1. הזרקת תוך לב

איור 1. הזרקת תוך לב בעכברים.
2. הזרקה תוך ורידי תוך ורידי תוך שימוש מקלעת רטרו-מסלולית

איור 2. הזרקת מסלול רטרו בעכברים.
3. הזרקת משטח רגליים

איור 3. הזרקת משטח רגליים בעכברים וחולדות.
מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN
ישנם מסלולים נפוצים רבים לניהול מורכב בעכברים במעבדה וחולדות. פרוטוקולים עשויים, עם זאת, לדרוש את השימוש במסלולים פחות נפוצים: תוך לב, footpad, וזריקות רטרו-מסלולית. הכשרה מיוחדת חיונית להליכים אלה להתבצע בהצלחה. ייתכן שיהיה צורך בהצדקה למסלולים אלה כדי לקבל אישור של ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים (IACUC).
1. הזרקת תוך לב

איור 1. הזרקת תוך לב בעכברים.
2. הזרקה תוך ורידי תוך ורידי תוך שימוש מקלעת רטרו-מסלולית

איור 2. הזרקת מסלול רטרו בעכברים.
3. הזרקת משטח רגליים

איור 3. הזרקת משטח רגליים בעכברים וחולדות.
תוך-לב, רטרו אורביטל וכרית כף הרגל הן חלק משיטות ההזרקה המיוחדות שחוקרים ביו-רפואיים משתמשים בהן לניסויים המחייבים אספקת תרכובות דרך מסלולים לא טיפוסיים אלה.
זריקה תוך לבבית מעבירה את התרכובת לחדר השמאלי ומאפשרת לחומר להיכנס ישירות למחזור העורקים. מסלול הרטרו הוא חלופה להזרקת וריד הזנב ומשמש להעברת התרכובת למחזור הווריד. והזרקת כרית כף הרגל כרוכה במתן תת עורי של הפריט לכף הרגל האחורית של החיה. סרטון זה ימחיש את השיקולים, הנהלים והיישומים של טכניקות הזרקה מיוחדות אלה.
נתחיל עם קצת מידע רקע ודברים שצריך לקחת בחשבון לפני שמתחילים בהליכי ניהול אלה.
מתן תוך לבבי נעשה לרוב באמצעות אולטרסאונד כדי להנחות את המחט למיקום הנכון בלב. עם זאת, אם מבוצע בצורה נכונה תוך ניצול ציוני הדרך המתאימים, ניתן לבצע את המתן ללא שימוש בהדמיית אולטרסאונד. שימו לב כי ההליך דורש שימוש בהרדמה כללית, ורק זריקה אחת לכל בעל חיים מותרת להליכי הישרדות. בדרך כלל משתמשים במחט בגודל 27-30 להזרקה זו ונפח המתן המרבי הוא 100 ו-300 מיקרוליטר לעכברים וחולדות, בהתאמה.
להזרקה תוך ורידית דרך מסלול הרטרו, צריך להיות בעל הבנה הוגנת של המבנה הוורידי המסלולי. לעכבר יש סינוס שבו מספר ורידים - כלומר האף העל-אורביטלי, האף הגבי, הפלפברל התחתון והטמפורלי השטחי - מתכנסים. ואילו בחולדות יש רשת או מקלעת של מספר ורידים. ההזרקה מתבצעת ישירות לסינוס או למקלעת. בדומה לתוך לב, גם הליך זה דורש שימוש בהרדמה כללית, ורק זריקה אחת לעין ליום מומלצת עם סה"כ שתי זריקות לעין להליכי הישרדות. כמו בכל הזריקות, יש לבחור את המחט בגודל הקטן ביותר - בדרך כלל מד 27-30 - והנפח המרבי המומלץ הוא 150? ליטר לעין.
למרות המחלוקת, השימוש בהזרקת כרית כף הרגל עדיין נדרש למחקרים מסוימים, הקשורים בדרך כלל לדלקת וצמיחת גידולים. שימו לב שההזרקות יכולות להתבצע רק על רגל אחת, לעולם לא דו צדדית. ומדידות כרית כף הרגל צריכות להיעשות מדי יום ברגע שהתרחשה נפיחות ברורה. מחט בגודל 29-30 מומלצת להזרקה והנפח המרבי המומלץ הוא 50 ליטר. לאחר כל זריקה, יש לעקוב מקרוב אחר כל בעלי החיים לאיתור סימני כאב, רמת צריכת מזון ותנועה תקינה. בדרך כלל יש להמית את בעל החיים כאשר הנגע או הגידול מפריעים ליכולתו של בעל החיים להתנייד או להגיע למזון ולמים.
עכשיו בואו נלמד את הליכי ההזרקה, החל מהזריקה התוך לבבית. נדגים את ההליך בעכבר, אך ציוני הדרך והפרוטוקול של חולדה דומים.
