הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
בדגי זברה, Mollugin במינונים בטוחים (≤200 µg/mL) היה קשור לשיפור ברגנרציה של הזנב, בליווי שינויים בביטוי של גנים הקשורים לאפופטוזיס, סממנים דלקתיים, פעילות של אנזימי נוגדי חמצון וסממנים הקשורים למקרופאגים. ממצאים אלו מרמזים כי Mollugin עשוי לווסת את התגובה הפגיעתית המקומית במהלך רגנרציית הזנב בדגי זברה.
Mollugin הוא תרכובת נפתוקינון טבעית בעלת פעילויות אנטי-דלקתיות ואנטי-חמצוניות מדווחות, אך תפקידה ברגנרציה של רקמות עדיין אינו מובן במלואו. במחקר זה, נעשה שימוש במודל של קטיעת זנב בדגי זברה כדי לבחון את השפעות ה-Mollugin על תיקון פצעים ותגובות חיסוניות ותגובות חמצון-חיזור (redox) נלוות. עוברים של דגי זברה טופלו ב-Mollugin בריכוזים של 22 µg/mL, 66 µg/mL ו-200 µg/mL בעקבות פגיעה בזנב. טיפול ב-Mollugin היה קשור לשיפור בהחלמת שטח הזנב באופן תלוי-מינון, בליווי ביטוי מופחת של גנים הקשורים לאפופטוזיס ודיכוי של מתווכי דלקת, כולל IL-1β, IL-6, TNF-α, TLR4 ו-NF-κB1. במקביל, Mollugin השקימה את פעילותם של האנזימים הנוגדי-חמצון superoxide dismutase ו-catalase. הדמיית פלואורסצנציה בדגי זברה Tg(mpeg1:GFP) הראתה השפעה תלוית-זמן של Mollugin על הצטברות מקרופאגים, ללא הפחתה ניכרת ב-24 h, אך עם שטח מופחת של מקרופאגים ב-48 h בקבוצות של 66 ו-200 µg/mL בהשוואה לקבוצת המודל הפגועה. ניתוח qRT-PCR הראה עוד ביטוי מופחת של הסמן iNOS הקשור ל-M1 וביטוי מוגבר של הסמן arginase-1 הקשור ל-M2. יחד, ממצאים אלו מרמזים כי Mollugin עשוי לתמוך ברגנרציה של זנב דג הזברה בקשר לשינויים בסמנים דלקתיים, סמני סטרס חמצוני, סמנים הקשורים לאפופטוזיס וסמנים הקשורים למקרופאגים. נדרשים מחקרים נוספים כדי להגדיר את המנגנונים התאיים והמולקולריים שבבסיס תהליך זה.
התחדשות רקמות היא תהליך פיזיולוגי קריטי שבאמצעותו אורגניזמים מתקנים נזקים, והיא כוללת ויסות מורכב של שגשוג תאים, דיפרנציאציה ושמירה על הומאוסטזיס של המיקרו-סביבה1. בין המודלים של בעלי חוליות, דגי זבראפיש הפכו למערכת מרכזית לחקר מנגנוני תיכון פצעים בשל יכולתם ההתחדשותית המדהימה. בפרט, התחדשות סנפיר הזנב בדגי זבראפיש כוללת תיאום מרחבי-זמני של אירועים ביולוגיים מרובים, כולל ויסות דלקת, איזון תגובה חמצונית ובקרת אפופטוזיס2,3. בשנים האחרונות, הפכו הפעילויות הפרמקולוגיות של תוצרי טבע למוקד עניין במחקרי רפואה רגנרטיבית. תרכובות נפתוכינון, בפרט, נחקרה רבות בשל השפעותיהן הביולוגיות המגוונות4. Mollugin היא תרכובת נפתוכינון המופקת מצמחי Rubiaceae, ובמחקרים קודמים הראתה פעילות נוגדת דלקת, נוגדת חמצון וויסות של מחזור התא5,6. עם זאת, מנגנון הפעולה שלה בהתחדשות רקמות נותר לא ברור, ותפקידה הפוטנציאלי בוויסות המיקרו-סביבה הדלקתית ובקיטוב תאי מערכת החיסון מצדיק חקירה שיטתית.
