הערכת נוקשות פנימית באאורטה של עכברים באמצעות מיוגרפיית סיכה: מסגרת תרגומית לחקירת השפעת הסביבה המסתובבת

סיכום

כאן אנו מציגים פרוטוקול להערכת קשיחות דופן האאורטה הפנימית (מודול אלסטי) באמצעות מיוגרפיה של פינים וגישות לחקירת התפקיד הפוטנציאלי של הסביבה הפנימית בוויסות נוקשות דופן האאורטה הפנימית.

תקציר

הידוק האאורטה הוא גורם סיכון עצמאי למחלות לב וכלי דם ולמחלות כרוניות אחרות, כולל ירידה קוגניטיבית, תפקוד כליה, פגיעה בראייה וירידה בתפקוד הגלוקוז–אינסולין. בגוף החיים, נוקשות האאורטה מוערכת בדרך כלל באמצעות טכניקות מבוססות טונומטריה או אולטרסאונד, המדמיינות גלי עורקים או מקטעים אורכיים של עורקים, בהתאמה. עם זאת, מדידות in vivo מושפעות ממספר גורמים—כגון לחץ עורקי וקלט אוטונומי—שמגבילים את התובנה המכאנית לגבי איך ולמה נוקשות האאורטה משתנה. מודלים פרה-קליניים של עכברים, המאפשרים רכישה ישירה של רקמת האאורטה, מציעים מסגרת ניסיונית ייחודית להערכת נוקשות אאורטה ב-vivo ותכונות מכניות פנימיות של האאורטה, ללא משתנים פיזיולוגיים מבלבלים. מודלים אלה מאפשרים גם חקירה ישירה של סביבת המחזור (כלומר, איסוף מולקולות ביואקטיביות במחזור הדם) ותפקידה בוויסות נוקשות האאורטה על פני הספקטרום הפרקליני לקליני. שינויים בסביבה המחזורית הופיעו כבסיס מכני מרכזי להיקשות האאורטה במצבים רבים—כולל הזדקנות ראשונית והזדקנות מוקדמת הקשורה לסרטן ולטיפולים בסרטן—הן במחקרים פרה-קליניים והן במחקרים קליניים, וכן בתיווך השפעות ההתערבויות. מאמר זה מספק מדריך שלב אחר שלב להערכה: (1) נוקשות אאורטה פנימית (מודולוס אלסטי) במודלים פרה-קליניים של עכברים, ו-(2) תרומת הסביבה הזורקת (ומרכיביה) לקשיחות האאורטה באמצעות דגימות ביולוגיות פרה-קליניות וקליניות.

מבוא

הידוק האאורטה הוא גורם סיכון עצמאי למחלות לב^{וכלי דם} ומחלות כרוניות ^אחרות. הערכת נוקשות האאורטה ב-vivo עלולה להיעדר פתרון מכניסטי, בהתחשב בתהליכים הפיזיולוגיים האינטגרטיביים שמווסתים את נוקשות האאורטה ב-vivo (למשל, לחץ דם וקלט אוטונומי)². לכן, הערכת נוקשות פנימית של האאורטה (כלומר, נוקשות דופן האאורטה/מודולוס אלסטי) מחוץ לחיים באמצעות מיוגרפיית סיכות מאפשרת הזדמנות להערכה ישירה של נוקשות האאורטה ללא תלות במשתנים פיזיולוגיים מבלבלים². יתרה מזאת, השימוש בגישה ניסויית ex vivo מאפשר חקירת מנגנונים מולקולריים פוטנציאליים שעשויים לתווך התקשות דופן האאורטה. בניגוד לשיטות מבוססות אחרות להערכת קשיחות עורקים מחוץ לחיים (ex-vivo), כגון מיוגרפיית לחץ, בדיקות מישוריות דו-ציריות ומערכות מיוגרפיה מחזוריות/פולסטיליות, התלויות במודלים פיזיולוגיים של מערכות (למשל, לחץ תוך-לומינלי והמודינמיקה פולסטילית), מיוגרפיה של פינים מאפשרת הערכה ישירה של קשיחות דופן האאורטה באמצעות כוח איזומטרי, בסביבות מבוקריות מאוד שאינן דורשות מידול בוויבו.

