טכניקה לאסוף למדוד מתווכים פצע כירורגי ביוכימיים בנקודות זמן מסוימות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
איסוף מדידת מגשרים nociceptive ועל פצעים דלקתיים כירורגי
במאמר זה
Retraction Notice
This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice
סיכום
תקציר
מטרות המחקר היו לבחון את הכדאיות של איסוף ומדידת מתווכים ביוכימיים דלקתיים nociceptive באתר כירורגית, כדי להעריך את הקשר בין הפצע רמות, ולקבוע כל קשר בין שחרור המתווך, כאב צריכת כאבים שלאחר ניתוח קיסרי משלוח. עשרים נשים בריאות העובר בניתוח קיסרי אלקטיבי בהרדמה השדרה נרשמו. Exudate הפצע מתווכים בסרום, עשרות הכאב ואת צריכת משככי כאבים נמדדו 1, 6, 24, ו - 48 שעות לאחר ניתוח קיסרי. ב exudate הפצע, 19 מתוך 20 מתווכים התגלו אמין כולל IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL -17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 ו-MIP 1β, גורם הגדילה העצבי (NGF), פרוסטגלנדין E2 (PG-E2) ואת חומר פ פצע PG-E2 ו ציטוקינים שונים לשיא מוקדם ואילו NGF הראו שחרור מושהה יותר. לא היו מתאמים בין ריכוז לעומת פרופיל זמן של הפצע ציטוקינים בדם. מחקר זה מדגים את הכדאיות של איסוף ומדידת מתווכים nociceptive ו דלקתיים פצעי הניתוח בנקודות זמן מסוימות. חוסר מתאם משמעותי בין רמות הפצע מדגישה את החשיבות של קביעת אתר ספציפי לשחרר אם פתולוגיות מקומי הם להיחקר.
פרוטוקול
Nociceptive ו דלקתי מתווך ביוכימיים אוסף
- ב-Q ® PainBuster ® מערכת הסיוע כאב מוכנס לתוך השכבה התת עורית על ידי צוות כירורגי קצר לפני סגירת הפצע. המערכת מספקת ברציפות מלוחים נורמלי (או הרדמה מקומית) תת עורית לתוך הפצע בשיעור של 2 מ"ל / שעה
- שסתום משולשת משתלב במערכת זו על מנת לאפשר שאיפה של exudate פצע בנקודות הזמן שצוין.
- בנקודות הזמן שצוין על ידי פרוטוקול (למשל, 1, 6, 24, ו - 48 שעות לאחר הלידה בניתוח קיסרי), 1 מ"ל של exudate פצע היא נסוגה לתוך כוס פוליאתילן המכילה 30 μl של מעכבי proteinase.
- במרווחים באותו זמן 10 מ"ל של דם נאסף לתוך צינור דם ירוק העליון אוסף המכיל הפרין ליתיום. 300 μl של מעכבי proteinase הוא הוסיף לאחר מכן את דגימות הדם.
- תוך שעה 1 של האוסף, דוגמאות לשים קרח centrifuged בסל"ד 3000 עבור 10 דקות.
- הסרום ו supranate הפצע מסירים ומניחים צינור microcentrifuge רגיל המאוחסן ב -20 ° C.
Assay ניתוח
- לאחר כל הדגימות נאספות, הם הפשירו ולנתח באותו זמן.
- ציטוקינים נמדדים מכן באמצעות A17-זמנית צלחת חרוז immunoassay המערך. חיסונית assay הטכנולוגיה מאפשרת Multiplex assaying עד 100 analytes בגוף, כמו דגימות נוזל בנפח קטן כמו μl 50 ו להניב תוצאות דומות לאלה שהושגו עם ELISA. צלחת זו הוא מסוגל למדוד interleukin 1ß (IL-1ß), אינטרלוקין 2 (IL-2), אינטרלוקין 4 (IL-4), אינטרלוקין 5 (IL-5), אינטרלוקין 6 (IL-6), אינטרלוקין 7 (IL -7), interleukin 8 (IL-8), אינטרלוקין (IL-10), אינטרלוקין 12 (IL-12), אינטרלוקין 13 (IL-13), אינטרלוקין 17 (IL-17), גידול גורם נמק α (TNFα) , אינטרפרון α (INFα), גורם המושבה granulocyte מגרה (G-CSF), granulocyte-macrophage המושבה גורם מגרה (GM-CSF), חלבון chemoattractant מונוציטים 1 (MCP-1) וחלבון macrophage דלקתיות 1 (MIP-1β).
