מקור: מעבדות של מרגרט וורקמן וקימברלי פריי - אוניברסיטת דפול
חנקן וזרחן הם חומרים מזינים צמחיים חיוניים שנמצאים במערכות אקולוגיות מימיות ושניהם מנוטרי…
1. למדוד חנקן במדגם
2. למדוד זרחן במדגם
חנקן וזרחן הם חומרים מזינים חיוניים לצמחים הנמצאים במערכות אקולוגיות ימיות, אולם בכמויות עודפות הם עלולים לגרום לבעיות משמעותיות באיכות המים. חנקן וזרחן במים נמצאים בדרך כלל בצורות של חנקות ופוספט, בהתאמה. שני חומרי המזון מומסים במים ונספגים בקלות על ידי פוטוסינתזה כגון אצות.
חנקות ופוספטים נכנסים למערכות המים דרך נגר מים מתוקים ממתקני טיהור שפכים, מדשאות מדושנות ואדמות חקלאיות, מערכות ספיגה פגומות והזרמת פסולת תעשייתית. בכמויות עודפות, שני חומרי המזון יכולים לגרום לעלייה בצמיחת צמחי מים ובפריחת אצות, הנקראת אטרופיקציה. פריחת האצות הללו חיה על פני המים, על מנת לגשת בקלות לחמצן ולאור השמש.
כתוצאה מכך, אטרופיקציה מונעת ממפלס מים נמוך יותר גישה לאור השמש ולחמצן באוויר. כאשר האצות מתות, הן שוקעות במפלס המים התחתון ומתפרקות, צורכות חמצן במים העמוקים יותר וגורמות להיפוקסיה, או רמות נמוכות של חמצן מומס. רעבים לחמצן, ומנותקים מאספקה מחודשת, המים העמוקים הופכים לאזור מת. כתוצאה מכך, דגים ואורגניזמים אחרים מתים במספרים עצומים. אזורים מתים נפוצים באוקיינוסים ובאגמים בעולם, בעיקר באזורים עירוניים מאוכלסים מאוד.
סרטון זה יציג את המתודולוגיה למדידת ריכוזי חנקות ופוספט במים עיליים, וידגים את המדידות במעבדה.
חנקן במים מדווח במונחים של "חנקן כחנקן". הביטוי "חנקה-כחנקן" מתייחס לכמות החנקן בצורת חנקה. לכן, ניתן להמיר את ריכוז החנקן כחנקן לריכוז חנקות באמצעות היחסים בין המשקלים המולקולריים של חנקן וחנקה.
ריכוז החנקות נמדד בשיטת הפחתת קדמיום. מתכת הקדמיום מפחיתה את החנקות לניטריטים, ואז יוני הניטריט מגיבים עם חומצה סולפנילית ליצירת מלח דיאזוניום ביניים. לאחר מכן מלח הדיאזוניום מתחבר עם חומצה ג'נטיזית, ויוצר תרכובת בצבע ענבר. ככל שצבע הענבר כהה יותר, כך ריכוז החנקות בדגימה גבוה יותר.
ריכוז הזרחן בדגימות מים מדווח באופן דומה, מבחינת כמות הזרחן בצורת פוספט. ניתן להשלים בקלות את ההמרה בין ריכוז הפוספט לריכוז הפוספט כזרחן באמצעות משקל מולקולרי. פוספטים נמצאים במים בקונפורמציות רבות ושונות. תחילה יש להמיר את כל הפוספטים לאורתופוספטים באמצעות הידרוליזה על ידי חימום דגימות עם חומצה ואשלגן פרסולפט.
שיטת החומצה האסקורבית/מוליבדט משמשת לחישוב ריכוז האורתופוספט. אורתופוספטים מגיבים עם נתרן מוליבדט בתנאים חומציים כדי לייצר קומפלקס פוספט/מוליבדט. לאחר מכן משתמשים בחומצה אסקורבית להפחתת הקומפלקס, ומייצרים מוצר בצבע כחול. כדי לכמת את עוצמת הצבע המיוצרת על ידי המגיב בשני הניסויים, נעשה שימוש בקולורימטר כדי למדוד את כמות האור שנספגת על ידי המינים הצבעוניים. לאחר מכן הספיגה מומרת לריכוז.
הניסוי הבא ידגים את ניתוח ריכוזי החנקות והפוספט בדגימות מים באמצעות חבילות ריאגנטים מעורבבות מראש לביצוע טכניקה קולורימטרית זו.
כדי להתחיל במדידת החנקן, מצא את התוכנית לחנקות במד הצבעים, והזן את מספר התוכנית המתאים או הגדר את מד הצבע למדידה של 420 ננומטר. מדוד 10 מ"ל מדגימת המים, צינור לתוך צינור דגימה וסמן את הצינור. הכן צינור זהה שני, ותייג אותו כריק.
