הפקת סוניקציה של סמנים ביולוגיים שומנים ממ משקעים

1. איסוף החומרים הדרושים

1. דגימות (עלים, לכלוך, פטריות, קליפה, רקמה), בדרך כלל קפוא, מיובש בהקפאה, כתוש, הומוגני לפני החילוץ, מופק בקבוצות כדי למקסם את היעילות. לחלץ שלוש דגימות.
2. בהתאם לגודל המדגם, בקבוקונים עם נפחים הנעים בין 4-60 מ"ל עשויים לשמש. לניסוי זה, בקבוקוני זכוכית בורוסיליקט (40 מ"ל) וכובעים בטוחים ממס משמשים. בקבוקונים, פיפטות זכוכית בורוסיליקט, ופחיות שקילה צריך להיות בעירה ב 550 °C (6 שעות לפני להבטיח הסרה של מזהמים אורגניים אפשריים.
3. דיכלורומטן ומתנול נפוצים ברוב המעבדות הגיאוכימיה האורגנית. הם משמשים בנפרד לשטוף כלי מעבדה וכלי זכוכית לפני השימוש. תערובת של דיכלורומתאן (DCM) למתנול (MeOH; 9:1) משמשת במעבדות רבות לחילוץ יעיל של סמנים ביולוגיים עם מגוון רחב של קוטביות. ממיסים צריכים להיות נקיים ממזהמים אורגניים.
4. יש להשתמש באמבט מים sonication בטמפרטורת החדר. מגוון של גדלי sonicator ו sonication עם או בלי חום זמינים מקמעונאי ציוד מדעי גדול.
5. מדפי קסינה, שאמורים להיות עמידים למים, יוצבו באמבט sonication.
6. ממס אושר כימי מכסה המנוע.

2. הכנת מדגם

1. מניחים פח שקילה בעירה על סולם המעבדה ואז טרה.
2. לשטוף את מרית המעבדה עם ממס, ולאחר מכן להשתמש בו כדי להעביר מסה מתאימה של מדגם לתוך פח שקילה, ולתעד את המסה.
   1. המסה של המדגם משתנה בהתאם לתוכן החומר האורגני שלה. חומר אורגני יחסית חומר רזה (בוץ ימי) עשוי לדרוש מספר גרם, בעוד חומר אורגני עשיר (רקמת עלה) עשוי לדרוש הרבה פחות.
3. מעבירים את כל החומר בפח השקילה לחקירה בעירה, שקולה מראש ומסומנת. מכסים את הנקניקיון, ואז משליכים את פח השקילה.
4. בצע שלבים 2.1 - 2.3 עבור כל דגימה שיש לחלץ.

3. חילוץ

1. באמצעות פיפטה ונורה טרום בעירה, להעביר ~ 20 מ"ל של תערובת DCM:MeOH (9:1) לתוך כל מחילה (ביקואל צריך להיות בערך חצי מלא). לסכם בקבוקונים לפני המעבר לדגימה הבאה, כך הממסים נדיפים לא להתאדות.
   1. התנודתיות של DCM ו- MeOH שונות. אידוי של ממס מיצוי עקב בקבוקוני מדגם לא מכופתר יש את היכולת לשנות את הקוטביות שלה, ובכך החילוץ.
2. מניחים את בקבוקוני הדגימה לתוך מתלה בקבוקונים עמיד למים.
3. בדוק כי רמת המים באמבט sonication הוא רק עמוק מספיק כדי להטביע את בקבוקוני המדגם עד החלק העליון של ממס החילוץ. יותר מדי מים עלולים לגרום לבקבוקונים לצוף; מעט מדי מים עשויים למנוע מהדגימות להיות נסערות כראוי.
4. מניחים את מתלה הוויאלי עם הדגימות בתוכו ישירות לתוך אמבט sonication.
5. סוניקאט במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.
6. הסר ארון תקשורת לדוגמה מ sonicator. אם לחלץ משקעים, תן לו להגדיר במשך 30 דקות כדי לאפשר יישוב להתרחש. אם לחלץ קבוצה נוספת של דגימות, לשים sonicator בשלב זה.
7. הסר את תערובת DCM:MeOH מנגינה החילוץ, באמצעות פיפטה ונורה בעירה מראש, ולהכניס עוד מראש שקל, מראש בעירה, ומסומן 40 מ"ל בוויאל.
8. חזור על 3.1 - 3.7 פי 3 עבור כל הדגימות.
9. אפשר דגימות שחולצו להתייבש בבקבוקונים שלהם, כובעים כבויים, ובמכסה המנוע, מכוסה באופן רופף עם חתיכת נייר כסף. סמן כ'שאריות שחולצו' ואחסן.
10. סמן את התמציות המשולבות עבור כל דגימה כ-TLE.