1. קעקוע זנב
קעקועי זנב נקראים בקלות ללא צורך לטפל בחיה.

איור 1. קעקוע זנב על עכברים בוגרים
2. קעקוע בוהן של יילודים
פרוטוקולים ניסיוניים יכולים לדרוש genotyping של יילודים כבר ביום הראשון, מה שהופך את זה חיוני כי גורים אלה להיות מזוהה לצמיתות. השימוש בקעקוע בוהן מאפשר לבעלי החיים להיות מזוהים עד שהם גדולים מספיק עבור תיוג אוזניים או אגרוף באוזן.

איור 2. טכניקת האיפוק המתאימה לקעקוע עכבר ניאון. לרומח יש את הצבע הירוק על הקצה.
3. קעקוע בוהן של חולדות ועכברים בוגרים
כאשר המלטה של יילודים מקועקעת, מוצע כי האם גם להיות מקועקע, כך הדבק על גוריה אינו זר לה.
4. שבבים זעירים
ההשתלה של שבב RFID היא שיטה נפוצה לזיהוי בעלי חיים.

איור 3. מיקום שבבים בחולדות בוגרות.
5. זיהוי זמני לעכברים
צבעים לא טוקסיקיים וסמנים בעלי חיים יכולים לשמש לזיהוי זמני של עכברים.
6. זיהוי זמני לחולדות
מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN
רשומות בעלי חיים חייבות להישמר במדויק כדי להבטיח שאי…
1. קעקוע זנב
קעקועי זנב נקראים בקלות ללא צורך לטפל בחיה.

איור 1. קעקוע זנב על עכברים בוגרים
2. קעקוע בוהן של יילודים
פרוטוקולים ניסיוניים יכולים לדרוש genotyping של יילודים כבר ביום הראשון, מה שהופך את זה חיוני כי גורים אלה להיות מזוהה לצמיתות. השימוש בקעקוע בוהן מאפשר לבעלי החיים להיות מזוהים עד שהם גדולים מספיק עבור תיוג אוזניים או אגרוף באוזן.

איור 2. טכניקת האיפוק המתאימה לקעקוע עכבר ניאון. לרומח יש את הצבע הירוק על הקצה.
3. קעקוע בוהן של חולדות ועכברים בוגרים
כאשר המלטה של יילודים מקועקעת, מוצע כי האם גם להיות מקועקע, כך הדבק על גוריה אינו זר לה.
4. שבבים זעירים
ההשתלה של שבב RFID היא שיטה נפוצה לזיהוי בעלי חיים.

איור 3. מיקום שבבים בחולדות בוגרות.
5. זיהוי זמני לעכברים
צבעים לא טוקסיקיים וסמנים בעלי חיים יכולים לשמש לזיהוי זמני של עכברים.
6. זיהוי זמני לחולדות
היכולת לזהות חיות מחקר בודדות היא היבט חיוני בשמירת רשומות מדעיות ואיסוף נתונים. הבחנה בין בעלי חיים מבטיחה שהנבדק הנכון משמש להליך הניסוי המיועד.
ישנן כמה שיטות קבועות וזמניות שמדענים משתמשים בהן כדי לזהות חיות מעבדה בודדות. בסרטון זה, נדון בשיטות הכוללות קעקוע זנב מכרסם בוגר, אצבעות יילודים ואצבעות בוגרות. לאחר מכן, ניגע בטכניקת מיקום השבבים הנפוצה בחולדות בוגרות, ואחריה שיטת הזיהוי הזמנית האוניברסלית המשתמשת בצבעים לא רעילים.
לפני שנעמיק בפרוטוקולים לשיטות אלה, בואו נסקור את השיקולים, היתרונות והחסרונות של כל אחת מהטכניקות הללו. קעקוע זנב מועיל בפרוטוקולי מחקר רבים, כגון ניסויים הכוללים הדמיית MRI או כאלה שבהם לבעלי חיים יש נטייה גנטית למחלות עור כולל דלקת עור כיבית. יתרון נוסף של קעקועי זנב הוא שניתן לדמיין אותם בקלות מבלי לרסן את החיה.
