מתואר מודל פצע מעור עכברוש המאפשר הערכה של תרופות שונות בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים בשלבים שונים של תהליך ההחלמה. בנוסף, מפורט פרוטוקול לביצוע פלנימטריה ידנית למעקב אחר קצב התכווצות הפצע במהלך תיקון הרקמות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מתואר מודל פצע מעור עכברוש המאפשר הערכה של תרופות שונות בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים בשלבים שונים של תהליך ההחלמה. בנוסף, מפורט פרוטוקול לביצוע פלנימטריה ידנית למעקב אחר קצב התכווצות הפצע במהלך תיקון הרקמות.
ריפוי פצעי העור הוא תהליך ביולוגי מורכב הכולל שלבים מתואמים של דלקת, התרבות ועיצוב מחדש. בהינתן הצורך להבין טוב יותר את המנגנונים הבסיסיים של ריפוי פצעים, מודלים של פצעים בבעלי חיים בניתוח משמשים להעמקת הידע בתהליך זה ולהקל על פיתוח גישות טיפוליות חדשניות. במודלים כאלה, השראת פצעי עור באמצעות ביופסיות מאגר משמשת לעיתים קרובות, שכן היא מניבה נגעים סטנדרטיים. עם זאת, טכניקה זו מגבילה את הנגע לצורה עגולה, מה שעשוי לא להתאים למטרות ניסיוניות מסוימות. בהקשר זה, מוצג פרוטוקול כירורגי פשוט וניתן לשכפול להשראת פצעים כריתתיים בעובי מלא בעכברים, באמצעות מודל מרובע סטנדרטי בצד. שיטה זו מאפשרת יצירת נגעים בגדלים וגיאומטריות משתנים, ומספקת גמישות ניסויית גבוהה יותר המותאמת למטרות הספציפיות של כל מחקר ומאפשרת ניטור תהליך הריפוי בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים. בנוסף, מתוארת שיטה למעקב אחר קצב התכווצות הפצע באמצעות פלנימטריה ידנית. למרות שיישום פרוטוקול זה דורש תשומת לב לפרטים ומיומנות טכנית, אין צורך במיומנויות כירורגיות מתקדמות.
ריפוי פצעים עוריים הוא תהליך ביולוגי מורכב ומתוזמר הכולל אירועים מתואמים רבים שמטרתם לשקם את שלמות הרקמה. התופעה מתקדמת בשלבים מובחנים אך חופפים, הכוללים המוסטזיס ודלקת, התרבות ועיצוב מחדש1. השלב הדלקתי מתחיל דקות לאחר היווצרות הפצע, מגיע לשיאו בין 24 ל-48 שעות לאחר הפציעה, וכולל גיוס תאי חיסון ושחרור מתווכים דלקתיים. שלב ההתרבות מתאפיין באפיתליאליזציה מחדש וביצירת רקמת גרנולציה, שמתחיל 4 עד 5 ימים לאחר הפציעה ועלול להימשך שבועות. לבסוף, הפצע נכנס לשלב השיקום, שמתחיל בשבוע השלישי לאחר הפציעה ויכול להימשך חודשים או שנים, ומאופיין בארגון רקמתי2. כאשר ההחלמה אינה מתקדמת כראוי, היא עלולה לגרום לפצע כרוני, שמטיל נטל משמעותי הן על המטופל והן על מערכת הבריאות, מה שמדגיש את הצורך לפתח גישות טיפוליות חדשות.
יצירת פצע כריתה באמצעות הסרה כירורגית של כל שכבות העור (אפידרמיס, דרמיס ורקמה תת-עורית) מהחיה מאפשרת חקירת דלקת, יצירת רקמות גרנולציה, שינוי אפיתליאליזציה, אנגיוגנזה ותהליך העיצוב מחדש4. בעשורים האחרונים, אימוץ מודלים לריפוי פצעים אפשר גילויים רבים, והרחיב את הידע וההבנה של האירועים המולקולריים והתאיים שמאפשריםתהליך זה. מודלים ב-vivo נשארים הכלים החיזויים ביותר לחקר תיקון פצעים אנושיים, שכן הם מייצגים בצורה מדויקת יותר את המיקרו-סביבה המרפאית המלאה בשל נוכחות סוגי תאים מרובים, רמזים סביבתיים ואינטראקציות פאראקריניות6. בהקשר זה, חולדות ועכברים נמצאים בשימוש נרחב בשל קלות הטיפולוהתחזוקה שלהם.
