לקטון ססקיטרפין XTT מחליש ביעילות תגובות דלקתיות הנגרמות על ידי ליפופוליסכריד (LPS) במקרופאגים. XTT מכוון ל-IKKα/β כדי לעכב את איתות NF-κB מבלי להשפיע על הפעלת MAPK, ובכך מפעיל אפקטים אנטי-דלקתיים חזקים במבחנה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
לקטון ססקיטרפין XTT מחליש ביעילות תגובות דלקתיות הנגרמות על ידי ליפופוליסכריד (LPS) במקרופאגים. XTT מכוון ל-IKKα/β כדי לעכב את איתות NF-κB מבלי להשפיע על הפעלת MAPK, ובכך מפעיל אפקטים אנטי-דלקתיים חזקים במבחנה.
חוסר ויסות של מפל הגורם הגרעיני-κB (NF-κB) קשור קשר הדוק להתפתחות הפרעות דלקתיות. קינאזות IκB (IKKs) מבוססות היטב כמודולטורים מרכזיים של פעילות NF-κB, מה שהופך אותם למועמדים טיפוליים אטרקטיביים לטיפול בפתולוגיות דלקתיות. הלקטון הססקיטרפני 1β-הידרוקסיל-5α-כלורו-8-אפי-קסנתטין (XTT) תועד כמפעיל השפעות אנטי-סרטניות חזקות. עם זאת, הפעילות האנטי-דלקתית שלו והמנגנונים המולקולריים הבסיסיים אינם ברורים. בעבודה זו, XTT דיכא באופן משמעותי את הסינתזה של תחמוצת החנקן (NO) ופרוסטאגלנדין E2 (PGE2) במקרופאגים RAW264.7 המופעלים על ידי ליפופוליסכריד (LPS). XTT גם הוריד משמעותית את רמות ה-mRNA המופעל על ידי LPS של סינתאז חנקן תחמוצת מושרה (iNOS), ציקלוקסיגנז-2 (COX2), פקטור נמק גידול-α (TNF-α), אינטרלוקין-1β (IL-1β) ואינטרלוקין-6 (IL-6). יתרה מזאת, XTT הפחית את רמות החלבון של iNOS ו-COX2 שנוצרו על ידי טיפול ב-LPS. ברמה המכניסטית, XTT לא שינה באופן משמעותי את פעילות מפל החלבון המופעל על ידי מיטוגן (MAPK). לעומת זאת, XTT חסם בחוזקה את הזרחון המופעל על ידי LPS ואת פירוק κBα המעכב (IκBα) על ידי אינטראקציה עם IKKα/β, ובכך פגע בהעברת גרעיני NF-κB. ביחד, הנתונים הללו מראים ש-XTT מעורר השפעות אנטי-דלקתיות חזקות במבחנה באמצעות מיקוד ב-IKKα/β וחסימת איתות NF-κB. תוצאות אלו מצביעות על כך ש-XTT עשוי לשמש כתרכובת מובילה מבטיחה לפיתוח תרופות נוגדות דלקת. נדרשים מחקרים ביוכימיים נוספים ומחקרים ב-in vivo כדי לאמת עיכוב ישיר של IKKα/β ופוטנציאל טיפולי.
דלקת היא תהליך ביולוגי מפוקח היטב שמאפשר לאורגניזמים להגיב לזיהום, פגיעות ברקמה ואתגרים סביבתיים נוספים1. למרות שתגובות דלקתיות חריפות הן בדרך כלל מגוננות, הפעלה מתמשכת של מסלולי דלקת עלולה לשבש את ההומאוסטזיס של הרקמות ולתרום להופעת והתקדמות של מחלות כרוניות, כולל מחלת מעי דלקתי (IBD) ודלקת מפרקים שגרונית (RA)2. רשתות איתות תוך-תאיות רבות משתתפות בוויסות דלקתי, כאשר מסלול גורם הגרעין-κB (NF-κB) הוא אחד הנחקרים ביותר3.
