ניהול מתחם II

JoVE Science Education
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Science Education Lab Animal Research

Compound Administration II

Previous Video

5.3: Fundamentals of Breeding and Weaning

Next Video

5.14: Diagnostic Necropsy and Tissue Harvest

35,582 Views

•

12:32 min

•

August 24, 2015

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג’י, אר-אל-ג’י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

ניהול מורכב הוא לעתים קרובות מרכיב אינטגרלי של מחקר בבעלי חיים. גורמים רבים צריכים להיות מוערכים כדי להבטיח כי המתחם מועבר כראוי. תוואי הניהול משפיע על מנגנוני הקליטה. מאפייני החומר שיש להציג (ה- pH, הצמיגות והריכוז) עשויים להכתיב איזה מסלול של ניהול נבחר.1,2,3

Principles

שני מסלולי הניהול העיקריים הם אנטריים (דרך מערכת העיכול) והורה (מנוהל מחוץ למערכת העיכול). בחירת מסלול הניהול נקבעת בעיקר על פי דרישות המחקר. היתרון העיקרי במינון parenteral הוא כי המתחם אינו נתון חילוף החומרים בכבד, וכתוצאה מכך זמינות ביולוגית גבוהה יותר. עם זאת, ישנם פרוטוקולים ניסיוניים רבים הדורשים את התרכובות להינתן דרך הפה כדי לחקות טוב יותר את הצריכה הטבעית של חומר. המסלול הטוב ביותר לנצל נקבע על ידי המאפיינים של מתחם הבדיקה.

מנונים אוראליים היא השיטה הנפוצה ביותר של מתן תרופות בבני אדם. זה נעשה עם טבליות, כמוסות, או צורות נוזליות של תרופות. טבליות וניהול כמוסה אינו מעשי במכרסמים, ולכן מנוני הפה הנפוצים לעכברים וחולדות מושגת על ידי המסת המתחם במי שתייה, באמצעות מזון מיוחד המשלב את תרכובת הבדיקה בנוסחה, או על ידי הצבת המתחם בפינוקים. כאשר מנונים באמצעות מי שתייה, סוכרוז מתווסף לעתים קרובות למים כדי לשפר את החוך. עם זאת, זה צריך להיות מאוזן היטב כדי לעודד צריכת מים נורמלית ולא שתייה מופרזת בגלל הטעם המתקתק.

מחקרים רבים הראו כי gavage אוראלי חוזר הוא מלחיץ הן עכברים וחולדות^. ^4,5 זה גם עבודה אינטנסיבית עבור צוות הטיפול בבעלי חיים. יש הזנה זמינה מסחרית כי יש בדרך כלל תרכובות מנוקב – כגון fenbendazole, אשר משמש כדי לחסל טפילים מכרסמים משולבים בו. חברות אחרות מספקות תרופות המכילות תרופות נוגדות דלקת, משכך משכך, תרופות נגד התרופות או אנטיביוטיקה. חברות הזנה המייצרות את הדיאטות המתגבשות לעכברים וחולדות ייצרו דיאטות בדיקה מיוחדות כדי לעמוד בדרישה ניסיונית. מעבדות רבות ניסחו פינוקים משלהן עם שימוש בדבש, חמאת בוטנים או ג’לטין בטעם פירות. ^4,5

מנונים אוראליים חסרים דיוק מכיוון שצריכת תרכובת תלויה בקבלת המזון או המים, ביציבות המתחם ובמספר בעלי החיים הנמצאים בכלוב. עם זאת, אם מינון מדויק אינו קריטי לניסוי, שיטה לא פולשנית זו של מינון היא הטובה ביותר לרווחתם של בעלי החיים.

gavage אוראלי היא שיטה הרבה יותר מדויקת של מימון אנטרי, כפי שהוא מאפשר את התצהיר של המתחם ישירות לתוך הבטן של החיה בזמן מסוים ובנפח שצוין. עם זאת, הכשרה נדרשת כדי להבטיח הצלחה. איפוק נכון של החיה חיוני להצלחת טכניקה זו. פגיעה בחלל הפה, הלוע, הגרון, קנה הנשימה, הוושט והבטן יכולה לנבוע ממיצוב לא תקין של הראש והגוף. החיה חייבת להיות אוחזת בחוזקה, כך שהראש אינו מסוגל לסובב, כדי למנוע פציעות כאלה.