- גורם הגדילה של העצב נמדדת עם נוגדן NGF DY256 ידי הוספתו צלחת 17-Plex עם סיוע של ערכת Bio-Plex צימוד אמין.
- כל מדידה נעשית כפילויות בהתאם למפרט היצרן. עקומות סטנדרט אנליטי עבור כל מופקות באמצעות analytes התייחסות שסופקו על ידי היצרנים בריכוזים של 0.20, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml פלוס (מלח רגיל בלבד) אפס סטנדרטי. עקומות סטנדרט כלולים לרוץ בכל ריכוזי המדגם חושבו עם התוכנה Bio-Plex מנהל.
- פרוסטגלנדין E2 ו-P חומר נמדדים באמצעות רגישות מאוד ערכות ELISA כל assay מתבצע בשני עותקים בהתאם למפרט היצרן.
איור 1: רמות Exudate ו בסרום של הציטוקינים הפרו ואנטי דלקתיים שונים (interleukin 1ß (IL-1ß), אינטרלוקין 2 (IL-2), אינטרלוקין 4 (IL-4), אינטרלוקין 5 (IL-5), interleukin 6 (IL-6), אינטרלויקין 7 (IL-7), interleukin 8 (IL-8), אינטרלוקין (IL-10), אינטרלוקין 12 (IL-12), אינטרלוקין 13 (IL-13), אינטרלוקין 17 (IL -17), גידול גורם נמק α (TNF-α), אינטרפרון γ (INFγ), granulocyte המושבה גורם מגרה (G-CSF), granulocyte-macrophage גורם מגרה המושבה (GM-CSF), חלבון chemoattractant מונוציטים 1 (MCP-1 ) וחלבון macrophage דלקתיות 1 (MIP-1ß), גורם הגדילה העצבי (NGF), פרוסטגלנדין E2 (PG-E2) ואת חומר P (SP) רמות (pg / mL) נמדד בתחילת המחקר, 6 ו - 24 שעות שלאחר הלידה בניתוח קיסרי .
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ב-Q ® PainBuster ® System כאב הסיוע צריך להיות מוכנס דרך החתך כולו שכבה תת עורית ממש לפני סגירת הפצע. זה מאפשר שאיפה דרך שסתום תלת אופן על מרווחי זמן מוגדר. ב-Q ® מספקת מערכת ברציפות מלוחים נורמלי מתחת לעור לתוך הפצע בשיעור של 2 מ"ל / שעה זה מונע קרישת הקטטר ומשפר את האמינות של המערכת לייצר דגימות exudate. אם השאיפה של exudate קשה (כ 5% מהמקרים), שקול לשנות את עמדת נושא (למשל, יושב המטופל כלפי מעלה או שוכב להם שטוח), דוחף בעדינות מעל הפצע, בעזרת סומק 0.5-1ml תמיסת מלח רגיל או למשוך את הקטטר 1-2 ס...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.
תודות
עבודתו של ד"ר קרבאליו נתמכת על ידי בניית קריירה הבינתחומי מענק מחקר בריאות נשים מלשכת לחקר בריאות האישה ואת המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם של המכונים הלאומיים לבריאות (5K12 HD043452). Angst ד"ר קיבלו אספקה (ב-Q ® PainBuster ® מנותחות מערכת הסיוע כאב) ומימון עבור ביצוע מבחני ביוכימיים של תזרים-I (בלייק פורסט, קליפורניה).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מערכת On-Q® PainBuster® להקלה על כאבים לאחר ניתוח | I-Flow, Lake Forest, CA | ||
| מעכב פרוטאינאז מלא | Roche Group | ||
| פלטת Bio-PlexTM לבדיקת חיסון חרוזיים ב-17-multiplex | Bio-Rad | ||
| ערכה לצימוד אמינים Bio-Plex | Bio-Rad | ||
| הנוגדן NGF DY256 | R&D Systems | ||
| ערכות ELISA ל-Prostaglandin E2 ו-substance P | Assay Designs |
מקורות
- Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
- Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
- Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
- Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.