חברי משפחת NF-κB, כולל p50, p52, p65 (RelA), RelB ו-c-Rel, משמשים כגורמי שעתוק דימריים המווסתים את ביטוי הגנים המעורבים במערכת החיסון והדלקת 4,5. בתנאים בסיסיים, דימרים של NF-κB נשארים לא פעילים בציטופלזמה בשל הקשר למעכב של חלבוני κB (IκB). לאחר גירוי על ידי מתווכים דלקתיים כמו ליפופוליסכריד (LPS) או פקטור נמק גידול-α (TNF-α), קומפלקס IκB קינאז (IKK) מופעל ומזרחן את IκBα, מה שמוביל לאוביקוויטינציה ולהתדרדרות שלו. תהליך זה מאפשר לקומפלקסים של NF-κB להצטבר בגרעין ולהתחיל שעתוק של מתווכים דלקתיים וציטוקינים6. מכיוון שהפעלה מופרזת או מתמשכת של NF-κB קשורה קשר הדוק למגוון מחלות דלקתיות ואוטואימוניות, התערבות פרמקולוגית ברמת איתות IKK משכה עניין רב 7,8,9.
מוצרים טבעיים היו מקורות חיוניים לפיתוח תרופות, כולל תרופות נוגדות דלקת10. 1β-הידרוקסיל-5α-כלורו-8-אפי-זנתטין (XTT) הוא לקטון ססקיטרפני שבודד מקסנתיום סיביריקום11,12. מחקרים קודמים הראו כי XTT מדכא התרבות תאים ומפעיל אפופטוזיס בתאי קרצינומה כבדית אנושית באמצעות הפעלת MAPK ERK/p38 המתווכת ROS ועיכוב JAK2/STAT3 הנגרם מדלדול גלוטתיון13. עם זאת, הפוטנציאל האנטי-דלקתי של XTT והמנגנונים המולקולריים הנלווים לו עדיין לא מובנים היטב.
הממצאים הנוכחיים מצביעים על כך ש-XTT מציג השפעות אנטי-דלקתיות משמעותיות במבחנה. מחקרים מכניים מראים ש-XTT מתקשר עם IKKα/β ומדכא את איתות NF-κB, ובכך מעכב תגובות דלקתיות במקרופאגים מופעלים. ממצאים אלו מצביעים על כך ש-XTT עשוי לייצג תרכובת מובילה מבטיחה לפיתוח תרופות אנטי-דלקתיות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר זה כלל רק קווי תאים מסחריים מבוססים ולא כלל משתתפים אנושיים, דגימות קליניות או ניסויים בבעלי חיים. לכן, לא נדרשו אישור אתי מוסדי והסכמה מדעת. כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות הבטיחות של המעבדות המוסדיות. חומרים מסוכנים טופלו במכסים ייעודיים עם אדים, עם ציוד מגן אישי (PPE) מתאים. הפסולת הכימית והביולוגית הושלכה בהתאם לתקנות המוסדיות. הכימיקלים, הערכות והתגובות המשמשים בפרוטוקול מופיעים בטבלת החומרים.
1. תרבית תאים
מקרופג'ים של עכברים מסוג RAW264.7, תאי קרצינומה צוואר הרחם של HeLa ותאי כליה עובריים HEK293T נרכשו מבנק התאים של האקדמיה הסינית למדעים (שנגחאי, סין). כל התאים נשמרו ב-Modified Eagle Medium (DMEM) של Dulbecco, המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין. סביבת הגידול נקבעה על 37°C עם 5% CO₂ ולחות רוויה.
2. מבחן כחיות תאים
הערכות התאים הוערכה באמצעות בדיקת Cell Counting Kit-8 (CCK-8). תאי RAW264.7 (2.5 × 104 תאים לבאר) צולחו ללוחות של 96 בארות ונתרמו במהלך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. התאים טופלו בריכוזים משתנים של XTT במשך 24 שעות עם או בלי LPS (0.5 מיקרוגרם/מ"ל). ריכוז ה-LPS ומשך הטיפול הותאמו בניסויים ראשוניים כדי לגרום לתגובות דלקתיות מתונות מבלי לגרום לציטוטוקסיות משמעותית. לאחר מכן נוספו 10 מיקרוליטר של תגובת CCK-8 לכל באר, והפלטה נשמרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות. הספיגה נמדדה ב-540 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט.
