$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ניסויים רבים דורשים שתרכובת תינתן לבעל חיים דרך הפה או דרך המקום, כך שהשיטה תחקה טוב יותר את הצריכה הטבעית של החומר הניסיוני.
למינון דרך הפה, ניתן להמיס את התרכובת במי השתייה או לשלב אותה במזון שבעלי החיים צורכים. שיטה נוספת ומדויקת יותר למינון דרך הפה היא גבאז' דרך הפה שבו משתמשים במחט גדולה כדי להניח את התרכובת ישירות לתוך הקיבה. מצד שני, ניתן להניח חומר מקומי ישירות על פני העור, והוא נועד בדרך כלל להשפיע רק על האזור עליו הוא מוחל. לכל אחת מהאסטרטגיות הללו יתרונות ומגבלות, עליהם נדון בסרטון זה. לאחר מכן נדגים כיצד לבצע את טכניקות מתן התרכובות הללו בחיות מעבדה, וחלק מהיישומים שלהן.
לפני שנעמיק בפרוטוקולים, בואו נסקור את השיקולים, היתרונות והחסרונות של טכניקות אלה. מינון דרך הפה עם טבליות, כמוסות או נוזל הוא השיטה הנפוצה ביותר למתן תרופות בבני אדם. עם זאת, טבליות וקפסולה אינן מעשיות עבור מכרסמים, ולכן המינון האוראלי הנפוץ מושג על ידי המסת התרכובת במי השתייה או במזון.
כאשר משתמשים במינון באמצעות מי שתייה, לעתים קרובות מוסיפים סוכרוז למים כדי לשפר את הטעם. עם זאת, יש לאזן אותו היטב כדי לעודד צריכת מים רגילה ולא שתייה מוגזמת בגלל הטעם הממותק. כלל טוב הוא להתחיל עם תמיסת סוכרוז של 10%, ולאחר מכן להתאים בהתאם לצריכה. דרך נוספת למנות את החיה דרך הפה היא באמצעות מזון מיוחד. יש מזון זמין מסחרי שיש בו תרכובות במינון נפוץ, כגון פנבנדזול, משולבות בו. חברות המזון למכרסמים יכולות גם ליצור דיאטות בדיקה מיוחדות כדי לעמוד בדרישת ניסוי.
היתרונות בצורת מינון פומית זו הם שהיא אינה פולשנית, נותנת את התרכובת באופן רציף ומחקה מתן תרופות דרך הפה בבני אדם. עם זאת, הוא חסר דיוק מכיוון שצריכת התרכובת תלויה בקבלת המזון או המים, ביציבות התרכובת ובמספר בעלי החיים הנמצאים בכלוב. אם המינון המדויק אינו קריטי לניסוי, שיטה לא פולשנית זו היא הטובה ביותר לרווחת בעלי החיים.
למתן אוראלי מדויק יותר, ניתן להשתמש בגבאז' דרך הפה, המפקיד את התרכובת ישירות לקיבה בזמן מסוים ובנפח מוגדר. עם זאת, נדרש אימון נכון לביצוע טכניקה זו מכיוון שנזק חמור לבעל החיים עלול להתרחש אם הם לא מרוסנים כראוי.
בהתייחס לתרופות מקומיות, אלה כוללות קרמים, קרמים, משחות, תרסיסים וג'לים. בדרך כלל, חומרים מקומיים נועדו להשפיע רק על האזור עליו הם מיושמים. עם זאת, הם יכולים גם להיספג בזרם הדם, מה שעשוי להיות מכוון או לא מכוון. ספיגה זו תלויה ב: מצב העור, שטח הפנים המנוצל, ריכוז החומר, משך המגע ומסיסות השומנים של החומר.
כעת, לאחר שדנו ברקע של שיטות מתן אוראלי ומקומי, בואו נלמד את הפרוטוקולים החל ממתן דרך הפה באמצעות הזנה או מים.