הוסף את התוכן של חבילות ריאגנט אחת מעורבבות מראש בשיטת הפחתת קדמיום לצינור הדגימה. מכסים את שתי שפופרות הדגימה. התחל לתזמן את תקופת התגובה של דקה אחת עבור המגיב. נענע את הצינור במרץ ביד עד להשלמת זמן התגובה.
הנח את הצינור, והתחל תקופת תגובה שנייה של 5 דקות כדי לאפשר לקדמיום להפחית חנקן. לאחר סיום תקופת התגובה, נגב את שני הצינורות במגבת נייר נטולת מוך.
הנח את צינור הדגימה ללא ריאגנט, המסומן כריק, במד הצבע. ודא שאין תוויות שמפריעות לנתיב האור. כסה היטב את התא במכסה המכשיר כדי להבטיח שכל אור הסביבה חסום מתא הדגימה.
כייל את מד הצבע עם הריק לקריאה של 0.0 מ"ג/ליטר חנקתי כחנקן. הסר את הצינור הריק והנח את צינור הדגימה במחזיק הדגימה, והחזר את מכסה המכשיר. מדוד את ספיגת הדגימה, והצג את ריכוז החנקות כחנקן בדגימה.
מדידת הזרחן בדגימת מים דומה למדידת חנקן. ראשית, מדוד 5 מ"ל מדגימת המים והכניס אותה לצינור דגימה. הוסף את התוכן של כרית אבקת אשלגן פרסולפט מעורבבת מראש לפוספונאט לצינור הדגימה.
יש לסגור את השפופרת בחוזקה ולנער כדי להמיס את האבקה. סמן את החלק העליון של המכסה. מניחים את הצינור בכור במכסה מנוע, ומחממים במשך 30 דקות בטמפרטורה של 150 מעלות צלזיוס. לאחר החימום, הוציאו את הצינור מהכור, הניחו אותו במתלה צינורות והניחו לו להתקרר לטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, התאם את ה-pH על ידי הוספת 2 מ"ל של נתרן הידרוקסיד 1.54 M לצינור הדגימה. מכסים את הצינור ומערבבים. במד הצבעים, אתר את מספר התוכנית עבור פוספט והזן את מספר התוכנית, או הגדר את הספקטרופוטומטר למדידת ספיגה ב-880 ננומטר.
נקה את צינור הדגימה עם מגבון נטול מוך, וטען את המבחנה לתוך מד הצבעים. ודא שאף תוויות לא מפריעות לנתיב האור במכשיר. הנח את המכסה על המכשיר, וכיול באמצעות הדגימה הלא מגיבה כריק.
הסר את הצינור מהמכשיר, והוסף למבחנה את התוכן של חבילת ריאגנטים בשיטת חומצה אסקורבית מעורבת מראש. מכסים את הצינור בחוזקה ומנערים את הצינור לערבוב. הנח את הצינור במתלה והתחל תקופת תגובה של 2 דקות באמצעות טיימר.
לאחר סיום תקופת התגובה, צבע התמיסה צריך להיות כחול. נקו את החלק החיצוני של הצינור עם מגבת נייר נטולת מוך. הנח את המבחנה לתוך המכשיר כשכל התוויות מחוץ לנתיב האור.
סגור את מכסה תא הדוגמה ולחץ על כפתור הקריאה. התוצאות יוצגו במ"ג/ליטר. אם משתמשים בספקטרופוטומטר, מדוד את ספיגת הדגימה ב-880 ננומטר.
ריכוזי החנקות והפוספט בענף נהר מטרופוליני הושוו ב-5 אתרי דגימה שונים בניסוי זה.
מי נהר נקיים מכילים בדרך כלל 0 עד 1 מ"ג/ליטר של חנקן-חנקן ו-0 עד 0.03 מ"ג/ליטר של פוספט-זרחן. ריכוזים בין 3 ל-5 מ"ג/ליטר חנקן-חנקן ו-0.03 עד 0.1 מ"ג/ליטר פוספט-זרחן נחשבים גבוהים, ומעל טווחים אלה נחשבים אוטרופיים.
רמות החנקות והפוספט היו גבוהות ב-3 מתוך 5 אתרי הדגימה. באופן דומה, ריכוזי החנקות והפוספט הממוצעים הושוו במעלה הזרם ובמורד הזרם של מתקן טיהור מים. המדידה במעלה הזרם מייצגת מים לא מטופלים, ואילו המדידה במורד הזרם מייצגת נגר ממתקן הטיהור.
המדידה במורד הזרם הייתה נמוכה בפוספטים עקב הסרת חומר אורגני במהלך תהליך הטיפול. עם זאת, ריכוזי החנקות הממוצעים היו גבוהים יותר במורד הזרם, מה שמצביע על תשומות חנקות אפשריות ליד אזור ההזרמה, אולי מדשן דשא.
הבנת תכולת החומרים המזינים של נגר המים, והשפעתו הנובעת מכך על חיי הצמחים הימיים, חשובה ביותר לשימור המערכות האקולוגיות הטבעיות שלנו.
