הפקת סמנים ביולוגיים משקעים - מיצוי ממס מואץ

1. איסוף החומרים הדרושים

1. לחלץ דגימות. דגימות (במקרה זה, משקעים) קפואים, מיובשים בהקפאה, מרוסקים והומוגניים לפני החילוץ, ומופקים בקבוצות כדי למקסם את היעילות.
2. בהתאם לגודל המדגם, השתמש בבקבוקוני אוסף עם נפחים של 40 או 60 מ"ל. לניסוי זה, בקבוקוני זכוכית בורוסיליקט (40 מ"ל) וכובעים בטוחים ממס משמשים. בקבוקוני Combust, פיפטות זכוכית בורוסיליקט, ופחיות שקילה ב 550 °C (6 שעות לפני להבטיח הסרה של מזהמים אורגניים אפשריים.
3. דיכלורומטן (DCM) ומתנול נפוצים ברוב מעבדות הגיאוכימיה האורגנית. השתמש בהם בנפרד, (מתנול הראשון, ואחריו DCM) לשטוף כלי מעבדה וכלי זכוכית לפני השימוש. תערובת של דיכלורומתאן למתנול (MeOH; 9:1) משמשת במעבדות רבות לחילוץ יעיל של סמנים ביולוגיים עם מגוון רחב של קוטביות. ממיסים צריכים להיות נקיים ממזהמים אורגניים.
4. להשיג מחלץ ממס מואץ לשימוש לניסוי זה.

2. הכנת תאים לדוגמה

1. להרכיב תא לדוגמה עבור כל דגימה שיש לחלץ, בתוספת ריק אחד.
   1. עבור כל תא, בורג מכסה קצה בקצה אחד של גוף התא.
   2. מניחים מסנן סיבי זכוכית בעירה על גבי כל תא באמצעות פינצטה שטופה בממס. לאחר מכן, לחץ בעדינות ובאיטיות את המסנן למטה לתוך התא באמצעות בוכנה המסנן.
   3. תייג את גופי התא לפי מספר (לדוגמה 1 - 22) עבור כל דגימה וכתוב "ריק" בתא הריק.
   4. מלאו את החסר באדמה הצורנית (או בחול) וכובע עם מכסה קצה שני. להדק ביד.

3. הכנת דוגמאות

1. מניחים פח שקילה בעירה על סולם המעבדה ואז טרה.
2. לשטוף את מרית המעבדה עם ממס, ולאחר מכן להשתמש בו כדי להעביר מסה מתאימה של מדגם לתוך פח שקילה, ולתעד את המסה.
   1. המסה של המדגם משתנה בהתאם לתוכן החומר האורגני שלה. חומר אורגני יחסית חומר רזה (בוץ ימי) עשוי לדרוש מספר גרם, בעוד חומר אורגני עשיר (רקמת עלה) עשוי לדרוש הרבה פחות.
3. מעבירים את כל החומר בפח השקילה לתא ASE מוכן.
4. מניחים מסנן סיבי זכוכית נוסף על החלק העליון של התא, ולאחר מכן לחץ לאט ובעדינות כלפי מטה עד שהוא מגיע לחלק העליון של המדגם באמצעות בוכנה המסנן.
5. הוסף אדמה הצורנית (או חול) לתא עד שהוא כמעט מלא. היזהר להסיר את כל הפסולת מחוטים גוף התא.
6. כיפה החלק העליון של התא עם מכסה קצה אחר.
7. חזור על שלבים 3.1 - 3.6 עבור כל דגימה.

4. הכנת בקבוקוני אוסף

1. סמן כל תקנה במספר של תא מתאים(למשל 1 - 22 או ריק) וכובע עם מכסה ביקציית אוסף ASE.

5. חילוץ

1. מקם כל תא לדוגמה בחריץ ממוספר על מגש ASE העליון.
2. מקם את בינתון האוסף המתאים באותו חריץ מספר במגש ASE התחתון.
3. צור את שיטת החילוץ באמצעות לוח המקשים ב- ASE. לחלץ ב 100 °C (70 °F) ו 1,200 פסאיי. לחלץ כל מדגם 3x עם אחיזה סטטית של 10 דקות לשטוף את גוף התא עם 50% של הנפח הכולל שלה בין החזקות סטטיות.
4. ודא בקבוק ממס מכיל מספיק ממס כדי לחלץ את כל הדגימות.
5. יש לשטוף את ASE 3x לפני תחילת הריצה על-ידי לחיצה על כפתור השטיפה בלוח הבקרה של ASE.
6. לחץ על התחל.