3. קביעת רמות NO ו-PGE₂ במדיום תרבית תאים
תאי RAW264.7 צויפו ללוחות של 24 בארות בצפיפות של 2.5 × 105 תאים לבאר וגודלו במהלך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. התאים טופלו מראש ב-XTT במשך שעתיים לפני גירוי LPS או TNF-α (15 ng/mL) למשך 24 שעות נוספות. תקופת הטיפול של שעתיים נבחרה כדי לאפשר אינטראקציה מספקת בין XTT למטרות תאיות לפני האתגר הדלקתי. רמות תחמוצת החנקן (NO) ופרוסטגלנדין E₂ (PGE₂) במדיית התרבית נמדדו בהתאם לפרוטוקולי היצרן.
4. תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qRT-PCR)
תאי RAW264.7 (2 × 10,6 תאים) הוקלטו לצלחות של 6 בארות במהלך הלילה וטופלו מראש במינונים שונים של XTT למשך 2 שעות לפני אתגר LPS (0.5 מיקרוגרם/מ"ל) למשך 24 שעות. סך ה-RNA בודד באמצעות תגובת טריזול לפי הוראות היצרן. ריכוז וטוהר ה-RNA הוערכו באמצעות ספקטרופוטומטר, ודגימות עם יחס A260/A280 >1.8 שימשו לניתוחים במורד הזרם.
סך ה-RNA (2 מיקרוגרם) הועבר לתועתקה הפכונית ל-cDNA בנפח תגובה סופי של 20 מיקרוליטר באמצעות ערכת סינתזת cDNA. PCR כמותי בזמן אמת בוצע באמצעות כימיה של SYBR Green על מערכת זיהוי PCR בזמן אמת. רצפי הפריימר היו כדלקמן:
חלוץ INOS: 5′-GGA TCT TCC CAG GCA ACC A-3′
הפוך iNOS: 5′-AAT CCA CAA CTC GCT CCA AGA TT-3′
COX2 קדימה: 5′-CAA CAC CTG AGC GGT TAC-3′
רוורס COX2: 5′-GTT CCA GGA GGA TGG AGT-3′
IL-1β קדימה: 5′-GCC TTG GGC CTC AAA GGA AAG AAT C-3′
IL-1β הפוך: 5′-GGA AGA CAC AGA TTC CAT GGT GAA G-3′
IL-6 פורוורד: 5′-TGG AGT CAC AGA AGGT AGT GGC TAA G-3′
ריוורס IL-6: 5′-TCT GAC CAC AGT GAA TGT CCA C-3′
TNF-α קדימה: 5′-CAC CAC GCT CTG TCT-3′
הפוך TNF-α: 5′-GGC TAC AGG CTT GTC ACT C-3′
GAPDH פורוורד: 5′-TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC-3′
הפוך GAPDH: 5′-GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG-3′
הליך הגברת ה-PCR בוצע כך: דנאטורציה ראשונית בטמפרטורה של 95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, ואחריה 39 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות ו-60 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות. רמות הביטוי הגנטיות היחסיות חושבו בשיטת 2−ΔΔCt עם GAPDH כבקרה פנימית.
5. כתמים מערביים
לאחר הטיפול, תאי RAW264.7 עברו הומוגניזציה בבופר RIPA המכיל מעכבי פרוטאז ופוספטאז. מעכבים אלו הוכנו טריים מיד לפני השימוש כדי למנוע פירוק חלבון ודפוספורילציה. רמות החלבון הכוללות נמדדו באמצעות ערכת בדיקת BCA. כמויות שוות של חלבון הופרדו על ידי אלקטרופורזה של 10% נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד ג'ל והועברו לקרומות ניטרוצלולוזה. לאחר ההעברה, הממברנות נדגרו עם 5% חלב דל שומן שהוכן ב-TBST המכיל Tween-20 (TBST) לחסימה, ולאחר מכן נבדקו עם נוגדנים ראשוניים (דילול של 1:1,000) במשך הלילה בטמפרטורה של 4°C. הממברנות נבדקו לאחר מכן עם נוגדנים משניים מצומדים עם פרוקסידאז חזרת (דילול של 1:5,000) למשך שעה בטמפרטורת החדר. רצועות חלבון זוהו באמצעות מערכת זיהוי כימילומינציה, ועוצמות הפס נותחו באמצעות כימות צפוף.
6. בדיקת אימונופלואורסצנציה
תאי HeLa זרעו לפלטות של 6 בארות וטופלו מראש ב-XTT (8 מיקרומון) במשך 4 שעות לפני גירוי TNF-α (15 ng/mL) למשך 30 דקות. תקופת ה-4 שעות לפני הדגירה נבחרה כדי למקסם את מעורבות המטרה לפני הפעלת NF-κB. התאים קיבעו עם 4% פרפורמלדהיד למשך 15 דקות וחדיר ב-0.25% טריטון X-100 למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר חסימה עם 2% אלבומין סרום בקר (BSA) וסרום עז 10% מדולל במי מלח עם פוספט (PBS), התאים נדגרו בנוגדן ראשוני נגד p65 (דילול 1:250) במשך לילה בטמפרטורה של 4°C, ולאחר מכן חקירה עם נוגדן משני מצומד TRITC (דילול של 1:1,000) למשך שעה בטמפרטורת החדר. הגרעינים צובעו ב-DAPI (0.5 מיקרוגרם/מ"ל) למשך 5 דקות בחושך. תמונות פלואורסצנציה צולמו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנצי. תאי HeLa נבחרו משום שהיחס הגבוה שלהם בין ציטופלזמה לגרעין מאפשר הדמיית טרנסלוקציה גרעינית של p65.
7. שבירה ציטופלזמית וגרעינית
תאי HeLa עברו דגירה מוקדמת עם XTT במשך 4 שעות ואז גירו ב-TNF-α (15 ng/mL) למשך 30 דקות. תאים נאספו, נשטפו ב-PBS קר, ועובדו להפקת חלבונים ציטופלזמיים וגרעיניים באמצעות ערכת הפקת חלבון גרעיני וציטופלזמי מסחרית לפי הוראות היצרן. כל ההליכים בוצעו על קרח לשמירה על שלמות החלבון.
8. בדיקת הזזת חום תאית (CETSA)
CETSA בוצע כפי שתואר קודם14. כ-1 ×-10 7 תאיHeLa נאספו והושמו מחדש ב-500 מיקרוליטר של מעכבי PBS קרים המכילים פרוטאז, ולאחר מכן עברו פירוק באמצעות שלושה מחזורי הקפאה-הפשרה בחנקן נוזלי. ליזטים תאיים צונטריפוגה ב-20,000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. הסופרנטנטים שהתקבלו חולקו באופן שווה לשתי קבוצות וטופלו ב-XTT (100 מיקרומון) או DMSO למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. XTT (100 מיקרומטר) יושם לשיפור רגישות הגילוי בניסויים של CETSA. הדגימות הועברו לשבעה צינורות וחוממו בטמפרטורות המצוינות למשך 3 דקות, ולאחר מכן דגירה בטמפרטורת החדר למשך 3 דקות נוספות. נאספו חלקי חלבון מסיסים לניתוח אימונובלטינג.
9. עגינה מולקולרית
ניתוח עגינה מולקולרי בוצע כפי שתואר קודם14. מבני הגביש של IKKβ (מזהי PDB: 3BRT ו-4KIK) נאספו מבנק נתוני החלבונים (PDB). מבני החלבון עובדו מראש באמצעות PyMOL (גרסה 2.3.4) להסרת מולקולות מים, ליגנדים מקוריים וזיהום, ולאחר מכן הוספת אטומי מימן. חושבו מטעני גסטיגר, וכיסים פעילים זוהו באמצעות AutoDock Tools (גרסה 1.5.6). מבני החלבון נשמרו לאחר מכן בפורמט PDBQT.
מבנה ה-XTT נוצר ב-Chem3D (גרסה 15.1) ואופטימיזציה באמצעות מזעור אנרגיה. עגינה חצי-גמישה בוצעה באמצעות AutoDock Vina (גרסה 1.1.2). תיבות רשת נבנו כדי לכסות במלואן את הכיסים הפעילים, בעוד שכל שאר הפרמטרים נשארו בהגדרות ברירת המחדל. נבחרו לניתוח תנוחות עגינה עם אנרגיות קישור נמוכות וקונפורמציות יציבות מרב. אנרגיות קישור מתחת ל-5 ק"ל למול נחשבו כאינדיקטוריות לזיקה חזקה לפי קריטריונים שפורסמו. PyMOL שימש גם להמחשת מצבי קישור ולהערכת קשרי מימן, אינטראקציות הידרופוביות, אינטראקציות ואן דר ואלס ואתרי קישור פוטנציאליים.
10. ניתוח סטטיסטי
כל הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת GraphPad Prism 5.0. הנתונים מוצגים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM) משלושה ניסויים עצמאיים. המובהקות הסטטיסטית הוערכה באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן פוסט-הוק של דאנט. ערך של p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
XTT עיכב ייצור NO ו-PGE₂ במקרופאגים RAW264.7 המונעים על ידי LPS או TNF α
כדי לקבוע האם ההשפעות האנטי-דלקתיות של XTT היו בלתי תלויות בציטוטוקסיות, הוערכה שרייתיות תאי RAW264.7 לאחר טיפול ב-XTT בנוכחות או בהיעדר LPS. לא זוהתה ירידה משמעותית בחיוניות התאים בריכוזים שבין 0.5 ל-8 מיקרומון, מה שמעיד שהתרכובת נסבלה היטב בתנאי הניסוי (איור 1). בהתבסס על ממצאים אלו, נבחרו ריכוזים של 2–8 מיקרומום לניתוחים הבאים.
גירוי בא...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
לקטונים ססקיטרפין הם סוג של מוצרים טבעיים עם פעילויות פרמקולוגיות מגוונות, כולל השפעות חיטוי, אנטי-דלקתיות, אנטי-פירטיות וניקוי רעלים15. מחקרים קודמים הראו כי XTT, לקטון ססקוויטרפני מסוג קסנתנוליד שבודד מקסנתיום סיביריקום, מציג השפעות אנטי-רבליפרטיביות ופרו-אפופטוטיות חזקות בתאי קרצינומה כבדית אנושית13. עבודה זו העריכה את התכונות האנטי-דלקתיות של XTT במקרופאגים RAW264.7 המונעים על ידי LPS וחקרה עוד את המנגנונים המולקולריים הבסיסיים...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82004031), פרויקט מחקר המנהל המחוזי של הרפואה הסינית המסורתית של סצ'ואן (מס' 2024MS566) ותוכנית המחקר והפיתוח המרכזית הלאומית של סין (מס' 2023YFC3504402).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| רגנט זרחון מוגבר D20A2:D21A2:D22A2:D23A2: D24A2:D25A2:D26A2:D27A2:D28A2: D29A2:D30A2:D29 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P90720 | זיהוי אותות זורחים |
| נוגדנים משניים מחוברים לפרוקסידאז כרזיס (HRP) | Signalway Antibody (Nanjing) | L30118 | נקשר באופן ספציפי לנוגדן הראשוני |
| נוגדן ראשוני p65 | Bioworld | BS4139 | מזהה באופן ספציפי את תת-היחידה p65 של NF-κB |
| ספקטרופוטומטר | Thermo Fisher Scientific | NanoDrop 2000 | SCR_018042 |