לחישובי מינון, ראשית עליך לדעת את המינון המיועד למתן שנית, אתה צריך לקבוע את משקל הגוף. במקום לשקול בעלי חיים בודדים, אתה יכול להשתמש במשקל הממוצע של זן העכבר או החולדה לחישובים שלך, אלא אם צוין אחרת. שלישית, עליכם להיות מודעים למספר בעלי החיים בכלוב, ורביעית, עליכם לדעת את צריכת המים או המזון היומית הממוצעת לכלוב.
זכור, ייתכן שיהיה צורך להחליף את המזון המנוסח או את מי השתייה עם התרכובת המומסת בתדירות גבוהה יותר מאשר מזון או מים רגילים עקב חוסר יציבות של התרכובת. תרכובות מסוימות עשויות להיות רגישות לאור או עלולות לשקע עם הזמן.
כעת, בואו נלמד כיצד לתת מינונים מדויקים דרך הפה על ידי ביצוע גבאז' דרך הפה בעכברים וחולדות.
השלב הראשון הוא בחירת מחט מתאימה להליך. אלה ניתנים לשימוש חוזר המורכבים מפלדת אל חלד או חד פעמיים עם פיר פלסטיק גמיש וקצה סיליקון. עבור עכברים, מחטי מינון ישרות או מעוקלות בגודל 20-25 באורך 1.5 אינץ' מתאימות. עבור חולדות, בחר מחטי מינון ישרות או מעוקלות בגודל 18-20 באורך 2-3 אינץ'. מד המחט הנכון ובחירת המזרק תלויים גם בנפח ובצמיגות. עיין בסרטון ניהול המתחם I כדי להבין את ההשפעה של גורמים אלה. למינון נוזלים סמיכים עדיף מזרק נעילת לואר.
לאחר ביצוע הבחירה, הצמד את המזרק למחט כך שניתן יהיה לקרוא את הסימונים על הקנה מבלי לסובב את המחט. זה חשוב מכיוון שברגע שהמחט הוכנסה לוושט, כל סיבוב יכול לקרוע את דופן הוושט וכתוצאה מכך למוות של בעל החיים. לאחר מכן, מלאו את המזרק בנפח הנכון של התמיסה שתינתן.
שיטה זו צריכה להתבצע תמיד על בעלי חיים בהכרה עם רפלקסים שלמים של בליעה כדי למנוע הכנסה מקרית לקנה הנשימה. שימוש בטכניקת ריסון נכונה הוא קריטי להליך זה. עבור עכבר, אחוז בעור בבסיס הראש והחזק את הקשקוש בחוזקה. זה מבטיח שלראש יש הזדמנות מינימלית לתנועה מצד לצד. כמו כן, וודאו שהגוף תלוי בקו ישר מהראש לזנב; כל פיתול יעכב את מיקום מחט הגאווג' בוושט. יש לייצב גם את החלק האחורי כדי למנוע סיבוב גוף.
כדי לרסן חולדה, אחוז בה מעל הכתפיים באמצעות האצבע המורה והאמצעית בכל צד של הצוואר. זה ימנע מהחולדה לסובב את ראשה מצד לצד. האגודל, האצבע השלישית והרביעית מקיפות את החזה כדי למנוע מהחיה לנוע קדימה או אחורה.
לאחר שריסנת כראוי את החיה, מקם את המחט כשהעיקול פונה כלפי מטה ובקו אחד עם הקימור הטבעי של הצוואר. לאחר מכן, הכניסו את המחט לפה מצד ימין או שמאל, דרך הדיאסטמטה ובין החותכות והטוחנות בזווית לכיוון החלק האחורי של הלוע. כעת, כשהמחט מונחת בחלל הפה, השתמש בה כדי להטות את הראש לאחור עד שהאף מופנה כלפי מעלה. בשלב זה, המחט צריכה להחליק בקלות לוושט. לאחר שהמחט ממוקמת בקיבה, הפקידו בעדינות את התרכובת. לאחר מכן, הסר את המחט מהחיה, הקפד לא לסובב אותה. חשוב לא להכריח את המחט כלפי מטה. אם אתה מרגיש התנגדות כלשהי, הסר אותה ונסה שוב. בזמן ביצוע ההליך, אם החיה מראה סימנים של ציאנוזה או מצוקה נשימתית או אם יש תמיסה שזורמת מפיה, יש להסיר מיד את מחט המינון ולשחרר את החיה לכלוב שלה.
לבסוף, בואו נסקור את הנהלים למתן מקומי בחיות מעבדה. התחל בהרדמת החיה. זה נעשה בדרך כלל באמצעות משאף מהיר פעולה, המאפשר התאוששות מהירה של בעלי חיים. לפרטים נוספים על מתן הרדמה, אנא ראה סרטון נוסף באוסף זה.
לאחר מכן, בעזרת קוצץ שיער הסר את כל הפרווה מאזור היישום. כדי למנוע חתכים, הנח את המשטח השטוח של הקוצץ על העור והתגלח בכיוון ההפוך לזה של צמיחת השיער. לאחר מכן, נקו את העור במים וייבשו אותו עם פד גזה. כעת, בעזרת אפליקטור עם קצה כותנה, מרחו את החומר ישירות על העור. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש למרוח מספר שכבות דקות של משחה או קרם, בניגוד למריחה חד פעמית של שכבה עבה. כדי למנוע בליעה מקרית של תרכובת המיושמת באופן מקומי עקב טיפוח, הנח קולר קטן או מגן כדי למנוע מהחיה להגיע לחלק הגוף הפגוע. יתר על כן, כדי למנוע אלוגרום מחברים לכלוב, יש לשכן את בעלי החיים בנפרד.
כעת, לאחר שהבנתם את דרכי המתן החלופיות הללו, בואו נראה כיצד הם משמשים במחקר ביו-רפואי כיום.
אחד היישומים החשובים של גבאז' דרך הפה הוא מתן מדויק של חומרים כדי לחקור את השפעתם הישירה על מערכת העיכול. כאן, החוקרים השתמשו בשיטה זו כדי להעביר שמרים פרוביוטיים שעברו טרנספורמציה ישירות לקיבת החיה. ואז הם ניתחו את מדבקות פייר, שהן גושי לימפה מאורגנים מהמעי הדק, כדי לחקור את הדבקות של המיקרואורגניזם שנמסר.
ניתן להשתמש בנתיב האוראלי הלא פולשני כדי לחקות את האופן הטבעי של זיהום הנישא במזון. בניסוי זה פיתח המדען מודל להעברה אוראלית של ליסטריה מונוציטוגנס בעכברים באמצעות בליעת מזון מזוהם. לאחר ההדבקה, החוקרים קצרו איברים שונים כמו המעי הדק, המעי הגס, הטחול, הכבד וכיס המרה, כדי לנתח את התפשטות הזיהום לרקמות אלה.
לבסוף, חלק מהחוקרים מעוניינים לחקור את המנגנון שבאמצעותו קרינת UV עלולה להוביל לכוויות שמש. כאן, המדענים השתמשו בדרך מקומית כדי ליישם חומר פרמקולוגי המשרה ייצור של מלנין אפידרמיס - חומר מגן UV. לאחר מכן, הם השתמשו בפרוטוקול הדומה למחקרים בבני אדם כדי לבחון את ההשפעה המגנה של החומר המיושם באופן מקומי מפני אריתמה הנגרמת על ידי קרינת UV.
זה עתה צפיתם בפרק השני של JoVE של שיטות מתן מורכבות העוסקות במינון אוראלי ומקומי. כעת עליכם להבין כיצד ניתן לתת לבעל החיים מינון דרך הפה באמצעות מזון או מים, וכיצד ניתן לבצע את המתן המדויק יותר, דרך הפה. לבסוף, עליך להכיר את השיקולים והשיטה למתן מקומי, ואת היישומים של טכניקות שונות אלה. כמו תמיד, תודה שצפית!