הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

מודולציה פרמקולוגית של ALDH2-SIRT1-ציר לחץ רשתית אנדופלזמית בניוון רשתית שנגרם על ידי MNU בעכברים C57BL/6: מחקר בחיים

139 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70755

⸱

23 ביוני 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Fuzong Clinical Medical College of Fujian Medical University, Dongfang Hospital Affiliated to Xiamen University, 2The Third Hospital of Zhangzhou, 3The General Hospital of Western Theatre Command, 4Xijing Hospital, Air Force Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

המחקר כלל מתן מתיל-ניטרוזוריאה לעכברים מסוג C57BL/6 כדי לגרום לנזק לרשתית, ולאחר מכן טיפול במפעילים ומעכבים של ALDH2 לצד מודולטורים של SIRT1 ומודולטורים של לחץ רשתית אנדופלסמית (ERS). הפרוטוקול נועד לחקור את ההשפעות המגנות של טיפולים אלו על ניוון הרשתית והשפעתם על מטבוליזם האלדהיד.

תקציר

מחקר זה חקר את ההשפעות המגנות של הפעלת אלדהיד דה-הידרוגנאז 2 (ALDH2) (באמצעות Alda-1), עיכוב ALDH2 (באמצעות Daidzin), ומודולציה של סירטואין 1 (SIRT1) ולחץ רשתית אנדופלזמי (ERS) על נזק רשתי שנגרם על ידי מתיל-ניטרוזוריאה (MNU) בעכברים C57BL/6. שבעים ושתיים עכברים חולקו באקראי לשמונה קבוצות, כולל קבוצת ביקורת, קבוצה של MNU בלבד, וקבוצות שילוב טיפול שונות. העכברים קיבלו הזרקות תוך-פריטוניאליות של אגוניסטים ומעכבים שמכוונים לציר ALDH2-SIRT1-ERS, בהתאמה. משקל הגוף, עובי שכבת הרשתית וסמנים ביולוגיים של מטבוליזם האלדהיד נבדקו ביום השני והרביעי לאחר הטיפול. מתן MNU גרם להידרדרות הרשתית, שגרמה לירידה משמעותית במשקל הגוף בכל הקבוצות פרט לקבוצת הביקורת. הטיפול באלדא-1 הפחית את הנזק לרשתית, בעוד שדיידזין החריף אותו. עיכוב פרמקולוגי של SIRT1 (באמצעות EX-527) הפחית את ההשפעות המגנות של אלדה-1, והשראת ERS (באמצעות TUN) כמעט ביטלה את יתרונותיו. לעומת זאת, הפעלת SIRT1 (באמצעות SRT1720) הפחיתה את תופעות הלוואי של דיידזין, בעוד שעיכוב ERS (באמצעות 4-PBA) הקל חלקית על השפעת דיידזין. יתרה מזאת, MNU העלה את רמות סמני חילוף החומרים של אלדהיד (מלונדיאלדהיד [MDA] ו-4-הידרוקסי-2-נוננל [4-HNE]), כאשר אלדה-1 הפחית ו-Daidzin העלה את הרמות הללו. בנוסף, המודולציה הפרמקולוגית של מסלולי SIRT1/ERS התערבה בהשפעות הרגולציה של אלדא-1 ודיידזין על חילוף החומרים של האלדהיד. בסך הכול, הפעלת ALDH2 הגנה על מבנה הרשתית ווויסתה את חילוף החומרים של האלדהיד, ומדגישה את התפקיד הקריטי של ציר האיתות ALDH2-SIRT1/ERS בהפחתת ניוון הרשתית.