לאחר פגיעה, הדלקת מופעלת במהירות ומשפיעה ישירות על תיקון הרקמה. סיגנלינג דלקתי מתון חיוני לפינוי רקמה נמקית ולהפעלת תוכנית הרגנרציה, בעוד שקסקדה דלקתית מוגברת עלולה להחמיר את העקה החמצונית ולהוביל לפיברוזיס של הרקמה7. ציטוקינים, כולל IL-1β, IL-6 ו-TNF-α, עולים באופן ניכר לאחר פגיעה ונלווים להפעלה של סיגנלינג TLR4/NF-κB, מה שמוביל לתגובות דלקתיות מוגברות ולעיצוב מחדש של הרקמה (tissue remodeling)8,9. מולקולת היצמדות בין-תאית-1 (ICAM-1) ו-CC chemokine ligand 2 (CCL-2) עולים אף הם לאחר פגיעה והם קשורים לגיוס מוגבר של נויטרופילים ומקרופאגים לרקמות הפגועות10. ראוי לציין כי חוסר איזון חמצוני מחמיר עוד יותר את הנזק לרקמה, ופעילות מופחתת של superoxide dismutase (SOD) ושל catalase (CAT) מעידה על פגיעה ביכולת הנוגדת חמצון2,11.
מקרופאגים משמשים כווסתים מרכזיים של המיקרו-סביבה הדלקתית, והקיטוב התפקודי שלהם משפיע באופן משמעותי על תהליך ההתחדשות12. מקרופאגי M1 מקושרים לביטוי של inducible nitric oxide synthase (iNOS) ולפעילות דלקתית, בעוד שמקרופאגי M2 מבטאים arginase-1 (Arg-1) ומקושרים לתיקון רקמות13,14. קיטוב של מקרופאגים מושפע מציטוקינים מקומיים, מעקה חמצוני ומאותות הקשורים לאפופטוזיס. בהקשר זה, רשת הבקרה האפופטוטית המורכבת מחלבוני משפחת B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) ומ-caspase-3 לא רק משפיעה על הישרדות תאים באתר הפגיעה, אלא גם מווסתת בעקיפין את ההתנהגות הכימוטקטית של תאי מערכת החיסון באמצעות שחרור אותות "find-me"15. לכן, בחינת אסטרטגיות התערבות המווסתות בו-זמנית תגובות דלקתית, עקה חמצונית וקיטוב של מקרופאגים עשויה לסייע בשיפור התחדשות הרקמות.
תרכובות טבעיות הדגימו יתרונות ייחודיים בוויסות תהליכים ביולוגיים אלו. מחקרים אחרונים אישרו כי לחומרים מסוג נפטוכינון (naphthoquinone), בשל מבניהם המצומדים, יש פוטנציאל לסלק רדיקלים חופשיים; גרעין הבנזוכינון שלהם יכול להשפיע על מסלולי איתות הרגישים לתגובות חמצון-חיזור באמצעות מנגנוני העברת אלקטרונים16,17. דווח כי מולוגין (Mollugin) מפחית תגובות דלקתיות בקוलाइट המושרה על ידי DSS, עם הפחתה בייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים וירידה בביטוי TLR4 ברקמות המעי הגס18. כמו כן, הוכח כי מולוגין מעכב את איתות TAK1-NF-κB/MAPK ומפעיל את מסלול Keap1-Nrf2 במקרופאגים6; עם זאת, השפעתו על קיטוב מקרופאגים ועל רשת האפופטוזיס-אנטי-אפופטוזיס במודל פצעים in vivo טרם הובהרה. יתרה מכך, ההשפעות הביולוגיות של מולוגין התלויות במינון ותפקידו הרגולטורי במהלך תהליך הרגנרציה טרם הובהרו באופן שיטתי.
המחקר הנוכחי בחן את ההשפעות של Mollugin במודל של התחדשות סנפיר הזנב של דג הזברה. באופן ספציפי, בחנו את צמיחתו מחדש של הזנב, את הביטוי של גנים הקשורים לאפופטוזיס, את השליחון הדלקתי, את הפעילות של אנזימים נוגדי חמצון ותגובות הקשורות למקרופאגים לאחר טיפול ב-Mollugin. ממצאינו מצביעים על כך שטיפול ב-Mollugin קשור לשיפור בהתחדשות הזנב ולשינויים במספר סממנים של תגובה לפגיעה במודל זה של דג הזברה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הפרוצדורות בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות המועצה הלאומית למחקר לטיפול ושימוש בבעלי חיים למעבדה ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים הכללי הראשון של פוז'ו (מספר אישור 202408002).
