הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

זיהוי ביומארקרים מועמדים הקשורים למיטוכונדריה של Ligustri Lucidi Fructus בנפרופת סוכרת

57 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71592

⸱

15 בספטמבר 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Pharmaceutical and Food Engineering, Shanxi University of Traditional Chinese Medicine, Shanxi Key Laboratory of Integrative Systemic Regulation for Qi-Blood Homeostasis, 2College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

נפרופתיה סוכרת (DN) כרוכה בתפקוד מיטוכונדריאלי לקוי. באמצעות טרנסקריפטומיקה, פרמקולוגיה רשתית ולמידת מכונה, זיהינו את CAT, FABP1, MAOA ו-MAOB כסמנים ביולוגיים מועמדים הקשורים למיטוכונדריה עבור Ligustri Lucidi Fructus. בעכברים מסוג db/db, LLF הוביל לעלייה בביטוי של CAT ו-MAOA, ממצא התומך בחקירה מכניסטית מעמיקה יותר.

תקציר

תפקוד לקוי של מיטוכונדריה ועקה חמצונית מוגברת בתוך המיטוכונדריה הם גורמים פתולוגיים מרכזיים המניעים פגיעה בצינוריות הכליה בנפרופתיה סוכרתית (DN). למרות ש-Ligustri Lucidi Fructus (LLF) משמש באופן מסורתי לטיפול ב-DN, המנגנונים המעורבים, ובמיוחד אלו הקשורים לגנים ומסלולים הקשורים למיטוכונדריה, נותרו לא מובנים דיו. מחקר זה השתמש בניתוח ביטוי דיפרנציאלי של מערך הנתונים GSE142025 כדי לזהות גנים בעלי ביטוי דיפרנציאלי (DEGs) הקשורים ל-DN. גנים מאפיינים נבחרו על ידי הצלבת הפלטים של ארבעה מודלים של למידה חישובית. גנים שהראו ביטוי דיפרנציאלי משמעותי ודפוסי ביטוי עקביים בשני מערכי הנתונים הערכו בהמשך באמצעות ניתוח עקומת מאפייני תפעול מקבל (ROC). אלו עם שטח תחת העקומה (AUC) > 0.7 בשני מערכי הנתונים הוגדרו כסמנים ביולוגיים מועמדים. בוצעו ניתוחים של העשרה תפקודית, חלחול חיסוני, בניית רשת ועגינה מולקולרית. מודל עכברים עם DN שימש להערכת רמות סוכר בדם, מיקרואלבומין בשתן, היסטופתולוגיה וביטוי RT-qPCR של הסמנים הביולוגיים המועמדים. CAT ו-MAOA הראו עלייה משמעותית בביטוי in vivo. הסמנים הביולוגיים המועמדים היו מועשרים במסלולים הקשורים לתפקוד הריבוזום, פירוק של ולין, לויצין ואיסולויצין, אינטראקציות בין ציטוקינים לקולטני ציטוקינים ופרוקסיזומים. הם נמצאו במתאם שלילי עם תאי T מסוג CD8+ ותאי מאסט מופעלים, ובמתאם חיובי עם תאי NK מופעלים ותאי B נאיביים. Taxifolin, beta-sitosterol ו-eriodictyol הראו אנרגיות קשירה נמוכות מ-5- kcal/mol עם הסמנים הביולוגיים המועמדים. CAT ו-MAOA הם מועמדים מבטיחים המצדיקים חקירה מנגנונית נוספת.

מבוא

נפרופתיה סוכרתית (DN), הגורם המוביל למחלת כליות בשלב מסוף ברחבי העולם, היא אחת הסיבוכים השכיחים ביותר של סוכרת (diabetes mellitus). מבחינה פתולוגית, היא מאופיינת בהצטברות מוגברת של מטריקס חוץ-תאי הן במדורה הגלומרולרית והן במדורה התובולרית, יחד עם עיבוי וסקלרוזיס של כלי דם תוך-כלייתיים2. DN קשורה בדרך כלל לחלבון בשתן (פרוטאינוריה) ויתר לחץ דם3. התפתחותה קשורה באופן הדוק לנזק בתאי אנדותל וסקולריים, לתגובה דלקתית מוגברת ולעקה חמצונית מוגברת כתוצאה מהיפרגליקמיה ממושכת4. שכיחות ה-DN עולה ברחבי העולם, במיוחד בקרב חולי סוכרת בגיל העמידה ובקרב קשישים. ככל שהמחלה מתקדמת, היא עלולה להוביל לאי-ספיקת כליות בשלב מסוף ואף לסיבוכים קרדיו-וסקולריים, דבר הפוגע משמעותית באיכות חיי החולים ובפרוגנוזה שלהם5. למרות התקדמויות בגישות האבחנתיות והטיפוליות ב-DN, ביומרקרים מועמדים מוקדמים ומדויקים לאבחנה עדיין אינם זמינים, ואסטרטגיות טיפול יעילות להפיכת התהליכים הפתולוגיים עדיין חסרות. לפיכך, קיים צורך דחוף בפיתוח תרופות חדשות וממוקדות נגד DN.

מיטוכונדריה חיוניות לביואנרגטיקה תאית, סינתזה של מקדימים מטבוליים, הומאוסטזיס של סידן, ייצור של מיני חמצן רהאקטיביים (ROS), סיגנלינג חיסוני ואפופטוזיס, כולם חיוניים לשמירה על יציבות התא והאורגניזם6. כ"תחנות הכוח" של התא, המיטוכונדריה ממלאות תפקיד מרכזי בתהליכים בסיים כגון גליקוליזה, מעגל חומצה טריקרבক্সילית ופוספורילציה חמצונית7. השמנת יתר משבשת את מעגל קרבס ואת שרשרת הנשימה המיטוכונדריאלית, מה שמוביל לתפקוד לקוי של המיטוכונדריה ולעלייה בייצור ROS. רמות גבוהות של ROS בשרת הנשימה המיטוכונדריאלית עלולות להוביל לעקה חמצונית, אשר מחמירה את התגובה הדלקתית הקשורה להשמנת יתר ומקדמת אפופטוזיס8. מחקרים עדכניים הדגישו את התפקיד המשמעותי של תפקוד לקוי של מיטוכונדריה בפתוגנזה ובהתקדמות של DN, כולל הפרעות במטבוליזם של אנרגיה, ייצור מוגבר של ROS ואיתות אפופטוטי מוגבר9. תפקוד מיטוכונדריאלי לקוי כרוני מאיץ את התקדמות מחלת הכליות10. לפיכך, שיפור התפקוד המיטוכונדריאלי עשוי להוות אסטרטגיה הגנתית מכרעת נגד DN.

