הפקת סוקסילט של סמנים ביולוגיים שומנים ממ משקעים

1. התקנה והכנת חומרים

1. לאסוף מדגם של משקעים ימיים קפואים, מיובשים בהקפאה, כתוש, הומוגני. מדגם כזה מכיל רבים מהתרכובות הדרושות לתקנים.
   1. סטנדרטים עשויים לעתים קרובות משקעים שנותרו לאחר משלחת קורדינג או ניתוח. לדוגמה, בניסוי זה, משקעים שהתקבלו מ'תיקון הבוץ 'הממוקם דרומית לקייפ קוד מופק. משקעים אלה נלקחו כחלק ממשלחת קורינג אך לא ישמשו לתענות על שאלות מדעיות. לכן אנחנו יכולים להשתמש בו כדי ליצור סטנדרט.
   2. מניחים נתח של ~ 100 גרם של המפיח לתוך המקפיא לילה, כך שהוא קופא דרך.
   3. לאחר המסד קפוא לחלוטין, להפעיל את מייבש ההקפאה (זמין מקמעונאי ציוד מדעי רבים כמו פישר) ולחכות עד המעיבוי מגיע אליו setpoint (לעתים קרובות ~ -30 °C ).
   4. טען את דגימת המ משקעים לתוך מייבש ההקפאה ולסגור את הטיהור כדי להתחיל למשוך ואקום על המדגם.
   5. בהתאם לכמות המים במשקעים, ובגודל המדגם, ייתכן שיחלכו מספר ימים עד שהדגימה תתייבש.
   6. לאחר הדגימה יבשה, לכבות את מייבש ההקפאה, לפרוק אותו, ולהסיר את המדגם.
   7. מניחים את המדגם במכתש שטוף ממס וטוחנים לאבקה באמצעות עלה. עושים זאת לכל הדגימה ומאחסנים בצנצנת זכוכית במקפיא עד שהם מוכנים לחילוץ.
2. בהתאם לגודל המדגם, השתמש בבקבוקונים עם נפחים הנעים בין 4-60 מ"ל. לניסוי זה, השתמש בקבוקוני זכוכית borosilicate (40 מ"ל) וכובעים בטוחים ממס. יש דליקו את הבקבוקונים, את פיפטות הזכוכית הבורוסיליקט ואת פחיות השקילה ב-550 מעלות צלזיוס למשך 6 שעות לפני שיבטיחו הסרה של מזהמים אורגניים אפשריים.
3. להשיג dichloromethane ומתנול (שניהם נפוצים ברוב המעבדות גיאוכימיה אורגנית), ולאחר מכן להשתמש בהם בנפרד לשטוף כלי מעבדה וכלי זכוכית לפני השימוש. תערובת של דיכלורומתאן (DCM) למתנול (MeOH; 9:1) משמשת במעבדות רבות לחילוץ יעיל של סמנים ביולוגיים עם מגוון רחב של קוטביות. ממיסים צריכים להיות נקיים ממזהמים אורגניים.
4. לרכוש מנגנון soxhlet לשימוש בניסוי זה (אלה ניתן לרכוש פישר מדעי או קמעונאי מדע אחר), ולאחר מכן לשטוף וללקחת אותו ב 550 °C (6 שעות לפני השימוש.
5. להשיג אצבעוני סיבי זכוכית (ניתן לרכוש מ Whatman) ודליק אותם ב 550 °C (6 שעות לפני השימוש.

2. הכנת מדגם

1. מניחים פח שקילה בעירה על סולם המעבדה ואז טרה.
2. לשטוף את מרית המעבדה עם ממס, ולאחר מכן להשתמש בו כדי להעביר מסה מתאימה של מדגם לתוך פח שקילה, ולתעד את המסה.
   1. המסה של המדגם משתנה בהתאם לתוכן החומר האורגני שלה. חומר אורגני יחסית חומר רזה (בוץ ימי) עשוי לדרוש מספר גרם, בעוד חומר אורגני עשיר (רקמת עלה) עשוי לדרוש הרבה פחות.
3. מעבירים את כל החומר בפח השקילה לאצבעון סיבי זכוכית בעירה.

3. חילוץ

1. מעבירים ~400 מ"ל של תערובת DCM:MeOH (9:1) לתוך הבקבוקון העגול (בקבוקון צריך להיות יותר מחצי מלא) ולשים במעטפת חימום. יש להוסיף מספר שבבי רתיחה שטופים בממס (5-10).
2. מניחים את אצבעון הדגימה, פתוח בסופו של דבר, לתוך החלק המרכזי של מנגנון Soxhlet.
3. מניחים את הקישוט המרכזי על גבי הבקבוקון העגול ומאובטחים עם מהדק כלי זכוכית.
4. התקן את המעיבות על גבי הקישוט המרכזי של Soxhlet ומאובטח עם מהדק כלי זכוכית.
5. חברו את אחד מקווי המים הקרים מהמעגן לקו המים הקרים בשכונה באמצעות מהדק צינור. לנתב את השני לתוך הניקוז.
6. הפעל את המים כדי להבטיח זרימת דם נכונה וניקוז.
7. הפעל את גלימת החימום ולהתאים את הטמפרטורה עד הממס בבקבוקון העגול רותח קלות.
8. לפקח על החילוץ כמה פעמים במהלך השעה הבאה.
   1. בדוק כדי לוודא את הטמפרטורה מוגדרת כראוי ברתיחה נמוכה, הממס מתמצה במעבות נוטף לתוך החלק המרכזי, החלק המרכזי מתמלא ומתרוקן כראוי, והמים מתנקזים כראוי לתוך ניקוז מכסה המנוע.
9. תפקח על החילוץ ב-36 השעות הבאות.
   1. ודא הטמפרטורה מוגדרת כראוי ברתיחה נמוכה, הממס מתמצה במעובה נוטף לתוך החלק המרכזי, החלק המרכזי מתמלא ומתרוקן כראוי, המים מתנקזים כראוי לתוך ניקוז מכסה המנוע, ואת רמת הממס בבקבוקון העגול הוא עדיין כחצי מלא.
10. לאחר 36 שעות, לעצור את החילוץ על ידי כיבוי גלימת החימום.
11. תייג את הבקבוקון "TLE".