| 0.45 μM פוליווינילידן פלואוריד ממברנה | Millipore | PR05509 | ספיגת מולקולות חלבון |
| 1β-hydroxyl-5α-chloro-8-epi-xanthatin | מכון ביולוגיה של צ'נגדו | תרכובות מונו-מריות טבעיות | |
| All-in-One cDNA Synthesis SuperMix | Bimake (Shanghai) | B24408 | תעתוק לאחור |
| BAY11-7082 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | SF0011 | מעכב IκB/IKK |
| נוגדן Bcl2 | Signalway Antibody (Nanjing) | 32012 | AB_3751037 |
| ערכת חומצה ביצינכונית (BCA) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0010S | כימות חלבון כולל |
| סוכן CCK-8 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | C0038 | מדידת חיוניות תאים |
| מערכת זיהוי זרחן | Millipore, Bedford, USA | P90720 | השגה ועיבוד אותות זורחים |
| נוגדן COX-2 | Signalway Antibody (Nanjing) | 33345 | AB_3676692 |
| DMSO | Sangon Biotech(Shanghai)Co.,Ltd. | A100231-0500 | המסת תרכובות |
| נוגדן GAPDH | Signalway Antibody (Nanjing) | 41549 | AB_3751036 |
| מכשיר הדמיית ג'ל | E-BLOT | Touch Imager Pro | רכישת ותחלית תמונות |
| מכשיר PCR גרדיאנט | Biometra TADVANCED | Biometra Tadvanced 96SG | טמפרטורת ניגוח גרדיאנטית |
| סוכן Griess | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | S0021S | כימות NO |
| תאי סרטן צוואר הרחם האנושי HeLa | בנק התאים של האקדמיה הסינית למדעים | SCSP-504 | תאים שנגזרו מאדם |
| TNF-α אנושי | Novus Biologicals | 210-TA | ציטוקינים פרו-דלקתיים |
| נוגדן iNOS | Signalway Antibody (Nanjing) | 48309 | AB_2943634 |
| מיקרוסקופ קונפוקלי הופכי בלייזר | Olympus | FV1000 | SCR_016840 |
| LPS ( E.coli 055:B5) | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd | L6529 | הקמת מודלים דלקתיים |
| תאי מקרופאג מורי RAW264.7 | בנק התאים של האקדמיה הסינית למדעים | SCSP-5036 | תאים שמקורם בעכבר |
| ערכת חילוץ חלבון גרעיני וציטופלסמי | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0027 | הפרדת חלבונים ציטופלסמיים וגרעיניים |
| PD98059 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1177 | מעכב MEK |
| נוגדן P-ERK (Thr202/Thr185) | Signalway Antibody (Nanjing) | 12548 | גילוי רמת הזרחון של חלבון ERK |
| נוגדן p-IKKα/β (Ser176/Ser177) | Signalway Antibody (Nanjing) | 11931 | AB_3751034 |
| נוגדן p-IκBα (phospho-Ser32) | Signalway Antibody (Nanjing) | 13776 | AB_3751033 |
| נוגדן p-JNK (T183/T221) | Signalway Antibody (Nanjing) | 13371 | AB_3718662 |
| נוגדן p-p38 MAPK (Thr180) | Signalway Antibody (Nanjing) | 11581 | AB_3751032 |
| ערכת בדיקת פרמטר פרוסטגלנדין E2 | R&D Systems | KGE004B | AB_2894942 |
| PS1145 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S7691 | מעכב IKK ספציפי |
| ערכת הכנת ג'ל SDS-PAGE מהירה | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0018S | הפרדת חלבונים |
| מערכת PCR בזמן אמת | Bio-Rad | CFX96 | SCR_018064 |
| חיץ RIPA | Bimake (Shanghai) | P0013C | פיצול תאים |
| SB203580 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1076 | מעכב p38 MAPK |
| SP600125 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1460 | מעכב JNK |
| SYBR Green | Bimake (Shanghai) | B21202 |