רבייה של דגי זברה
כל הניסויים בוצעו באמצעות דגי זברה (Danio rerio) שנשמרו בתנאי מעבדה סטנדרטיים. דגי זברה מסוג Wild-type AB שימשו לבדיקת רעילות ולבדיקת התחדשות לאחר קטיעת זנב. דגי זברה מסוג Tg(mpeg1:GFP) שימשו ספציפית להדמיית מקרופאגים. Tg(mpeg1:GFP) הוא קו דיווח למקרופאגים שבו ביטוי GFP מסמן תאים משושלת המקרופאגים תחת השליטה של מקדם mpeg1 המבטא במקרופאגים. כל קווי דגי הזברה נשמרו בטמפרטורה של 28.5 °C תחת מחזור תאורה/חושך של 14 שעות/10 שעות. רק עוברים תקינים מבחינה מורפולוגית שימשו לניסויים. בכל הניסויים, העוברים דגרו בבופר דניאו (Danieau’s buffer), שהוכן באמצעות כימיקלים בדרגת ריאגנט, כולל NaCl, KCl, Ca(NO₃)₂·4H₂O, MgSO₄·7H₂O ו-HEPES שהותאם ל-pH 7.2.
הכנת התרופה וקביעת הבטיחות
Mollugin (40 mg) הומס ב-1 mL DMSO כדי להכין תמיסת מלאי בריכוז 40 mg/mL. תחילה דוללה תמיסת המלאי ביחס של 1:10 בבופר Danieau לריכוז של 4 mg/mL, ולאחר מכן בוצעו דילוחים נוספים לריכוזים של 22, 66 ו-200 µg/mL לצורך הטיפולים. כדי לקבוע את הריכוז הבטוח המקסימלי, עוברי זן AB בגילי 48 שעות לאחר ההפריה (hpf) עברו הסרת מעטפת (dechorionation) וחיטוי ב-0.003% sodium hypochlorite לפני שחולקו לפלטות של 6 בארות (n=20, שלושה כפילויות של בארות לכל קבוצה). העוברים הודגרו עם Mollugin (בסבבים של 22 µg/mL, 66 µg/mL, 200 µg/mL, 240 µg/mL, 280 µg/mL, 320 µg/mL או 360 µg/mL) במצע E3 למשך 48 h בטמפרטורה של 28.5 °C. הישרדות העוברים נוטרה תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי, והריכוז הגבוה ביותר עם חיוניות עוברים של ≥90% נקבע כגבול העליון הבטוח עבור ניסויים המשכיים.
בניית מודל של קטיעת זנב והתחדשות
לצורך מחקרי התחדשות, עוברי wild-type AB בגיל 48 hpf הורדמו ב-0.03% tricaine שהוכן במדיום עוברי והונחו בשכיבה צדית תחת מיקרוסקופ סטריאו. לפני קטיעת הזנב, העוברים הוחזקו בבופר דניאו (Danieau’s buffer). קטיעת זנב רוחבית סטנדרטית בוצעה תחת הנחיה של מיקרוסקופ סטריאו. קו הקטיעה מוקם מיד מאחורי קצה המיתר (notochord), כאשר הקצה האחורי של המיתר שימש כנקודת ייחוס אנטומית. קיפלי סנפיר הזנב המרוחקים מנקודה זו הוסרו באמצעות מיקרו-סקלפל כדי להבטיח רמת פגיעה עקבית בין הדגימות. מיד לאחר הקטיעה (0 h), נרכשו תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה סטריאו. לאחר הקטיעה, הועברו העוברים למדיום הטיפול המתאים מבוסס E3 לצורך בדיקת ההתחדשות. תמיסות עבודה של Mollugin הוכנו על ידי דילול של תמיסת מלאי Mollugin במדיום E3 לריכוזים סופיים של 22, 66, ו-200 µg/mL. ה-Mollugin ניתן באמצעות חשיפה באמבט במהלך תקופת ההתחדשות. כדי להתאים לחשיפה לחומר המוביל (vehicle), קבוצת הביקורת ללא הפגיעה וקבוצת המודל הפגועה הוחזקו במדיום E3 המכיל 0.5% DMSO, התואם לריכוז ה-DMSO הסופי בקבוצת ה-200 µg/mL Mollugin. העוברים הוחזקו בלוחות 6-בארים בטמפרטורה של 28.5 °C למשך יומיים, עם רענון יומי של מדיום הטיפול המתאים מבוסס E3. ההתחדשות תועדה באמצעות דימוג ב-24 ו-48 שעות לאחר הקטיעה, תחת הגדרות של אור לבן ופלואורסצנציה, כדי להעריך את צמיחתו מחדש של הזנב ואת התפלגות המקרופאגים. מדידות התמונות בוצעו בתוכנת ImageJ.
לצורך כימות הרגנרציה, שטח הזנב שהשתקם נמדד כשטח מוחלט ב-µm2 ולא נורמל לגודל העובר או לגודל הזנב המקורי. כדי למזער שונות, כל העוברים נקטעו באותו סימן אנטומי מיד לאחר קצה המיתר (notochord), ואותו סימן שימש להגדרת אזור המדידה בכל הקבוצות. אזורי העניין (ROI) סומנו ידנית ב-ImageJ על בסיס מתאר הזנב, והניתוח בוצע על ידי חוקר שלא היה מודע לקבוצות הטיפול (blinded). לצורך כימות השטח החיובי למקרופאגים, נותחו ב-ImageJ תמונות פלורסצנציה של GFP מעוברים מסוג Tg(mpeg1:GFP). אזור הפגיעה/רגנרציה בזנב הוגדר ידנית כאזור העניין באמצעות אותו סימן אנטומי ששימש למדידת שטח הזנב. התמונות הומרו לגווני אפור של 8-bit, ופלורסצנציית הרקע הופחתה תוך שימוש באותן הגדרות תיקון רקע עבור כל התמונות באותו ניסוי. לאחר מכן הוחל סף (threshold) פלורסצנציה קבוע באופן אחיד על כל התמונות בכל ניסוי כדי לזהות אותות חיוביים ל-GFP הקשורים למקרופאגים. השטח החיובי למקרופאגים חושב כשטח ה-GFP החיובי לסף בתוך אזור העניין שהוגדר. המדידות התבססו על שטח פלורסצנציה חיובי ולא על עוצמת הפלורסצנציה או ספירה ידנית של תאים. כל ניתוחי התמונות בוצעו על ידי חוקר שלא היה מודע לקבוצות הטיפול.
הפקת RNA ו-PCR כמותי בזמן אמת (qRT-PCR)
עם השלמת בדיקת הרגנרציה, נאספו עוברים מכל תנאי ניסויי ואוחדו (לפחות 20 עוברים לקבוצה) לצורך ניתוח RNA. עבור כל תנאי, שכפול ביולוגי אחד כלל דגימה מאוחדת המכילה לפחות 20 עוברים מאותה קבוצה ניסויית. שלושה שכפול ביולוגיים מאוחדים ועצמאיים הוכנו עבור כל תנאי ושימשו לניתוח סטטיסטי. RNA כולל בודד לאחר הומוגניזציה מכנית בריאגנט להפקת RNA מבוסס פנול/גואנידין. איכות וריכוז ה-RNA הוערכו ספקטרופוטומטרית על ידי מדידת יחסי A260/A280. cDNA סונתז באמצעות ערכה מסחרית לתעתוק הפוך. הגברה ב-PCR בוצעה עם ריאגנטים של SYBR Green. תנאי המחזור של ה-qRT-PCR היו כדלקמן: דנטורציה ראשונית ב-95 °C למשך 30 s, ולאחריה 40 מחזורים של דנטורציה ב-95 °C למשך 5 s ואנילינג/הארכה ב-60 °C למשך 30 s. נמדדו רמות ביטוי של גנים הקשורים לאפופטוזיס (caspase-3 ו-Bcl-2), דלקת (TNF-α, IL-1β, IL-6, NF-κB1, TLR4, CCL2 ו-ICAM1), ופנוטיפ של מקרופאגים (iNOS ו-arginase-1). β-Actin שימש כגנויות הייחוס. שינויים במכפלה (fold changes) בביטוי הגנים נקבעו באמצעות שיטת 2−ΔΔCt. פרטי הפריימרים מפורטים ב-Table 1.
בדיקות פעילות עבור SOD ו-CAT
רמות SOD ו-CAT שימשו להערכת המצב הנוגัด-חמצוני לאחר פגיעה בזנב. 48 שעות לאחר הקטיעה, נאספו דגי zebrafish מכל קבוצה והומוגניזו ב-PBS קר. לאחר סרטיפוגציה, נעשה שימוש בתמציות הצלולות למדידת SOD ו-CAT באמצעות ערכות מסחריות לבדיקת פעילות. פעילות SOD נמדדה באמצעות ערכה מבוססת WST-1 בהתאם להוראות היצרן. דגימות הועמסו על לוחות בדיקה בעלי 96 בארות יחד עם תמיסות סטנדרט, והבליעה נקראה באמצעות קורא מיקרו-פלייטים. פעילות האנזימים הופקה מעקומות סטנדרט. כל הבדיקות בוצעו בשלוש חזרות.
ניתוח סטטיסטי
הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM מתוך לפחות שלושה ניסויים בלתי תלויים. עבור בדיקת הרעילות, כל ניסוי בלתי תלוי כלל מנת עוברים אחת, עם 20 עוברים לכל קבוצה ובבאיר בשלוש חזרות. עבור דימות רגנרציה ודימות מקרופאגים בדגי zebrafish מסוג Tg(mpeg1:GFP), עוברים בודדים שימשו כיחידות המדידה, ונותחו 10 עוברים לכל קבוצה. עבור ניתוח qRT-PCR, רפליקה ביולוגית אחת consisted מתוך דגימה מאוחדת המכילה לפחות 20 עוברים מאותה קבוצת ניסוי, ושלוש רפליקות ביולוגיות מאוחדות ובלתי תלויות נותחו לכל תנאי. עבור ניתוח פעילות SOD ו-CAT, חמש רפליקות ביולוגיות מאוחדות ובלתי תלויות נותחו לכל תנאי. הבדלים בין קבוצות נותחו באמצעות one-way ANOVA עם מבחן post hoc של Tukey. הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו בתוכנת GraphPad Prism. הבדלים עם p < 0.05 נחשבו למשמעותיים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
קביעת רעילות ומינון בטוח
כדי לבחון את השפעות ה-Mollugin, ביצענו תחילה בדיקות רעילות. התוצאות הצביעו על כך ששיעור התמותה של עוברי דגי זברה נשאר נמוך בריכוזים של עד 200 µg/mL, בעוד שריכוזים הגבוהים מ-200 µg/mL הובילו לעלייה בתמותה (טבלה 2). לפיכך, המינון הבטוח הגבוה ביותר נקבע כ-200 µg/mL, בעוד שהמינונים הנמוך והבינוני נקבעו כ-22 ו-66 µg/mL, בהתאמה.
מודל קטיעת זנב והערכת התאוששות מוקדמת של שטח הזנב
בהמשך, הוקם מודל קטיעת זנב בדגי zebrafi...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בעבודָה זו, בחנו את ההשפעות של Mollugin על התחדשות זנב של דגי זברה. בטווח המינונים שנבדקו, טיפול ב-Mollugin היה קשור לשיפור בהתאוששות שטח הזנב לאחר פגיעה, יחד עם שינויים בביטוי של גנים הקשורים לאפופטוזיס, סממנים דלקתיים, פעילות של אנזימים נוגדי חמצון וסממנים הקשורים למקרופאגים.
דגי זברה, המהווים מודל בולט למחקרי רגנרציה, מראים רגנרציה של הזנב הכוללת פעולה מתואמת של מספר מסלולי איתות19. לאחר פגיעה, רמות ה-caspase-3 עלו בעוד שהביטוי של Bcl-2 ירד, דבר המעיד על הגברה של אפו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים כי אין ניגודי אינטרסים.