פרוטוקולים ניסויים מסוימים דורשים גנוטיפ של יילודים כבר ביום הראשון, מה שמחייב זיהוי קבוע של גורים אלה. השימוש בקעקוע אצבעות מאפשר לזהות בעלי חיים כאלה עד שהם גדולים מספיק לתיוג אוזניים או ניקוב אוזניים. מומלץ למרוח קעקוע בוהן דומה על האם הבוגרת כדי למנוע ממנה להגיב יתר על המידה ולטפח יתר על המידה את הקעקוע החדש של הגור שלה. למרות שיש מספר יתרונות לשימוש בשיטה זו, החיסרון הוא שההליך דורש מיומנות, תרגול, יד יציבה וציוד מיוחד.
שיטת הזיהוי הקבועה הבאה הנבחנת היא שבב. למרות שהשתלת שבבים היא תהליך קל יחסית, ישנם מספר גורמים המגבילים את התועלת שלו. ראשית, שבבים אלה הם בערך בגודל של גרגר אורז גדול ודורשים מחט בגודל 10-12 להשתלה, שהיא גדולה מדי עבור עכבר, ובכך מגבילה את השיטה לחולדות בוגרות. שנית, שבבים הם יקרים ולכן אינם אידיאליים לזיהוי מספר רב של בעלי חיים. לבסוף, לא ניתן להשתמש בשבבים בניסויים הכוללים MRI. עם זאת, אם יש קבוצה של בעלי חיים יקרי ערך כמו חיות מגדלים עם גנטיקה ייחודית שיש לזהות לצמיתות, ניתן להשתמש בשבבים.
השיטה האחרונה שנדון בה היא זיהוי זמני באמצעות סמנים לא רעילים. הסמנים הלא רעילים מיועדים לצביעת פרוות של חיות מחקר. שיטה זו אידיאלית למחקרים קצרי טווח הדורשים זיהוי בעלי חיים למשך מספר שעות או ימים בלבד, אם כי הצבעים יכולים להישאר גלויים למשך מספר שבועות. חלק מהחוקרים משתמשים בסמנים אלה בשילוב עם שיטות זיהוי אחרות כדי לזהות בקלות בעלי חיים ספציפיים בקבוצה.
כעת, לאחר שדנו ברקע, בואו נלמד את ההליכים, החל מקעקוע זנב. כאן, נדגים את ההליך על עכברים בוגרים, אך ניתן ליישם את אותו הדבר עבור חולדות נגמלות ובוגרות.
כדי למזער כל חשש או מצוקה לבעלי החיים, יש לבצע קעקוע זנב בחדר ההליכים ולא באזור המגורים לבעלי חיים. לפני מריחת הקעקוע, רסנו את העכבר באמצעות ריסון כוסות, כשהזנב משוך מתוח מהפתח. אוגן הכוס מוחזק במקומו באמצעות פלטפורמת זכוכית מיוחדת. לאחר מכן, נקו את הזנב עם כמות קטנה של מנקה רקמות מדולל על ספוגית עם קצה כותנה. שלב זה חשוב כדי להסיר כל הצטברות של אבנית ופסולת שעלולה להפריע לקעקוע. לאחר מכן, מרחו שמן טישו על עור הזנב בעזרת ספוגית נוספת. זה ממזער נזק לרקמות על ידי ריכוך העור ומתן סיכה למחט הקעקוע. בנוסף, השמן ממיס לכלוך שלא הוסר בתהליך הניקוי ומונע הכתמת דיו על העור הלא מקועקע. עכשיו אתה מוכן למרוח את הקעקוע.
בזמן שהמכונה כבויה, טבלו את קצה מחט הקעקוע, שהיא מחט לנצט או מחט תת-עורית, לתוך הפיגמנט. לאחר מכן, הפעל את האקדח באמצעות דוושת הרגל, הנח את כלי הקעקוע על הזנב והביא את קצה המחט לאתר הקעקוע. להתקרב לעור עם המחט ב-90? זווית וחודרת עמוק מספיק לתוך הדרמיס כך שהפיגמנט מופקד לצמיתות. שינוי בצליל של המחט המופעלת יכול לעזור להבחין בעומק. בצע משיכות אחידות קצרות בכיוון אחד, וצור ספרות ואותיות. נסה להשתמש בקימורים וזוויות מינימליות בעת מריחת הקעקוע.
כדי להוסיף פיגמנט נוסף, טבלו את קצה המחט במאגר הצבע עבור כל תו או שניים לעכברים וכל תו אחד לחולדות. כתם את הקעקוע שהושלם במגבת נייר כדי להסיר עודפי פיגמנט. הימצאות דם על הקעקוע או מגבת הנייר מעידה על כך שהקעקוע נעשה עמוק מדי, ולכן לא סביר שיהיה קבוע. חיזוק תווים דקים בפיגמנט נוסף על ידי הנחת המחט במקביל לפיגמנט שכבר הופקד ולא על גביו. יש לנקות היטב את ציוד הקעקוע לאחר כל שימוש, ויש להשתמש במחט חדשה או מעוקרת ובאספקה טרייה של דיו בין הכלובים כדי למנוע העברת מחלות.
לאחר מכן, נלמד כיצד ליישם קעקועי אצבעות על יילודים ומבוגרים. כאן, נדגים את ההליך בעכברים, אך אותם שלבים ישימים עבור חולדות.
היילודים מקועקעים על בהונות רגליהם מכיוון שעצמות הזנב אינן מאובנות ואורך הזנב קטן מדי. כמו כן, ככל שהזנב גדל, העור יימתח והמספרים עלולים להיות מעוותים, חלשים ובלתי קריאים. התחל בהנחת נקודה של משחת קעקועים ירוקה על משטח לא נקבובי כגון נייר אלומיניום. לאחר מכן, כוס את הגור שנגמל מראש בידך באמצעות פד גזה. מקם את כף הרגל בין האגודל לנוכל האצבע המורה כדי לחשוף את אצבעות הרגליים שנבחרו לקעקוע. החזק את כף הרגל קרוב לאצבעות כך שלבוהן שנבחרה יהיה משטח מוצק מאחוריה כדי למנוע ממנה להתכופף.
כעת, טבלו את קצה ה-lancet בקוטר 4.5 מ"מ במשחת הקעקוע. לאחר מכן, תקעו את הבוהן הרצויה לפי הקוד שנקבע מראש. כדי להבטיח חדירה נכונה, תקעו את אותה נקודה שלוש פעמים. לחדור לעור מספיק כדי שהעיסה תשאיר סימן, אך הימנע מנקיטה עמוקה כל כך עד שהבוהן מדממת. מחק בעדינות את הקעקוע החדש עם הגזה כדי להסיר עודפי משחת קעקוע, והחזיר את החיה לכלוב שלה. השתמש ב-lancet חדש להמלטה הבאה. יום לאחר ההליך, ודא שהקעקוע גלוי.
כאשר מקעקעים גורים יונקים, רצוי לקעקע גם את הסכר. זה עשוי למנוע ממנה להגיב יתר על המידה ולטפח יתר על המידה את הקעקועים של הגור שלה. כדי להחיל קעקוע בוהן על מבוגר, שוב, הניחו תחילה נקודה קטנה של משחת קעקועים ירוקה על נייר אלומיניום. לאחר מכן, רסנו את החיה באמצעות חרוט פלסטיק או רסן פרספקס המאפשר גישה לכפות הרגליים האחוריות. הארך את כף הרגל מהתקן הריסון ומקם את כף הרגל בין האגודל לנוכל האצבע המורה כדי לחשוף את אצבעות הרגליים שנבחרו לקעקוע.
כעת, טבלו את קצה הרומח בקוטר 5 מ"מ במשחת הקעקוע. וכמו קודם, יש למרוח את הקעקוע על ידי דקירה וניקוב של עור הבוהן הרצויה לפחות שלוש פעמים כדי להבטיח חדירה נכונה. לאחר מכן, מחק בעדינות את הקעקוע כדי להסיר עודפי משחה, והחזיר את החיה לכלוב שלה. כמו עם היילודים, ודא את הקעקוע יום לאחר ההליך. אם הסימן נראה למחרת הקעקוע, הוא אמור להישאר גלוי לכל חיי החיה. אם הוא חלש או לא נראה, בצע שוב את הקעקוע כפי שתואר קודם לכן.
שיטת הזיהוי הבאה שנדון בה כוללת השתלת שבבים במכרסמים. השבב המשמש בדרך כלל לתיוג חיות מעבדה הוא שבב זיהוי בתדר רדיו, או RFID. בדרך כלל, השבב נטען מראש במחטים, אותן ניתן להכניס לאפליקציה. להחדרת שבב, השתמש בצינור פרספקס כדי לרסן את החיה וודא שאתה עדיין יכול לתפוס את העור מעל הכתפיים. ראשית, אוהל את העור ליצירת כיס. לאחר מכן הניחו את המחט דרך העור, שיפוע כלפי מעלה, במקביל לעמוד השדרה, ומכוונים לכיוון הזנב. הוצא את השבב תת עורי ומשוך את המחט. צבטו את העור סגור במקום ההזרקה כדי למנוע מהשבב לעקוב אחר המחט החוצה מהעור. המשך להפעיל לחץ כדי לספק המוסטזיס לכל דימום בעור. הסר את החיה מהתקן הריסון וסרוק את השבב באמצעות הקורא שסופק על ידי היצרן כדי לאשר את קוד הזיהוי.
לבסוף, בואו ללמוד כיצד למרוח צבעים זמניים על מכרסמים לצורך זיהוי. נתחיל עם עכברים. ראשית, רסנו את החיה כך שהאזור שבין השכמות יהיה נגיש. חלק זה של הגוף בטוח מפני טיפוח עצמי. הניחו נקודה או פס של הצבע על הפרווה באזור זה והחזירו את החיה לכלוב שלה.
עבור חולדות, רסנו את החיה באופן ידני על ידי אחיזת הזנב והחזקתו מתוח. זה מבטיח שהאזור למריחת צבע נגיש בקלות, שיכול להיות ראש, כתפיים או גב. הניחו נקודה או פס של הצבע על הפרווה. לפעמים ניתן למרוח צבע לא רעיל מבלי לרסן את החיה. בדוק את הסימונים על בעלי חיים אלה מעת לעת, במיוחד אם אתה משתמש בהם כמזהה היחיד במשך יותר מכמה ימים.
כעת, לאחר שסקרנו את ההליכים של שיטות הזיהוי השונות האלה, בואו נראה כיצד מדענים משתמשים בהן במחקרים שונים כיום.
השימוש במכרסמים בניסויי התנהגות הוא די נפוץ. כאן, החוקרים השתמשו בקעקוע הזנב כדי לסמן את החיות לצמיתות ולאחר מכן צפו בהן במשך מספר ימים בסביבת כלוב ביתי שנבנתה באופן מלאכותי. הנתונים שנאספו חשפו הבדלים בהתנהגויות, כמו מרחק תנועה, בין קבוצת הביקורת לבין חיות הניסוי, במשך תקופה של 10 ימים לאחר הניתוח.
בניסוי התנהגות אחר, החוקרים ביצעו קעקוע אצבעות בילודים והניחו אותם בקופסת הקלטה עם מיקרופונים מיוחדים להקלטת קולות אולטרה-סוניים. מטרת הניסוי הזה הייתה לבחון את ההבדלים בקצב הקריאות, כלומר מספר הקולות לדקה, בעכברים מסוג פרא ובעכברים חסרי Shank2 - מודל של אוטיזם - במהלך תקופת ילודים של 12 יום ובבגרות.
לבסוף, כפי שצוין קודם לכן, השימוש בצבע לא רעיל הוא דרך יעילה לסמן בעלי חיים לניסויים קצרי טווח. כאן, המדענים התעניינו בביטוי חולף של חלבון פלזמה. אז הם סימנו את החיות בסמנים זמניים, הזריקו את ה-DNA של הפלסמיד תוך ורידי, ואספו את דגימת הדם יומיים לאחר מכן כדי לקבוע את ביטוי החלבון בטכניקת הכתם המערבי.
זה עתה צפיתם בהקדמה של JoVE לקעקועים, מיקום שבבים ושיטות זיהוי זמניות של עכברי מעבדה וחולדות. זיהוי בעלי חיים הוא מרכיב עיקרי בשמירת רשומות במחקר. לכן, בבחירת שיטת הזיהוי המתאימה, יש לבחון גורמים רבים. זה כולל את רמת אי הנוחות לבעל החיים, קלות הטכניקה, צרכי הניסוי ולבסוף העלות הכרוכה בשיטה. כמו תמיד, תודה שצפית!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: Why is individual animal identification important in laboratory research?
Individual identification ensures accurate scientific recordkeeping and correct data collection. Distinguishing between animals guarantees that the correct subject is used for the intended experimental procedure, which is essential for maintaining research integrity and preventing errors in data attribution across multiple subjects in studies.
Q2: What are the advantages of tail tattooing for rodent identification?
Tail tattoos are easily visualized without manually restraining the animal, making monitoring convenient. They are beneficial for experiments involving MRI imaging or animals genetically predisposed to skin conditions like ulcerative dermatitis, since the tattoo avoids problematic body areas and remains permanently visible.
Q3: Why is toe tattooing preferred for identifying neonatal rodents?
Neonates require early permanent identification for genotyping as early as day one. Toe tattooing allows identification until pups are large enough for rodent identification ear punching and tagging. The tail is unsuitable because tailbones are not ossified and tail skin stretches as the animal grows, causing tattoo marks to become distorted and unreadable.
Q4: What are the limitations of microchip identification in laboratory rodents?
Microchips require a 10-12 gauge needle for implantation, which is too large for mice, limiting use to adult rats. They are expensive and unsuitable for identifying large numbers of animals. Additionally, microchips cannot be used in MRI experiments, though they remain useful for identifying valuable breeder animals with unique genetics.
Q5: When should researchers use non-toxic dyes for rodent identification?
Non-toxic dyes are ideal for short-term studies requiring identification for only a few hours or days, though dyes can remain visible for several weeks. Some researchers use markers in conjunction with other identification methods to easily spot specific animals in a group during temporary monitoring periods.
Q6: What preparation steps are necessary before applying a tail tattoo to a rodent?
Restrain the mouse using a cup restrainer with the tail pulled taut. Clean the tail with diluted tissue cleaner on a cotton-tipped swab to remove scale and debris. Apply tissue oil with another swab to soften skin, provide lubrication, and prevent ink staining on non-tattooed areas.
Q7: How should proper handling and restraining techniques be applied during toe tattooing procedures?
For neonates, cup the pup in your hand using gauze and position the foot between your thumb and index finger crook to expose toes. For adults, use a plastic cone or Plexiglass restrainer allowing hind foot access. Proper handling and restraining techniques ensure safe, accurate tattoo placement while minimizing animal stress.
Chapters in this video
0:00
Overview
1:22
Considerations for Identification Methods
3:40
Tail Tattooing in Adults
6:26
Toe Tattooing in Neonates and Adults
9:23
Microchip Placement
10:49
Method for Temporary Identification
11:50
Applications
13:35
Summary
Videos from this collection: