Name: Gibberella zeae Ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray. (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 24 s
Description: למד את תהליך איסוף האסקוספורים הסטרילי של Gibberella zeה לניתוח פרופילי ביטוי גנומי. פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה לחקר פתוגניות פטרייתית ופיתוח ביולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים קארן הילברן לקבלת תמיכה טכנית מעולה. פרויקט זה מומן על ידי היוזמה הלאומית למחקר של החינוך שיתופית USDA המחקר, המדינה שירות ההדרכה והמקצוע (פרס # 2004-35604-14327). מטיאס Pasquali נתמך על ידי ברנקו וייס המלגה. חיטה ארה&quot;ב גלד יוזמת ברלי הוא גם הודה על התמיכה המתמשכת של המחקר.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגר גזר (Klittich ולסלי, 1988) הוכן 9 ס&quot;מ קוטר צלחות פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוביה 2 מ&quot;מ של אגר המכיל תפטיר טרי גדל על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה יושמה למרכז צלחת פטרי כל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבויות גדלו במהירות של 25 ° C ו -12 שעות photoperiod עבור 96 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחת מ&quot;ל Tween של 2.5% מימית 60 היה מוחל על פני השטח של תרבות (שביל משותף, 2000) המפוזרים על פני התרבות עם מוט פלסטיק, על ידי לחיצה בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הירי Perithecia ascospores פיתחה 7-10 ימים לאחר הטיפול לזירוז כאשר שמר בסביבת לחות גבוהה של 25 ° C עם photoperiod זהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוסף Spore מבוצע על ידי שינוי מכסה צלחת פטרי, עוזב perithecia לירות לזמן מוגבל (למשל 12 שעות) בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מים סטריליים מתווסף המכסה, השעיית ascospores בעדינות על ידי העברת מים על פני השטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ascospores נאספים סטרילי צינורות פלקון, שטף ומשמש לניתוח נוסף. </li></ol>

<ol><li>Beyer, M., Verreet, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+of+Gibberella+zeae+ascospores+as+affected+by+age+of+spores+after+discharge+and+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors.</a> , (2005).</li>
<li>Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+inoculum+levels+of+Gibberella+zeae+on+wheat+spikes.+Plant+Disease+83%2C662-666%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666.</a> , (1999).</li>
<li>Goswami, R. S., Kistler, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heading+for+disaster%2C+Fusarium+graminearum+on+cereal+crops.+Molecular+Plant+Pathology+5%2C515%26%23x2013%3B525%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515&#x2013;525.</a> , (2004).</li>
<li>Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+reduction+mutants+in+Fusarium+moniliforme+%28Gibberella+fujikuroi%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi.</a> Genetics. 118, 417-2013 (1998).</li>
<li>Trail, F., Common, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perithecium+development+in+Gibberella+zeae%2C+a+light+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study.</a> , (2000).</li>
<li>Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+substrate+for+uniform+production+of+perithecia+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae.</a> Mycologia. , 67-1101 (1975).</li>
<li>Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+environment+on+sexual+reproduction+of+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae.</a> , (1976).</li>
</ol>

הפרוטוקול המובא כאן מתבסס על ההליכים הקודמים המשמש לייצור perithecial עבור Fusarium spp. (Klittich ולסלי, 1988; שביל משותף, 2000). התקינה של ההליך שבו כמויות גדולות של ascospores (מספיק לצורך ניתוח microarray) נוצרו היה חיוני עבור שחזור של הניסוי. זה כבר דווח כי ההבדלים גורמים סביבתיים, גיל המצע יכול לשנות את אופיו הביולוגי של ascospores (Beyer ו Verreet, 2005). לכן השימוש וידאו עשויה לסמן הפרטים הקטנים בדרך נבגים מיוצרים שנאספו שאמור להקל על שחזור. בפרט את הווידאו של ההליך אמור לשפר את רמת סטנדרטיזצי...

<table><tbody><tr><td>צלחת פטרי בקוטר 9 cm</td><td>כלי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 60 (20%)</td><td>ריאגנט</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אגר גזר (20% w/v גזרים אורגניים ו-1.5% w/v אגר)</td><td>ריאגנט</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gibberella zeae ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray.

