שיטת התוספת הסטנדרטית

1. הכנת ריאגנטים

1. פתרון Al³⁺ סטנדרטי ל-100 ppm: המיס 0.9151 גרם אלומיניום חנקתי (Al(NO₃₎₃•9H₂O) לבקבוק נפחי של 1-L עם מי DI.
2. פתרון 8HQ בחומצה אצטית 1 M (2% wt/vol): הוסף 2.0 גרם של 8-הידרוקסיקווינולין לבקבוק נפחי של 100 מ"ל.
3. בזהירות להוסיף 5.74 מ"ל חומצה אצטית קרחונית לבקבוק 100 מ"ל, ולאחר מכן לדלל לסימן עם מים DI. זה מאפשר 8-hydroxyquinoline להתמוסס בשלב מימי.
4. 1 M NH₄⁺/NH₃ חוצץ (pH ~ 8): הוסף 20 גרם של אצטט אמוניום (NH₄OAc) לבקבוק 100 מ"ל.
5. הוסף 7 מ"ל של 30% אמוניום הידרוקסיד לבקבוק 100 מ"ל זה, ונדלל לסימן עם מי DI. זה עוזר לנטרל את החומצה בתמיסת 8HQ בשילוב.
6. ריאגנטים אחרים כוללים נתרן גופרתי נטול מים (Na₂SO₄₎וכלורופורם (ציון מפרט).

2. הכנת הדגימות

1. הכן פתרון Al³⁺ סטנדרטי בגודל 1.00 ppm על-ידי הוספת 1.0 מ"ל מפתרון Al³⁺ של מלאי 100-ppm עם פיפטה לבקבוק נפחי של 100 מ"ל.
2. הניחו שישה משפכים מפרידים בגודל 125 מ"ל על הטבעות שנמצאות על דוכן טבעת גדול הממוקם בשכונה. הם צריכים להיות מתויגים כדלקמן: BL, 0, 1, 2, 3, 4. ודא שכל כלי הזכוכית נקיים בקפידה, שכן קשה להשיג תוצאות כמותיות אם חרוזים קטנים של כלורופורם נדבקים לקירות כלי הזכוכית.
3. הוסף 25.00 מ"ל של פתרון Al³⁺ הלא ידוע לחמשת משפכי ההפרדה המסומנים בתווית 0, 1, 2, 3 ו- 4. בדוגמה זו, הריכוז הלא ידוע הוא 0.110 עמודים לדקה.
4. הוסף 0, 1.00, 2.00, 3.00 ו- 4.00 מ"ל של פתרון Al³⁺ סטנדרטי בגודל 1.00-ppm, בהתאמה, ל- 5 משפכים עם פיפטה של 1 מ"ל.
5. הכן ריק על-ידי הוספת 25.00 מ"ל של מים מזוקקים למשפך המפריד המסומן BL.
6. הוסף 1.0 מ"ל של פתרון 8-הידרוקסיקווינולין עם פיפטה לכל אחד מששת הפתרונות.
7. הוסף 3.0 מ"ל של פתרון חיץ עם פיפטה לכל אחד מששת הפתרונות.
8. לחלץ כל פתרון פעמיים עם 10 מ"ל של כלורופורם, רועד במרץ במשך 1 דקות בכל פעם. זכור מדי פעם לפרוק את המשפך המפריד כדי לשחרר הצטברות לחץ. (הערה: מיצוי טוב מתרחש רק כאשר יש הרבה מגע נוזלי נוזלי בין השלבים).
9. לאסוף את הכלורופורם ב 100 מ"ל נקי, יבש תווית. לכלורופורם יש צפיפות של קרוב ל 1.5 גרם / ס"מ³, אז זה השכבה התחתונה. לא צריך להיות זכר של צבע צהוב עזב בשלב מימי לאחר החילוץ המלא.
10. מעבירים את תמצית הכלורופורם המשולבת מכל כוב לבקבוקון נפחי בגודל 25 מ"ל ומדלדלים לסימן עם כלורופורם. הקפידו להניח פקקים בכל בקבוק נפחי כדי למנוע מכלורופורם להתאדות.
11. הוסף ~ 1 גרם של נתרן גופרתי נטול מים (Na₂SO₄) לכל אחד מששת כוסות 100 מ"ל מהשלב 2.9. נתרן גופרתי מסייע להסיר כל עקבות של מים שעשויים להיות נוכחים בתמצית הכלורופורם.
12. העבר את הפתרונות בחזרה למכסות המכובדות שלהם. מערבבים בזהירות כדי להקל על התייבשות של כל מים במדגם.
13. דקאנט תמציות כלורופורם לתוך תא פלואורימטר קוורץ (הערה: כלורופורם יהיה להמיס תא פוליסטירן פלסטיק).

3. בחירת אורך הגל של העירור

קבעו את אורכי הגל של העירור והפליטה על-ידי הפעלת סריקות, ואז פשוט קראו ותעדו את עוצמת הפלואורסצנטיות של כל הדגימות בערכים אלה. רוחבי הפס של העירור והפליטה מוגדרים מראש ב- 5 ננומטר. המתחם נספג ב UV הקרוב, כך אורך גל העירור צריך להיות על 385 ננומטר. בתחילה, לפקח על פלואורסצנטיות ב 500 ננומטר בענף הפליטה.

1. בפלורימטר, ודא כי מאווררי הקירור הפנימיים והחצונים בפלורימטר מופעלים לפני הפעלת מנורת הקסנון. מנורת הקסנון מתחממת מאוד, ודורשת קירור מתמשך.
2. הפעל את המתח הגבוה (HV) לגלאי PMT ל- 400 V.
3. פתח את שני התריסים.
4. פתח את תוכנית רכישת הנתונים במחשב, כאן זה "100nmFluorScan".
5. מקם את הפתרון "מדגם + 2 מ"ל הוסיף" (2) לתא קוורץ לשימוש לקביעת אורכי הגל העירור והפליטה הטובים ביותר.
6. עם אורך גל הפליטה שנקבע בתחילה על 500 ננומטר, להפעיל סריקת עירור מ 335-435 ננומטר עם מהירות סריקה של 2 ננומטר / s.
7. מתוך עלילת הפלואורסצנטיות המתקבלת, קבע את אורך הגל המרבי של עירור פלואורסצנטיות (EXλ_max)והגדר את המכשיר לערך זה.

4. בחירת אורך גל הפליטה

1. הגדר את אורך הגל פליטת פלואורימטר ל 450 ננומטר.
2. הגדר את טווח אורך הגל של הפליטה כדי להפעיל סריקה של 100 ננומטר מ 450-550 ננומטר.
3. כדי להתחיל את הסריקה, לחץ על כפתור "התחל ניסיון" בתוכנית באותו זמן של לחיצה על כפתור "START" בלוח הקדמי של הפלורימטר.
4. מתוך עלילת הפלואורסצנטיות המתקבלת, קבעו את אורך הגל המרבי של פליטת פלואורסצנטיות(EMλ_max)והגדירו את המכשיר לערך זה(איור 2).

איור 2. קביעת EXλ_max אופטימלי ו- EMλ_max אורכי גל.

5. מדידת הפלואורסצנטיות של הדגימות

1. כל הדגימות מופעלות ב- EMλ_max וב- EXλ_max. סריקות אינן נחוצות עבור כל מדגם, אלא רק את ערך הפלואורסצנטיות בתנאים אלה. החל מדגם מדלל ביותר (ריק), למקם בתא קוורץ ולאחר מכן בכלי. הקלט את עוצמת הפלואורסצנטיות במחשבון המעבדה.
2. חזור על הפעולה עבור כל הדגימות האחרות.
3. זכור שיש להפחית את העוצמה היחסית הריקה מהעוצמה היחסית של כל פתרון לפני יצירת תרשים הכיול.

6. יצירת עלילת התוספת הסטנדרטית

1. התווה את עוצמת הפלואורסצנטיות לעומת מיקרוגרם של Al^{3+ הוסיף.}
2. קבע את הערך הפחות ריבועי של התוויית התוצאה, ורשום הן את השיפוע והן את היירוט.
3. קבע את הμg של Al³⁺ במדגם הלא ידוע מהמשוואה מיקרוגרם של Al³⁺ = -b/m
4. בידיעה כי אלומיניום לא ידוע היה נפח של 25.0 מ"ל הוסיף לכל מדגם, לקבוע את הריכוז של אלומיניום לא ידוע.