Name: הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: למדו כיצד להכין תא בודד השעיות מטחול עכבר באמצעות gentleMACS Dissociator. שיטה אוטומטית זו מייצרת תאים חיים לניתוח זרימה ויישומים נוספים בתחום האימונולוגיה והביולוגיה התאית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מבוא ציוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות הוא ניתק בעדינות, בעזרת צינורות סגול C לתוך תא בודד השעיות קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המאגר PBS / BSA EDTA משמש לנתק את התאים. המאגר מוכן ידי הוספת 1 חלק מהפתרון במלאי BSA עד 20 חלקים autoMACS שטיפת פתרון המכיל EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MACS טרום ההפרדה מסננים משמשים כך דגימות רקמה ניתק הן ללא כל גושים התא, לקדם הפרדה MACS מוצלח וניתוח שלאחר מכן. </li></ol> Dissociating בתאי הטחול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Spleens שלמות disscociated לתוך תא בודד השעיות של splenocytes באמצעות Dissociator gentleMACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את ההליך, לטעון את Tube C בהיקף של המאגר על פי המסה של spleens. הטחול בריא של עכבר צעיר מבוגר נשים BALB / c שוקל כ 80-120 מ&quot;ג. כל 1-2 spleens של מסה זו דורשת 3 מ&quot;ל של המאגר. Spleens מבעלי חיים או בבעלי חיים מבוגרים עם זיהומים הם לעתים קרובות גדולים יש לשקול במאגר. נפח המאגר חייב להיות מדורגים בהתאם. לא יעלה על נפח המאגר כולל של 10 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את הטחול גזור אל התחתית C המכיל 3 מ&quot;ל של המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כובע Tube C הוא חזק לצרף את Tube C כדי dissociator עם כובע ומטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוח עד dissociator. במשך 1-2 spleens, בחר m_spleen_01 התוכנית. התוכנית ייקח 56 שניות כדי להשלים. אם מספר spleens גדול, להשתמש בתוכנית m_spleen_04: תוכנית זו יכולה לשמש עד 720 מ&quot;ג של רקמת טחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת התוכנית רקמת טחול יליד הוא ניתק לתוך השעיה splenocyte. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין את ההשעיה התא כולו בבת 300xg בטמפרטורת החדר למשך כ -30 שניות. זה יבטיח כי הרוטור ואת הסטטור משוחררים של כל התאים אשר נאספים בתחתית של התחתית C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המדגם דרך הפתח, מחצה חתום כובע Tube C באמצעות pipetter 1000 microliter. </li></ol> סינון צעד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את שלב הסינון, להחיל את רקמת ניתק על סנן ההפרדה טרום או מסננת תא בגודל 30 מיקרומטר הנקבוביות. מסננת צריך להתאים צינור 15 מ&quot;ל במשך 1-2 spleens או שפופרת 50 מ&quot;ל במשך יותר מ 2 spleens. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו ההשעיה התא לעבור. ואז לשטוף את המסנן על ידי יישום של 5 מ&quot;ל חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, צנטריפוגה הצינור עם ההשעיה התא 300xg, בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות כדי לאסוף את כל splenocytes בתא הטחול גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, שיש לנו גלולה של splenocytes ניתק, עלינו לשאוב supernatant ו resuspend התא גלולה בסכום המתאים של המאגר. </li></ol> דיסוציאציה הטחול באמצעות Dissociator gentleMACS תניב אחוז גבוה של splenocytes קיימא, אשר באה לידי ביטוי cytometry זרימה באמצעות Analyzer MACSQuant. תאים מתים הם מוכתמים על ידי יודיד propidium. בדוגמה סיפקה, לצד פיזור העלילה קדימה נקודה מציגה את splenocytes מוכן.

כל הפרוטוקולים וגליונות נתונים זמינים<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

כדי להימנע dissociations ידני מייגע וכואב לעיתים קרובות, את Dissociator gentleMACS מאפשרת לנתק רקמה ביעילות רבה בתנאים מבוקרים לשעתקו. ההליך רקמת ניתוק עדין לתאים התשואות השעיות תא עם קצב כדאיות גבוהה. Dissociator gentleMACS בשילוב עם C צינורות נועד להכנת תא בודד השעיות מרקמות שונות. המכשיר מצויד במספר שנקבע מראש תוכניות לנתק עכבר הטחול, הכבד, הריאות, או רקמה עצבית. מגוון של תוכניות ופרוטוקולים יורחב ברציפות לכלול רקמות נוספות.