השלב הראשון הוא הכנת המזרק. זכור מחט בגודל 29 ומזרק 1 סמ"ק מתאים לעכברים. והנפח המרבי להזרקה תוך לבבית הוא 100 מיקרוליטר. בעת ציור התמיסה, השאירו כמות קטנה של אוויר בין הבוכנה לחומר ההזרקה. זאת כדי לאפשר לדם להיכנס למזרק כשהוא מוכנס ללב.
כדי להתחיל, יש להרדים את החיה באמצעות חומרי הרדמה נדיפים או הניתנים להזרקה. סקור את השיקולים לשמירה על הרדמה כללית בסרטון אחר של אוסף זה. לאחר מכן, מקם את החיה בתנוחת שכיבה גבית על פלטפורמה מבודדת. לאחר מכן, הדביקו את הגפיים הקדמיות לפלטפורמה והניחו פיסת סרט אופקית על פני הבטן מעל הירכיים. זאת כדי לייצב עוד יותר את החיה ולהימנע מכל תנועה לאחר החדרת המחט. לאחר מכן, בעזרת ספוגית, הרטיבו את החזה של החיה ב-70% אלכוהול.
כדי לאתר את אתר ההזרקה, אתר תחילה את ה-xiphoid ואת עצם החזה של המנובריום. לאחר מכן, מצא את נקודת האמצע בין שני ציוני הדרך. 1-2 מ"מ משמאל לנקודה זו, הוא ציון הדרך של החדרת המחט. בעזרת מוליך עם קצה כותנה, מרחו יוד פובידון כדי לסמן את מקום החדרת המחט.
להזרקה, כוון את המחט בניצב לשולחן, והכנס אותה לעומק של כ -2 מ"מ. לאחר מכן, הפעל לחץ אחורי קל מאוד על הבוכנה. דם מחומצן אדום בוהק צריך להיכנס לרכזת המזרק, מה שמאשר מיקום נכון. החזיקו את המזרק באותו מקום והזריקו את החומר לאט ובהתמדה במשך 30 עד 60 שניות. הזרקה מהירה עלולה לגרום להתגבשות התאים ולסתימת העורקים, לזעזוע במערכת עקב טמפרטורת החומר הנמוכה משמעותית מטמפרטורת הגוף, או להתרחבות החדר ולשיבוש בקצב הלב.
לאחר שהחומר פינה את המזרק, הסר לאט ובזהירות את המחט ללא כל תנועה רוחבית מכיוון שהדבר עלול לפגוע בשרירי הלב. לאחר מכן שחרר מיד את הקלטת מהרגליים הקדמיות והבטן והניח את החיה במצב נוטה בכלוב נקי עם מצעים עמוקים מספיק כדי לשמש כשכבת בידוד. שימו לב שמחצית מכלוב ההתאוששות הזה נמצא על מקור חימום והחיה המורדמת ממוקמת בצד המחומם של הכלוב. זה מונע היפותרמיה, וכאשר בעל החיים מתאושש מההרדמה הוא יוכל לזוז מהצד המחומם כרצונך.
לאחר מכן, בואו נלמד את השיטה להזרקה תוך ורידית תוך שימוש במקלעת הרטרו-אורביטלית בחולדות. שוב, נדגים את ההליך על עכבר, אולם ציוני הדרך והפרוטוקול עבור חולדות דומים.
חבר את המחט המתאימה למזרק שנבחר ומלא את חומר ההזרקה. זכרו, בדרך כלל משתמשים במחט בגודל 27-30 עם המזרק הקטן ביותר האפשרי ונפח מרבי של 150 מיקרוליטר.
כדי להתחיל בהליך, תחילה יש להרדים את החיה. לאחר מכן, הנח אותו על משטח ישר במצב שכיבה לרוחב. כעת הניחו את האצבע המורה על החלק העליון של הראש ואת האגודל על הלסת, ומשכו בעדינות אחורה ולמטה. זאת כדי להדק את העור ולהבליט את גלגל העין. הקפד לא להפעיל לחץ על קנה הנשימה ולהגביל את זרימת האוויר. אם מתכננים זריקות מרובות, יש למרוח חומר הרדמה מקומי לעיניים, כמו טטרקאין או פרופרקאין.
להכניס את המחט לקנטוס המדיאלי של העין ב-45? זווית לאף. העומק חייב להיות מספיק כדי לחדור לרקמות הלחמית ולהתקדם למסלול העין ולסינוס. זה לא אמור להיתקל בעצם בחלק האחורי של המסלול. כדי למנוע קרע של כלי הדם, ודא שלמחט יש תנועה מינימלית לאחר החדרתה. אין לשאוף, מכיוון שזה ימוטט את הכלים. הזרקת המאמר בצורה איטית ויציבה. לאחר מכן, משוך את המחט בעדינות והפעל לחץ קל על העין כדי לשלוט בדימום ולספק המוסטזיס.
לבסוף, בואו נסקור את שיטת הזרקת כרית כף הרגל בעכברים וחולדות. כדי להתחיל, חבר את המחט המתאימה ומלא את המזרק בנפח הנכון. הליך זה יכול להיעשות בבעלי חיים מודעים.
הנח את החיה בצינור ריסון עם רגל אחורית אחת מבודדת ומורחבת על ידי אחיזת העור מעל החנק. נגב את כף הרגל במים או באלכוהול כדי להסיר פסולת לפני ההזרקה. כדי להימנע מכלי הדם העובר לאורך כף הרגל, נקודת הציון של ההזרקה נמצאת במרכז, אך ממש מחוץ לקו האמצע, קרוב יותר לאצבעות הרגליים.
הנח את שיפוע המחט כלפי מעלה במקום ההזרקה ומכוון אותה לכיוון העקב. הזריק את הפריט לאט ובהתמדה כדי למנוע התנפחות מהירה של רקמות כף הרגל. זה יגרום לכרית כף הרגל להתנפח כאשר חומר ההזרקה ממלא את החלל התת עורי הזה. בכף הרגל של בעל חיים קטן הנפיחות מהזריקה יכולה להתפשט עד העקב, בעוד שבבעל חיים גדול יותר היא תהיה מקומית יותר.
לאחר ההזרקה, התבונן בבעלי החיים מדי יום ואם קיימת נפיחות מתמשכת או אם יש נגעים או גידולים כתוצאה מפרוטוקול הניסוי, לאחר מכן, באמצעות קליפר, בצע את מדידת כרית כף הרגל. מכשיר זה מודד את עובי כף הרגל במילימטרים ומסייע בכימות הנפיחות.
עכשיו בואו נדון בכמה ניסויים לדוגמה המשתמשים בהזרקות תוך-לבביות, רטרו אורביטלי וכרית כף הרגל.
אחד היישומים הרבים של מתן תוך לבבי הוא פיתוח מודל בעלי חיים של גרורות סרטניות. כאן, החוקרים השתמשו במסלול זה כדי להזריק תאי גידול בעלי נטייה להתיישבות עצם. בימים שלאחר מכן, הם חקרו את צמיחת הגידול בעצמות באמצעות טכניקות רנטגן והדמיה פלואורסצנטית. במחקר אחר, מסלול הרטרו אורביטלי שימש להזרקת נוגדנים ספציפיים המסמנים נויטרופילים. לאחר מכן, בעזרת הדמיה תוך-חיונית, המדענים הצליחו לעקוב אחר דפוס הנדידה של התאים המסומנים
לבסוף, חוקרים משתמשים לעתים קרובות בהזרקת כרית כף הרגל כדי לנתח תגובה דלקתית. בניסוי זה, החוקרים בודדו תאים חד-גרעיניים מדם היקפי מדגימות דם אנושיות, ערבבו אותם עם אנטיגנים שונים לבדיקה והזריקו את התמיסות לכרית כף הרגל של החיה. לבסוף, הם ביצעו מדידות כף רגל כדי לכמת את תגובת הנפיחות עקב אנטיגנים שונים.
זה עתה צפיתם בפרק האחרון של JoVE על טכניקות מתן התרכובות הרגילות והמיוחדות.
רק לסיכום, בחלק הראשון סקרנו את המסלול הפרנטרלי הנפוץ ביותר. בפרק השני, דנו בהליכים האנטרליים והאקטואליים. הפרק השלישי עסק בקבוצה הראשונה של פרוצדורות לא טיפוסיות כמו תוך-עורית, תוך-אף ותוך גולגולת בילודים. לבסוף, כאן דנו בשלושה מסלולים נוספים שחוקרים ביו-רפואיים משתמשים בהם במעבדות למטרות ספציפיות.
לאחר צפייה בסדרה זו אתה אמור להבין הרבה יותר טוב את טכניקות הניהול השונות ועליך גם להכיר את השיקולים הכלליים והספציפיים הקשורים לפרוטוקולים אלה של מתן תרכובות כמו תמיד, תודה על הצפייה!
ניהול תרכובות לבעלי חיים יכול להיות בעל השפעה משמעותית הן על רווחת החיה והן על התוצאה של הנתונים הניסיוניים והערך המדעי. שיטת המסירה הנכונה חיונית להצלחת הניסוי. גורמים רבים חייבים להיחשב כדי לקבוע את המסלול הטוב ביותר, כולל המטרה המדעית של המחקר, ה- pH של החומר, נפח המינון הנדרש, צמיגות החומר, ואת הרווחה של בעלי החיים. מומחיות טכנית היא גם דרישה לכל שיטות ההזרקה.
Chapters in this video
0:00
Overview
0:44
Considerations for the Specialized Injections
2:16
Footpad Injection
3:42
Application
4:16
Summary
Videos from this collection: