם וקצב לב) לוכדות רק נקודות קצה פיזיולוגיות מבודדות, ואינן מצליחות לפתור את השינויים המטבוליים המערכתיים והמקושרים שמתפרסים על פני "קו הבסיס לפני האימון → לחץ חריפה לאחר האימון → התאוששות של 24 שעות."

מטבולומיקה לא ממוקדת, המופעלת על ידי ספקטרומטריית מסה טנדם של כרומטוגרפיה נוזלית-קוודרופולית-זמן-טיסה, מתמודדת עם מגבלה זו על ידי פרופיל מקיף של מטבוליטים של מולקולות קטנות בדגימות ביולוגיות. הוא בדרך כלל מזהה אלפי פסגות מטבוליות ומסמן מאות עד אלפי מטבוליטים באמצעות אינטגרציה עם מסדי נתונים מוקפדים ^1,2,3. גישה זו יכולה לחשוף דינמיקות מטבוליות מורכבות שהשיטות המסורתיות מפספסות אותן, אך מחקרים מטבולומיים קיימים המתמקדים באיגרוף חסרים סטנדרטיזציה: לעיתים קרובות הם משמיטים פרוטוקולי אימון מבוקרים, שלבי בקרת איכות קפדניים (QC) או זמני החלמה ארוכי טווח, מה שמוביל לתוצאות בלתי שחזוריות ולהגבלת תרגום לאימון או אסטרטגיות התאוששות ^4,5.

מוצגת זרימת עבודה מטבולומית סטנדרטית המבוססת על כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם-זמן טיסה מרובע, ומותאמת למתאגרפים עילית, כדי ללכוד הן תגובות אימון חריפות והן התאוששות מאוחרת. הפרוטוקול כולל שלוש נקודות זמן מרכזיות (לפני הקרב [T0], מיד לאחר הקרב [T1], 24 שעות לאחר הקרב [T2]) להבחנה בין לחץ חולף לבין התאמה מתמשכת ^6,7,8. מאפיינים טכניים קריטיים כוללים: (1) ספארינג מבוקר (80–85% דופק מקסימלי) להבטחת עוצמת אימון עקבית ^7,9; (2) LC-QTOF ברזולוציה גבוהה לגילוי רגיש של מטבוליטים בסרום בעלי שפע נמוך ^2,3,10; (3) ניתוחים רב-משתניים וחד-משתניים, כולל ניתוח רכיבים עיקריים (PCA), ניתוח חלקי אורתוגונלי של מינימום ריבועים (OPLS-DA), ובדיקות סטטיסטיות זוגיות, לזיהוי מטבוליטים מגיבים לאימון ^6,8,11; ו-(4) דגימת QC סרום אחת מאוחדת (ערבוב בנפח שווה של דגימות מחקר) עם מספר הזרקות להערכת יציבות המכשיר מול סטיית אות¹².

פרוטוקול זה עשוי להיות מותאם לענפי ספורט אינטנסיביים וקצרים אחרים (למשל, ספרינט והיאבקות), אך העברה כזו דורשת אימות בקבוצות ספציפיות לספורט. במחקר הנוכחי, תהליך העבודה מספק מסגרת ראשונית לזיהוי סמנים מטבוליים של לחץ והחלמה אצל מתאגרפים גברים עילית. תהליך עבודה זה מתאים במיוחד למחקרים מבוקרים של פעילות גופנית חריפה והחלמה קצרה טווח בקבוצות ספורטיביות קטנות ומאופיינות היטב, המשתמשות במטבלומיקה לא ממוקדת מבוססת סרום. ייתכן שהוא פחות מתאים להרחבה ישירה לענפי ספורט אחרים, ספורטאיות, אוכלוסיות הטרוגניות גדולות יותר, או מחקרי הסתגלות ארוכי טווח ללא אימות נוסף.

המחקר נועד לאפיין שינויים מטבוליים בסרום שנגרמו על ידי אימון אגרוף עילית ולהבחין בין תגובות חריפות לאחר הקרב לבין שינויים הקשורים להחלמה של 24 שעות. הושערה כי ספארינג אקוטי ישפיע בעיקר על חילוף החומרים של האנרגיה, בעוד שהתאוששות של 24 שעות תהיה קשורה למטבוליטים הקשורים לאיזון רדוקס ותיקון רקמות. תהליך העבודה הכולל מוצג באיור 1.

פרוטוקול

לבצע את כל ההליכים בהתאם לאישור ועדת האתיקה המוסדית למחקר אנושי של אוניברסיטת קפיטל לחינוך גופני וספורט (אישור מס' 2025A005).

זהירות: התייחסו לכל דגימות הדם האנושיות כאילו הן מדבקות פוטנציאלית. לבש כפפות, מעיל מעבדה והגנה על עיניים. ביצוע איסוף דם ורידי, טיפול בסרום והשלכת פסולת בהתאם לנהלי הבטיחות הביולוגית המוסדיים. ניקוי משטחי עבודה לאחר טיפול בדגימות.

זהירות: מתנול, אצטוניטריל וחומצה פורמית הם כימיקלים מסוכנים. טפל בשלבי הכנה, חילוץ והרכבת מחדש של ממס במכסה אדים כימי מוסמך. הימנעו ממגע עור ושאיפה. אספו פסולת ממס במיכלים מאושרים.

1. גיוס והכנה למשתתפים במחקר

1. לגייס שבעה מתאגרפים גברים עילית בגילאי 20–28 המתחרים בקטגוריות משקל 60–75 ק"ג.
2. ודאו שלכל משתתף יש לפחות 5 שנות ניסיון מקצועי וללא היסטוריה של מחלות מטבוליות.
3. יש להוציא משתתפים עם פגיעה במערכת השרירים והשלד במהלך 6 החודשים הקודמים.
4. הנחו את המשתתפים לעקוב אחרי תזונה סטנדרטית הכוללת 55% פחמימות, 25% חלבון ו-20% שומן במשך 3 ימים לפני הבדיקה.
5. הנחו את המשתתפים להימנע מפעילות גופנית מאומצת ב-60% או מעל דופק הלב המרבי למשך 48 שעות לפני הבדיקה.
6. הנחו את המשתתפים לצום במשך 12 שעות לפני איסוף הדם. לאפשר צריכת מים במהלך תקופת הצום.
7. קבעו את קצב הלב המקסימלי על ידי בדיקת אימון מדורגת שבוע לפני האימון.
8. הגבר את מהירות ההליכון ב-1 קמ"ש כל 3 דקות עד לעייפות. השתמש בקצב הלב המרבי הנמדד כדי להגדיר את עוצמת היעד של הקרב.

2. פרוטוקול ספארינג ואיסוף דגימות סרום

1. הכינו זירת אגרוף סטנדרטית באורך 6 × 6 מטר, כפפות של 16 אונקיות ומד דופק עם רצועת חזה.
2. בצע חימום סטנדרטי של 10 דקות הכולל 5 דקות ריצה במהירות 8 קמ"ש, 3 דקות מתיחה דינמית ו-2 דקות של shadowboxing.
3. בצע את פרוטוקול האימון כך.
   1. ערכו שלושה סבבי ספארינג של 2 דקות כל אחד.
   2. התמודדו מול יריבים לפי קטגוריית משקל ורמה טכנית.
   3. אפשר מרווח מנוחה של דקה בין הסיבובים.
   4. עקבו אחרי קצב הלב כל 30 שניות לאורך כל המפגש.
   5. כוונן את עוצמת האימון כדי לשמור על קצב לב של 80%–85% מדופק MHR.
   6. הפסק את האימון אם קצב הלב עולה על 90% מדופק MHR. המשך את האימון רק אחרי שהדופק חוזר לטווח היעד.
4. אסוף דגימות סרום בשלוש נקודות זמן כדלקמן.
   1. איסוף 5 מ"ל דם ורידי מהווריד האנטקוביטלי 30 דקות לאחר חימום ל-T0 באמצעות צינור הפרדה סרום (SST) של 8 מ"ל.
   2. אסוף 5 מ"ל דם ורידי תוך 5 דקות לאחר הסבב האחרון ל-T1 באמצעות SST חדש.
   3. אסוף 5 מ"ל דם ורידי באותו זמן ביום עם T0 ל-T2 באמצעות SST חדש. ודאו שהמשתתפים מקפידים על אותן מגבלות צום ופעילות שהיו נהוגות ל-T0.
5. עבדו דגימות דם כדלקמן.
   1. צנטריפוגה כל SST ב-11000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס תוך שעה לאחר האיסוף.
   2. העבר 2–3 מ"ל מהשכבה העליונה של הסרום ל-1.5 מ"ל קריוביאלים.
   3. אחסן את הקריוביאלים מיד בטמפרטורה של -80°C.
   4. הגבל כל דגימה ליותר משני מחזורי הקפאה והפשרה.
6. הכינו דגימת בקרת איכות משותפת.
   1. הפשרו את כל 21 דגימות הסרום במחקר (T0, T1 ו-T2 משבעה משתתפים) על הקרח לפני הכנת QC מאוחדת.
   2. העבר אליקו שווה מכל דגימת מחקר לצינור אחד בנפח 1.5 מ"ל.
   3. העבר 20 מיקרוליטר מכל דגימה כדי לקבל נפח QC מאוחד סופי של 420 מיקרוליטר.
   4. Vortex את דגימת האיכותי המאוחדת למשך 10 שניות.
   5. השתמשו בדגימת ה-QC המאגדת להזרקות חוזרות במהלך ניתוח LC-QTOF-MS כדי לנטר יציבות אינסטרומנטלית וסטיית אותות.

3. חילוץ מטבוליטים מדגימות סרום

1. הסר דגימות סרום קפואות (T0, T1, T2 ו-QC) מ-80 מעלות צלזיוס. הפשיר את הדגימות על הקרח למשך 30 דקות ומערבולת כל דגימה במשך 10 שניות.
2. פיפט של 100 מיקרוליטר סרום לצינור מיקרוצנטריפוגה בקוטר 1.5 מ"ל עם חיבור חלבון נמוך. הוסף 500 מיקרוליטר של ממס הפקה קר המורכב ממתנול:אצטוניטריל (1:1, v/v). Vortex ל-30 שניות.
   1. אין להוסיף תקן פנימי במהלך החילוץ. אין ליישם תיקון חילוץ מבוסס תקן פנימי או נרמול במורד הזרם בזרימת העבודה הסופית.
3. סוניק את הצינור באמבט מים קרים בטמפרטורה של 4°C למשך 10 דקות בעוצמה של 300 W ו-40 kHz. דגרו את הצינור בטמפרטורה של מינוס 20°C למשך שעה אחת כדי להשקיע חלבון.
4. צנטריפוגה את הצינור ב-13200 × גרם למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. העבר כ-450 מיקרוליטר של סופרנטנט לצינור מיקרוצנטריפוגה חדש והשליך את הכדור כפסולת ביולוגית מסוכנת.
5. ייבשו את הסופרנטנט בריכוז ואקום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-0.09 מגה-פסקל למשך 45 דקות או עד להשגת יובש מלא.
6. לשחזר את התמצית המיובשת ב-100 מיקרוליטר של אצטוניטריל:מים (1:1, v/v). Vortex ל-30 שניות.
   הערה: אצטוניטריל:מים (1:1, v/v) שימש משום שהיה תואם לעמודת הכרומטוגרפיה בפאזה הפוכה ששימשה בזרימת עבודה זו ולא יצר משקעים נראים לעין בבדיקות הראשוניות.
7. צנטריפוגה את התמיסה המחודשת ב-13200 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. העבר כ-90 מיקרוליטר של סופרנטנט לבקבוקון זכוכית LC-MS המצויד בתוספת של 200 מיקרוליטר ואטום את הבקבוקון.

4. זיהוי ספקטרומטריית מסה בכרומטוגרפיה נוזלית

1. להתקין עמודת כרומטוגרפיה הפוכה, המתאימה למטבולומיקה של הסרום (ראו טבלת חומרים) במערכת הכרומטוגרפיה הנוזלית. כוון את תנור העמודה ל-40 מעלות צלזיוס.
2. הכינו את שלב A הנייד כחומצה פורמית של 0.1% (v/v) במים אולטרה-טהורים. הכינו את שלב B הנייד כחומצה פורמית של 0.1% (v/v) באצטוניטריל.
3. סינן את שני הפאזות הניידות דרך ממברנה של 0.22 מיקרון.
4. הגדר את קצב הזרימה ל-400 מיקרוליטר/דקה ונפח ההזרקה ל-5 מיקרוליטר.
5. הפעילו את השיפוע הבא: 0.0–0.5 דקות, 95% A ו-5% B; 0.5–5.5 דקות, שיפוע ליניארי ל-50% A ו-50% B; 5.5–9.0 דקות, שיפוע ליניארי ל-5% A ו-95% B; 9.0–10.5 דקות, 5% A ו-95% B; 10.5–12.0 דקות, חוזרים ל-95% A ו-5% B וחוזרים לאיזון
6. חבר את מערכת הכרומטוגרפיה הנוזלית לספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה המצויד במקור יינון אלקטרוספריי.
7. אסוף נתונים במצבי יון חיובי ושלילי בריצות נפרדות.
8. במצב יון חיובי, כוון את מתח הקפילרי ל-2500 וולט ואת מתח הקונוס ל-30 וולט.
9. במצב יון שלילי, הגדר את מתח הקפילרי ל-2000 וולט ומתח הקונוס ל-25 וולט.
10. הגדר את טמפרטורת גז המסה ל-500 מעלות צלזיוס, את זרימת גז ההמסה ל-800 ליטר/שעה, ואת זרימת גז הקונוס ל-50 ליטר/שעה.
11. רכש נתונים מעל m/z 50–1200 עם זמן סריקה של 0.2 שניות.
12. רכישת נתוני ספקטרומטריית מסה טנדם באמצעות אנרגיית התנגשות נמוכה ב-0 וולט ואנרגיית התנגשות גבוהה ב-10–40 וולט.
13. הרץ דגימות בסדר הבא: הזרקה אחת ריקה של ממס מחדש; שלוש הזרקות רצופות של דגימת ה-QC המאוחדת; כל דגימות המחקר עם הזרקה ריקה אחת והזרקת QC אחת לאחר כל חמש דגימות מחקר; זריקת בקרת איכות אחרונה; והזרקה ריקה אחרונה
14. הערכת איכות הנתונים ויציבות אנליטית בשני מצבי היונים באמצעות ניתוח מתאם QC משולב ואשכול ניתוח רכיבים עיקריים (PCA).
15. פרש מקדמי קורלציה מאוגדים-בקרת איכות הגדולים מ-0.8 כמצביעים על יציבות אנליטית מקובלת לאורך הרצף האנליטי.

5. קדם-עיבוד נתונים וניתוח סטטיסטי

1. ייבוא קבצי כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה גולמיים לתוכנת עיבוד נתונים ליישור זמן שימור, דה-קונבולוציה, יישור שיא והפקת תכונות (ראו טבלת חומרים).
   1. בחר את הזרקת האיכות-איכות המאגדת הראשונה כהפניה ליישור.
   2. בצע יישור זמן שמירה, דה-קונבולוציה ויישור שיא באמצעות זרימת העבודה ברירת המחדל של התוכנה הנבחרת. השתמש בסבילות זמן שמירה של ± 0.1 דקה ובסבילות מסה של ± 5 ppm.
   3. לבצע פיקינג שיא ולשמור על תכונות בעוצמה גבוהה מ-1000 ספירות שנמצאות לפחות ב-80% מהדגימות בקבוצה אחת לפחות.
   4. אין להחיל נרמול נוסף לאחר עיבוד מוקדם באף אחד ממצבי היונים.
   5. ייצא את טבלת התכונות המעובדת המכילה m/z, זמן שמירה וערכי שטח שיא.
   6. כל עוצמות השיא נשמרו על Log2.
   7. מייחסים ערכים חסרים עם חמישית מהערך החיובי המינימלי לכל תכונה.
   8. מרכז ממוצע לכל תכונה ולחלק בסטיית התקן לפני ניתוח רב-משתני.
   9. השתמשו במטריצה המומרת והקנה מידה לניתוח רכיבים עיקריים (PCA), ניתוח ריבועים חלקיים-דיסקרימיננטיים (PLS-DA), ניתוח ריבועים חלקיים אורתוגונליים-מבחינים (OPLS-DA), אשכולות וניתוח קורלציה. השתמש בעוצמות התכונות המעובדות המקוריות לגרפים של שפע.
2. הערות על מטבוליטים על ידי התאמת תכונות למאגרי מידע ציבוריים של מטבולומיקה, כולל מסד הנתונים של מטבולומים אנושיים (HMDB), אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG), ומפות LIPID כאשר רלוונטי.
   1. לדרג כל הערה לפי שגיאת מסה של יוני הפרקורסור, התפלגות איזוטופים, והתאמת קטעי ספקטרומטריית מסה טנדם. הקצה מקסימום של 20 נקודות לכל קריטריון.
   2. החלו חלון שגיאת מסה של יוני קדם-מבצר של 100 ppm וחלון שגיאת מסה של יוני מקטעים של 50 ppm. אל תפעיל חלון זמן שמירה קבוע.
   3. שמרו הערות עם ציון כולל של לפחות 40 מתוך 60. החריגו הערות עם ניקוד נמוך יותר.
3. הגדר קבוצות השוואה במפורש כך: A = T0 (לפני ספארינג), B = T1 (מיד לאחר ספארינג), ו-C = T2 (24 שעות לאחר ספארינג).
4. בצע ניתוחים סטטיסטיים בהמשך באמצעות תוכנות מחשוב סטטיסטיות וחבילות ניתוח נלוות (ראו טבלת חומרים).
   1. הרץ ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) לאחר קנה מידה של שונות יחידה והמחשה את גרפים הניקוד.
   2. בנה מודלים של ניתוח מינימום ריבועי חלקי (PLS-DA) וניתוח ריבועים חלקיים אורתוגונלי (OPLS-DA) עבור A מול B, B מול C, ו-A מול C.
   3. השתמש באימות צולב של 7 פעמים כאשר מספר המדגם הוא לפחות 7. אם מספר הדגימה קטן מ-7, יש להגדיר את מספר הקפלים השווה למספר הדגימות.
   4. בצע 200 בדיקות פרמוטציה להערכת תוקף המודל.
   5. סקר מטבוליטים דיפרנציאליים על ידי יישום הספים הבאים: שינוי קיפול (FC) ≥ 2 או FC ≤ 0.5, חשיבות משתנה בהקרנה (VIP) ≥ 1, ו-t-test P. < 0.05.
   6. צור גרפים של הרי געש וגרפיקות סטטיסטיות קשורות להשוואות זוגיות.
   7. יצירת מפות חום באמצעות מטריצת log-2 ומוגדרת לפי שונות יחידה.
   8. יצר מפות חום מתאמות עם סף מובהקות של P ≤ 0.05 והצג עד 20 מטבוליטים.
   9. קבעו את מספר האשכולות האופטימלי לפני קיבוץ k-ממוצעים. בצע קיבוץ k-means לאחר קנה מידה של שונות יחידה.
   10. יצר גרפים של שורת שפע מתוך עוצמות התכונות המעובדות המקוריות.
   11. צור דיאגרמות ון כדי לסכם חפיפה בין השוואות זוגיות.
   12. בצע ניתוח מאפייני פעולה של מקלט (ROC) עבור מטבוליטים נבחרים. הערך את ביצועי האבחון לפי השטח מתחת לעקומה (AUC).
5. מיפוי מטבוליטים דיפרנציאליים למסלולי KEGG באמצעות פונקציית העשרת מסלולים בחבילת ביואינפורמטיקה מתאימה (ראו טבלת חומרים).
   1. פרש מסלולים עם P. < 0.05. לא דווח תיקון בדיקות מרובות ברשומות הניתוח הסופיות.

תוצאות

אימות בקרת איכות (QC) של נתוני LC-QTOF-MS/MS

להערכת יציבות האות ויכולת השחזור, נותחו הזרקות חוזרות של דגימת QC מאוחדת בשני מצבי היונים. מקדמי הקורלציה של ספירמן בין הזרקות איכות-איכות מאוחדות עלו על 0.8 בשני מצבי היונים, מה שהצביע על ביצועים יציבים של המכשיר לאורך רצף האנליזה. PCA של כל דגימות המחקר והזרקות QC הראה קיבוץ הדוק של זריקות QC וללא חריגים ברורים, מה שתמך ביציבות אנליטית מקובלת (איור 2). לא נצפתה פיזור ...

דיון

תהליך העבודה הסטנדרטי הזה אפיין שינויים במטבוליטים הקשורים לקרבות אגרוף עילית ולהחלמה קצרה טווח בקבוצה קטנה ומבוקרת. הזרקות QC מאוחדות, ניתוח קורלציה מבוסס QC, אשכולות PCA וניתוחים רב-משתניים יחד תמכו ביציבות אנליטית מקובלת. הצלחת הפרוטוקול התבססה בעיקר על ארבעה גורמים: שמירה על עוצמת האימון בטווח של 80%–85% מהדופק המקסימלי, עיבוד דגימות דם תוך שעה לאחר האיסוף, הגבלת כל דגימה לשני מחזורי הקפאה-הפשרה, ומעקב אחר רצף האנליטי עם הזרקות איכות-איכות. במאגר הנתונים הנוכחי, ביצועי השיטה המקובלים...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ריאגנטים	אצטוניטריל	מרק	דרגת LC-MS, CAS 75-05-8
ריאגנטים	מתנול	מרק	דרגת LC-MS, CAS 67-56-1
ריאגנטים	חומצה פורמית	TCI	דרגת LC-MS, CAS 64-18-6
מוצרי צריכה	מפעיל קריש דם סרום עם צינור ואקום	גריינר ביו-וואן	צינור מפעיל קריש דם באורך 8 מ"ל
מוצרי צריכה	בקבוקון קריוגני נלג'ין	תרמו פישר סיינטיפיק	1.5 מ"ל, הברגה חיצונית
מוצרי צריכה	צינור לובינד חלבון	אפנדורף	חתול. מספר 0030108442, 1.5 מ"ל
כלי זכוכית	בקבוקון זכוכית עם בורג עם תוספת	אג'ילנט	בקבוקון 2 מ"ל עם 200 ו-mu; תוספת זכוכית L; הכנס את החתול. מס' 5183-2090
מוצרי צריכה	מסנן מילקס-GP	מרק	חתול. לא. SLGP033RS, 0.22 & mu; ממברנת m
כלים	טבעת אגרוף מותאמת אישית בגודל 6x6 מטר	ספורט מואי תאי	6 & פעמים; טבעת האימון של 6 מטר
מוצרי צריכה	כפפות אגרוף Pro Style 2	אברלאסט	16 אונקיות
כלים	פולאר H10	פולאר	חיישן דופק עם רצועת חזה
כלים	קוואזר	H/P/Cosmos	הליכון ממונע
כלים	צנטריפוגה 5425 R	אפנדורף	מיקרוצנטריפוגה מקוררת
כלים	ברנסוניק CPX2800	אמרסון / ברנסון	אמבטיה דיגיטלית אולטרסונית 40 קילוהרץ
כלים	Savant SpeedVac SPD1030	תרמו פישר סיינטיפיק	מרוכז ואקום משולב
כלים	VWR Mini Vortex Mixer	Avantor / VWR	חתול. מס' 10153-688
כלים	מקפיא TSX ULT	תרמו פישר סיינטיפיק	דגם TSX50086A
כלים	ACQUITY UPLC I-Class PLUS	מים	מערכת UHPLC
כלים	Xevo G2-XS QTof	מים	ספקטרומטר מסה QTOF
כלים	עמודת ACQUITY UPLC HSS T3	מים	P/N 176001132, 1.8 & mu; m, 2.1 & פעמים; 100 מ"מ
תוכנה	MassLynx	מים	גרסה 4.2
תוכנה	פרוגנזה QI	מים	גרסה 2.3
תוכנה	R	קרן R למחשוב סטטיסטי	גרסה 3.6.1
תוכנה	PRCOMP	בסיס R	פונקציית בסיס R
תוכנה	ROPLS	ביו-קונדוקטור	חבילת R
תוכנה	פיטמאפ	קראן	חבילת R
תוכנה	קורפלוט	קראן	חבילת R
תוכנה	קמינים	בסיס R	פונקציית בסיס R
תוכנה	NbClust	קראן	חבילת R
תוכנה	ון	קראן	חבילת R
תוכנה	MetaboAnalystR	מעבדת CRAN / שיאה	גרסה 1.0
תוכנה	pROC	קראן	גרסה 1.15.0
תוכנה	clusterProfiler	ביו-קונדוקטור	חבילת ביו-מוליך
מאגרי מידע	מאגר מטבולומים אנושיים (HMDB)	HMDB	מאגר נתונים מקוון
מאגרי מידע	אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG)	KEGG	מאגר נתונים מקוון
מאגרי מידע	מפות ליפידים	מפות ליפידים	מאגר נתונים מקוון