Ligustri Lucidi Fructus (LLF) הוא פרי בשל ומייבש ממשפחת ה-Luteaceae, הידוע בסגולותיו להזנת הכבד והכליות, וכן ביכולתו להכהות את השיער ולשפר את הראייה. הטרפוליסכריד המופיע באופן טבעי ומופק מ-LLF זוה, ונחשף פוטנציאל שלו להגן על הכליות מפני פיברוזיס1. בשנים האחרונות ניתנה תשומת לב גוברת לשימוש ב-LLF לטיפול ב-DN, תוך הדגמה של השפעות רנפרוטקטיביות (מגינות על הכליות) בולטות1,12,13. יתרה מכך, הקשר המורכב בין LLF למיטוכונדריה נחקר ואומת באופן נרחב. באופן בולט, מחקר הראה כי LLF מפעיל את השפעותיו המיטיבות על ידי ויסות התפקוד המיטוכונדרי באמצעות הפעלה של מסלול האיתות AMPK14. מנגנון זה מגן ביעילות על המיטוכונדריה מפני נזקים הנגרמים על ידי עקה חמצונית. ממצאים אלו מדגישים עוד יותר את תפקידו החיוני של LLF בשמירה על מטבוליזם אנרגטי תאי ובשיפור עמידות התאים לעקה חמצונית. עם זאת, המנגנון הטיפולי המדויק, ובמיוחד בנוגע לשיקום התפקוד המיטוכונדרי, נותר פחות מובן.

מטרת מחקר זה הייתה להבהיר את המנגנונים הביולוגיים העומדים בבסיס ההשפעה הטיפולית של LLF על תפקוד המיטוכונדריה ב-DN. בוצע חיפוש במאגרי מידע ציבוריים באמצעות כלים של ביואינפורמטיקה כדי לזהות ביומרקרים מועמדים הקשורים להשפעות ההגנה הכלית של LLF, תוך שילוב נתוני טרנסקריפטומיקה ומידע על רכיבים פעילים. ניתוחים נוספים, כולל חדירה חיסונית, קשר למאפיינים קליניים, מודיפיקציית m6A RNA, העשרה תפקודית, בניית רשת רגולטורית ועגינה מולקולרית (molecular docking), הצביעו על כך שביומרקרים מועמדים אלו ממלאים תפקיד מרכזי בויסות תפקוד המיטוכונדריה במהלך טיפול ב-DN. תיקוף In vivo אישר עוד יותר את חשיבותם. ניתוח מקיף זה מעמיק את הבנתנו לגבי המנגנונים שבאמצעותם LLF מטפל ב-DN ומספק בסיס איתן לפיתוח מטרות טיפוליות חדשות המבוסות על תפקוד לקוי של המיטוכונדריה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

איסוף נתונים
מטריצת ביטוי הגנים והנתונים הקליניים התואמים עבור מאגרי הנתונים GSE142025 ו-GSE96804, הקשורים ל-DN, נשלפו ממאגר הנתונים Gene Expression Omnibus (GEO) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)15. קבוצת האימון (GSE142025) כללה דגימות רקמת כליה מ-27 חולי DN ותשעה ביקורות, שרוצפו באמצעות פלטפורמת GPL20301. קבוצת התיקוף (GSE96804) כללה נתוני ריצוף מ-41 חולי DN ו-20 ביקורות, שעובדו באמצעות פלטפורמת GPL17586. שני מאגרי הנתונים מתמקדים ברקמת כליה; מאגר הנתונים GSE96804 בוחן באופן ספציפי את הגלומרולוס, יחידת הסינון הראשית של הכליה (איור 1). מאגר הנתונים GSE142025 (קבוצת האימון) מורכב מדגימות רקמת כליה שלמה ומספק סקירה נרחבת של הנוף הטרנסקריפטומי של DN. לעומת זאת, מאגר הנתונים GSE96804 (קבוצת התיקוף) מתמקד ספציפית ברקמת גלומרולוס, שהיא האתר העיקרי של פגיעה בסינון הגלומרולרי. מכיוון ששני מאגרי נתונים אלו לא מוזגו באופן ישיר עקב הבדלים בפלטפורמה וברקמה, לא בוצע תיקון אפקט אצווה (batch effect correction). במקום זאת, ביצוע תיקוף בין-מאגרי בוצע באופן עצמאי. גנים עם שינויים כיווניים עקביים ושטח תחת העקומה (AUC) הגבוה מ-0.7 בשני מאגרי הנתונים נבחרו כמועמדים חסונים, התומכים ביכולת ההכללה בין מדורי הכליה השונים.

בסך הכל 1,136 גנים הקשורים למיטוכונדריה (MRGs) הופקו ממאגר הנתונים MitoCarta3.0 (https://www.broadinstitute.org/mitocarta). הרכיבים הפעילים של LLF נחזו באמצעות מאגר הנתונים Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology (TCMSP) (http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php), בהתבס על סף זמינות ביולוגית経oral (OB) של ≥30% וסף דמיון לתרופה (DL) של ≥0.18. לאחר מכן, גנים שהם מטרות פוטנציאליות עבור הרכיבים הפעילים נחזו באמצעות מאגר הנתונים Swiss Target Prediction (http://www.swisstargetprediction.ch/).