מבוא

ניוון רשתית, גורם מוביל לעיוורון ברחבי העולם, כולל מצבים כמו רטיניטיס פיגמנטוזה (RP), ניוון מקולרי הקשור לגיל (AMD) ורטינופתיה סוכרתית (DR), המשפיעים יחד על מיליוני אנשים ומטילים עול סוציו-אקונומי משמעותי 1,2,3. עם זאת, כיום קיימת מחסור בטיפולים תרופתיים יעילים במיוחד לעצירת התקדמות מחלות הרשתית העיוורות הללו בפרקטיקה קלינית. הפתוגנזה של ניוון הרשתית היא רב-גורמית, הכוללת לחץ חמצוני, דלקת כרונית ולחץ רשתית אנדופלזמית (ERS), אשר מפריעה להומאוסטזיס של תאי הרשתית. גורמי לחץ אלו מופעלים לעיתים קרובות על ידי דיסרגולציה מטבולית פנימית (למשל, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה), מה שמוביל בסופו של דבר לאפופטוזיס ולנזק בלתי הפיך לרשתית4. מתיל-ניטרוזוריאה (MNU), סוכן אלקילט DNA עוצמתי, הפך לגורם כימי בשימוש נרחב למידול ניוון רשתית5. מודל מחלת הרשתית המושרה על ידי MNU משמש ככלי חשוב לחקר מנגנוני מחלה ולהערכת התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. מבחינה מכנית, MNU גורם ללחץ חמצוני על ידי יצירת מיני חמצן פעילים (ROS) והפרעת איזון החמצון האדום, ובכך פוגע בממברנות האורצפטורים והאברונים. דבר זה עשוי גם להשפיע על חילוף החומרים של האלדהיד, ולפגוע בניקוי רעלים של פרוקסידציה של שומן. הצטברות אלדהידות רעילה לאחר מכן עלולה להחמיר נזק חמצוני, ולהגביר את אפופטוזיס קולטני האור.

אלדהיד דה-הידרוגנאז 2 (ALDH2), אנזים התלוי ב-NAD+ במיטוכונדריה, ממלא תפקיד קריטי בניקוי אלדהידים רעילים כגון 4-הידרוקסית-2-נוננאל (4-HNE) ומלונדיאלדהיד (MDA) על ידי המרתם לחומצות קרבוקסיליות פחות תגובתיות, ובכך מונע נזק חמצוני7. פעילות חזקה של ALDH2 חיונית לשמירה על הומאוסטזיס רדוקס, ותפקוד ALDH2 לקוי נקשר להזדקנות מואצת ופתולוגיות ניווניות נוירודגנרטיביות8. הפעלה פרמקולוגית של ALDH2, במיוחד באמצעות האגוניסט המולקולי הקטן Alda-1, הוכחה כמפעילה אפקטים ציטופרוטניים במודליםשונים 9,10. סירטואין 1 (SIRT1), ניקוטינמיד, אדנין דינוקלאוטיד + (NAD+) התלוי בדיאצטילאז, מווסת תגובות לחץ ומטבוליזם אנרגיה על ידי ויסות גורמי שעתוק, כולל p53 ופקטור גרעיני קאפה B (NF-κB)11. הפעלת SIRT1 הראתה פוטנציאל בקידום תפקוד מיטוכונדריה והישרדות תאים, כאשר מחקרים קישרו את ההגברה שלו להפחתת נזק חמצוני ודלקת בניוון הרשתית12. לחץ רשת אנדופלזמית (ERS), המופעל על ידי הצטברות חלבונים מקופלים בצורה שגויה, מפעיל את תגובת החלבון הפתוח (UPR), שיכולה להפוך למפל פרו-אפופטוטי תחת לחץ כרוני. ERS נקשר לניוון הרשתית, ותורם לאפופטוזיס של קולטניהאור 13. למרות ממצאים אלו, האינטראקציה הספציפית בין ALDH2, SIRT1 ו-ERS בהקשר של מודל הניוון הרשתית המושרה על ידי MNU עדיין לא מובנת היטב. בנוסף, התפקידים המתואמים של המסלולים המקושרים הללו דורשים חקירה שיטתית נוספת.

לכן, המחקר הנוכחי נועד לחקור את השפעות הרכיבים המרכזיים בציר ALDH2-SIRT1-ERS — ALDH2 (דרך Alda-1 או Daidzin), SIRT1 (דרך SRT1720 או EX527) ו-ERS (באמצעות 4-PBA או TUN) — על נזק רשתית שנגרם על ידי MNU בעכברים C57BL/6. באמצעות ניתוחים היסטופתולוגיים וביוכימיים, בדקנו כיצד מיקוד בציר זה משפיע על הישרדות קולטני האור ועל מטבוליזם האלדהיד. השענו כי הפעלה מתואמת של ALDH2, הגברת SIRT1 ודיכוי ERS יפחיתו באופן סינרגטי את הניוון הרשתית המושרה על ידי MNU, ובכך יספקו הצדקה למיקוד בציר זה במחלות ניווניות רשתית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הצהרה אתית
כל הפרוטוקולים הניסיוניים נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש הניסויי בבעלי חיים של המכללה הרפואית הקלינית פוזונג באוניברסיטת פוג'יאן לרפואה, ובוצעו בהתאם להצהרת האגודה למחקר ראייה ועיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים במחקר עיניים וראייה.

הקצאת בעלי חיים וקבוצות
בסך הכל התקבלו 72 עכברים זכרים מסוג C57BL/6 (בגיל 8–10 שבועות, משקל גוף 20–25 גרם) מהספק המוסמך, בהתאם לסטנדרטים הלאומיים לגידול בעלי חיים במעבדה. העכברים הוחזקו בכלובים מאווררים בנפרד בתנאי סביבה סטנדרטיים, כולל מחזור אור/חושך של 12 שעות, טמפרטורה מבוקרת (22 ± 2 מעלות צלזיוס) ולחות יחסית (50% ± 10%), עם גישה חופשית למזון ומים. כדי לחקור את ההשפעות המודולטוריות של מסלולי ALDH2, SIRT1 ו-ERS על נזק רשתית שנגרם על ידי MNU, העכברים חולקו באקראי לשמונה קבוצות ניסוי (n = 9 לקבוצה; n = 5 לקבוצת היום השני; n = 4 לקבוצת היום הרביעי) באמצעות רצף אקראי שנוצר במחשב כדי למזער הטיית בחירה. התקציר הגרפי של המחקר הוצג באיור 1.

הכנת ריאגנטים ומשטרי טיפול
החומרים הניסיוניים ששימשו במחקר זה הופיעו בטבלת החומרים, עם מידע מפורט על ההכנה והמינון כדלקמן. (1) MNU (50 מ"ג/ק"ג): 100 מ"ג MNU הומסו ב-2 מ"ל של תמלח רגיל להכנת תמיסה של 50 מ"ג/מ"ל. לאחר מכן, 1.4 מ"ל מהתמיסה דוללה עם 5.6 מ"ל תמיסת מלח רגילה לריכוז סופי של 10 מ"ג/מ"ל למתן בעלי חיים. (2) אלדה-1 (10 מ"ג/ק"ג): 50 מ"ג אבקת אלדה-1 הומסו ב-1 מ"ל דימתיל סולפוקסיד (DMSO) להכנת תמיסה של 50 מ"ג/מ"ל, שדוללה ב-24 מ"ל תמלח רגיל לריכוז סופי של 2 מ"ג/מ"ל. (3) דייידזין (10 מ"ג/ק"ג): 50 מ"ג אבקת דיידזין הומסו ב-1 מ"ל DMSO להכנת תמיסה של 50 מ"ג/מ"ל, אשר מדוללת לאחר מכן ב-24 מ"ל של תמלח רגיל לריכוז סופי של 2 מ"ג/מ"ל. (4) EX-527 (10 מ"ג/ק"ג): 5 מ"ג אבקת EX-527 הומסו ב-0.1 מ"ל DMSO להכנת תמיסה של 50 מ"ג/מ"ל, שדוללה ב-2.4 מ"ל תמלח רגיל לריכוז סופי של 2 מ"ג/מ"ל. (5) SRT1720 (10 מ"ג/ק"ג): 5 מ"ג אבקת SRT1720 הומסו ב-0.1 מ"ל DMSO וערבבו היטב. לאחר מכן, נוספו 400 מיקרוליטר PEG300, 50 מיקרוליטר של טווין-80, ו-450 מיקרוליטר של תמיסת מלח רגילה להכנת תמיסת עבודה של 2 מ"ג/מ"ל. (6) TUN (10 מ"ג/ק"ג): 5 מ"ג אבקת TUN הומסו ב-0.1 מ"ל DMSO להכנת תמיסה של 50 מ"ג/מ"ל, אשר מדוללת לאחר מכן ב-2.4 מ"ל תמיסת מלח רגילה לריכוז סופי של 2 מ"ג/מ"ל. (7) 4-פנילבוטיראט (4-PBA; 10 מ"ג/ק"ג): 2 מ״ג אבקת 4-PBA הומסו ב-1 מ״ל תמלח רגיל להכנת תמיסה של 2 מ״ג/מ״ל. כל נפחי הניהול הנ"ל היו 5 × M מיליליטר (כאשר M = משקל גוף בעל חיים בק"ג). לאחר מכן, העכברים חולקו לשמונה קבוצות עם פרוטוקולי הטיפול הבאים:

קבוצת ביקורת: הזרקה תוך-פריטוניאלית אחת של מי מלח תקינה.
קבוצת MNU: הזרקה תוך-פריטונלית אחת של MNU.
קבוצת MNU + אלדה-1: הזרקה תוך-פריטוניאלית של אלדה-1, ואחריה מתן יחיד של MNU שעתיים לאחר מכן. לאחר מכן ניתן אלדה-1 תוך-פריטונית פעם ביום.
קבוצת MNU + Daidzin: הזרקה תוך-פריטוניאלית של Daidzin, ואחריה זריקת MNU אחת שעתיים לאחר מכן. לאחר מכן ניתן דיידזין תוך-פריטונית פעם ביום.
קבוצת MNU + Alda-1 + EX-527: הזרקה תוך-פריטוניאלית של Alda-1, ואחריה הזרקת EX-527 שעה לאחר מכן, והזרקת MNU שעה לאחר מכן (הזרקה אחת). לאחר מכן ניתן אלדה-1 תוך-פריטונית פעם ביום.
קבוצת MNU + Alda-1 + TUN: הזרקה תוך-פריטונלית של אלדה-1, אחריה הזרקת TUN שעה לאחר מכן, והזרקת MNU שעה לאחר מכן. לאחר מכן ניתן אלדה-1 תוך-פריטונית פעם ביום.
MNU + Daidzin + קבוצת SRT1720: הזרקה תוך-מצרחית של Daidzin, ואחריה הזרקה SRT1720 שעה לאחר מכן, והזרקת MNU שעה לאחר מכן. לאחר מכן ניתן דיידזין תוך-פריטונית פעם ביום.
קבוצת MNU + Daidzin + 4-PBA: הזרקה תוך-פריטוניאלית של Daidzin, ואחריה הזרקת 4-PBA שעה לאחר מכן, והזרקת MNU שעה לאחר מכן. לאחר מכן ניתן דיידזין תוך-פריטונית פעם ביום.

ניטור משקל גוף
רעילות מערכתית וההשפעות הפיזיולוגיות הקשורות לטיפול נבדקו על ידי רישום משקל הגוף של כל עכבר מדי יום במשך ארבעה ימים רצופים לאחר מתן MNU. המשקלים נמדדו באמצעות סולם דיגיטלי מדויק בדיוק של ±0.1 גרם, ותועדו נתונים למעקב אחר מגמות בירידה או עלייה במשקל בין קבוצות, ששימשו כאינדיקטורים עקיפים לסבילות לטיפול וללחץ מערכתי.