במודלים אלה, ביופסיות מאגרוף משמשות לעיתים קרובות ליצירת פצעים כירורגיים משום שהן מספקות כריתה סטנדרטית. כתוצאה מכך, רוב המודלים הניסיוניים המתוארים בספרות מבוססים על הקמת נגעים מעגליים7–12. למרות שגישה זו מקובלת באופן נרחב, השימוש בגאומטריות חלופיות יכול לגוון את הגישות המתודולוגיות הזמינות למחקרי ריפוי פצעים. בהקשר זה, יצירת פצעים באמצעות סכין מנתחים מאפשרת יצירת נגעים בגדלים שונים ובצורות מוגדרות מחוץ לדפוס המעגלי הסטנדרטי המשמש בביופסיות מכה 13,14,15,16,17,18. יתרה מזאת, מחקרים השוואתיים במודלים של בעלי חיים הראו כי חתכי סכין גורמים לפחות נזק לרקמה הראשונית בהשוואה לטכניקות אחרות.
פרוטוקול זה מתאר שיטה ניתוחית חלופית להשראת פצעי עור בעובי מלא בעכברים, באמצעות מודל נגע מרובע בצד. הגישה המוצגת מסייעת בסטנדרטיזציה של אזור הנגע ובמעקב אחר תהליך תיקון הרקמות. יתרה מזאת, הוא רלוונטי למחקרים שמטרתם להעריך את השפעות האסטרטגיות הטיפוליות והביוחומרים השונים לאורך שלבי הריפוי העור השונים בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים הניסיוניים אושרו על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים (CEUA) של אוניברסיטת סנטה קרוז (UESC). חולדות ויסטר (Rattus norvegicus) הושגו ממעבדת הרבייה, התחזוקה והניסויים של בעלי חיים (LaBIO)/מתקן בעלי חיים ב-UESC, בהתאם לפרוטוקול CEUA/UESC מס' 010/25. כל ההליכים בטיפול בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך NIH לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה ועמדו בהנחיות מוסדיות לרווחת בעלי חיים ושימוש אתי. העיצוב הכולל של פרוטוקול הניסוי מוצג באיור 1, והחומרים והציוד המשמשים בפרוטוקול זה מפורטים בטבלת החומרים הזמינה כחומר משלים.

איור 1: עיצוב ניסויי של פרוטוקול השראה לפצע עור במודלים של חולדות. (א) לאחר הרדמה בבעלי חיים, גילוח את אזור הניסוי; (ב) לעורר הרדמה בתא עם איזופלורן, ולאחר אובדן הרפלקסים, לשמור על מישור הרדמה מספק באמצעות מסכת פנים; (ג) לבצע אנטיספסיסיה של האזור המגולח, סימון מידות הנגע באמצעות קליפר, ויצירת פצע ניתוחי באמצעות סכין סטרילית; (ד) להגן על הנגע באמצעות ציפוי סרט שקוף ולבצע פלנימטריה ידנית באמצעות נייר דבק; (ה) מתן הקלה לאחר הניתוח עם טרמדול הידרוכלוריד כל 12 שעות במשך 3 ימים; (ו) ליישם את הטיפול הניסיוני 24 שעות לאחר השראת הפצע; (ז) לבצע המתת חסד בנקודת הזמן הניסויית שנקבעה מראש וממשיך באיסוף דגימות ומעקבי פלנימטריה לניתוחים הבאים. הדמות הזו נוצרה על ידי המחברים באמצעות BioRender. גלוואו, מ. (2026) https://BioRender.com/jsiygmf. רישיון פרסום מצורף. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.
1. בעלי חיים וטיפול
2. הליך טרום-ניתוחי
3. השראת פצע עורי
4. תכנון ידני של אזור הפצע
5. טיפול מיידי לאחר הניתוח
6. טיפול
7. המתת חסד
8. מדידת אזור הנגע

איור 2: מדידת אזור הנגע באמצעות ImitoWound. (A) בפלנימטריה ידנית, סמנו שתי נקודות (A ו-B), ומדדו את המרחק (x) ביניהן באמצעות סרגל מילימטר; (ב) להעלות את תמונת הנגע לתוכנה, ולסמן את אותן נקודות שהוגדרו מראש (A ו-B), תוך הצמתן על המקור; הזנת המדידה שנאספה קודם (X) לכיול קנה מידה; (ג) לבקש את התוכנה להמשיך במדידת שטח הנגע; המתינו כי ערך השטח מחושב אוטומטית ומסופק על ידי המערכת. הדמות הזו נוצרה על ידי המחברים באמצעות BioRender. לסה דה סילבה, מ. (2026) https://BioRender.com/dzko62t. רישיון פרסום מצורף. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.
9. קביעת קצב התכווצות הפצע
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בניסוי זה נעשה שימוש בסולפדיאזין כסף כטיפול ייחוס. המוצר הומרח באופן מקומי על מיטת הפצע 24 שעות לאחר השראת הפצע. הבחירה בסולפדיאזין כסף התבססה על השימוש הקליני המבוסס שלו כסוכן אנטי-מיקרוביאלי ובניהול פצעים עוריים. הנתונים מוצגים כטווח החציוני והבין-רבעוני, כאשר n = 5 בעלי חיים לכל נקודת זמן ניסיונית. איור 3A ממחיש את ההתפתחות המאקרוסקופית של הפצע העור ביום ההשראה (D0) ובימים 3, 7, 14 ו-21, התואמים ליום המתת החסד לכל בעל חיים. איור 3B
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למרות שהידע על ריפוי פצעים אנושי התקדם משמעותית, קשיים ומגבלות מובנים הופכים את השימוש במודלים ניסיוניים לבלתי נפרדים למחקרבתחום זה. בהקשר זה, הפרוטוקול הנוכחי נועד לתאר מודל פצע כריתה בעובי מלא המושר באמצעות סכין מדרגה על צדי חולדות כשיטה חלופית לטכניקות המסורתיות. האזור הגבי הקשור לשימוש בביופסיות מאגרים מעגליות הוא השיטה הנפוצה ביותר במחקרי ריפוי עור. עם זאת, השימוש בצד כאזור אנטומי חלופי מתועד היטב, ומדגים יישום שווה ערך בהערכת תיקון רקמות 21,22,23.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
אנו מודים בהכרת תודה לקרן אמפארו לפסקיסה דו סטאדו דה באהיה (FAPESB), ולקורדנאסאו של אפרפייסואמנטו לפסואל דה ניבל סופריור (CAPES), על התמיכה בחברות; תוכנית הלימודים לתארים מתקדמים בביולוגיה וביוטכנולוגיה של מיקרואורגניזמים (PPGBBM/UESC), לתמיכה כספית. אנו מודים גם לבית החולים הווטרינרי לרפואה (HVET/UESC) על כך שהפכו את חדר הניתוח והציוד לזמינות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אלכוהול (אתנול 70%) | Dinâmica | P.01.0024.006.06.81 | חיטוי |
| מלקחיים אנטומיים | Sigma-Aldrich | F3892 | פלדת אל חלד |
| תחבושת | כל | לא חלים | הגנה על פצע |
| קליפר | Mitutoyo | 530-104 | הפרדת פצע |
| כלורהקסידין 0.2% תמיסת חיטוי מימית | Riohex | לא חלים | חיטוי |
| תא CO2 | Bonther | D149F1LYSZ | השראת הרדמה |
| תחבושת קרפ | Cremer | 818765 | 15 ס\"מ x 1,25 מ\' |
| כפפות לטקס חד פעמיות | Descarpak | e0530101 | לא סטרילי |
| כרית גזה | Cremer | 819342 | 7.5 x 7.5 ס\"מ |
| מזרק תת-עורי | Dercarpack | e0324201 | 1 מ"ל עם מחט |
| ImageJ | Image J | https://imagej.net/ij/ | מדידה פלנימטרית |
| ImitoWound | ImitoWound | https://imito.io/pt/imitowound | מדידה פלנימטרית |
| מגבת נייר מקופלת ביניהם | Scott Smart | 48260 | ניקוי כללי |
| איזופלורן | Cristália | 7.89668E+12 | הרדמה בשאיפה |
| כפפות לטקס לנוהל | כפפות לטקס לנוהל כפפות לטקס לנוהל | ציוד מגן אישי | |
| סבון נוזלי | כל | לא חלים | ניקוי אזור פצע |
| מספריים מאיו, ישרים, חדים/חדים | Fine Science Tools | 14001-12 | פלדת אל חלד |
| סרגל מילימטר | כל | לא חלים | |
| מורפין סולפט | Sigma-Aldrich | M8777 | תמיסה להזרקה 1 מ"ג/מ"ל |
| גיליון נייר | כל | לא חלים | |
| עט קבוע | כל | לא חלים | סימון עור |
| פובידון-יוד | Rioquimica | ZK48BN72E | חיטוי |
| להב סקלפל מס\' 23 | Descarpak | 740801 | פלדת אל חלד |
| ידית סקלפל מס\' 4 | Sigma-Aldrich | לא חלים | פלדת אל חלד |
| להב גילוח מפלדת אל חלד | Wilkinson | N/A | הסרת שיער |
| כפפת ניתוח סטרילית | Descarpak | e0212101 | סטרילי |
| מסכת ניתוח | כל | לא חלים | לא סטרילי |
| טרמדול הידרוכלוריד | UniãoQuímica | 7.89601E+12 | פתרון להזרקה 50 מ"ג/מ"ל |
| תחבושת סרט שקוף | Vital derme | 1503 | 15 ס\"מ x 10 מ\' |
| סרט דבק פוליפרופילן שקוף | סרט דבק פוליפרופילן שקוף סרט דבק פוליפרופילן שקוף | הגנה על פצע | |
| שמיכה תרמית וטרינרית עם כיסוי PVC | Prevtech | MSO2VT001 | שמירה על טמפרטורת הגוף |
| סרט דבק עמיד למים | Cremer | 819113 | 10 ס\"מ x 4,5 מ\' |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.