מחטי מנונים זמינות בפורמטים הניתנים שימוש חוזר או חד פעמי. למרות יקר, השימוש במחטים חד פעמיות מסיר את האיום של זיהום צולב בעת מנונים בעלי חיים מרובים. ישנם מספר גדלים של מחטי gavage, החל 20-22 מד לעכברים ו 18-20 מד לחולדות. הבחירה של מחט נקבעת על ידי גודל החיה, נפח הנוזל, ואת הצמיגות של הפתרון להיות מנוהל.

gavaging אוראלי צריך להתבצע על חיה מודעת כדי להקטין את האפשרות של הצבת המחט לתוך קנה הנשימה. בעל חיים בהכרה ישמור על רפלקס הבליעה, כמו גם על רפלקס ההקאה, מה שיקל על המיקום הנכון לוושט. מחקר נערך מדגים כי precoating מחט gavage עם סוכרוז גרם רפלקס הבליעה והפחית את כמות הזמן הדרוש כדי להעביר את המחט לתוך הוושט. ⁶

סוכן אקטואלי כי הוא ממוקם ישירות על פני השטח של העור נועד בדרך כלל להשפיע רק על האזור שבו הוא מוחל. אלה יכולים להיות קרמים, קרמים, משחות, קצף, או ג’לים. כמו בעלי חיים נוטים לטפח את האזור שבו הסוכן מוחל, הרעילות של צריכת הפה חייב להיחשב.

תרכובות מנוהלות topically מנוסחות להיספג דרך שכבות הדרמיס ואת החלל התת עורי באמצעות זקיקי השיער ואת בלוטות האביזר. גורמים המשפיעים על ספיגת התרכובות כוללים את מצב העור, את שטח הפנים מנוצל, את ריכוז החומר, את מסיסות השומנים של המתחם, ואת משך הזמן שהוא במגע עם פני העור. שכבות עור לחות ודקות יקטין את זמן הספיגה.

בעת החלת חומר topically, יש סיכוי לספיגה מערכתית בשל בעלי החיים טיפוח האזור. יש לנקוט באמצעי מניעה כדי למנוע בליעה בתאונה או הסרה מוקדמת של החומר. צווארונים קטנים או מגנים זמינים כדי למנוע מהבעל החיים להגיע לחלקי גוף מושפעים. דיור פרטי עשוי להידרש גם כדי למנוע allogrooming מבני זוג בכלוב.

Procedure

1. יישום אקטואלי

לפני החלת משחות וקרמים, להסיר את כל הפרווה מהאזור באמצעות קרם depilatory או על ידי גילוח.
מנקה ויבש את העור ביסודיות.
יש למרוח את החומר ישירות על העור באמצעות אפליקטור עם קצה כותנה או באמצעות טיפה הממוקמת ישירות כדי להימנע ממגע עם הטכנאי.
לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש למרוח מספר שכבות דקות של משחה או קרם בניגוד ליישום חד פעמי של שכבה עבה.
יש למרוח נוזל על ידי פרידה מהשיער והחלת טיפה על העור החשוף.
בעת החלת חומר topically, יש סיכוי של ספיגה מערכתית בשל בעלי החיים טיפוח האזור. יש לנקוט באמצעי מניעה כדי למנוע בליעה בתאונה או הסרה מוקדמת של החומר. צווארונים קטנים או מגנים זמינים כדי למנוע מהבעל החיים להגיע לחלקי גוף מושפעים. דיור פרטי עשוי להידרש גם כדי למנוע allogrooming מבני זוג בכלוב.

איור 1. יישום אקטואלי בעכברים.

2. מנונים אוראליים

בעת מתן תרכובות לבעלי חיים באמצעות הזנה או מים, יש לחשב מינון יומי מינימלי המבוסס על משקל הגוף. המשקל הממוצע של זן העכבר או העכברוש המשמש בניסוי יכול לשמש כדי לבצע את החישובים, אלא אם כן צוין כי כל חיה ישקול ואת המינון הבין עבור כל אדם.
עבור פרוטוקולים הדורשים כי צריכת מזון ו / או מים להימדד במדויק, בעלי חיים צריכים להיות מאוכסנים בנפרד.
ניתן לייצר הזנה או פינוקים מיוחדים כדי לענות על הצרכים הניסיוניים.
1. החלף את הדיאטה הסטנדרטית עם אחד מנוסח, אשר מאפשר לבעלי החיים לבלוע את המתחם לאורך כל היום.
2. ייתכן שיהיה צורך להחליף את המזון בתדירות גבוהה יותר מאשר מזון רגיל בשל חוסר יציבות מתחם.
חומרים עשויים להינתן גם על ידי המסתם במי השתייה, ומאפשר לבעלי החיים לקבל תרכובת לאורך כל היום
1. כמות קטנה של סוכר מתווספת למים כדי להפוך אותו טעים. הכמות המדויקת להוסיף נקבעת על ידי קבלת המים על ידי העכברים. השתמש בהפרש המרווח הקטן ביותר האפשרי.
2. תדירות שינוי המים תלויה ביציבות המתחם. חומרים מסוימים עשויים להיות רגישים לאור או לזרז לאורך זמן.

3. הליך גבאג’

20-25 מד x 1.5 מחטי מנונים ישר או מעוגל משמשים לעכברים. עבור חולדות, 18-20 מד x 2-3 מחטי מנונים ישר או מעוקל משמשים. אלה זמינים כמו מחטי נירוסטה רב פעמיות או כמו מחטים חד פעמיות. המחטים החד פעמיות יכולות להיות מתכת או פיר פלסטיק גמיש עם קצה סיליקון.

חבר את מחט המנונים למזרק שנבחר בהתבסס על הנפח והצמיגות של פתרון הבדיקה. עבור מנונים נוזלים עבים, מזרק מנעול Luer הוא מועדף. אלה זמינים בדרך כלל החל בגודל 3 סמ”ק שיש לו 100 טקסי סיום μl. זה לא יכול להיות מתאים לנפחים קטנים יותר או כאשר יש צורך בנפחי מינון מדויק במרווחים קטנים יותר.
הצמד את המזרק למחט כך שניתן יהיה לקרוא את טקסי הסיום על החבית מבלי לסובב את המחט. לאחר המחט הונח לתוך הוושט, כל סיבוב יכול לקרוע את הוושט, וכתוצאה מכך מותו של החיה.
מלא מזרק בנפח המאמר המתאים שיש לנהל (נפח אופטימלי = 5 מ”ל/ק”ג ונפח מרבי = 20 מ”ל/ק”ג)⁴
האיפוק הנכון חיוני להליך זה. ⁷
1. לרסן עכברים באופן ידני על ידי אחיזת העור בבסיס הראש וקשקושם. חשוב כי הגוף להיות מוחזק כך שהוא מושעה בקו ישר מהראש לזנב. כל פיתול של הגוף יעכב את המיקום של מחט gavage לתוך הוושט.
2. תפס את הקשקוש בחוזקה כך שלראש יש תנועה מינימלית מצד לצד. יש לייצב את אחוריו כדי למנוע סיבוב גוף.
3. לתפיסת חולדה, תפסו אותה מעבר לכתפיים באמצעות האינדקס והאצבעות האמצעיות בכל צד של הצוואר, וכף היד על גב החיה. האצבעות האגודל, השלישי והרביעי צריכות להקיף את החזה כדי למנוע את החיה על היכולת לנוע קדימה או אחורה. מיקום האצבעות בכל צד של הצוואר מונע מהעכברוש לסובב את ראשו.
4. חשוב שהגוף יהיה בקו ישר ולא יעוות כדי לסייע במיקום מחט הגאבאג’ ללא נזק לפה, הלוע, הוושט או הקיבה.
5. ודא שלראש אין תנועה עודפת מצד לצד.
6. ניתן לייצב את אחוריו כדי למנוע את סיבוב הגוף. זה מושג על ידי מתן אפשרות לרגליים האחוריות לנוח על הדלפק או על החלק העליון של הכלוב.
ניהול החומר
1. מקם את המחט עם העקומה הפונה כלפי מטה ופניית עם העקומה הטבעית של הצוואר. הציגו את המחט לתוך הפה מצד ימין או שמאל, בין החותכות והטוחנות בזווית לכיוון החלק האחורי של הלוע.
2. ברגע המחט היא בחלל הפה, להטות את הראש בחזרה באמצעות מחט gavage עד האף הוא הצביע למעלה. זה חשוב במיוחד בעת שימוש מחטים ישר. המחט צריכה להחליק בקלות לתוך הוושט. אל תכריח את המחט לרדת. אם כל התנגדות מורגשת, גב את המחט החוצה ונסה שוב.
3. ברגע המחט היא בעמדה בבטן, בעדינות להפקיד את המתחם.
4. הסר את המחט, מוודא כי אין סיבוב של מחט מעוקלת מתרחשת.
5. אם החיה מתחילה להיאבק, להסיר את מחט מנונים ולרסן את החיה בצורה בטוחה יותר.
6. בעת ביצוע ההליך, אם החיה מראה סימנים של כיחלון או מצוקה נשימתית, או אם יש פתרון זורם מפיו, יש להסיר מיד את המחט מינון ואת החיה שוחררה לכלוב שלה.
7. באופן כללי, כאשר gavaging חולדות ועכברים, במיוחד עם חומר קאוסטית, מומלץ בפועל כדי לספק באופן אינטימי כמות קטנה – כדי לבדוק שיעול – לפני הנפח כולו ניתן. בדרך זו, אם המחט ממוקמת באופן שגוי, הנפח המועבר לריאות הוא קטן ולבעל החיים יש סיכוי טוב יותר להחלמה.

איור 2. תוחם אוראלי בעכברים (משמאל) וחולדות (מימין).

ניסויים רבים דורשים כי תרכובת תנוהל לתוך בעל חיים באמצעות מסלול אוראלי או אקטואלי, כך שהשיטה מחקה טוב יותר את הצריכה הטבעית של החומר הניסיוני.

עבור מנונים אוראליים, המתחם יכול להיות מומס לתוך מי השתייה או לשלב לתוך המזון כי בעלי החיים צורכים. שיטה נוספת, מדויקת יותר של מימון אוראלי היא gavage אוראלי שבו מחט גדולה משמשת למקם את המתחם ישירות לתוך הבטן. מצד שני, סוכן אקטואלי יכול להיות ממוקם ישירות על פני העור, והוא נועד בדרך כלל להשפיע רק על האזור שבו הוא מוחל. לכל אחת מהאסטרטגיות הללו יש יתרונות ומגבלות, אשר נדון בסרטון זה. לאחר מכן נדגים כיצד לבצע טכניקות ניהול מורכבות אלה בחיות מעבדה, וחלק מהיישומים שלהם.

לפני שנתעמק בפרוטוקולים, הבה נסקור את השיקולים, היתרונות והחסרונות של טכניקות אלה. מנונים אוראליים עם טבליות, כמוסות, או נוזל היא השיטה הנפוצה ביותר של מתן תרופות בבני אדם. עם זאת, טבליות כמוסה אינם מעשיים עבור מכרסמים, ולכן מנונים אוראליים נפוצים מושגת על ידי המסת המתחם במי השתייה או במזון.

כאשר מנונים באמצעות מי שתייה, סוכרוז מתווסף לעתים קרובות למים כדי לשפר את החוך. עם זאת, זה צריך להיות מאוזן היטב כדי לעודד צריכת מים נורמלית ולא שתייה מופרזת בגלל הטעם המתקתק. כלל טוב הוא להתחיל עם פתרון סוכרוז 10%, ולאחר מכן להתאים בהתאם לצריכה. דרך נוספת במינון בעל פה היא באמצעות מזון מיוחד. יש הזנה זמינה מסחרית כי יש תרכובות מנוקב בדרך כלל, כגון fenbendazole, משולב בו. חברות הזנת המכרסמים יכולות גם ליצור דיאטות בדיקה מיוחדות כדי לעמוד בדרישה ניסיונית.

היתרונות עם צורה זו של מנון אוראלי הם שזה לא פולשני, מנהל את המתחם ברציפות, ומחקה את ניהול התרופה האוראלית האנושית. עם זאת, הוא חסר דיוק כי צריכת מתחם תלויה בקבלת המזון או המים, היציבות של המתחם, ואת מספר בעלי החיים הנוכחים בכלוב. אם מנון מדויק אינו קריטי לניסוי, שיטה לא פולשנית זו היא הטובה ביותר לרווחת בעלי החיים.

לקבלת ניהול אוראלי מדויק יותר, ניתן להשתמש gavage אוראלי, אשר מפקיד את המתחם ישירות לתוך הבטן בזמן מסוים ובנפח שצוין. עם זאת, אימון נכון נדרש לבצע טכניקה זו כי נזק חמור לחיה יכול להתרחש אם הם לא מרוסנים כראוי.

מגיעים סוכנים אקטואלי, אלה כוללים קרמים, קרמים, משחות, תרסיסים, וג’לים. בדרך כלל, סוכנים אקטואליים נועדו להשפיע רק על האזור שעליו הם מוחלים. עם זאת, הם יכולים גם להיספג למחזור הדם, אשר עשוי להיות מכוון או לא מכוון. ספיגה זו תלויה: מצב העור, שטח הפנים מנוצל, ריכוז החומר, משך המגע, ואת מסיסות השומנים של הסוכן.

עכשיו כשדיברנו על הרקע של שיטות ניהול בעל פה ואקטואלי, בואו ללמוד את הפרוטוקולים החל עם ניהול בעל פה באמצעות הזנה או מים.

עבור חישובי מינון, ראשית אתה צריך לדעת את המינון המיועד להיות מנוהל. שנית, אתה צריך לקבוע את משקל הגוף. במקום לשקול בעלי חיים בודדים, אתה יכול להשתמש במשקל הממוצע של העכבר או זן חולדה עבור החישובים שלך, אלא אם צוין אחרת. שלישית, אתה צריך להיות מודע למספר בעלי החיים לכלוב, ורביעית, אתה צריך לדעת את צריכת המים היומית הממוצעת לכל כלוב.

זכור, המזון מנוסח או מי השתייה עם המתחם מומס ייתכן שיהיה צורך להחליף בתדירות גבוהה יותר מאשר מזון רגיל או מים בשל חוסר יציבות מתחם. תרכובות מסוימות עשויות להיות רגישות לאור או עשויות לזרז לאורך זמן.

עכשיו, בואו ללמוד איך דרך הפה לנהל מינונים מדויקים על ידי ביצוע gavage אוראלי בעכברים וחולדות.

הצעד הראשון הוא לבחור מחט מתאימה להליך. אלה עשויים או שימוש חוזר עשוי נירוסטה או חד פעמי עם פיר פלסטיק גמיש קצה סיליקון. עבור עכברים, 20-25 מד ישר או מחטי מנונים מעוקלות כי הם 1.5 אינץ ‘אורך מתאימים. עבור חולדות, בחר 18-20 מד ישר או מחטי מנונים מעוקלות כי הם 2-3 אינץ ‘אורך. מד המחט הנכון ובחירת המזרק תלויים גם בנפח ובצמיגות. סקור את מנהל המתחם אני וידאו כדי להבין את ההשפעה של גורמים אלה. עבור מנונים נוזלים עבים מזרק מנעול Luer הוא מועדף.

לאחר ביצוע הבחירה, הצמיד את המזרק למחט כך שניתן לקרוא את טקסי הסיום על החבית מבלי לסובב את המחט. זה חשוב כמו פעם המחט הונח לתוך הוושט כל סיבוב יכול לקרוע את דופן הוושט וכתוצאה מכך מותו של החיה. לאחר מכן, מלא את המזרק באמצעי האחסון הנכון של הפתרון שיש לנהל.

שיטה זו צריכה תמיד להתבצע על בעלי חיים מודעים עם רפלקסים בליעה שלמים כדי למנוע מיקום מקרי לתוך קנה הנשימה. שימוש בטכניקת איפוק נאותה הוא קריטי עבור הליך זה. לעכבר, תפסו את העור בבסיס הראש והחזקו את הקשקוש בחוזקה. זה מבטיח שלראש יש הזדמנות מינימלית לתנועה מצד לצד. כמו כן, ודא כי הגוף תלוי בקו ישר מהראש לזנב; כל פיתול יעכב את המיקום של מחט הגאבאג’ לוושט. יש לייצב גם את אחוריו כדי למנוע את סיבוב הגוף.

כדי לרסן חולדה, לתפוס אותו מעבר לכתפיים באמצעות האינדקס והאצבעות האמצעיות בכל צד של הצוואר. זה ימנע מהעכברוש לסובב את ראשו מצד לצד. האצבעות האגודל, השלישי והרביעי כתרות את החזה כדי למנוע מהחיה לנוע קדימה או אחורה.

לאחר שריסנת כראוי את החיה, מקם את המחט עם העקומה הפונה כלפי מטה ובהתיישר עם העקומה הטבעית של הצוואר. לאחר מכן, להציג את המחט לתוך הפה מצד ימין או שמאל, דרך diastemata ובין החותכות והטוחנות בזווית לכיוון החלק האחורי של הלוע. עכשיו כי המחט ממוקמת בחלל הפה, להשתמש בו כדי להטות את הראש בחזרה עד האף הוא הצביע למעלה. בשלב זה, המחט צריכה להחליק בקלות לתוך הוושט. ברגע המחט ממוקמת בבטן, בעדינות להפקיד את המתחם. לאחר מכן, להסיר את המחט מן החיה, הקפדה לא לסובב אותו. חשוב לא לכפות את המחט למטה. אם אתה חש התנגדות כלשהי, הסר אותה ונסה שוב. בעת ביצוע ההליך, אם החיה מראה סימנים של כיחלון או מצוקה נשימתית או אם יש פתרון זורם מפיו, מחט מינון יש להסיר מיד את החיה צריך להשתחרר לכלוב שלה.

לבסוף, בואו לסקור את הנהלים לניהול אקטואלי בחיות מעבדה. התחל על ידי מרדים את החיה. זה נעשה בדרך כלל באמצעות משאף פעולה מהיר, המאפשר התאוששות מהירה של בעלי חיים. לקבלת פרטים נוספים על ניהול הרדמה, אנא עיין בסרטון נוסף באוסף זה.

לאחר מכן, באמצעות קוצץ שיער להסיר את כל הפרווה מאזור היישום. כדי למנוע חתכים, מניחים את המשטח השטוח של הקוצץ על העור ומתגלחים בכיוון ההפוך לזה של צמיחת השיער. לאחר מכן, לנקות את העור עם מים ולייבש אותו עם כרית גזה. עכשיו, באמצעות אפליקטור כותנה קצה, להחיל את החומר ישירות על העור. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש למרוח מספר שכבות דקות של משחה או קרם, בניגוד ליישום חד פעמי של שכבה עבה. כדי למנוע בליעה בשוגג של תרכובת מוחלת topically בשל טיפוח, מניחים צווארון קטן או מגן כדי למנוע את החיה מלהגיע לחלק הגוף המושפע. יתר על כן, כדי למנוע אלגומה מבני זוג בכלוב, בעלי החיים צריכים להיות שוכנים בנפרד.

עכשיו שיש לכם הבנה של דרכי הממשל החלופיות האלה, בואו נראה איך משתמשים בהם במחקר ביו-רפואי היום.

אחד היישומים החשובים של gavage אוראלי הוא ניהול מדויק של חומרים כדי ללמוד את ההשפעה הישירה שלהם על מערכת העיכול. כאן, החוקרים השתמשו בשיטה זו כדי לספק שמרים פרוביוטיים שעברו טרנספורמציה ישירות לקיבת החיה. ואז הם ניתחו את הטלאים של הפייר, שהם גושי לימפה מאורגנים מהמעי הדק, כדי לחקור את הדבקות של המיקרואורגניזם הנמסר.

המסלול האוראלי הלא פולשני יכול לשמש כדי לחקות את המודוס הטבעי של זיהום המועבר במזון. בניסוי זה, המדען פיתח מודל להעברת אוראלי של מונוציטוגנים ליסטריה בעכברים באמצעות בליעה של מזון מזוהם. בעקבות זיהום, החוקרים קצרו איברים שונים כמו המעי הדק, המעי הגס, הטחול, הכבד וכיס המרה, כדי לנתח את התפשטות הזיהום לרקמות אלה.

לבסוף, כמה חוקרים מעוניינים לחקור את המנגנון שבאמצעותו קרינת UV עלולה להוביל כוויות שמש. כאן, המדענים השתמשו במסלול אקטואלי כדי ליישם חומר פרמקולוגי זה גורמת לייצור של מלנין אפידרמלי – סוכן מגן UV. לאחר מכן, הם השתמשו בפרוטוקול הדומה למחקרים בבני אדם כדי לבחון את ההשפעה המגנה של הסוכן המיושם topically נגד אריתמה המושרה על ידי קרינת UV.

הרגע צפית בפרק השני של JoVE של שיטות ניהול מורכבות העוסקות במינון בעל פה ואקטואלי. עכשיו אתה צריך להבין איך אפשר מינון בעל פה החיה באמצעות מזון או מים, וכיצד ניתן לבצע את הממשל המדויק יותר, אוראלי gavage. לבסוף, אתה צריך לדעת את השיקולים ואת השיטה לניהול אקטואלי, ויישומים של טכניקות שונות אלה. כמו תמיד, תודה שצפית!

Applications and Summary

השיטה הבטוחה והאנושית ביותר של ניהול מורכב היא באמצעות מינה אוראלי אם ניתן לשלב אותו לתוך ההזנה או המים. gavage אוראלי היא שיטת מנונים מדויקת אבל הוא גם מלחיץ מאוד את החיה, וזה דורש מיומנות טכנית. ניהול אקטואלי מתבצע בדרך כלל עם מעט או ללא איפוק של החיה, ברגע שהאזור מוכן כראוי. שיקול זהיר של תוואי הממשל צריך לקחת בחשבון את הלחץ הפוטנציאלי לבעלי החיים.

Transcript

ניסויים רבים דורשים שתרכובת תינתן לבעל חיים דרך הפה או דרך המקום, כך שהשיטה תחקה טוב יותר את הצריכה הטבעית של החומר הניסיוני.

למינון דרך הפה, ניתן להמיס את התרכובת במי השתייה או לשלב אותה במזון שבעלי החיים צורכים. שיטה נוספת ומדויקת יותר למינון דרך הפה היא גבאז’ דרך הפה שבו משתמשים במחט גדולה כדי להניח את התרכובת ישירות לתוך הקיבה. מצד שני, ניתן להניח חומר מקומי ישירות על פני העור, והוא נועד בדרך כלל להשפיע רק על האזור עליו הוא מוחל. לכל אחת מהאסטרטגיות הללו יתרונות ומגבלות, עליהם נדון בסרטון זה. לאחר מכן נדגים כיצד לבצע את טכניקות מתן התרכובות הללו בחיות מעבדה, וחלק מהיישומים שלהן.

לפני שנעמיק בפרוטוקולים, בואו נסקור את השיקולים, היתרונות והחסרונות של טכניקות אלה. מינון דרך הפה עם טבליות, כמוסות או נוזל הוא השיטה הנפוצה ביותר למתן תרופות בבני אדם. עם זאת, טבליות וקפסולה אינן מעשיות עבור מכרסמים, ולכן המינון האוראלי הנפוץ מושג על ידי המסת התרכובת במי השתייה או במזון.

כאשר משתמשים במינון באמצעות מי שתייה, לעתים קרובות מוסיפים סוכרוז למים כדי לשפר את הטעם. עם זאת, יש לאזן אותו היטב כדי לעודד צריכת מים רגילה ולא שתייה מוגזמת בגלל הטעם הממותק. כלל טוב הוא להתחיל עם תמיסת סוכרוז של 10%, ולאחר מכן להתאים בהתאם לצריכה. דרך נוספת למנות את החיה דרך הפה היא באמצעות מזון מיוחד. יש מזון זמין מסחרי שיש בו תרכובות במינון נפוץ, כגון פנבנדזול, משולבות בו. חברות המזון למכרסמים יכולות גם ליצור דיאטות בדיקה מיוחדות כדי לעמוד בדרישת ניסוי.

היתרונות בצורת מינון פומית זו הם שהיא אינה פולשנית, נותנת את התרכובת באופן רציף ומחקה מתן תרופות דרך הפה בבני אדם. עם זאת, הוא חסר דיוק מכיוון שצריכת התרכובת תלויה בקבלת המזון או המים, ביציבות התרכובת ובמספר בעלי החיים הנמצאים בכלוב. אם המינון המדויק אינו קריטי לניסוי, שיטה לא פולשנית זו היא הטובה ביותר לרווחת בעלי החיים.

למתן אוראלי מדויק יותר, ניתן להשתמש בגבאז’ דרך הפה, המפקיד את התרכובת ישירות לקיבה בזמן מסוים ובנפח מוגדר. עם זאת, נדרש אימון נכון לביצוע טכניקה זו מכיוון שנזק חמור לבעל החיים עלול להתרחש אם הם לא מרוסנים כראוי.

בהתייחס לתרופות מקומיות, אלה כוללות קרמים, קרמים, משחות, תרסיסים וג’לים. בדרך כלל, חומרים מקומיים נועדו להשפיע רק על האזור עליו הם מיושמים. עם זאת, הם יכולים גם להיספג בזרם הדם, מה שעשוי להיות מכוון או לא מכוון. ספיגה זו תלויה ב: מצב העור, שטח הפנים המנוצל, ריכוז החומר, משך המגע ומסיסות השומנים של החומר.

כעת, לאחר שדנו ברקע של שיטות מתן אוראלי ומקומי, בואו נלמד את הפרוטוקולים החל ממתן דרך הפה באמצעות הזנה או מים.

לחישובי מינון, ראשית עליך לדעת את המינון המיועד למתן שנית, אתה צריך לקבוע את משקל הגוף. במקום לשקול בעלי חיים בודדים, אתה יכול להשתמש במשקל הממוצע של זן העכבר או החולדה לחישובים שלך, אלא אם צוין אחרת. שלישית, עליכם להיות מודעים למספר בעלי החיים בכלוב, ורביעית, עליכם לדעת את צריכת המים או המזון היומית הממוצעת לכלוב.

זכור, ייתכן שיהיה צורך להחליף את המזון המנוסח או את מי השתייה עם התרכובת המומסת בתדירות גבוהה יותר מאשר מזון או מים רגילים עקב חוסר יציבות של התרכובת. תרכובות מסוימות עשויות להיות רגישות לאור או עלולות לשקע עם הזמן.

כעת, בואו נלמד כיצד לתת מינונים מדויקים דרך הפה על ידי ביצוע גבאז’ דרך הפה בעכברים וחולדות.

השלב הראשון הוא בחירת מחט מתאימה להליך. אלה ניתנים לשימוש חוזר המורכבים מפלדת אל חלד או חד פעמיים עם פיר פלסטיק גמיש וקצה סיליקון. עבור עכברים, מחטי מינון ישרות או מעוקלות בגודל 20-25 באורך 1.5 אינץ’ מתאימות. עבור חולדות, בחר מחטי מינון ישרות או מעוקלות בגודל 18-20 באורך 2-3 אינץ’. מד המחט הנכון ובחירת המזרק תלויים גם בנפח ובצמיגות. עיין בסרטון ניהול המתחם I כדי להבין את ההשפעה של גורמים אלה. למינון נוזלים סמיכים עדיף מזרק נעילת לואר.

לאחר ביצוע הבחירה, הצמד את המזרק למחט כך שניתן יהיה לקרוא את הסימונים על הקנה מבלי לסובב את המחט. זה חשוב מכיוון שברגע שהמחט הוכנסה לוושט, כל סיבוב יכול לקרוע את דופן הוושט וכתוצאה מכך למוות של בעל החיים. לאחר מכן, מלאו את המזרק בנפח הנכון של התמיסה שתינתן.

שיטה זו צריכה להתבצע תמיד על בעלי חיים בהכרה עם רפלקסים שלמים של בליעה כדי למנוע הכנסה מקרית לקנה הנשימה. שימוש בטכניקת ריסון נכונה הוא קריטי להליך זה. עבור עכבר, אחוז בעור בבסיס הראש והחזק את הקשקוש בחוזקה. זה מבטיח שלראש יש הזדמנות מינימלית לתנועה מצד לצד. כמו כן, וודאו שהגוף תלוי בקו ישר מהראש לזנב; כל פיתול יעכב את מיקום מחט הגאווג’ בוושט. יש לייצב גם את החלק האחורי כדי למנוע סיבוב גוף.

כדי לרסן חולדה, אחוז בה מעל הכתפיים באמצעות האצבע המורה והאמצעית בכל צד של הצוואר. זה ימנע מהחולדה לסובב את ראשה מצד לצד. האגודל, האצבע השלישית והרביעית מקיפות את החזה כדי למנוע מהחיה לנוע קדימה או אחורה.

לאחר שריסנת כראוי את החיה, מקם את המחט כשהעיקול פונה כלפי מטה ובקו אחד עם הקימור הטבעי של הצוואר. לאחר מכן, הכניסו את המחט לפה מצד ימין או שמאל, דרך הדיאסטמטה ובין החותכות והטוחנות בזווית לכיוון החלק האחורי של הלוע. כעת, כשהמחט מונחת בחלל הפה, השתמש בה כדי להטות את הראש לאחור עד שהאף מופנה כלפי מעלה. בשלב זה, המחט צריכה להחליק בקלות לוושט. לאחר שהמחט ממוקמת בקיבה, הפקידו בעדינות את התרכובת. לאחר מכן, הסר את המחט מהחיה, הקפד לא לסובב אותה. חשוב לא להכריח את המחט כלפי מטה. אם אתה מרגיש התנגדות כלשהי, הסר אותה ונסה שוב. בזמן ביצוע ההליך, אם החיה מראה סימנים של ציאנוזה או מצוקה נשימתית או אם יש תמיסה שזורמת מפיה, יש להסיר מיד את מחט המינון ולשחרר את החיה לכלוב שלה.

לבסוף, בואו נסקור את הנהלים למתן מקומי בחיות מעבדה. התחל בהרדמת החיה. זה נעשה בדרך כלל באמצעות משאף מהיר פעולה, המאפשר התאוששות מהירה של בעלי חיים. לפרטים נוספים על מתן הרדמה, אנא ראה סרטון נוסף באוסף זה.

לאחר מכן, בעזרת קוצץ שיער הסר את כל הפרווה מאזור היישום. כדי למנוע חתכים, הנח את המשטח השטוח של הקוצץ על העור והתגלח בכיוון ההפוך לזה של צמיחת השיער. לאחר מכן, נקו את העור במים וייבשו אותו עם פד גזה. כעת, בעזרת אפליקטור עם קצה כותנה, מרחו את החומר ישירות על העור. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, יש למרוח מספר שכבות דקות של משחה או קרם, בניגוד למריחה חד פעמית של שכבה עבה. כדי למנוע בליעה מקרית של תרכובת המיושמת באופן מקומי עקב טיפוח, הנח קולר קטן או מגן כדי למנוע מהחיה להגיע לחלק הגוף הפגוע. יתר על כן, כדי למנוע אלוגרום מחברים לכלוב, יש לשכן את בעלי החיים בנפרד.

כעת, לאחר שהבנתם את דרכי המתן החלופיות הללו, בואו נראה כיצד הם משמשים במחקר ביו-רפואי כיום.

אחד היישומים החשובים של גבאז’ דרך הפה הוא מתן מדויק של חומרים כדי לחקור את השפעתם הישירה על מערכת העיכול. כאן, החוקרים השתמשו בשיטה זו כדי להעביר שמרים פרוביוטיים שעברו טרנספורמציה ישירות לקיבת החיה. ואז הם ניתחו את מדבקות פייר, שהן גושי לימפה מאורגנים מהמעי הדק, כדי לחקור את הדבקות של המיקרואורגניזם שנמסר.

ניתן להשתמש בנתיב האוראלי הלא פולשני כדי לחקות את האופן הטבעי של זיהום הנישא במזון. בניסוי זה פיתח המדען מודל להעברה אוראלית של ליסטריה מונוציטוגנס בעכברים באמצעות בליעת מזון מזוהם. לאחר ההדבקה, החוקרים קצרו איברים שונים כמו המעי הדק, המעי הגס, הטחול, הכבד וכיס המרה, כדי לנתח את התפשטות הזיהום לרקמות אלה.

לבסוף, חלק מהחוקרים מעוניינים לחקור את המנגנון שבאמצעותו קרינת UV עלולה להוביל לכוויות שמש. כאן, המדענים השתמשו בדרך מקומית כדי ליישם חומר פרמקולוגי המשרה ייצור של מלנין אפידרמיס – חומר מגן UV. לאחר מכן, הם השתמשו בפרוטוקול הדומה למחקרים בבני אדם כדי לבחון את ההשפעה המגנה של החומר המיושם באופן מקומי מפני אריתמה הנגרמת על ידי קרינת UV.

זה עתה צפיתם בפרק השני של JoVE של שיטות מתן מורכבות העוסקות במינון אוראלי ומקומי. כעת עליכם להבין כיצד ניתן לתת לבעל החיים מינון דרך הפה באמצעות מזון או מים, וכיצד ניתן לבצע את המתן המדויק יותר, דרך הפה. לבסוף, עליך להכיר את השיקולים והשיטה למתן מקומי, ואת היישומים של טכניקות שונות אלה. כמו תמיד, תודה שצפית!