Question 1

מהו מיון תאים מופעל מגנטית (MACS) וכיצד הוא מפריד בין תאים?

Accepted Answer

מיון תאים המופעל מגנטית, או MACS, הוא טכניקה המפרידה תאים על בסיס אפיתופים ספציפיים המובעים על פני השטח שלהם. נוגדנים המשורשריים לביוטין נקשרים לתאי המטרה, ולאחר מכן חרוזי מגנט המשורשרים לסטרפטאווידין נקשרים לביוטין. תאים מסומנים נצמדים למגנט בתוך עמודה בעוד שתאים לא מסומנים עוברים דרכה, ובכך מושג שיעור השבה של 60 עד 98% מתאי המטרה.

Question 2

כיצד פועלת האינטראקציה בין ביוטין לסטראפטאבידין ב-MACS?

Accepted Answer

ביוטין, המחובר לנוגדנים המכוונים לסמני שטח ספציפיים של התא, בעל זיקה גבוהה למולקולות סטריפטאבידין המחוברות לחרוזי מגנט. כאשר ביוטין וסטריפטאבידין באים במגע, הם נקשרים חזק, ובכך מצפים את תאי המטרה בחרוזי מגנט. קומפלקס "סנדוויץ'" זה, המורכב מסמן שטח של התא, נוגדן וחרוז מגנטי, מאפשר לכידה והפרדה מגנטית.

Question 3

אילו שלבים מעורבים בהכנת רקמת תימוס לבידוד באמצעות MACS?

Accepted Answer

הטימוס מוצא ומפורק באופן מכני לתאים בודדים באמצעות מסננת תאים ובוכנה. אריתרוציטים לא רצויים מולyses באמצעות בופר ACK. לאחר מכן, התאים סובבים בצנטריפוגה ומוסבסים מחדש ב-HBSS עם סרום עגל עוברי. ריכוז התאים מכוון ל-10 בחזקת 7 תאים למיליליטר לפני סימון מגנטי עם נוגדי anti-CD3.

Question 4

כיצד מסמנים ולוכדים תאי T חיוביים ל-CD3 במהלך MACS?

Accepted Answer

מדגרירים את התאים עם נוגדי CD3 מצומדים לביוטין על קרח למשך 20 דקות, ולאחר מכן שוטפים אותם. מוסיפים חרוזי מגנט מצומדים לסטרפטאבידין ומדגרירים למשך 20 דקות. את תרחיף התאים המסומנים מעבירים בפיפט לתוך עמודה הממוקמת על מגנט, שם נצמדים תאים חיוביים ל-CD3 בעוד שתאים שאינם מסומנים זורמים דרך העמודה אל מבחנה לאיסוף.

Question 5

מהי המטרה של שימוש בעמודה בתהליך ההפרדה ב-MACS?

Accepted Answer

העמודה מכילה מטריצה שאינה מגנטית המאריכה את הנתיב שבו התאים נעים דרך המערכת. דבר זה מאט את זרימת התאים, ומאפשר זמן רב יותר עבור חרוזי המגנט לתפוס את תאי המטרה ביעילות. העמודה משפרת את יעילות ההפרדה ומגבירה את אחוז התאים המשוחללים בהשוואה להפרדה מגנטית ישירה ללא עמודה.

Question 6

כיצד מאמתים את יעילות ההעשרה של תאי T חיוביים ל-CD3 לאחר MACS?

Accepted Answer

דגימות תאים מועשרות ולא מועשרות נצבעות עם נוגדנים פלואורסצנטיים נגד CD3 ומנותחות באמצעות ציטומטריה של זרימה. תרשימי פיזור (Dot plots) מציגים לימפוציטים חיוביים ל-CD3, אשר אמורים להופיע בעיקר בדגימה המועשרת. שכיחות התאים החיוביים ל-CD3 מתוך כלל הלימפוציטים מחושבת, כאשר תאי T מועשרים מראים בדרך כלל 80% או יותר של תאים חיוביים ל-CD3.

Question 7

מהם ההבדלים בין מיון מגנטי חיובי למיון מגנטי שלילי?

Accepted Answer

במיון חיובי, תאים רצויים נלכדים באמצעות חרוזי מגנט המצומדים לנוגדנים המכוונים לסמני שטח רצויים. במיון שלילי, תאים לא רצויים מוסרים על ידי לכידתם באמצעות חרוזי מגנט הנושאים נוגדנים מתאימים. שתי הגישות משתמשות באותו עיקרון של MACS, אך נבדלות באוכלוסיית התאים שנשמרת לעומת זו שנשלפת.

מיון תאים המופעל מגנטי (MACS): בידוד של לימפוציטים T תימיים - חידון הערכה