בדוגמה הבאה, מיקרואורגניזמים ימיים נחקרו בסביבות מרוחקות כמו שוניות. תוצאות אלה יכולות לעזור להבהיר אוכלוסיות מיקרוביאליות משתנות עקב ריכוזי חנקות ופריחת האצות כתוצאה מכך.
דגימות מים נאספו במיכלים הסגורים לסביבה החיצונית כדי למנוע זיהום. מיקרובים נאספו על מסנן של 0.22 מטר. המים המסוננים נותחו כדי לבחון זיהומים אנאורגניים. ניתוח מטאגנומי מצא כי העברת החומר הגנטי המיקרוביאלי הייתה בקורלציה חיובית עם ריכוז החנקה.
על מנת להילחם באטרופיקציה, חשוב להבין את נגר הקרקע ואת גורלם והובלתם של מזהמים באדמה. בדוגמה הבאה נערכה הדמיה של גשמים, ונחקר גורלם של מזהמים באדמה. קופסאות האדמה היו ארוזות באדמה המכילה מזהמים מעניינים, במקרה זה אוריאה, צורה נפוצה של דשן חנקן. ניתן לחקור מולקולות המכילות זרחן באותו הליך. הגשמים דומו בתנאים שונים, והנגר נאסף ונותח.
בדומה לדוגמא האחרונה, ניתן לחקור נגר גם בחוץ בסביבות טבעיות. כאן הוקם מתקן מחקר נגר באזור עירוני. נבנה קיר תמך כדי למנוע זיהום נגר לאזורים אחרים, ולאפשר איסוף מים מבוקר. שטחי החלקה הופרדו גם הם, כדי למנוע תנועת מים רוחבית. מחקרי נגר מים נערכו באמצעות מערכות השקיה. נגר מים נאסף והושלם ניתוח כימי לקביעת מזהמים במים.
זה עתה צפיתם במבוא של JoVE לניתוח חומרי מזון במים עיליים. כעת עליכם להבין את האתגרים הקשורים לנגר מים ואטרופיקציה, וכיצד למדוד את תכולת החומרים המזינים בדגימות מים. תודה שצפית!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: What causes eutrophication in aquatic ecosystems?
Eutrophication occurs when excess nitrogen and phosphorus nutrients stimulate rapid algae growth. These algae blooms live at the water surface to access oxygen and sunlight, blocking light from reaching lower water levels. When algae die and decompose in deeper water, they consume dissolved oxygen, creating hypoxia and dead zones where fish and organisms cannot survive.
Q2: How do nitrates and phosphates enter water systems?
Nitrates and phosphates enter aquatic ecosystems through multiple pathways including wastewater treatment plant discharge, runoff from fertilized lawns and agricultural lands, faulty septic systems, animal manure, and industrial waste. These dissolved nutrients are readily absorbed by photosynthesizers like algae, making them major contributors to water quality problems in populated urban areas.
Q3: What is the cadmium reduction method used for in water testing?
The cadmium reduction method measures nitrate concentration in water samples. Cadmium metal reduces nitrates to nitrites, which then react with sulfanilic acid to form a diazonium salt. This salt couples with gentisic acid to produce an amber-colored compound. The color intensity correlates with nitrate concentration and is quantified using a colorimeter.
Q4: Why must phosphates be converted to orthophosphates before analysis?
Phosphates exist in water in many different conformations, so all forms must be standardized for accurate measurement. Samples are heated with acid and potassium persulfate to hydrolyze all phosphate forms into orthophosphates. This conversion ensures consistent analysis using the ascorbic acid/molybdate method, which specifically reacts with orthophosphates to produce a measurable blue-colored product.
Q5: What do clean river water nitrate and phosphate levels indicate?
Clean river water typically contains 0 to 1 mg/L of nitrate-nitrogen and 0 to 0.03 mg/L of phosphate-phosphorus. Concentrations between 3 to 5 mg/L nitrate-nitrogen and 0.03 to 0.1 mg/L phosphate-phosphorus are considered high. Levels above these ranges indicate eutrophic conditions where excess nutrients threaten aquatic ecosystem health and dissolved oxygen in surface water.
Q6: How does the ascorbic acid/molybdate method quantify phosphate concentration?
Orthophosphates react with sodium molybdate in acidic conditions to form a phosphate/molybdate complex. Ascorbic acid then reduces this complex, producing a blue-colored product. A colorimeter measures the light absorbed by the blue species, and this absorbance value is converted to phosphate concentration, providing quantitative analysis of phosphorus in water samples.
Q7: What does nitrate-as-nitrogen reporting mean in water quality analysis?
Nitrogen in water is reported as nitrate-as-nitrogen, which refers specifically to the amount of nitrogen present in nitrate form rather than total nitrate mass. This standardized reporting allows conversion between nitrate-as-nitrogen and total nitrate concentration using molecular weight ratios, enabling consistent comparison of nitrogen levels across different water samples and monitoring programs.