ניתוח ביטוי דיפרנציאלי
ניתוח ביטוי דיפרנציאלי של GSE142025 (DN לעומת ביקורת) בוצע באמצעות חבילת limma (גרסה 3.54.1), כאשר קריטריוני המובהקות נקבעו כ- Pתואר < 0.05 ו- |log2FoldChange| > 0.516 תרשימי געש (Volcano plots) ומפות חום (heat maps) הוצגו באמצעות החבילות ggplot2 (גרסה 3.3.6) ו-ComplexHeatmap (גרסה 2.14.0).17,18, בהתאמה. בוצע חפיפה בין הגנים בעלי ביטוי Differentially Expressed Genes (DEGs), הגנים הקשורים למחלה (MRGs) והגנים המהווים מטרות פוטנציאליות של הרכיבים הפעילים, והגנים החופפים הוגדרו כגנים מועמדים. הרשת המקשרת בין הרכיבים הפעילים לבין הגנים המועמדים נבנתה באמצעות תוכנת Cytoscape (גרסה 3.9.0).19.

ניתוח העשרה פונקציונלית ובניית רשת אינטראקציות חלבון-חלבון (PPI)
ניתוחי העשרה של Gene Ontology (GO) ו-Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) עבור הגנים המועמדים בוצעו באמצעות חבילת clusterProfiler (גרסה 4.6.2) כדי לבחון את תפקודיהם הביולוגיים ואת מסלולי השליחות הקשורים אליהם (P.adjust < 0.05). לאחר מכן, הגנים המועמדים הוזנו למסד הנתונים STRING (https://cn.string-db.org/) לשליפת קשרי PPI (רמת ביטחון ≥ 0.4), ולאחר מכן נבנתה רשת PPI באמצעות Cytoscape (גרסה 3.9.0)20.

למידת מכונה
ארבעה אלגוריתמים של למידת מכונה, הכוללים random forest (RF), k-nearest neighbor (KNN), partial least squares (PLS), ו-support vector machine עם radial basis kernel (SVM), הוטמעו באמצעות חבילת caret (גרסה v6.0-93) בהתבסס על מערך הנתונים GSE142025. הגנים המועמדים שזוהו בניתוח הקודם שימשו כמשתני ניבוי, ומצב המחלה (DN או ביקורת) שימש כתוצאה. עבור מודל ה-KNN, בוצע אימות צולב של 10 מקפלים (10-fold cross-validation) באמצעות פונקציית trainControl, עם tuneLength = 10. מודל ה-RF הותאם עם 20 עצים (ntree = 20); מודלי ה-PLS וה-SVM הותאמו באמצעות ההגדרות שהוטמעו בזרימת העבודה המקורית של caret.

התפלגויות השאריות של המודלים הוערכו באמצעות חבילת DALEX (גרסה 2.4.3). לאחר מכן בוצעו הערכות משתנים מבוסות פרמוטציה באמצעות הפונקציה variable_importance של DALEX, כאשר שגיאת השורש הממוצעת של הריבועים (RMSE) הוגדרה כפונקציית ההפסד. ה-dropout_loss המתקבל מייצג את ה-RMSE שהושג לאחר פרמוטציה של המשתנה המתאים21,2. בזרימת העבודה האנליטית המקורית, נשמרו משתנים עם dropout loss < 0.281 בכל המודלים, וגנים המשותפים לכל ארבעת המודלים הוגדרו כגני מאפייני קונסנזוס לצורך תיקוף עוקב.

ארבעת המודלים של למידת מכונה שימשו בעיקר לתעדוף מאפיינים ולא לבניית מסווג קליני סופי. בהתאם לכך, ההבחנה האבחנתית הוערכה לאחר מכן ברמת הגן הבודד באמצעות ניתוח ROC הן במערך הנתונים לגילוי והן במערך הנתונים לתיקוף.

זיהוי ביומרקרים מועמדים
במערכי הנתונים GSE142025 ו-GSE96804, נבחנו הבדלי ביטוי של גנים מאפיינים בין דגימות DN לדגימות ביקורת באמצעות מבחן Wilcoxon. רק גנים עם ביטוי דיפרנציאלי מובהק (P < 0.05) ומגמות ביטוי תואמות בשני מערכי הנתונים נבחרו לניתוח עקומי מאפיין תפעול מקלט (ROC). חבילת pROC (גרסה 1.18.0) שימשה להפקת עקומי ROC ולחישוב השטח תחת העקומה (AUC), כאשר גנים שהראו AUC > 0.7 בשני מערכי הנתונים סווגו כביומרקרים מועמדים23.

ניתוח העשרה של קבוצות גנים (GSEA)
הפונקציות הביולוגיות ומסלולי האיתות הקשורים לסממנים הביולוגיים המועמדים נבחנו בהמשך באמצעות GSEA על מערך הנתונים GSE142025. ראשית, בוצע ניתוח מתאם של ספירמן (Spearman correlation analysis) בין הסמנים הביולוגיים המועמדים לבין כל שאר הגנים באמצעות חבילת ה-psych (גרסה 2.2.9).24חושבו מקדמי מתאם ודורגו (מהגבוה לנמוך). סט הגנים הייחסי היה c2.cp.kegg.v2023.1.Hs.symbols.gmt ממאגר החתימות המולקולריות (MSigDB, https://www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/). לאחר מכן בוצע GSEA כדי להעריך את העשירה של הגנים המדורגים בסט הגנים ברקע באמצעות החבילה clusterProfiler (גרסה 4.6.2). הוחל תיקון לבדיקות מרובות. באמצעות שיטת ה-FDR, ומותאם P-ערכים (המסומנים כ- P.adjust) נחשבו למשמעותיים אם < 0.05.

ניתוח מודיפיקציית M6A
כדי לחקור מודיפיקציות של מתילציה של RNA בביומרקרים מועמדים, נעשה שימוש במאגר הנתונים SRAMP (http://www.cuilab.cn/sramp/) כדי לנבא אתרי מודיפיקציית m6A בביומרקרים מועמדים, תוך התמקדות במיקומים בעלי רמת ביטחון גבוהה בתוך המבנים השניוניים שלהם. לאחר מכן, נעשה שימוש במאגר הנתונים ENCORI (https://starbase.sysu.edu.cn/) כדי לזהות חלבונים שעברו מודיפיקציית m6A אשר מקיימים אינטראקציה עם הביומרקרים המועמדים, תוך שימוש בפרמטר |HepG2 (shRNA)| > 1 לסינון חלבונים מרכזיים. בהמשך, נעשה שימוש במאגר הנתונים RPISeq (http://pridb.gdcb.iastate.edu/RPISeq/) כדי לנבא את הסבירות לאינטראקציות בין החלבונים המרכזיים לבין הביומרקרים המועמדים. רצפי ה-RNA של שניהם הועלו בפורמט טקסט פשוט כדי להפיק ציוני ניבוי של מסווגי RF ו-SVM. אינטראקציה נחשבה למשמעותית כאשר הציון עלה על 0.525. ניתוח ה-SRAMP בוצע עם סף 'High' לניבוי אתרי m6A, תוך שימוש במצב 'Transcript' ובפרמטרים ברירת המחדל. ניתוח ה-ENCORI השתמש בפונקציית האינטראקציה 'miRNA-mRNA' עם הפרמטר 'HepG2 (shRNA)' > 1. ניתוח ה-RPISeq השתמש במסווג RF עם פרמטרים ברירת המחדל; ציונים > 0.5 העידו על אינטראקציה חיובית. אלו הם ניבויים חישוביים, ולא ראיות ניסיוניות למודיפיקציית m6A או לאינטראקציות RNA-חלבון ברקמת כליה. הקריטריון של HepG2 shRNA נגזר ממאגרי הנתונים שחושבו מראש של ENCORI וייתכן שאינו משקף רגולציה ספציפית לכליות.

ניתוח חדירה חיסונית
אלגוריתם CIBERSORT יושם כדי להעריך את הפרופורציות של 2 סוגי תאי חיסון הן בדגימות ביקורת והן בדגימות DN מ-GSE142025, עם ויזואליזציה באמצעות מפת חום (heatmap) שנוצרה באמצעות חבילת ggplot2 (גרסה 3.3.6)26. CIBERSORT הופעל באמצעות מטריצת החתימה LM2, עם 1,0 פרמוטציות ובלי נורמליזציית קוונטיל (כפי שמומלץ עבור נתוני microarray). דגימות עם CIBERSORT p < 0.05 נשמרו לניתוח נוסף. CIBERSORT מעריך שברי תאי חיסון מביטוי של רקמת כליה כוללת (bulk), אשר אינו יכול להבחין בין חדירה ספציפית למדור (למשל, גלומרולרית לעומת טובולו-אינטרסטיציאלית) ואינו יכול להבדיל בין לוקוציטים חודרים לבין תאי חיסון תושבי הרקמה. לפיכך, הקורלציות המדווחות הן ברמת הרקמה ויש לתקפן באמצעות שיטות מרחביות. ניתוח קורלציית Spearman בין תאי חיסון בשפע שונה לבין ביומארקרים מועמדים בוצע באמצעות חבילת psych.

בניית רשתות ועגינה מולקולרית (molecular docking)
MicroRNAs (miRNAs) המקיימים אינטראקציה עם ביומארקרים מועמדים נחזו באמצעות מאגר הנתונים miRNet (https://www.mirnet.ca). לאחר מכן, long noncoding RNAs (lncRNAs) המטרים את ה-miRNAs שזוהו נחזו באמצעות מאגרי הנתונים TarBase (http://www.diana.pcbi.upenn.edu/tarbase) ו-starbase (http://starbase.sysu.edu.cn/). lncRNAs המשותפים לשני מאגרי הנתונים נבחרו לבניית הרשת. רשת ויסות של lncRNA-miRNA-mRNA נבנתה לאחר מכן באמצעות תוכנת Cytoscape. רכיבים פעילים פוטנציאליים המטרים את הביומארקרים המועמדים נבחרו לבניית רשת של רכיב פעיל-ביומארקר. בנוסף, רכיבים פעילים, ביומארקרים מועמדים ומסלולים שזוהו ב-GSEA שולבו ב-Cytoscape ליצירת רשת של רכיב פעיל-ביומארקר-מסלול.

ביצוע ניתוח עגינה מולקולרית (Molecular docking) נועד להעריך את זיקת הקישור בין רכיבים פעילים פוטנציאליים לבין סמנים ביולוגיים מועמדים. מבנים תלת-מדיים של חלבוני הסמנים הביולוגיים התקבלו ממאגר החלבונים של ה-Research Collaboratory for Structural Bioinformatics Protein Data Bank (RCSB PDB, https://www.rscb.org/pdb) בפורמט קובץ PDB. מבנים דו-מדיים של רכיבים פעילים פוטנציאליים נשלפו בפורמט SDF ממאגר הנתונים PubChem (http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). העגינה המולקולרית בוצעה באמצעות פלטפורמת CB-Dock (http://clab.labshare.cn/cb-dock/php/blinddock.php). אנרגיית קישור של פחות מ- -5 kcal/mol העידה על זיקת קישור חזקה27.

הכנה ואימות של Ligustri Lucidi Fructus
כאן, Ligustri Lucidi Fructus (LLF) מתייחס לפרי הבשל והמיובש של Ligustrum lucidum W. T. Aiton (Oleaceae). החומר הבוטני אומת על פי הפרמקופיה הסינית (Chinese Pharmacopoeia), ודגימת ביקורת (voucher specimen) מספר 20240506,2024091,2024103 הופקדה באוניברסיטת שאנשי לרפואה סינית מסורתית.

להכנת התסבית, השרגו 200 g של פרוסות LLF מאושרות ב-1,0 mL של מים מזוקקים למשך 30 min בטמפרטורת החדר. התערובת הורתכה בעוצמה ולאחר מכן בושלה בבעבוע עדין למשך 60 min. התסנין נאסף, וחומרי הצמח שנותרו בושלו שוב עם 1,0 mL נוספים של מים מזוקקים למשך 60 min. שני התסנינים אוחדו, סוננו, עברו סנטריפוגה ורוכזו תחת לחץ מופחת כדי להגיע לריכוז מלאי סופי של 1 g של תמצית גולמית/mL (נפח כולל של 10 mL). התסבית שהוכנה נשמרה ב-4 °C לשימוש קצר טווח או ב-−20 °C לשימור ארוך טווח. איכות ה-LLF והתסבית שלו זוהו ואומתו בקפידה לפי התקנים של הפרמקופה הסינית כדי להבטיח את מהימנות הניסוי ואת יכולת השחזור שלו.

לזיהוי איכותי, בוצע כרומטוגרפיה בשכבה דקה. בקצרה, נפח מתאים של התשבוח שהוכן הועבר לסרכזפוגה, והנוזל העליון חולץ באמצעות methanol. לאחר סינון, תמיסת הדגימה ותמיסת תקן ייחוס של specnuezhenide הונחתו על אותה פלטת silica gel G. לאחר פיתוח, ייבוש ובדיקה תחת אור ultraviolet, הכתם של תמיסת הדגימה הראה צבע ומיקום עקביים עם תרכובת הייחוס, מה שאיש את קיומו של הרכיב הביולוגי הפעיל האופייני של LLF.

לצורך בקרת איכות כמותית, בוצעה דטקציה באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעוצמה גבוהה (HPLC). הניתוח בוצע באמצעות עמודת C18 כאשר המהלול היה תערובת של methanol–water. אורך גל הדטקציה נקבע על 24 nm. תכולת ה-specnuezhenide במיצוי נקבעה על בסיס עקום סטנדרטי. התוצאות הדגימו הרכב כימי יציב ואחיד של מיצוי הדגימה שהוכן, מה שהבטיח איכות תרופתית עקבית לאורך כל ניסוי ההתערבות בבעלי החיים.

ניסויי בעלי חיים
שנים עשר עכברי db/db זכרים בדרגת SPF (בני 8–9 שבועות) ושישה עכברי db/m תואמים בגילם הוחזקו במתקן בעלי החיים SPF של אוניברסיטת שאנשי לרפואה סינית מסורתית. לפני הניסויים, בעלי החיים עברו תקופת אקלמיזציה של 7 ימים תחת מחזור של 12 שעות אור/12 שעות חושך, עם גישה חופשית (ad libitum) למזון ומים. המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת שאנשי לרפואה סינית מסורתית (מספר אישור 202DW167). בעלי חיים שהפגינו ירידה במשקל הגוף של >20%, מצב גסיסה, או חוסר יכולת לגשת למזון או למים, הומתו באופן הומני לפני נקודת הסיום המתוכננת של המחקר. בסיום המחקר, כל שאר העכברים הומתו באמצעות הזרקה תוך-פריטונית של pentobarbital sodium ולאחריה פריקה של עמוד השדרה הצווארי בהתאם לפרוטוקולים המוסדיים.

בעקבות תקופת האקלימטציה, אישור להקמת מודל DN בעכברי db/db התקבל על סמך רמת גלוקוז בדם מווריד הזנב של ≥ 16 mmol/L ומיקרואלבומינוריה, כפי שהודגם על ידי בדיקת רצועה חיובית למיקרואלבומין בשתן. לאחר הקמה מוצלחת של מודל ה-DN, חולקו עכברי ה-db/db באופן אקראי לשתי קבוצות (n = 6 לכל קבוצה): קבוצת מודל ה-DN‏ (DN) וקבוצת הטיפול ב-LLF‏ (Treatment). בנוסף, עכברי db/m (מספרם n = 6) שימשו כקבוצת ביקורת (Control). המינון נבחר על בסיס מחקרי פרמקודנמיקה קודמים של LLF בחולדות סוכרתיות והומר למינון השקול בבני אדם באמצעות נרמול לפי שטח פני השטח של הגוף28. קבוצות הביקורת וה-DN קיבלו מים מזוקקים, בעוד שקבוצת הטיפול קיבלה 3.5 g/kg של LLF למשך 8 שבועות. לאחר 8 שבועות של מתן החומר, כל העכברים הורדמו כדי לאסוף סרום, שתן ורקמת כליה לבדיקות המשך.

מדדי דם ושתן
רמות הגלוקוז בסרום נותחו באמצעות מנתח ביוכימיה של דם אוטומטי מלא. ריכוז המיקרואלבומין בשתן נמדד בהתאם להוראות הערכה (קובץ משלים 1).

בחינה פתולוגית של רקמות כליה בעכבר
רקמות הכליה עובדו לצורך בדיקה היסטופתולוגית. לאחר קיבוע ב-4% paraformaldehyde, הרקמות נשטפו, עברו דהידרטציה, נטמנו בפרפין ונחתכו לפרוסות. לאחר מכן בוצע צביעת Hematoxylin and eosin (HE), והפרוסות הצבועות נבחנו תחת מיקרוסקופ אופטי להערכת שינויים פתולוגיים.

תגובת שרשרת פולימראז כמותית עם שעתוק הפוך (RT-qPCR)
נעשה שימוש ב-RT-qPCR כדי לקבוע את רמת הביטוי של הביו-מרקרים הפוטנציאליים ברקמת כליה של עכבר. RNA כולל הוצא מהרקמה בהתאם להוראות היצרן, ולאחר מכן הוערכו ריכוז ה-RNA ואיכותו (טבלה 1). cDNA סונתז מה-RNA שהופק באמצעות ה-cDNA Synthesis Kit. ההגברה בוצעה עם זוגות הפריימרים המפורטים ב- טבלה 1בשימוש ב- GAPDH כגן ייחוס. רמות ביטוי יחסיות חושבו באמצעות שיטת 2^-ΔCt−ΔΔCt שיטה13,26.

ניתוח סטטיסטי
כל הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת R (גרסה 4.2.2) יחד עם התוכנות הנדרשות להליכים הניסויים המתאימים. אלא אם צוין אחרת, כל המבחנים הסטטיסטיים היו דו-זנביים, והבדלים נחשבו למשמעותיים סטטיסטית כאשר P < 0.05. ניתוח ביטוי דיפרנציאלי טרנסקריפטומי בוצע באמצעות חבילת ה-limma. גנים עם P מותאם < 0.05 וערך מוחלט של log2fold change הגבוה מ-0.5 הוגדרו כבעלי ביטוי דיפרנציאלי.

להשוואות של ביטוי גנים מועמדים בין דגימות DN עצמאיות לדגימות ביקורת, נעשה שימוש במבחני Wilcoxon rank-sum לא-פרמטריים במקומות שצוינו בזרימת העבודה האנליטית המקורית. מתאמים בין סמנים ביולוגיים מועמדים לבין פראקציות של תאי מערכת החיסון הוערכו באמצעות מתאם דרג של Spearman.

נתונים ניסיוניים מוצגים כממוצע ± SD. השוואות בין שלוש קבוצות בעלי החיים הבלתי תלויות בוצעו באמצעות ניתוח שונות חד-כיווני (one-way ANOVA) כאשר התקיימו הנחות הניתוח הפרמטרי. להשוואות פוסט-הוק (post hoc), נעשה שימוש במבחן ההבדל המשמעותי המינימלי (LSD) כאשר השונויות היו הומוגניות, בעוד שמבחן Dunnett's T3 שימש כאשר השונויות לא היו שוות. המדידות הפרמקודינמיות בנקודת הבסיס ובשבוע השמיני נותחו והוצגו בנפרד; לא הוסקו מסקנות בנוגע לאינטראקציה בין קבוצה לזמן. סקריפטי ה-R ונתוני המקור ששימשו לניתוחים של ביואינפורמטיקה ולמידה חישובית מסופקים ב- קובץ משלים 1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי לבחון באופן שיטתי סמנים ביולוגים מועמדים פוטנציאליים הקשורים למיטוכונדריה עבור LLF בטיפול ב-DN, תכננו זרימת עבודה אנליטית בת ארבעה שלבים (איור 1). בשלב I, שילבנו נתוני טרנסקריפטומיקה ממאגר הנתונים GSE142025 (קבוצת אימון, כליה שלמה, n=36) ו-GSE96804 (קבוצת תיקוף, גלומרולוס, n = 61) עם 1,136 גנים הקשורים למיטוכונדריה ממאגר הנתונים MitoCarta 3.0 ו-517 מטרות חזויות של 9 רכיבים פעילים ממאגר הנתונים TCMSP. חפיפה של שלוש קבוצות גנים אלו הניבה 9 גנים מועמדים. בשלב II, יושמו ארבעה מודלים של למידת מכונה (RF, K...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

LLF היא תרופה נפוצה מהרפואה הסינית המסורתית, המשמשת בעיקר לחיזוק הכבד והכליות ולטיפול בסוכרת ובסיבוכיה. נכון להיום, אין תרופות או טיפולים ספציפיים עבור DN, והניהול של המחלה נשען בעיקר על טיפולים להורדת רמות הסוכר (hypoglycemic), הורדת רמות השומנים (hypolipidemic) והורדת לחץ הדם (antihypertensive)30,31,32. עם זאת, טיפולים אלו יכולים להאט את התקדמות הנזק הכליתי רק בחלק קטן מהמטופלים3. הוכח כי LLF מפעילה השפ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

ברצוננו להביע את תודתנו הכנה לכל האנשים והארגונים שתמכו וסייעו לנו לאורך מחקר זה. מחקר זה נתמך על ידי National Natural Science Foundation of China (מספרים 81973486 ו-82173974), פרויקטי המחקר של מינהל הרפואה הסינית המסורתית של מחוז Shanxi (מספר 2024ZYYA021), פרויקט הדיסציפלינה של אוניברסיטת Shanxi לרפואה סינית (מספר 2026XK24), ופרויקט קרן המחקר המדעי של אוניברסיטת Shandong לרפואה סינית (מספר KYZK2024Q13). אנו מודים ל-Qinqing Li, פרופסור חבר באוניברסיטת Shanxi לרפואה סינית, שאימת את החומר הבוטני.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תמיסת קיבוע רקמות של 4% פראפורמלהידSaiyin Biotechnology Co., Ltd.71033600
אתנול מוחלטSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10009218
מד סוכר בדםSinocare Inc.GA-3
ערכה לבדיקת חנקן שלוריאה בדם (BUN)המכון להנדסה ביו-רפואית נאנג'ינג ג'יאנוויי (Nanjing Jianwei Bioengineering Institute)C03-2-1
עכברי C57BLKS/J db/dbChangzhou Cavens Experimental Animal Co., Ltd.SCXK (Su) 2021-013
עכברי C57BLKS/J db/mChangzhou Cavens Experimental Animal Co., Ltd.SCXK (Su) 2021-013
צנטריפוגהHunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.HI650
כלורל הידרטShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.302-17-0
Cytoscape (v3.9.0)<קישור ל-"https://cytoscape.org/">https://cytoscape.org
מאגר נתונים עבור m6חיזוי מודיפיקציה<קישור ל-"http://www.cuilab.cn/sramp/">http://www.cuilab.cn/sramp/
מאגר מידע של רכיבים פעילים ברפואה סינית מסורתית<קישור ל-"http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php">http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php
ENCORI / Starbasehttps://starbase.sysu.edu.cn/
Gene Expression Omnibus (GEO)<קישור ל-"https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/">https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/
ערכה לצביעת המטוקסילין ואאוזין (HE)Servicebio C0105S
צנטריפוגה מהירהLabnet, ארה"בC250-R-230V
כלי לניתוח חדירה חיסונית<קישור ל-"https://cibersort.stanford.edu/">https://cibersort.stanford.edu/
Ligustri Lucidi FructusSichuan Quanyirun Biotechnology Co., Ltd.20240506
מערבל מגנטימפעל המכשירים ג'ינטאן ז'ונגטיאן, ג'יאנגסו (Jintan Zhongtian Instrument Factory, Jiangsu)T8-1
מיקרוסקופOlympusBX53
מיקרוטוםLeica, גרמניהRM 2016
ספקטרופוטומטר לנפחים קטניםHangzhou Aosheng Instrument Co., Ltd.Nano-300
miRNethttps://www.mirnet.ca
MitoCarta 3.0<קישור ל-"https://www.broadinstitute.org/mitocarta">https://www.broadinstitute.org/mitocarta
חבילת R לפירוש מודלים<קישור ל-"https://cran.r-project.org/package=DALEX">https://cran.r-project.org/package=DALEX
פלטפורמה לעגינה מולקולרית<קישור ל-"http://clab.labshare.cn/cb-dock/">http://clab.labshare.cn/cb-dock/
ערכה לביצוע ELISA למיקרואלבומינוריה בעכבריםבדיקה מדויקתEM0632
פס סטריפ לבדיקת מיקרואלבומינוריה בעכבריםGuangzhou Huadu Gaoerbao Biotechnology Co., Ltd.20211203
ערכה לביצוע בדיקת ELISA למדידת קריאטינין בסרום של עכברAbmartAB590A
MSigDB<קישור ל-"https://www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/">https://www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/
מעגל תרמי ל-PCRRocheRoche LightCycler 480
תוכנת R (גרסה 4.2.2) + חבילות R<קישור ל-"https://www.r-project.org / CRAN/Bioconductor">https://www.r-project.org / CRAN/Bioconductor
RCSB PDB<קישור ל-"https://www.rcsb.org/">https://www.rcsb.org
ערכה למיצוי RNABeijing Jumei Biotech Co., Ltd.MF-036-01
RPISeq<קישור ל-"http://pridb.gdcb.iastate.edu/RPISeq/">http://pridb.gdcb.iastate.edu/RPISeq/
ערכה ל-RT-qPCRBeijing Jumei Biotech Co., Ltd.MF949-T
סלידרוסידSichuan Quanyirun Biotechnology Co., Ltd.20211009
ערכה לבדיקת קראטינין בסרוםמכון הביו-הנדסה נאנג'ינג ג'יאנווי (Nanjing Jianwei Bioengineering Institute)C01-2-1
מתקן בעלי מעבדה SPFאוניברסיטת Shanxi לרפואה סינית מסורתית
SRAMPhttp://www.cuilab.cn/sramp/
נא ספק את הטקסט באנגלית שברצונך לתרגם.<קישור ל-"https://cn.string-db.org/">https://cn.string-db.org/
SwissTargetPredictionhttp://www.swisstargetprediction.ch/
TCMSP<קישור ל-"http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php">http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php
תחזי פיגןSichuan Quanyirun Biotechnology Co., Ltd.20210602
אמבט ציפה לרקמותוואוהאן ג'ונג'י (Wuhan Junjie)JK-6

מקורות

  1. Thipsawat S. Early detection of diabetic nephropathy in patient with type 2 diabetes mellitus: a review of the literature. Diabetes Vasc Dis Res. 2021;18(6):14791641211058856.
  2. Kanwar YS, Sun L, Xie P, Liu FY, Chen S. A glimpse of various pathogenetic mechanisms of diabetic nephropathy. Annu Rev Pathol. 2011;6:395-423.
  3. Santulli G, et al. Prediabetes increases the risk of frailty in prefrail older adults with hypertension: beneficial effects of metformin. Hypertension. 2024;81(7):1637-43.
  4. Jin Q, et al. Oxidative stress and inflammation in diabetic nephropathy: role of polyphenols. Front Immunol. 2023;14:1185317.
  5. Alicic RZ, Rooney MT, Tuttle KR. Diabetic kidney disease: challenges, progress, and possibilities. Clin J Am Soc Nephrol. 2017;12(12):2032-45.
  6. Harrington JS, et al. Mitochondria in health, disease, and aging. Physiol Rev. 2023;103(4):2349-422.
  7. Peña FJ, et al. An integrated overview on the regulation of sperm metabolism (glycolysis-Krebs cycle-oxidative phosphorylation). Anim Reprod Sci. 2022;246:106805.
  8. de Mello AH, Costa AB, Engel JDG, Rezin GT. Mitochondrial dysfunction in obesity. Life Sci. 2018;192:26-32.
  9. Shen Y, et al. Notoginsenoside Fc, a novel renoprotective agent, ameliorates glomerular endothelial cells pyroptosis and mitochondrial dysfunction in diabetic nephropathy through regulating HMGCS2 pathway. Phytomedicine. 2024;126:155445.
  10. Zhang PN, et al. Mitochondrial dysfunction and diabetic nephropathy: nontraditional therapeutic opportunities. J Diabetes Res. 2021;2021:1010268.
  11. Zhang JL, et al. Structural characterization and protective effect against renal fibrosis of polysaccharide from Ligustrum lucidum Ait. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115898.
  12. Luan R, et al. The protective effect of ethyl acetate and n-butanol fractions of wine-steamed Ligustri Lucidi Fructus on diabetic nephropathy in rats. Evid Based Complement Alternat Med. 2021;2021:6512242.
  13. Luan R, et al. Pharmacodynamics, pharmacokinetics, and kidney distribution of raw and wine-steamed Ligustri Lucidi Fructus extracts in diabetic nephropathy rats. Molecules. 2023;28(2):791.
  14. Seo HL, et al. Liqustri lucidi Fructus inhibits hepatic injury and functions as an antioxidant by activation of AMP-activated protein kinase in vivo and in vitro. Chem Biol Interact. 2017;262:57-68.
  15. Yan M, et al. Identification of pyroptosis-related genes and potential drugs in diabetic nephropathy. J Transl Med. 2023;21(1):490.
  16. Ritchie ME, et al. limma powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies. Nucleic Acids Res. 2015;43(7):e47.
  17. Gustavsson EK, et al. ggtranscript: an R package for the visualization and interpretation of transcript isoforms using ggplot2. Bioinformatics. 2022;38(15):3844-6.
  18. Gu Z, Eils R, Schlesner M. Complex heatmaps reveal patterns and correlations in multidimensional genomic data. Bioinformatics. 2016;32(18):2847-9.
  19. Shannon P, et al. Cytoscape: a software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 2003;13(11):2498-504.
  20. Wu T, et al. clusterProfiler 4.0: a universal enrichment tool for interpreting omics data. Innovation (Camb). 2021;2(3):100141.
  21. Dong H, et al. Identification through machine learning of potential immune-related gene biomarkers associated with immune cell infiltration in myocardial infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):163.
  22. Pei B, et al. The development of prediction model for cuffed tracheal tube size from the middle finger in pediatrics: a concise and feasible approach. Transl Pediatr. 2023;12(12):2222-31.
  23. Robin X, et al. pROC: an open-source package for R and S+ to analyze and compare ROC curves. BMC Bioinformatics. 2011;12:77.
  24. Robles-Jimenez LE, et al. Worldwide traceability of antibiotic residues from livestock in wastewater and soil: a systematic review. Animals (Basel). 2021;12(1):60.
  25. Wang Y, et al. Bioinformatics analysis combined with clinical sample screening reveals that leptin may be a biomarker of preeclampsia. Front Physiol. 2022;13:1031950.
  26. Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2^−ΔΔCT method. Methods. 2001;25(4):402-8.
  27. Klejborowska G, et al. Synthesis, anticancer activity and molecular docking studies of N-deacetylthiocolchicine and 4-iodo-N-deacetylthiocolchicine derivatives. Bioorg Med Chem. 2021;32:116014.
  28. Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659-61.
  29. An Y, Duan H. The role of m6A RNA methylation in cancer metabolism. Mol Cancer. 2022;21(1):14.
  30. Mazzieri A, Porcellati F, Timio F, Reboldi G. Molecular targets of novel therapeutics for diabetic kidney disease: a new era of nephroprotection. Int J Mol Sci. 2024;25(7):3969.
  31. Breyer MD, Susztak K. The next generation of therapeutics for chronic kidney disease. Nat Rev Drug Discov. 2016;15(8):568-88.
  32. Leoncini G, et al. Blood pressure reduction and RAAS inhibition in diabetic kidney disease: therapeutic potentials and limitations. J Nephrol. 2020;33(5):949-63.
  33. Pofi R, et al. Diabetic nephropathy: focus on current and future therapeutic strategies. Curr Drug Metab. 2016;17(5):497-502.
  34. Arellano Buendía AS, et al. Immunomodulatory effects of the nutraceutical garlic derivative allicin in the progression of diabetic nephropathy. Int J Mol Sci. 2018;19(10):3107.
  35. Zhang X, Agborbesong E, Li X. The role of mitochondria in acute kidney injury and chronic kidney disease and its therapeutic potential. Int J Mol Sci. 2021;22(20):11253.
  36. Liu Y, et al. DsbA-L interacting with catalase in peroxisome improves tubular oxidative damage in diabetic nephropathy. Redox Biol. 2023;66:102855.
  37. Zhong Y, et al. Jujuboside A ameliorates high fat diet and streptozotocin induced diabetic nephropathy via suppressing oxidative stress, apoptosis, and enhancing autophagy. Food Chem Toxicol. 2022;159:112697.
  38. Zhong Y, et al. Dioscin relieves diabetic nephropathy via suppressing oxidative stress and apoptosis, and improving mitochondrial quality and quantity control. Food Funct. 2022;13(6):3660-73.
  39. Issac PK, et al. Protective effect of morin by targeting mitochondrial reactive oxygen species induced by hydrogen peroxide demonstrated at a molecular level in MDCK epithelial cells. Mol Biol Rep. 2022;49(6):4269-79.
  40. Abo El-Asrar M, Ismail EAR, Elnhrawy AM, Thabet RA. Fatty acid binding protein 1 (FABP1) and fatty acid binding protein 2 (FABP2) as a link between diabetic nephropathy and subclinical atherosclerosis in children and adolescents with type 1 diabetes. J Diabetes Complications. 2023;37(3):108414.
  41. Gholaminejad A, Fathalipour M, Roointan A. Comprehensive analysis of diabetic nephropathy expression profile based on weighted gene co-expression network analysis algorithm. BMC Nephrol. 2021;22(1):245.
  42. Tanaka M, et al. Urinary fatty acid-binding protein 4 is a promising biomarker for glomerular damage in patients with diabetes mellitus. J Diabetes Investig. 2025;16(4):670-9.
  43. Liu Y, et al. Gastric cancer adapts high lipid microenvironment via suppressing PPARG-FABP1 axis after arriving in the lymph node. Redox Biol. 2025;85:103759.
  44. Borús DL, et al. Fatty acid binding protein 1 (FABP1) depletion promotes an oxidative metabolic shift in Caco-2 colorectal cancer cells. Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 2025;1870(7):159661.
  45. Chu Y, et al. Glutathione peroxidase-1 overexpression reduces oxidative stress, and improves pathology and proteome remodeling in the kidneys of old mice. Aging Cell. 2020;19(6):e13154.
  46. Zhang F, et al. Mesenchymal stem cells alleviate rat diabetic nephropathy by suppressing CD103+ DCs-mediated CD8+ T cell responses. J Cell Mol Med. 2020;24(10):5817-31.
  47. Cao Q, et al. Renal F4/80+ CD11c+ mononuclear phagocytes display phenotypic and functional characteristics of macrophages in health and in adriamycin nephropathy. J Am Soc Nephrol. 2015;26(2):349-63.
  48. Zhou W, et al. The landscape of immune cell infiltration in the glomerulus of diabetic nephropathy: evidence based on bioinformatics. BMC Nephrol. 2022;23(1):303.
  49. Bloch K, Shichman E, Vorobeychik M, Bloch D, Vardi P. Catalase expression in pancreatic alpha cells of diabetic and non-diabetic mice. Histochem Cell Biol. 2007;127(2):227-32.
  50. Zhao Y, et al. Taxifolin attenuates diabetic nephropathy in streptozotocin-induced diabetic rats. Am J Transl Res. 2018;10(4):1205-10.
  51. Ding S, Wang W, Song X, Ma H. Based on network pharmacology and molecular docking to explore the underlying mechanism of Huangqi Gegen Decoction for treating diabetic nephropathy. Evid Based Complement Alternat Med. 2021;2021:9928282.
  52. Guo S, et al. Correction: Eriodictyol: a review of its pharmacological activities and molecular mechanisms related to ischemic stroke. Food Funct. 2023;14(10):4949.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

שיבוש תפקוד מיטוכונדריאליביטוי דיפרנציאלימודלים של למידת מכונההעשרה תפקודיתחדירה חיסוניתעגינה מולקולריתתפקוד ריבוזומלי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.