המחקר הנוכחי נתמך על ידי ועדת הבריאות של מחוז פוג'יאן בסין (מענק מס' 2022QNA085).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פלטות תרבית רקמה עם 6 בארות | Corning | 3516 | |
| ערכה לבדיקת קטאלז (CAT) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A007-1-1 | |
| כלורופורם | Sigma-Aldrich | 288306 | |
| קורא מיקרופלט CMax Plus | Molecular Devices | iD3s | |
| בופר Danieau’ – Ca(NO3)2·4H2O | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | ריכוז סופי בבופר Danieau’: 0.6 mM. |
| בופר Danieau’ – HEPES | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | ריכוז סופי בבופר Danieau’: 5 mM; pH הותאם ל-7.2. |
| בופר Danieau’ – KCl | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | ריכוז סופי בבופר Danieau’: 0.7 mM. |
| בופר Danieau’ – MgSO4·7H2O | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | ריכוז סופי בבופר Danieau’: 0.4 mM. |
| בופר Danieau’ – NaCl | Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd., China | N/A | ריכוז סופי בבופר Danieau’: 58 mM. |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| מצע עוברים E3 | הכנה במעבדה (מתכון סטנדרטי) | N/A | מתכון סטנדרטי. |
| פריימרים ל-qPCR ספציפיים לגנים (tnfα, il1β, il6, nfkb1, tlr4, ccl2, icam1, inos, arginase-1, caspase-3, bcl2, β-actin) | Sangon Biotech | N/A | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, San Diego, CA, USA | N/A | גרסה 8.0. |
| תוכנת ImageJ | National Institutes of Health (NIH) | N/A | גרסה 1.52n. |
| Mollugin (≥98%, HPLC) | Sigma-Aldrich | SMB00431 | תרכובת פעילה מ-Rubia cordifolia, מומסת ב-DMSO לריכוז של 40 mg/mL ומדוללת ל-22, 66 ו-200 µg/mL במצע E3. |
| הומוגניזר רקמות ממונע | IKA, T10 basic ULTRA-TURRAX (או מקביל לו) | N/A | |
| NovoScript 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | Novoprotein | abs60077 | |
| סליין בבופר פוספטי (PBS) | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH 7.4 |
| מערכת Real-time PCR (Archimed X4) | Sansure Biotech Inc. | Archimed X4 | |
| מיקרוצנטריפוגה מקוררת | SCILOGEX | CF1524R | |
| טיפים נקיים מ-RNA | Sangon Biotech | F603222-0010 | |
| RNAiso Plus | Takara Bio Inc. | 9109 | ריאגנט להוצאת RNA מבוסס פנול/גוаниדין. |
| מבחנות מיקרוצנטריפוגה נקיות מ-RNase, 1.5 mL | Axygen / Eppendorf | N/A | |
| מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי SMZ800N | Nikon | SMZ800N | מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי המשמש להדמיית זחלי Tg(mpeg1:GFP) וכמות של אגרגציית מקרופאגים. |
| תמיסת נתרקה היפוכלוריט | McLean, USA | N/A | תמיסת עבודה בריכוז 0.003%. |
| SYBR Green qPCR Mix (2× SYBR qPCR Mix) | Novoprotein | E096 | |
| מיקרוסקופ סטריאו SZX16 | Olympus | SZX16 | משמש לתצפיות מורפולוגיות, הערכת רעילות וקטיעת סנפיר הזנב של זחלים. |
| ערכה לבדיקת סופר-אוקסיד דיסמוטאז כולל (T-SOD) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A001-3 | |
| דגי zebrafish טרנסגני Tg (mpeg1:GFP) | Anburui, Fujian, China (או מושבה פנימית) | N/A | קו רב-דיווח למקרופאגים. |
| טריקאין מתנסולפונט (MS-222) | Sigma-Aldrich | E10521 | תמיסת עבודה בריכוז 0.03%. |
| מים מזוקקים UltraPure נקיים מ-DNase/RNase | Invitrogen | 10977023 | |
| zebrafish מסוג בר, זן CZ98 (Danio rerio) | Anburui, Fujian, China | N/A | עוברים מופרים וזחלים הושגו ממלאי רבייה של בוגרים. |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.