הסביבה המחזורית (כלומר, אוסף מולקולות ביואקטיביות בזרם הדם), שנמצאת במגע ישיר ותדיר עם האאורטה, משתנה לעיתים קרובות בהקשחות האאורטה (למשל, הזדקנות כרונולוגית/ראשונית והזדקנות מוקדמת, כמו אצל ניצולי סרטן או מודלים של הישרדות סרטן)^3,4. קבענו, באמצעות דגימות ביולוגיות פרה-קליניות (עכברים) וקליניות (אנושיות) (פלזמה וסרום), כי הסביבה המחזורית תורמת ישירות להיקושות האאורטה הן עם הראשוני⁴ והן בהזדקנות מוקדמת³. יתרה מזאת, הקמנו מסגרת ניסויית לקביעת התרומה הישירה של רכיבים נבחרים בתוך הסביבה המחזורית בתיווך השפעתם על התקשות האאורטה ^3,5,6. כאן, אנו מתארים ומתארים את הגישות הניסיוניות שלב אחר שלב להערכת הקשיחות הפנימית של האאורטה ואת תרומת הסביבה המסתובבת (ומרכיביו) לקשיחות האאורטה באמצעות מיוגרפיית סינים, ומספקים תוצאות מייצגות (עם איורים וציטוטים).

פרוטוקול

עכברים זכרים מסוג בר מסוג C57BL/6J צעירים (בני 4 חודשים) שימשו לאורך כל המחקר הזה. דיור ונהלים הכוללים עכברים ניסיוניים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדית של אוניברסיטת קולורדו אנשוץ (IACUC).

1. הכנת תמיסת מלח פיזיולוגית קרה (CPSS)

1. הכינו את תמיסת המלאי של Ca²⁺ ב-1 ליטר diH₂O ואחסנו ב-4 מעלות צלזיוס (טבלה 1).
2. הוסיפו 13.9 גרם MOPS ב-100 מ"ל diH₂O להכנת תמיסת הבופר של MOPS ואחסנו בטמפרטורה של 4°C.
3. הוסף 0.186 גרם EDTA ב-100 מ"ל diH₂O להכנת תמיסת המאגר של EDTA, ה-pH ל-8.0, ואחסן בטמפרטורת החדר.
4. הכינו CPSS המכילים תמיסות מלאי שהוכנו לעיל ואת הכימיקלים המפורטים להלן (טבלה 2). הביאו את הנפח הכולל ל-2 ליטר עם diH₂O, pH ל-7.4 ב-34 °C, וסינון CPSS דרך מסנן ≤ 0.45 מיקרון. מפזר בצינורות קוניים של 50 מ"ל ואחסן בטמפרטורה של -20°C.

2. ניתוח האאורטה של העכבר (איור 1, איור 2 ואיור 3)

1. הרדימו את העכבר על ידי איזופלורן שנשאף (2.5%) והניחו אותו במצב שכיבה גבית (איור 1A-C).
2. כאשר העכבר נמצא תחת מישור ההרדמה הכירורגית, יש לאסוף דם על ידי ביצוע ניקוב לבבי ולשלים את שיטת המתת החסד המשנית באמצעות כריתת חזה דו-צדדית (איור 1B–C).
3. לאחר מכן, הסר בזהירות את האאורטה מקשת האאורטה לאאורטה הבטנית (איור 1D–F).
4. הניחו את האאורטה ב-CPSS והסירו את כל רקמת השומן המחברת והפריוסקולרית באמצעות מספריים של Fine Science Tools Vannas Spring Scissors (2.5 מ"מ) (איור 2A–E).
5. חתכו בזהירות שלושה קטעי אאורטה ברוחב 1 מ"מ באזור החזה ממש מתחת לקשת האאורטה (איור 3).
6. הניחו את שני מקטעי האאורטה בקוטר 1 מ"מ בצינור בנפח 1.5 מ"ל מלא ב-CPSS ואחסנו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס עד לניסויי מיוגרפיה של פין מאמץ. אחסן^{את המקטע} השלישי כראוי למדידות היסטולוגיות הבאות כפי שמתואר להלן.

