$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
זיהוי נכון של חיות מעבדה הוא דרישה בסיסית של מחקר ביו-רפואי. חיוני לחוקרים להיות מסוגלים להבחין בין בעלי חיים בודדים כך שהחיה הנכונה תשמש להליכי ניסוי ואיסוף נתונים. מדענים פיתחו כמה שיטות קבועות וזמניות לזיהוי חיות מעבדה בודדות. כאן, אנו הולכים לדון בשתי השיטות הנפוצות ביותר: תיוג אוזניים וניקוב אוזניים.
לפני שנעמיק בהליך ניקוב האוזניים, בואו נציג את קוד ניקוב האוזניים, את סוגי האגרופים הזמינים ונדון ביתרונות ובחסרונות של שיטה זו. כפי שאולי ניחשתם, ניקוב אוזניים כרוך בניקוב חור או חריץ באוזן החיצונית או באפרכסת של החיה. על מנת לתקנן שיטה זו, פותחו קודי ניקוב אוזניים אוניברסליים.
בהתאם למיקום, חריצים באוזן ימין מייצגים ספרות בודדות, כמו 1, 3 ו-5, וחריץ כפול מייצג 2. באמצעות שילובים שונים של חריצים אלה, וסיכום הערך עבור כל חריץ, אתה יכול לתייג את החיה מ-1 עד 9. באופן דומה, באוזן שמאל, אותם חריצים מייצגים את העשרות. ושוב, שילובים שונים יכסו את הטווח של 10 עד 90. חורים במרכז האפרכסת הימנית והשמאלית מייצגים 100 ו-200, בהתאמה. והחורים בשניהם מצביעים על 300. לכן, למשל, אם אתה רוצה לתייג את החיה 173, אתה צריך לנקב חור במרכז האוזן הימנית עבור 100, שלוש חריצים בשנה השמאלית המסכמים את הסכום הכולל ל-70, וחריץ בודד באוזן הימנית העליונה המייצג את מקום היחידה "שלוש".
כעת, בואו נדון בשלושת הסגנונות של אגרופי אוזניים זמינים מסחרית: אגרוף המספריים, אגרוף האגודל ואגרוף המנוף. לכל אחד מאלה היתרונות והחסרונות שלו.
אגרוף האגודל דורש תנועת צביטה, אך הוא קטן מספיק כדי להתאים לצינור אפנדורף כך שניתן יהיה לאסוף את רקמת האוזן ביתר קלות. מבחינה ארגונומית, אגרוף הידית קל יותר לשימוש מאשר אגרוף אגודל, במיוחד עבור האוזניים העבות יותר של החולדות המבוגרות יותר. אגרוף המספריים אינו דורש תנועת צביטה, ובכך מונע עייפות ופציעה של התעלה הקרפלית.
למרות היותה שיטת זיהוי מהירה ופשוטה, לניקוב אוזניים יש כמה מגבלות. ראשית, לקוד ניקוב האוזן שנדון לעיל יש גבול עליון של 399, מה שעשוי להגביל את השימוש בשיטה זו בכמה מחקרים בקנה מידה גדול. מגבלה נוספת היא שרוב בעלי החיים חייבים להיאחז בשרוול כדי לקרוא את הקוד, ובכך להגדיל את זמני הטיפול בהם. ככל שהחולדות מזדקנות, עור האוזניים שלהן מתעבה וקשה לבצע אגרוף אוזניים מבלי לגרום למצוקה משמעותית לבעל החיים. לכן, עדיף לבצע את אגרופי האוזניים על חולדות צעירות בזמן שהן נגמלות. עבור חולדות בוגרות הדורשות זיהוי, יש לשקול שימוש בהרדמה ממלפת בעת ביצוע אגרופים באוזניים.
כעת, כשיש לך קצת מידע רקע על קוד ניקוב האוזן וסוגי הכלים הזמינים, בואו נלמד כיצד לבצע טכניקה זו בעכברים.
לפני תחילת ההליך, מומלץ לנקות את כלי הניקוב בתמיסת חיטוי,לשטוף באלכוהול ולייבש היטב. הימנע מחיטוי אגרופי האוזניים, מכיוון שבסופו של דבר זה יקהה אותם.
כדי להתחיל, החליטו על קוד הניסוי של החיה ועל האגרוף שבו יש להשתמש. בואו נשתמש בקוד 173 ובאגרוף המספריים כדוגמאות כאן. אותו נוהל חל על כל קוד או אגרוף אחר. כשאתה מוכן, רסן את החיה על ידי אחיזתה בשרוול כך שהאוזניים יהיו נגישות בקלות. התחל עם החור ל-100. הנח את האוזן הימנית באגרוף כך שהחור של האגרוף ימוקם הרחק משולי האפרכסת. לאחר מכן, הפעל לחץ כדי לסגור את המספריים במהירות ובחוזקה כדי לחתוך את העור. לאחר מכן, שחרר את האגרוף והסר אותו מהאוזן. הימנע ממשיכה או סיבוב של האגרוף כדי למנוע קריעת האוזן. כדי ליצור חריץ, הניחו את האגרוף בקצה אפרכסת האוזן במקום הנכון, במקרה זה בחלק העליון של האוזן הימנית עבור "השלושה" במקום יחידת הקוד, ועשו את אותו הדבר - הפעילו לחץ מהיר ויציב ואז פתחו את המספריים כדי להסיר אותו. חזור על אותו הליך באוזן השנייה כדי לנקב שלושה חריצים - שניים עבור "20" ליד הפינה החיצונית ואחד עבור "50" ליד הפינה הפנימית, ובסך הכל הקוד ל-"70".
ודא שהקוד הנכון נוקב לפני הוספת החיה בחזרה לכלוב. שוב, נקו את האגרוף עם חומר חיטוי, שטפו באלכוהול וייבשו אותו היטב כדי למנוע חלודה.
כעת, בואו נעבור לתיוג אוזניים, שהיא עוד שיטה זולה וקלה לביצוע לזיהוי אינדיבידואלי של עכברים וחולדות. ישנם מגוון תגי אוזניים זמינים מסחרית. אלה כוללים: תגי מתכת שעליהם חרוטות סדרה של מספרים ו/או אותיות, ותגי פלסטיק עם תווים או ברקודים על רקע בצבעים עזים.
חסרון אחד של תגי מתכת הוא שלעתים קרובות יש צורך להרים את החיה כדי לקרוא את הקוד. לעומת זאת, תגי פלסטיק קלים לקריאה מבלי לטפל בבעלי החיים. יתרון נוסף לתגי פלסטיק הוא תאימותם להדמיית MRI. בעוד שהתגים מספקים מזהה אישי לעכבר או לחולדה, הם אינם חסינים מטעויות. תגים יכולים ללכת לאיבוד עקב טיפוח יתר, דרמטיטיס או זיהום, טראומה עצמית שנגרמה בניסיון להסיר תגים עקב חוסר סובלנות, לחימה והתנהגות רבייה אגרסיבית. אם מספר בעלי חיים שוכנים באותו כלוב, אובדן תג אוזן יכול להיות בעייתי. כדי לעקוף בעיה זו, יש להשתמש בצורת זיהוי משנית כגון קוד ניקוב על האוזן שממול לתג. מתקן צריך לתקן הן את בחירת האוזן לתיוג והן את הקוד שישמש באוזן השנייה, וכל הקודים צריכים להיות מסומנים בכרטיס הכלוב.
עכשיו בואו נלמד כיצד להחיל כראוי תג אוזן, שכן למיקום שגוי יכולות להיות כמה השלכות מצערות. לאחר היישום נדון גם בהסרת תג האוזן, המתבצעת בדרך כלל במקרה של זיהום עקב הדבקת התג.
השלב הראשון הוא לבחור תג מתאים לזיהוי בעלי החיים. כאן, נשתמש בתג מתכת כדי להדגים את ההליך על עכברים. הקפד להזמין את היישום המתאים לגודל ולסגנון הספציפיים של תגי האוזניים שבהם נעשה שימוש. הסר בעדינות את התג ממחזיק הקרטון וכוון אותו לתוך הפלייר כך שהקצה עם החור ימוקם מעל האזור המחורץ של האפליקציה. הקצה המחודד של התג צריך להיות מול החריץ.
כאשר אתה מוכן להחיל את תג האוזן, רסן את החיה כך שהאוזניים יהיו נגישות בקלות. בעלי חיים עשויים להיאבק פחות אם הגפיים האחוריות יכולות לנוח על משטח כמו החלק העליון של הכלוב או משטח הדלפק. לאחר שהחיה מרוסנת, מקם את חוד תג האוזן עמוק בקונכיה של האוזן כך שמספרי התגים יפנו לחלק האחורי של החיה. לאחר מכן, סחטו בחוזקה את האפליקציה סגורה; תג האוזן ינקב את האוזן ויינעל יחד. כאשר אתה משחרר, האוזן המתויגת תיפול מהאפליקציה. ודא שהתג הוצב והוחל כהלכה. אם אתם מעדיפים שמספרי תגי האוזן יפנו לאף של החיה, הניחו את חוד התג בבסיס האפרכסת בחלק האחורי של האוזן ולאחר מכן לחצו כדי לנעול את התג במקומו.
