פולחן ופירום חיידקים מדגימות קרקע

1. הכנת דילול קרקע

1. כדי להתחיל את ההליך, לשקול 10 גרם של דגימת קרקע ולהוסיף 95 מ"ל של מים deionized. לנער את ההשעיה היטב, ולתייג כמו "A".
2. לפני שהאדמה מתיישבת, להסיר 1 מ"ל של ההשעיה עם pipette סטרילי ולהעביר אותו מים deionized 9 מ"ל ריק. מערבולת ביסודיות, ולתייג כמו "B".
3. חזור על שלב דילול זה שלוש פעמים, בכל פעם עם 1 מ"ל של ההשעיה הקודמת ומים שעברו דה-יוניזציה של 9 מ"ל ריקים. תייג אותם ברצף כצינורות C, D ו- E. התוצאה היא דילול סדרתי של 10^-1 עד 10^-5 גרם של אדמה לכל mL

2. הכנת צלחות התפשטות לתרבות חיידקית

1. כדי לגדל מושבות חיידקים, יש ליטול שלוש צלחות אגר פפטונים-שמרים מוכנות מראש ולתייג אותן כדוגמיות C, D ו- E. Vortex C, D ו- E, ופיפטה 0.1 מ"ל על כל צלחת. פעולה זו מגדילה עוד יותר את ערך הדילול, בגורם של עשרה (C = 10^-3, D = 10^-4, E = 10^-5).
2. לאחר מכן, טובלים ממרח זכוכית באתנול. מניחים את המפיץ בלהבה לכמה שניות כדי להצית ולשרוף את האתנול. זה יתעקר את המפיץ.
3. מחזיקים את המפרש מעל הצלחת הראשונה עד שהלהבה כובתה. פתח את הצלחת במהירות, מחזיק את המכסה קרוב. לגעת במפיץ אל אגר הרחק inoculum (Inoculum = תאים המשמשים להתחיל תרבות) כדי להתקרר, ולאחר מכן להפיץ את טיפת inoculum סביב פני השטח של אגר עד עקבות של נוזל חופשי להיעלם. החלף את מכסה הצלחת.
4. להבה מחדש את המפיץ ולחזור על התהליך עם הצלחת הבאה, עובד במהירות כדי לא לזהם את אגר עם אורגניזמים מוטסים
5. לדגור על לוחות החיידקים בטמפרטורת החדר במשך שבוע אחד. ודא הלוחות הפוכים במהלך הדגירה כדי למנוע טיפות של לחות עיבוי ליפול על פני אגר.

3. הכנת לוחות התפשטות לאקטינומיצטס

1. כדי לגדל actinomycetes, לקחת שלוש לוחות גלצל-קזאין מוכנים מראש ולתייג אותם כמו B, C, ו- D. באמצעות הטכניקות שהוצגו קודם לכן, צלחת להפיץ 0.1 מ"ל מן המתלים B, C, ו- D. הדילול התחתון משמש מכיוון שאקטינומיצטים נמצאים בדרך כלל כ- 1/10 מהאוכלוסייה החיידקית (B = 10^-2, C = 10^-3, D = 10^-4).
2. לדגור על לוחות actinomycete (הפוך) בטמפרטורת החדר במשך 2 שבועות.

4. ספירות חיידקים ואקטינומיצ'טה

1. לאחר הדגירה, לבחון את כל לוחות החיידקים בקפידה, ולשים לב הבדלים בגודל המושבה ובצורה. כאשר הם גדלים על אגר, חיידקים מייצרים מושבות חלקלקות החל כתום בהיר, צהוב או ורוד. לעומת זאת, מושבות אקטינומיצ'טה הן גיריות, מוצקות, עוריות, וישברו תחת לחץ, שם מושבות חיידקים אחרות ימרחו. זה מאפשר למושבות להיות מובחנות על ידי מגע עם לולאה סטרילית.
2. לספור ולתעד את מספר מושבות החיידקים, כולל כל actinomycetes. רק לספור לוחות עם 30-200 מושבות לכל צלחת.

5. בידוד של תרבויות טהורות

1. בחר מושבות חיידקים בודדות מכל אחת מהצלחות. מושבות נוספות ניתן לבחור אם יש עניין מיוחד באדמה. השתמש צלחת דילול גבוהה, כפי שהוא נוטה להיות מושבות טהורות מופרדות היטב. בחרו רק מושבות המופרדות היטב מהמושבות השכנות ונראות שונות זו מזו מבחינה מורפולוגית.
2. לחטא את הלולאה על ידי טבילה באלכוהול והצתה. פתח במהירות את צלחת הפטרי של עניין, ולגעת בלולאה לנקודה חשופה אגר כדי לקרר אותו. לאחר מכן, הסר כמות קטנה של מושבה של עניין על הלולאה.
3. לוקח צלחת פפטונה-שמרים טריים, לעשות פס כמה סנטימטרים ארוכים בצד אחד. לחטא ולקרר שוב, ולאחר מכן לעשות פס שחוצה את הרצף הראשוני רק על המעבר הראשון. חזור על תהליך זה פעמיים נוספות באותו אופן. "דילול" פסים זה גורם לתאים בלולאה להיות מופרדים זה מזה. מניחים את הצלחת באזור חשוך כדי לדגור בטמפרטורת החדר במשך שבועיים.