3. ניסויי מיוגרפיה של סיכות מאמץ-עיוות

הערה: מערכת ה-Pin Myography תשמש לביצוע בדיקות חוץ-גופיות של נוקשות האאורטה (איור 4 ואיור 5).

1. ראשית, חממו מראש את התאים לטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס המכילים כ-6 מ"ל של מלח עם בופר פוספט (PBS) והפשרו מקטעי אאורטה קפואים בעובי 1 מ"מ.
   הערה: ניתן להשתמש גם בתמיסות מלח פיזיולוגיות חלופיות שהן מחומצנות כראוי ומבוקרות ב-pH כפי שתואר קודם⁷.
2. לאחר שמגיעים ל-37 מעלות צלזיוס, יש לעקוב אחר פרוטוקול הכיול של היצרן.
   1. הניחו את גשר הכיול על המיוגרף כך שמוט ה-T-balance לא ייגע בפין שמחובר למתמר הכוח של תא המיוגרפיה של הפינים.
   2. ודא שפין מתמר הכוח אינו חשוף לשום כוח. כאשר הכוח היחסי יציב, הניחו משקל של 2 גרם על גשר ה-T כך שמוט האיזון מפעיל כעת ~2 גרם כוח על פין מתמר הכוח.
   3. אשר שקריאת הכוח היא בטווח של 9.71–9.91 מיליון. אם כן, הכיול הושלם.
3. קבעו קריאת מיקרומטר בסיסית וערך רישום (כלומר, קריאה ראשונית).
   1. תחת כוונת דיסקציה, קבעו את המרחק הבסיסי של מיקרומטר שבו שני הפינים המקבילים כמעט נוגעים זה בזה (איור 4).
      הערה: אל תאפשר לשני הפינים לגעת, שכן זה עלול לגרום נזק או לשבש את מתמר הכוח בתוך תא המיוגרף.
4. מתחת למיקרוסקופ חיתול, מניחים קטע אאורטה בקוטר 1 מ"מ מעל שני הפינים ורשמו את רוחב הקטע באמצעות קליפרים מיקרו (איור 6A). לאחר מכן מחברים את יחידת התא לממשק מערכת המיוגרפיה של הפינים.
   הערה: הגדלת רוחב הפין כדי להפעיל מתח על קטע האאורטה בזמן התקנת האאורטה כדי לקבע אותה על שני הפנים, מה שמונע מהקטע של האאורטה להתנתק.
5. אם מופעל מתח על האאורטה והתא מחובר והותקן על מערכת המיוגרפיה של הפינים, החזר את המיקרופוזיזיטור ל"מיקום ההתחלתי" כפי שנקבע בשלב 3.3 לעיל.
6. מתיחה מקדימה מלאה של האאורטה.
   1. מתיחו את האאורטה על ידי הגדלת המרחק בין שני הפינים ב-1 מ"מ מהמיקום המיקרו הראשוני (איור 6B).
   2. לאחר מכן, הרפה את האאורטה על ידי החזרת הפינים לקריאת המיקרופוזיציה הראשונית. בצע את רצף המתיחה-רפיה הזה שלוש פעמים (איור 6A).
      הערה: לאחר רצף המתיחה-הרפייה האחרון, המיקרו-פוזיציה אמורה לחזור לקריאה הראשונית.
7. בממשק מערכת המיוגרפיה של הפין, קריאת כוח אפס לכל תא בשימוש (איור 7).
8. התחל ניסוי מתח-עיוות.
   1. הגדלת קריאת הכוח לכ-1 mN על ידי כיוון המיקרו-פוזיציה (איור 7).
   2. לאחר שיווי משקל כוח של ~1 mN (3–5 שניות), רשמו את קריאת המיקרו-פוזיזיציה החדשה בכוח ~1 mN ורשמו את קריאת הכוח הראשונה.
   3. הגדל את המיקרו-פוזיזינר ב-50 מיקרון (כלומר, 5 קליקים לגיבוב) ואפשר למתוח את קטע האאורטה למשך 3 דקות. 3 דקות לאחר מכן, כוח שיא.
   4. המשך להגדיל את המיקרו-פוזיזינר ב-50 מיקרון כל 3 דקות ולרשום כוח עד שמגיעים ל"נקודת הכנעה".
      הערה: נקודת הכניעה היא כמות הכוח הגבוהה ביותר שנוצרת לפני שנגרם נזק מבני בלתי הפיך באאורטה (כלומר, קרע או שבר באאורטה, ירידה משמעותית בכוח).
   5. אשר את נקודת התפילה על ידי מתיחת האאורטה ב-50 מיקרון נוספים לאחר נקודת הכניעה ההתחלתית. ודאו שערך הכוח נשאר נמוך או מעט מעל נקודת ההחזרה. אם נקודת התפוקה לא מאושרת, המשך עם העלאות של 3 דקות עד שנקודת התשוקה מושגת.
   6. לאחר אישור נקודת ההחזרה, הניסויים הושלמו. התחל בניתוח עכשיו.

4. ניתוח ניסויים במיוגרפיה של פינים במאמץ-עיוות לקביעת מודולוס האלסטי של אזור הקולגן והאלסטין

1. באמצעות קריאות הכוח המתקבלות מהמיוגרף, יוצרים עקומת מאמץ-עיוות באמצעות המשוואות הבאות:
   עיוות (λ)=∆d/[d(i)]
   כאן d הוא הקוטר ו-d_i הוא הקוטר ההתחלתי ו;
   לחץ (t)=λL/[2(HD)]
   כאשר L הוא עומס חד-ממדי, H הוא עובי אינטימה מדיה, ו-D הוא אורך הכלי. לאחר יצירת עקומות המתח-עיוות, השתמש בהן לחישוב אזורי הכוח הגבוה והנמוך כפי שתואר קודם ^8,9 (איור 8).
2. חשב את אזור הכוח הגבוה (אזור הקולגן) (איור 8B).
   1. קבעו את מודול האלסטי של עקומת המאמץ-עיוות כאשר שיפוע הרגרסיה הליניארית מתאים לארבע הנקודות האחרונות של עקומת המאמצ-עיוות. כדי לקבל את מדידת הכוח הגבוה מגרף המתח-עיוות, יש לעקוב אחר השלבים הבאים:
      1. לחץ קליק ימני על נקודת נתונים בגרף ובחר בחר נתונים > הוסף > הזן שם סדרה: מודול אלסטי.
      2. ערכי סדרה X: בחרו 4 נקודות נתונים מתוך ערכי העיוות. אלו צריכות להיות שלוש הנקודות כשהכוח מתקרב ל"נקודת הנפילה". ודא שאתה כולל את נקודת התפוקה כנקודה הרביעית.
      3. ערכי סדרה Y: בחר 4 נקודות נתונים מתוך ערכי המאמצים. אלו צריכות להיות שלוש הנקודות כשהכוח מתקרב ל"נקודת הנפילה". ודא שאתה כולל את נקודת התפוקה כנקודה הרביעית.
      4. לחץ על אישור והוסף קו מגמה > משוואת תצוגה ליניארית > בגרף > הצג ערך R-בריבוע על הגרף.
   2. השיפוע של המשוואה הוא מודול האלסטי של כוח גבוה. ודא שערך R-בריבוע הוא ≥ 0.99 כדי שהמודול האלסטי יהיה מדויק.
3. חשב את אזור הכוח הנמוך (אזור האלסטין) (איור 8C)
   1. קבעו את גבולות אזור הדומיננטי אלסטין (אזור כוח נמוך שבו העקמומיות היא ~0) של עקומת המתח-עיוות על ידי התאמת משוואת פולינום מסדר שביעי לנתונים (r² > 0.99) ואז חישוב שורשי המשוואה. נבחן את השורש הראשון, הגבול בין אזור הכוח הנמוך מאוד לאזור האלסטין, והשורש השני, הגבול בין אזור האלסטין לתחילת ההתערבויות של סיבי הקולגן.
   2. לאחר מכן נקבע את מודולוס האלסטיות של אזור הכוח הנמוך כהתאמה של שיפוע משוואה ליניארית לנתוני המאמצ-עיוות בין שני השורשים ^8,9. כדי להשיג זאת:
      1. צרו גיליון אלקטרוני שמכיל עמודות כפי שמוצג בטבלה משלימה 1.
      2. הפוך את זה למסמך "txt" ופתח אותו בסקריפט R של תוכנת קוד R "Modulus of Elasticity".
      3. כדי להשתמש בנתונים, בדוק שיפועים נורמליים – הגרף^הנגזר השלישי על פלט R צריך להיות בצורת "M".
      4. בלשונית התוצאות , הערך המספרי תחת עמודת השיפוע הוא מודול האלסטיות. ודא שערך ה-R בריבוע גדול או שווה ל-0.99 כדי שמודולוס האלסטיות יהיה מדויק.
      5. כדי לקבל ערך זה בגיליון האלקטרוני, בחר את ערכי העיוות (וערכי המאמץ המתאימים להם) בין הנגזרת הראשונה לשנייה שהתקבלו מלשונית תוצאות קוד R .
      6. עקבו אחרי השלבים המפורטים בשלב 4.2 כדי לקבל את המשוואה ואת ערך R² בגרף הגיליונות האלקטרוניים.

5. הערכת קוטר האאורטה ועובי הדופן

1. הניחו את הקטע האאורטלי האחרון בקוטר 1 מ"מ בקריומולד מלא בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT). כיוון את הטבעת כשהלומן שטוח ובמרכז בתחתית התבנית, כאשר ציר הלומינל ניצב למשטח החיתוך כדי קבלת חתכים רוחביים.
2. הכינו מיכל של 2-מתילבוטאן מקורר בחנקן נוזלי ואז טבלו את הקריומולד ב-2-מתילבוטאן קר עד שה-OCT הופך ללבן אטום.
3. אחסן את הקריומולד ב-80 מעלות צלזיוס עד לחתוך. כוונו את טמפרטורת הקריוסטט לטמפרטורת החיתוך המתאימה ל-OCT (≈-20 מעלות צלזיוס) ואז התקינו את הבלוק הקפוא על מחזיק הדגימה.
4. לאחר החיבור למתקן, גזום בזהירות את הבלוק תוך שמירה על עובי של 7 מיקרון עד להופעת רקמה.
5. סמנו שקף עם מזהה העכבר וחתכו 4–5 חתכים רוחביים של רקמת האאורטה בעובי 7 מיקרון.
6. כדי להעביר את הרקמה החתוכה לשקופיות, מניחים את כל החלקים החתוכים על שלב הקריוסטט (המכונה גם שלב הסכין) לפני שמניחים את הסלייד המסומן ישירות מעליהן.
7. לאחר השלמת ההעברה, מחליקים באוויר לייבוש.
8. קטעי תמונה בהגדלה של פי 10 על מיקרוסקופ שדה בהיר. שמור תמונות בפורמט JPG/TIFF עם פס קנה מידה בתחתית התמונה.
9. לניתוח, פתח את ImageJ, גש ל-File > Open ובחר את תמונת האאורטה.
10. לאחר שהתמונה האאורטלית מופעלת, התקרב לשורת הסולם באמצעות אייקון Control + + ואז השתמש בכלי הקו כדי למדוד את אורך סרגל הסולם. כדי למלא את התוצאה, לחץ על Control + M. המדידה המחושבת תחת האורך היא מדידת מוט הסולם.
11. כדי לכייל את התוכנה, עבור לניתוח > Set Scale. עבור המרחק בפיקסלים, הזינו את אורך הקו שחושב על ידי ImageJ בשלב 8. למרחק הידוע הזינו את האורך האמיתי של פס הסקאלה, ומתחת ליחידות כתבו את יחידת המדידה (μm, mm, cm, וכו').
12. סמן את התיבה הגלובלית כדי לכייל אוטומטית את כל התמונות הבאות. שימו לב אם פס הסקאלה בתמונות האחרות שונה, או ש-ImageJ סגור; אם כן, יש צורך בכיול מחדש.
13. לעובי הקיר, השתמשו בכלי הקו הישר ושרטטו קו ניצב מהקצה הלומינלי לקצה האדוונטיציאלי החיצוני. לחץ על Control + M כדי למלא אוטומטית את האורך בלשונית התוצאות .
14. חזרו על שלב 5.13 כדי לבצע מדידות ב-6 מיקומים שווים סביב היקף האאורטה ולרשום כל ערך.
15. כדי לחשב את העובי הממוצע לאאורטה של עכבר, ממוצע את כל העובי שהתקבל מ-4–5 דגימות של אותו עכבר.
16. כדי למדוד את קוטר הלומינל, בחרו את כלי הפוליגון ועקבו אחרי הגבול הפנימי הלומינלי בכיוון השעון. הקלטת היקף (μm) על ידי לחיצה על Control + M.
17. חזרו על המעקב נגד כיוון השעון, מתחילים בנקודה אחרת. ודא ששני ערכי ההיקף קרובים זה לזה וממוצע אותם עבור הטבעת האאורטלית.
18. חזור על שלב 5.16 עבור 4–5 דגימות האאורטה של אותו עכבר וממוצע את כל ערכי ההיקף.
19. לחישוב הקוטר, השתמשו במשוואה: קוטר (μm) = היקף/3.14.

6. מודולוס האלסטי האאורטלי המתווך-סביבתי בסירקולציה

הערה: כדי לקבוע האם גורמי מחזור או תרכובות ספציפיות משנים את הקשיחות האאורטה הפנימית, ניתן לדגור טבעות אאורטה חזה מעכברים נאיביים מתערבים מחוץ לחי תחת תנאי תרבית סטנדרטיים מוגדרים (37 מעלות צלזיוס, 5%_CO2, 20_{% O2}, לח) (איור 9).

1. נתח את האאורטה החזה וחתוך שני מקטעי טבעת בקוטר 1 מ"מ לכל מצב. הסר את כל רקמת השומן הפריוסקולרית.
2. בלוח עם 96 בארות, יש לדוג את טבעות האאורטה במדיה סטנדרטית, המורכבת מ-DMEM + 1% פניצילין-סטרפטומיצין.
3. הוסף טיפול ניסיוני למדיה. לפלזמה או סרום (ניתן להשתמש בפלזמה/סרום לא מטופל לכך), השתמש ב-10% מנפח המדיה הכולל. השתמש בפלזמה פרה-קלינית וקלינית (אנושית) או בסרום ^3,4,6 (איור 9).
4. לקביעת התפקיד הסיבתי של גורם מחזורי שהוצג כשונה בין קבוצות המחקר, חזרו על חשיפה לפלזמה/סרום תוך תיקון ההבדל הנצפה בריכוז בין קבוצות (כלומר, נרמול ריכוז הגורם הרלוונטי), קבעו את ההשפעה הישירה של גורם העניין בריכוז שמייצג את ההפרש הממוצע בקבוצה, או לחסום את האיתות של הגורם שנחשב לאחראי לתיווך השפעת הסביבה הזורמת.
   הערה: שתי הגישות האחרונות בוצעו בעבר, בהתאמה, עם טרימתילאמין-N-אוקסיד (TMAO)⁵ ועם חסימת הקולטן לתוצרי קצה גליקציה^{מתקדמים 3}.
5. להבהרת תפקיד הלחץ החמצוני הקשור לסופר-חמצן עודף או מיטוכונדריה-
   מאמץ חמצוני ספציפי הקשור לסופראוקסיד במערכת מודל זו, משתמשים בריכוזים הבאים בעת דגירה של טבעות האאורטה: TEMPOL: 1 μM ^5,10 ו-MitoQ: 1 μM⁶.
6. לאחר 48–72 שעות של דגירה, טעין את טבעות האאורטה לתוך מיוגרף הפינים ופעל לפי השלבים שפורטו לעיל.

תוצאות

התקשות אאורטה הקשורה לגיל

עבור קשיחות מכנית פנימית, הכוח המתאים לכל מרווח מתיחה נרשם ומשמש לחישובים. בחישובים שנדונו קודם, נוצר עקומות מתח-עיוות ומחשבים את המודול האלסטי עבור אזור הקולגן ו/או אזור האלסטין של עקומות אלו, כפי שתואר לעיל והוצג במקור על ידי ג'יושיה-ריאן ואח'⁹. המודולוס האלסטי של האזור הדומיננטי יותר בקולגן של עקומת המאמצ-עיוות נקבע כשיפוע המשוואה הליניארית, המתאים לארבע הנקודות האחרונות של

דיון

השימוש במיוגרפיה של פין להערכת נוקשות פנימית באאורטה מחוץ לחי מספק הזדמנות להעריך נוקשות פנימית באאורטל ללא תלות במשתנים פיזיולוגיים פוטנציאליים מבלבלים ב-vivo , כגון לחץ דם וקלט אוטונומי². יתרה מזאת, גישה ניסויית אקס ויבו זו מספקת הזדמנות לסנן מנגנונים מולקולריים פוטנציאליים שעלולים להוביל להבדלים בנוקשות פנימית באאורטה. כאן סיפקנו מדריך שלב אחר שלב להערכת נוקשות פנימית של האאורטה באמצעות מיוגרפיית סיכות וסיפקנו תוצאות מייצגות ממחקרים ש...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
2-methylbutane	Fisher Scientific	AA19387AP
BSA	Fisher Bioreagents	BP1600
Calcium Chloride Dihydrate	Sigma-Aldrich	C7902
Cryomold	Fisher Scientific	NC9511236
D-(+)-Glucose (Dextrose)	Sigma-Aldrich	G7021
DMEM	Fisher Scientific	MT10017CV
EDTA (A.C.S.)	Fisher Chemical	E478
KCl	Sigma-Aldrich	P4504
Magnesium Sulfate Heptahydrate	Sigma-Aldrich	M2773
MitoQ	Cayman Chemical	845959-50-4
Monosodium Phosphate	Sigma-Aldrich	S5011
MOPS (Na salt)	Sigma-Aldrich	M9024
Multi Pin Myography System	Danish Myo Technology (DMT)	620M
NaCl	Fisher Chemical	S271
Penicillin-streptomycin	Fisher Scientific	15-140-148
RAGE antibody	R&D System	AF1145
Sodium pyruvate	Sigma-Aldrich	P2256
TEMPOL	Sigma-Aldrich	2226-96-2
Tissue-tek OCT compound	Sakura	4583
Trimethylamine N-oxide (TMAO)	Sigma Aldrich	317594