יש להציב תגים כך שלא יגרמו לעיקול באוזן, יפריעו לניידות של בעל החיים או יתפסו בחלק כלשהו של הכלוב. אם התג ממוקם קרוב מדי לקצה האוזן, הוא יכול להיקרע בקלות. אם הוא ממוקם קרוב מדי לראש, העור של אזור הצוואר יכול להיתפס בתג, ליצור גירוי, כאב והגבלת תנועה, מה שעלול להוביל לטראומה עצמית. לעיתים, תגי מתכת עלולים לגרום לגירוי ונפיחות באוזן. זה מוביל לרוב לזיהומים של האפרכסת, והטיפול המיידי צריך לכלול הסרת התג.
על מנת להסיר את התג, הרטיבו אפליקטור עם קצה כותנה בתמיסת חיטוי והשתמשו בו כדי להסיר כל פסולת מסביב לתג. במקרים חמורים של זיהום, ייתכן שיהיה צורך להרדים את בעל החיים. לאחר מכן, בעזרת חותכי תיל, חותכים את החלק העליון של לולאת התגים מקצה לקצה. חשוב לציין, אין לחתוך את המשטח השטוח מכיוון שזה ידחוס את התג, יצבוט את האוזן ויגרום נזק לאוזן. בעזרת המוסטטים, הנח בעדינות את תג האוזן דרך האוזן והחוצה ממנה. החלק את התג החוצה כך שהקצה המכווץ לא יעבור דרכו ויגרום לטראומה ולהגדלה של חור הפירסינג. לאחר שהתג נעלם, נגב את האוזן עם מקל מוליך כותנה ספוג בחיטוי, והחזיר את החיה לכלוב שלה. אם יש הפרשה מוגלתית מהאוזן, ייתכן שיהיה צורך בטיפול מעקב ומומלץ להתייעץ עם הצוות הווטרינרי להערכה.
כעת, כשאתם יודעים כיצד לסמן את חיות המעבדה באמצעות תגי אוזניים ואגרופים, בואו נסקור כמה ניסויים שבהם השיטות האלה יכולות להיות שימושיות. יתרון מרכזי אחד בשימוש בקוד ניקוב אוזניים הוא שהאגרופים יכולים לשמש כדגימות רקמה לגנוטיפ, ובכך להפחית את הלחץ על בעלי החיים הנגרם עקב טיפול חוזר. עם זאת, אם אתם מתכננים להשתמש באגרופים לאיסוף דגימות PCR, זכרו תחילה להשרות את המכשיר בתמיסה מטהרת פני השטח למשך 3 דקות לפחות כדי להסיר שאריות DNA או RNA, ולאחר מכן לשטוף באלכוהול לפני השימוש.
חשיבותה של טכניקת הזיהוי עולה עוד יותר אם הניסוי נמשך מספר ימים. לדוגמה, בניסוי זה המדענים סימנו תחילה את החיות באמצעות תג מתכת ולאחר מכן הם הזריקו לעצב הסיאטי תרחיף של תאי גידול טרנסגניים המבטאים חלבון לוציפראז. לאחר מכן, על מנת לכמת את התקדמות הסרטן, הם צילמו את החיות באמצעות ביולומינסנציה ביום, עשרה ושמונה עשר ימים לאחר ההזרקה.
זה עתה צפיתם במצגת של JoVE המדגימה את שתי שיטות הזיהוי הנפוצות במכרסמים: תגי אוזניים ואגרופים באוזניים. כעת עליך להבין את קוד ניקוב האוזניים, להכיר את הסוגים השונים של תגי אוזניים למכרסמים הזמינים מסחרית, ואמור להיות מסוגל לבצע במדויק הליכים אלה מבלי לגרום לאי נוחות משמעותית של בעלי חיים.
זכור, לכל טכניקה יש את היתרונות והחסרונות שלה, אותם יש לקחת בחשבון ביחס לצרכי הניסוי שלך. בנוסף לשיקול העלות, קלות הטכניקה ורמת הכאב לבעלי החיים צריכים להיות חלק מהשיקולים העיקריים בבחירת שיטת הזיהוי המתאימה. כמו תמיד, תודה שצפית!
