Question 1

מדוע לא ניתן לגדל תאי B ישירות בתרבית כדי להפיק נוגדנים מונוקלונליים?

Accepted Answer

תאי B אינם שורדים היטב בתרבית לטווח ארוך, מה שהופך את תחלוקתם לאפשרית ללא הגבלה לצורך ייצור נוגדנים. כדי להתגבר על מגבלה זו, מדענים מאחים תאי B עם תאי מילומה אלמוות ליצירת היברידומה, המשלבת את תכונות ייצור הנוגדנים של תאי B עם יכולת הגדילה הבלתי מוגבלת של תאי מילומה.

Question 2

מהו ההבדל בין נוגדנים פוליקלונליים לנוגדנים מונוקלונליים?

Accepted Answer

נוגדנים פוליקלונליים הם תערובת של נוגדנים, שכל אחד מהם מזהה אפיתופים שונים על גבי אנטיגן, המיוצרים על ידי מספר שיבוטי תאי B. נוגדנים מונוקלונליים הם נוגדנים זהים המיוצרים על ידי שורת תאי היברידומה בודדת, המזהים אפיתופ ספציפי אחד בלבד. עובדה זו הופכת את הנוגדנים המונוקלונליים לספציפיים יותר ושימושיים יותר להבחנה בין אנטיגנים דומים.

Question 3

כיצד מבטיח דילול מגביל ייצור של נוגדן מונוקלונלי?

Accepted Answer

דילול מגביל הוא תהליך של דילול סדרתי המבטיח מבחינה סטטיסטית שתאים בודדים יושתלו בבארות של לוח סריקה. בארות המכילות תא אחד גדלות לאוכלוסיות מונוקלונליות המייצרות נוגדנים זהים. שיטת שיבוט זו מבטיחה שקו ההיברידומה שיתקבל ישחרר רק את הנוגדן הרצוי בעל הספציפיות הידועה.

Question 4

מהו התפקיד של אמון סולפט בטיהור נוגדנים?

Accepted Answer

שיקוע באמוניום סולפט מסיר נוגדנים מתוך מצע גידול על ידי תחרות של חלבונים על מולקולות מים באמצעות אינטראקציות הידרופיליות. יוני האמוניום והסולפט בעלי המטען הגבוה מפחיתים את מסיסות הנוגדנים, ובכך גורמים להם לשקוע מתוך התמיסה. שיטה זו של "המלוחה" (salting-out) היא טכניקה סטנדרטית לטיהור חלבונים מתוך על-נוזלי תרבית.

Question 5

מדוע משתמשים בשרוול דיאליזה לאחר שקיעה באמוניום סולפט?

Accepted Answer

שקי dialysis מסירים שארית של אמון סולפט מתמיסת הנוגדנים באמצעות חילוף אוסמוטי. תמיסת הנוגדנים מוכנסת לשק dialysis ומוטבלת בבफर PBS למשך הלילה. מים ויוני מלח קטנים עוברים דרך ממברון השק בעוד שהנוגדנים נותרים בפנים, מה שיוביל לנוגדנים מטוהרים נקיים מאמון סולפט.

Question 6

כיצד נקבע ריכוז הנוגדנים לאחר הטיהור?

Accepted Answer

ריכוז הנוגדנים נמדד באמצעות ספקטרופוטומטר באורך גל של 280 ננומטר, המזהה בליעת אור של חלבונים. דגימת הנוגדנים מדוללת פי 20 ב-PBS ולאחר מכן מנותחת באמצעות הספקטרופוטומטר. הריכוז מחושב באמצעות נוסחה סטנדרטית ונרשם לצורך תיעוד ואחסון של הנוגדן המונוקלונלי המטוהר.

Question 7

באיזו שיטת סריקה משתמשים כדי לזהות היברידומה המייצרת את הנוגדן הרצוי?

Accepted Answer

בדיקות ELISA בשיטות עקיפות, סנדוויץ' ותחרותיות משמשות לסריקת מצעי גידול של היברידומות כדי לבדוק נוכחות של הנוגדן המטרה. לאחר היתוך ההיברידומות ושיבוט באמצעות דילול מגביל, בדיקת ELISA מאפשרת לזהות באילו בארות נמצאים תאים המייצרים את הנוגדן המונוקלונלי הרצוי. שלב סריקה זה מבטיח כי רק היברידומות בעלות הספציפיות הנכונה של הנוגדן ייבחרו להתרבות ולהפקת נוגדנים.

יצירת נוגדנים: ייצור נוגדנים חד שבטיים באמצעות היברידיות - חידון הערכה