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; ערכה התחלתית</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;קישור ל-&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>מבחנות C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;קישור ל-&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>מבחנות של 13 מ"ל</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;קישור ל-&quot;מבחנות 13 מ"ל עבור עמודי LS&quot;&gt;מבחנות 13 מ"ל עבור עמודי LS&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; תמיסת שטיפה </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;קישור ל-&quot;תמיסת שטיפה autoMACS&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; תמיסת מלאי של BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;קישור ל-&quot;מלאי תמיסת BSA עבור MACS&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>מסנני טרום-הפרדה </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;קישור ל-&quot;מסנני טרום-הפרדה&quot;&gt;מסנני טרום-הפרדה&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSQuant Analyzer</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פרופידיום יודיד</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;קישור ל-&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם dissociator gentlemacs

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

תא בודד המתלים הם תנאי הכרחי ניסויים ההפרדה התא, ניתוח התא תרבית תאים. כדי להימנע dissociations ידני מייגע וכואב לעיתים קרובות Dissociator gentleMACS מאפשרת לנתק רקמה ביעילות רבה בתנאים מבוקרים לשעתקו. Dissociator gentleMACS ניתן לנתק בצורה אופטימלית טחול עכבר, שילוב timesaving וסטנדרטיזציה עם בטיחות למשתמש. וידאו זה מתאר כיצד לנתק spleens העכבר באמצעות Dissociator gentleMACS, מכשיר אוטומטי הספסל העליון שיכולים לשבש באופן מכני לרקמות באמצעות צינורות מיוחדים כדי לייצר השעיות תא קיימא. בעקבות הניתוק, spleens מסוננים, centrifuged ו resuspended עבור יישומים נוספים.

וידאו זה מתאר פשוטים, חוסך זמן טכניקה ניתוק אוטומטי רקמות באמצעות Dissociator gentleMACS להכין תא בודד השעיות של splenocytes העכבר.

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

סספנסיות של תאים בודדים הן תנאי מקדמי לניסויים בהפרדת תאים, אנליזה של תאים ותרביות תאים. כדי להימנע מעבודה ידנית מייגעת ולעתים מכאיבה...

בפרוטוקול וידאו זה, תראו כיצד לבצע דיסוציאציה של טחורי עכבר באמצעות Gentle Max, מכשיר שולחני אוטומטי שיכול לפרק רקמות באופן מכני באמצעות מבחנות מיוחדות כדי להפיק תרחיפי תאים חיוניים. לאחר הדיסוציאציה, הטחורים מסוננים באמצעות מסנני הפרדה מסוג Max Pres, עוברים סנטריפוגה ומוסמקים ליישומים נוספים. שלום, שמי מלאני מלו.אני מדען ב-Milton Biotech כאן ב-BE Lab Park, גרמניה. היום אראה לכם את הכנת תרחיף תאים בודדים מטחול של עכבר באמצעות GenX dissociation. ה-GenX dissociation מאפשרת הכנה קלה ומהירה מאוד של תרחיף תאים בודדים.בואו נתחיל. כדי להימנע מדיסוציאציות ידניות מייגעות ולעיתים כואבות, ה-gentle max di associator מאפשר לבצע דיסוציאציה של רקמה ביעילות רבה תחת תנאים נשלטים וניתנים לשחזור. הרקמה עוברת דיסוציאציה עדינה באמצעות מבחנות violet C לת сусפנסיות של תאים בודדים חיוניים.השפופרת מסוג C כוללת פתח עם ספטום אטום במרכז המכסה, המאפשר להעביר נוזלים באמצעות פיפט מהשפופרת תוך שמירה מתמדת על סטריליות. כדי להשעות את התאים המופרדים, יהיה עליכם להשתמש בתמיסת PBS-BSA-EDTA המתאימה. את התמיסה מכינים על ידי הוספת חלק אחד של תמיסת מקור של BSA ל-20 חלקים של תמיסת AutoMax fencing המכילה EDTA.באמצעות מסנני ההפרדה Max Pres, דגימות רקמה מופרדות מכל גשמי תאים, דבר המקדם הפרדה מרבית מוצלחת ואנליזה לאחר מכן. כדי להתחיל את הפרוצדורה, אנו ממלאים את מבחנת ה-C בנפח של בופר. בהתאם למסת הטחולים, טחול בריא של עכברה נקבת בגיל שש עד שבעה שבועות שומשה לביופסיה שוקל כ-80 עד 120 milligrams.עבור כל אחד עד שני טחולים ממסה זו נדרשים שלושה מיליליטרים של בופר. אין לעלות על נפח כולל של 10 מיליליטרים. כעת ניתן להוסיף את הטחול שפורק לשפחור C המכיל שלושה מיליליטרים של בופר. טחולים מבעלי חיים מבוגרים או מבעלי חיים עם זיהומים הם לרוב גדולים יותר ויש לשקול אותם בתוך הבופר.יש להתאים את נפחי התמיכה בהתאם, אך שוב, הם לא יעלו על נפח כולל של 10 milliliters. כעת, ודאו שפקק צינור C סגור היטב וחברו את צינור C למכשיר הדיסוציאציה. כאשר הפקק פונה כלפי מטה, הפעילו את הדיסוציאציה עבור אחד עד שניים spleens ובחרו בתוכנית Program M spleen oh one. התוכנית תסתיים לאחר 56 שניות; אם מספר ה-spleens גדול יותר, השתמשו בתוכנית program M spleen oh four.ניתן להשתמש בתוכנית זו עבור עד 720 milligrams של רקמת טחול. לאחר השלמת התוכנית, רקמת הטחול הטבעית מתפרקת לתרחיף תאי PLE, שנראה כך; יש לסובב את הדגימה במערבל מרכז (centrifuge) לזמן קצר כדי לאסוף את הדגימה בתחתית המבחנה. פעולה זו תבטיח שהרוטור והסטטור יהיו נקיים מכל התאים שנאספו בתחתית מבחנת ה-C.אנו מוציאים את הדגימה דרך הפתח האטום בספטום במכסה של מבחנת ה-C באמצעות פיפט של 1000 µL. כדי להתחיל בשלב הסינון, אנו מעבירים את הרקמה הדיסוציאטית למסנן הפרדה מוקדם או למסננת עם גודל נקבים של 30 micron. המסננת צריכה להתאים למבחנה של 15 mL עבור אחד עד שני טחולים, או למבחנה של 50 mL עבור יותר משני טחולים.העבירו את תרחיף התאים דרך המסנן, ולאחר מכן שטפו את המסנן על ידי הוספת חמישה מיליליטר של בופר. כעת, סבבו את המבנה עם תרחיף התאים בצנטריפוגה ב-300 Gs בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות כדי לאסוף את כל התאים למשקע תאי טחול. כעת, כאשר יש לנו משקע של תאים מופרדים, יש לשאוב את העילאי ולהשעות מחדש את משקע התאים בכמות מתאימה של בופר להפרדת טחול.שימוש ב-gentle max יניב אחוז גבוה של PLE cytes חיוניים, כפי שמוצג בבדיקת flow cytometry באמצעות ה-max quant. תאים מתים נצבעים ב-Propidium iodide, כפי שמוצג בדוגמה. תרשים ה-dot plot של ה-forward side scatter מראה SP cytes שהוכנו. בסדר.הראיתי לכם כיצד לבצע דיסוציאציה של רקמת הטחול באמצעות שימוש ב-Gentle X dissociation עדינה זו. בעת ביצוע הליך זה, חשוב להתאים את כמות התמיכה (buffer) לגודל הדגימה ולבחור את תוכנית ה-Gentle X המתאימה. אוקיי, זה הכל.בהצלחה בניסוי שלך.

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מתארים את הכנת גורם תא T צמיחה המשמש הרחבה של מבחנה של אנטיגן ספציפי לערמונית קווי עכברוש T לימפוציטים.

הכנת פקטור T צמיחת תאים מן Splenocytes עכברוש

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים תסיסה רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת הריאות הוא הסביר.

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים aggitation רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi Dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת nerual הוא הסביר.

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

סרטון זה מדגים הליך להעברה מאומצת של תאים דנדריטיים מציגי אנטיגן (DCs) המטופלים במלח גבוה לעכברים. תאים דנדריטיים מסוג Murine CD11c+ (DCs) נחשפים למדיום המכיל כמויות גבוהות של נתרן, ויוצרים בתאים איזולבוגלנדין (IsoLG)-חלבון adducts. אדדוקטים אלה משמשים ניאואנטיגנים ומוצגים על פני השטח של DCs. התאים המטופלים במלח מוזרקים לעכברים באמצעות העברת תאים מאומצת.

שיטה לטיפול במלח גבוה בתאים דנדריטיים והעברתם המאומצת לעכברים

הסרטון מדגים הכנה של תרחיף חד-תאי של תאי חיסון מרקמת מוח מורינה. זה כרוך בעיכול אנזימטי כדי לשחרר תאים מרקמת המוח, ואחריו צנטריפוגה הדרגתית צפיפות כדי לבודד את תאי החיסון על בסיס הצפיפות שלהם כדי לקבל את ההשעיה של תא יחיד.

הכנת תרחיף חד-תאי של תאי מערכת החיסון מרקמת המוח המורין

Cytometry זרימה יכול להיות מנוצל כדי להעריך את מצב הכרומטין בתוך תאי T. פרוטוקול זה מאפשר למדענים להבין את העדות של decondensation הכרומטין במהלך הפעלת תא T הפגינה על ידי עלייה בעוצמת הפריחה הממוצעת (MFI) של נוגדני היסטון H3 ניאון...

השימוש בcytometry הזרימה מנת להעריך את המצב של הכרומטין בתאי T

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד תאים דנדריטים טחולים מאתר על ידי מיון מגנטי תא עוקבות המאמצת העברת לתוך תמים עכברים. המודל של תאים דנדריטים מופעל מלח גבוהה נבחר להסביר את ההליכים צעד אחר צעד של cytometry זרימה והעברת המאמצת.

בידוד והעברה המאמצת של מלח גבוהה מטופלים אנטיגן תאים דנדריטים

אנו מתארים כאן ניתוח פשוט של ההטרוגניות של תא תאי B החיסוניים המוריניים ברקמות הצפק, הטחול ומח העצם על ידי ציטומטריית זרימה. הפרוטוקול יכול להיות מותאם ומורחב לרקמות עכבר אחרות.

אפיון ציטומטרי זרימה של פיתוח תאי מורין B

כאן אנו מציגים שיטה פשוטה ויעילה לבודד תאי חיידקים מיוטיים ופוסט-מיוטיים חיים מערכי עכבר בוגרים. באמצעות ציטוקסיות נמוכה, צבע מחייב DNA סגול-נרגש ומיון תאים המופעלים על-ידי פלואורסצנה, ניתן לבודד אוכלוסיות תאי זרע מועשרים מאוד עבור יישומים רבים במורד הזרם.

בידוד של תאי זרע מורין באמצעות צבע מחייב DNA סגול-נרגש תא חרוש

מאמר זה מתאר פרוטוקול לצבירה ומעטפת של תאי טחול בתוך מטריצת קרום מרתף מוצקה למחצה. מבני מטריצת קרום מרתף יכולים לשמש בתרבית תלת ממדית לחקר התפתחות אורגנואידים, או למחקרי השתלות in vivo והתחדשות רקמות.

מטריצת קרום מרתף צבירת תאים עטופה לחקר היווצרות רקמת טחול מורין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד אקסוזומים שמקורם בטחול עכברים באמצעות שילוב של עיכול עם קולגן מסוג I ואולטרה-צנטריפוגה.

בידוד ואפיון אקסוזומים שמקורם ברקמת הטחול של העכבר

למדו כיצד להכין תא בודד השעיות מטחול עכבר באמצעות gentleMACS Dissociator. שיטה אוטומטית זו מייצרת תאים חיים לניתוח זרימה ויישומים נוספים בתחום האימונולוגיה והביולוגיה התאית.

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

גלה סרטונים נוספים