בדיקת היסטופתולוגיה של הרשתית
בנקודות הזמן של היום השני והרביעי לאחר הניסוי, עכברים הושתו באמצעות פריקה צווארית לאחר הרדמה בהזרקה תוך-פריטוניאלית (I.p.) של נתרן פנטוברביטל במינון של 50–60 מ"ג/ק"ג למשקל גוף, תוך שמירה קפדנית על הנחיות המתת חסד מוסדיות. העיניים, ובמיוחד העיניים השמאליות, הוחלפו מיד. לפני הסרת הנובר, נעשה חתך קטן בלימבוס האף כדי לסמן את הכיוון. הכדורים הוטבלו לאחר מכן ב-4% פאראפורמלדהיד (PFA) במי מלח מפוזרים פוספט (PBS, pH 7.4) למשך 24 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לצורך קיבוע. העיניים הקבועות יובשו לאחר מכן באמצעות סדרת אתנול מדורגת (70%, 80%, 95% ו-100%), נוקו בקסילן, והוטמעו בבלוקים של פרפין לעיבוד היסטולוגי. במהלך ההטמעה, הכיוון הוגדר על ידי מיקום הצד האף המסומן כלפי מטה.

חתכים סדרתיים (בעובי 5 מיקרון) הוכנו באמצעות מיקרוטום סיבובי דרך ראש עצב הראייה (ONH) כדי להבטיח דגימה מייצגת של אזור הרשתית המרכזי. באופן ספציפי, חתכים נחתכו מהצד העליון לכיוון נקודת האף המסומנת, כדי להבטיח שכל החלקים יעברו דרך ה-ONH. החלקים הותקנו לאחר מכן על שקופיות זכוכית טעונות חיוביות. צביעת המטוקסילין ואאוזין (HE) בוצעה בהתאם לפרוטוקולים הסטנדרטיים. המורפולוגיה של הרשתית הוערכה באמצעות מיקרוסקופיית אור בהגדלה של 400×. המדידות נלקחו באופן שיטתי מהרשתית הטמפורלית במרחקים קבועים מראש מה-ONH: 200, 400, 600, 800, 1000 ו-1200 מיקרון. בכל מיקום נמדדו עובי רשתית כולל, אורך הסגמנט הפנימי והחיצוני (IS/OS), עובי שכבת הגרעין החיצונית (ONL), עובי השכבה החיצונית (OPL) ושכבת הגרעין הפנימית (INL).

כדי להבטיח אובייקטיביות ולמזער הטיית מדידה, הוטמע פרוטוקול בקרת איכות קפדני. באופן ספציפי, כל אחת משמונה קבוצות הניסוי חולקה לחמש או ארבע תת-קבוצות (למשל, תת-קבוצות 1, 2, 3, 4, 5). חמישה או ארבעה צופים עצמאיים, עיוורים להקצאות קבוצות, הוקצו למדוד את אותה תת-קבוצה מתאימה בכל קבוצות הניסוי (למשל, צופה A תמיד מדד תת-קבוצה 1 מכל קבוצה). בכל נקודת מדידה, נלקחו שלוש קריאות בטווח ~5 מיקרון (למשל, ב-200 מיקרון, 195 מיקרון ו-205 מיקרון) וממוצעו כדי למזער שגיאות טכניות. מדידות כמותיות בוצעו באמצעות תוכנת ImageJ (גרסה 1.54g), וערך העובי הממוצע לכל נקודה חושב כדי להבטיח שחזוריות.

סמני חילוף חומרים של אלדהיד
כדי להעריך לחץ חמצוני ומטבוליזם אלדהיד, נבדקו דגימות סרום לרמות MDA ו-4-HNE, שהן סמנים ביולוגיים מרכזיים לפרוקסידציה של שומנים ולחץ אלדהיד. באופן ספציפי, כל העכברים הורדמו באמצעות הזרקה תוך-פריטוניאלית (I.p.) של נתרן פנטוברביטל במינון של 50–60 מ"ג/ק"ג משקל גוף. לאחר שהעכברים הורדמו עמוקות, בוצעה המתת חסד באמצעות ניתוק צוואר הרחם. מיד לאחר המתת החסד, גלגלי העיניים הוצאו מהדם, ודם רטרובולברי נאסף במהירות. הדגימות הורשו להיקרש בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגה ב-3,000 × גרם במשך 10 דקות. חלק הסרום הועבר בזהירות לצינורות מיקרוצנטריפוגה ללא אנזימים ונשמר בטמפרטורה של -80°C עד לניתוח הבא. רמות MDA בסרום נמדדו באמצעות ערכות ELISA (בדיקות אימונוסורבנט מקושרות באנזימים מסחריות) בהתאם לפרוטוקולי היצרן. בקצרה, תקנים ודגימות נוספו למיקרופלטות מצופות מראש, דגרו בנוגדנים ראשוניים ספציפיים, נשטפו להסרת חומרים לא קשורים, והגיבו עם נוגדנים משניים מצורפים לפרוקסידאז חזרת (HRP). לאחר מכן נוספה סובסטרט טטרמתילבנזידין (TMB), והתגובה הסתיימה עם חומצה גופרתית. ערכי צפיפות אופטית (OD) נקראו ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט, וריכוזי MDA/4-HNE נקבעו על ידי השוואת ערכי ה-OD לעקומות סטנדרטיות שנוצרו באמצעות ריכוזים ידועים של האנליטים.

ניתוח סטטיסטי
כל הנתונים הוצגו כממוצע ± שגיאת תקן (SE). בהינתן גודל המדגם הקטן (n = 5 לקבוצת היום השני; n = 4 לקבוצת היום הרביעי), שימשו שיטות סטטיסטיות של מבחן Bootstrap. באופן ספציפי, שיטת הדגימה מחדש של Bootstrap (1,000 איטרציות עם החלפה) שימשה להערכת רווחי ביטחון של 95% (CI) עבור ממוצעים קבוצתיים ולהשוואת הבדלים בין קבוצות. לכל תוצאה (למשל, משקל, עובי רשתית, רמות MDA/4-HNE), נלקחו דגימות Bootstrap מהמאגר המקורי, והממוצע חושב לכל דגימה מחודשת. רווח ה-CI של 95% נגזרמהאחוזון ה-2.5 וה-97.5 של התפלגות ה-bootstrap. המשמעות הוערכה בעקיפין באמצעות הגישה הבאה על ידי בחינת מרווח הביטחון. אם רווח הרווח של תוצאות הבוטסטרפ לא כלל אפס, זה בדרך כלל הצביע על כך שההבדל מובהק (בהנחה השוואה של ממוצעים בין שתי קבוצות או יותר). הדמויות נוצרו באמצעות תוכנת Graphpad (גרסה 5.01).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

שינויים במשקל הגוף
לפני הניסוי, לא היו הבדלים משמעותיים במשקל הגוף בין הקבוצות. ביום השני לאחר הניסוי, למעט קבוצת הביקורת, שהראתה עלייה במשקל הגוף מ-17.0 ± 0.5 גרם ל-17.4 ±-0.4 גרם, משקל הגוף של העכברים בכל שאר הקבוצות ירד באופן משמעותי. בפרט, עכברי קבוצת MNU ירדו מ-17.4 ± 0.3 גרם ל-16.2 ± 0.2 גרם, קבוצת MNU + אלדה-1 מ-17.3 ± 0.3 גרם ל-16.7 ± 0.4 גרם, קבוצת MNU + דיידזין מ-17.3 ± 0.3 גרם ל-16.2 ± 0.3 גרם, קבוצת MNU + אלדה-1 + EX-527 מ-17.3 ± 0.4 גרם ל-16.7 ± 0.2 גרם, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקרים קודמים הציעו כי אגוניסטים של ALDH2 יכולים להציע השפעות הגנה מפני ניוון רשתית המושרה על ידי MNU14. עם זאת, השפעות ההתערבות של המעכב שלו, יחד עם מסלולים פוטנציאליים במורד הזרם כמו SIRT1 ו-ERS, לא נחקרו בפירוט. היו מחקרים שהצביעו על מעורבות SIRT1 ו-ERS במודלים של ניוון רשתית, כולל ניוון רשתית מושרה על ידי אור ועכברים מהונדסים גנטית עם ניונות רשתית15,16. הממצא המרכזי במחקר הנוכחי היה ש-MNU גרם לניוון רש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים הצהירו כי אין ניגודי עניינים פוטנציאליים בנוגע למחקר, לכתיבה או לפרסום מאמר זה.

תודות

עבודה זו נתמכה במענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82301245), קרנות משותפות לחדשנות במדע וטכנולוגיה במחוז פוג'יאן (מס' 2024Y9653), קרן המדעים הטבעיים של מחוז פוג'יאן, סין (מס' 2024J011148), וקרן הפוסט-דוקטורט למדעים של בית החולים הכללי בפוז'ואו (מספר מענק: 48678).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת 4HNEElabscience, סיןE-EL-0128למדידת רמות 4HNE בסרום
חומצה 4-פנילבוטירית (4-PBA)MCE, ארה״בHY-A0281ריאגנט לעכב ERS
Alda-1MCE, ארה״בHY-18936מפעיל ALDH2 למחקר
דאידזיןMCE, ארה״בHY-N0018מעכב ALDH2 למחקר
נתרן פלואורוסציןגואנגג'ואוN/Aמשמש לשימוש שנרכש באמצעות מערכת אנגיוגרפיה של פלואורוסצין. התמונות האנגיוגרפיות נותחו לנוכחות של דליפה, אזורים לא מוזנים או שינויים במורפולוגיה של כלי הרשתית.
תוכנת ImageJהמכונים הלאומיים לבריאות, ארה״בגרסה 1.53t
ערכת MDABeyotime, סיןS0131Sלמדידת רמות MDA בסרום
N-ניטרוסו-N-מתילוריאה (MNU)MCE, ארה״בHY-34758סוכן אלקילציה של DNA להשראת ניוון רשתית
פרפורמלדהידSigma-Aldrich, ארה״ב30525-89-4משמש לחתכים של רקמת רשתית
סולם דיגיטלי מדויקסולם אלקטרוני, סיןSF-400קיבולת: 5000 גרם & acute; 1 גרם/177ozX0.10z, המשמש לרישום משקל הגוף של כל עכבר
PrismGraphPadגרסה 5.01תוכנת ניתוח סטטיסטי
מיקרוטום סיבוביLEICA, גרמניהRM2016משמש להכנת חתכים של רשתית
סליסיסטט (EX-527)MCE, ארה״בHY-15452מעכב SIRT1 למחקר
נתרן פנטובארביטלSigma-Aldrich, ארה״ב1.93248משמש להסדרת הרדמה למחקרים מאוחרים יותר באמצעות הזרקה תוך-צפקית (IP)
SRT1720MCE, ארה״בHY-10532מפעיל SIRT1 למחקר
סומיאנקסיןחברת התרופות לבעלי חיים ג'ילין שינגדהN/Aמשמש להסדרת הרדמה למחקרים מאוחרים יותר באמצעות הזרקה תוך-צפקית (IP)
טוניקמיצין (TUN)MCE, ארה״בHY-A0098ריאגנט לעירור ERS

מקורות

  1. Gouveia, N., et al. Retinitis Pigmentosa GTPase regulator-associated retinal degeneration: integrating patient-reported outcomes, genetic, and structural biomarkers. Ophthalmol Sci. 6 (1), 100915 (2026).
  2. Sturzbecher, L., et al. Outer retina micro-inflammation is driven by T cell responses prior to retinal degeneration in early age-related macular degeneration. Front Immunol. 16, 1520188 (2025).
  3. Hajari, J. N., et al. Novel blood biomarkers to detect retinal neurodegeneration and inflammation in diabetic retinopathy. Int J Mol Sci. 26 (6), 2625 (2025).
  4. Chen, Y., et al. Retinal degeneration protein 3 mutants are associated with cell-cycle arrest and apoptosis. Cell Death Discov. 11 (1), 175 (2025).
  5. Reisenhofer, M., et al. Characteristics of Muller glial cells in MNU-induced retinal degeneration. Vis Neurosci. 33, E013 (2016).
  6. Park, D., et al. Preventive effects against retinal degeneration by Centella asiatica extract (CA-HE50) and asiaticoside through apoptosis suppression by the Nrf2/HO-1 signaling pathway. Antioxidants (Basel). 10 (4), 613 (2021).
  7. Duan, Y., et al. ALDH2 in autophagy and cell death: molecular mechanisms and implications for diseases. Mil Med Res. 12 (1), 58 (2025).
  8. Liu, H., et al. Association between ALDH2 gene polymorphism and late-onset Alzheimer disease: an up-to-date meta-analysis. Curr Alzheimer Res. 17 (2), 105-111 (2020).
  9. Lin, Y., et al. Alda-1 restores ALDH2-mediated alcohol metabolism to inhibit the NF-kappaB/VEGFC axis in head and neck cancer. Int J Mol Med. 55 (4), 55 (2025).
  10. Wang, J., et al. Alda-1 mediates cell senescence and counteracts bone loss in weightlessness through regulating mitophagy. Life Sci. 366-367, 123482 (2025).
  11. Abdulkhaliq, A. A., et al. SIRT1 in aging and diseases. J Cell Biochem. 126 (10), e70069 (2025).
  12. Yang, W., et al. CRYAA activates the SIRT1-PI3K/AKT signaling pathway by suppressing miR-155-5p to protect the RPE. Arch Biochem Biophys. 770, 110435 (2025).
  13. Navines-Ferrer, A., Pomares, E. Endoplasmic reticulum stress and rhodopsin accumulation in an organoid model of retinitis pigmentosa carrying a RHO pathogenic variant. Stem Cell Res Ther. 16 (1), 71 (2025).
  14. Yan, W., et al. Protection of retinal function and morphology in MNU-induced retinitis pigmentosa rats by ALDH2: an in vivo study. BMC Ophthalmol. 20 (1), 55 (2020).
  15. Qi, L., et al. Sirtuin type 1 mediates the retinal protective effect of hydrogen-rich saline against light-induced damage in rats. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (13), 8268-8279 (2015).
  16. Ou, C., et al. Lycium barbarum L. and Salvia miltiorrhiza Bunge extract ameliorates retinitis pigmentosa in rd10 mice by affecting endoplasmic reticulum stress. J Ethnopharmacol. 337 (Pt 3), 118971 (2025).
  17. Tsubura, A., et al. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU: disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol Histopathol. 25 (7), 933-944 (2010).
  18. An, M., et al. Predictors of foveal microstructural reconstruction after idiopathic macular hole surgery. Photodiagnosis Photodyn Ther. 53, 104541 (2025).
  19. Chen, T., et al. Protective effects of hydrogen-rich saline against N-methyl-N-nitrosourea-induced photoreceptor degeneration. Exp Eye Res. 148, 65-73 (2016).
  20. Tao, Y., et al. The temporal topography of the N-methyl-N-nitrosourea-induced photoreceptor degeneration in mouse retina. Sci Rep. 5, 18612 (2015).
  21. Nixon, E., Simpkins, J. W. Neuroprotective effects of nonfeminizing estrogens in retinal photoreceptor neurons. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (8), 4739-4747 (2012).
  22. Hu, W., et al. Global research trends on endoplasmic reticulum stress in retinal diseases from 2000 to 2024. Int Ophthalmol. 45 (1), 210 (2025).
  23. Teng, C., et al. Fucoxanthin ameliorates endoplasmic reticulum stress and inhibits apoptosis and alleviates intervertebral disc degeneration in rats by upregulating Sirt1. Phytother Res. 38 (5), 2114-2127 (2024).
  24. Sari, F. R., et al. 14-3-3 protein protects against cardiac endoplasmic reticulum stress and ERS-initiated apoptosis in experimental diabetes. J Pharmacol Sci. 113 (4), 325-334 (2010).
  25. Wan, F., et al. Knockdown of YTHDF2 initiates ERS-induced apoptosis and cancer stemness suppression by sustaining GLI2 stability in cervical cancer. Transl Oncol. 46, 101994 (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ALDH2SIRT1MNUAlda 1

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.