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum שוובה (teleomorph Gibberella zeae) הוא צמח הפתוגן גורם המחלה גלד על חיטה ושעורה המפחיתה להניב יבול ואיכות תבואה. פ graminearum גם גורם גבעול והאוזן נרקב של תירס הוא מפיק של mycotoxins כגון trichothecenes כי לזהם תבואה מזיקים לבני אדם ובעלי חיים (ו Kistler Goswami, 2004). הפטרייה מייצרת שני סוגים של נבגים. Ascospores, propagules הנובע רבייה מינית, הן המקור העיקרי של הזיהום העיקרי. נבגים אלה הם משוחררים בכוח perithecia בוגרת מפוזר על ידי הרוח (Francl et al 1999). זיהומים משניים נגרמים בעיקר על ידי macroconidia אשר מיוצרים באמצעות מינית על פני הצמח. כדי לחקור את תהליכי ההתפתחות של ascospores ב פטרייה זו, נוהל איסוף שלהם כמות גדולה בתנאים סטריליים נדרש. פרוטוקול שלנו צולם על מנת להפיק את הרמה הגבוהה ביותר של מידע על ההבנה ועל שחזור; היבטים מכריעים כאשר הגן מלא הגנום פרופילי הביטוי נוצרות ולפרש. בפרט, השתנות של נביטה ascospore והפעילות הביולוגית תלויים מניפולציה מראש של החומר. השימוש וידאו המתעדים כל צעד בייצור ascospore מוצע על מנת להגביר את הסטנדרטיזציה, העומד בדרישות המחמירות לניתוח microarray. ההליך דורש רק ציוד מעבדה סטנדרטי. השלבים מוצגים על מנת למנוע זיהום זמן לטובת סינכרון של ascospores.

כדי לחקור את תהליכי ההתפתחות של ascospores ב Gibberella zeae, נוהל איסוף בתנאים סטריליים מצולם על מנת להפיק את הרמה הגבוהה ביותר של מידע עבור תיאור פרוטוקול. זה אמור להקל על שחזור של הניסוי, היבט חיוני כאשר ביטוי מלא הגנום בדיקות פרופיל מיושמים.

Gibberella zeae Ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray.

.Fusarium graminearum Schwabe (הטלומורף Gibberella zeae) הוא פתוגן צמחים הגורם למחלת הפיטאריוזיס (scab) בחיטה ובשעורה, המפחיתה את יבול התבואה ואת איכות הגרעינים...

gibberella-zeae-ascospore-production-collection-for-microarray

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בפרוטוקול זה, הגן ביטוי שמרים...

Microarray ניתוח עבור Saccharomyces cerevisiae</em

ההרס של פלחה ידי זרעים מדביק פטריות גרם מאמצי מחקר רבים כדי להבין טוב יותר הצמח לפתוגן אינטראקציות. ללמוד זרעים פטרייתיים אינטראקציות במעבדה להגדרה, פיתחנו שיטה חזקים כימות של רבייה ביומסה פטרייתי, וזיהום mycotoxin באמצעות bioassays ליבה.

כימות של קולוניזציה Sporogenesis פטרייתי, ולאחר הפקה של mycotoxins שימוש bioassays-Kernel

צלבים מיניים ובידוד של הצאצאים רקומביננטי הם כלי מחקר חשובים פטריות...

התפתחות מינית והפרשות Ascospore ב Fusarium graminearum</em

סרטון זה מדגים שיטה לכימות זיהום פטרייתי בזחלי דגי זברה. נבגי פטריות מוזרקים במיקרו לחדר המוח האחורי של הזחל, והזחלים מודגרים כדי לאפשר התפתחות זיהום. הזחלים הנגועים נקצרים בפרקי זמן מוגדרים, והתקדמות ההדבקה מוערכת על ידי ספירת יחידות יוצרות מושבות.

טכניקה לכימות זיהום פטרייתי בזחלי דגי זברה

הסרטון מדגים טכניקת פציעה ולכידה של דגי זברה לצפייה בזיהום פתוגן פטרייתי המסומן באופן פלואורסצנטי בזחלי דגי זברה. זיהום ראשוני מושך מקרופאגים, וככל שהזיהום נמשך, גיוס נויטרופילים מתקדם באתר ההזרקה.

טכניקת zWEDGI להמחשת זחלי זברה נגועים בפתוגן פטרייתי

כאן אנו מציגים פרוטוקול לנתח אספרגילוס flavus צמיחה וייצור aflatoxin ב תירס גרעינים ביטוי של חלבונים נגד פטריות.  באמצעות זן GFP-לבטא flavus א לנו פיקוח זיהום או התפשטות הפטרייה ב גרעינים בוגרת בזמן אמת. וזמינותו היא מהירה, אמינה, לשחזור.

עיכוב של צמיחה אספרגילוס flavus Aflatoxin ייצור הטרנסגניים תירס לבטא מעכב α-עמילאז מן Lablab purpureus ל'

צוואר בקבוק במחזור ' עיצוב-לבנות בדיקה ' של הנדסת חיידקים היא המהירות שבה אנחנו יכולים לבצע מסכי פונקציונלי של זנים. אנו מתארים שיטת תפוקה גבוהה לסינון המתח המוחל על מאות אלפי תאים שמרים לכל ניסוי העושה שיטה ברצף RNA מבוסס droplet.

תפוקה גבוהה שמרים להתאמץ פנוטיפים עם רצפי רנ א מבוססי Droplet

פרוטוקול זה מתאר מודל זיהום אספרגילוס בזחלים זברה. נבגי אספרגילוס הם microinjected לתוך hindbrain של זחלים, טיפול כימי משמש כדי לגרום לדיכוי המערכת החיסונית. התקדמות הזיהום מנוטרת באמצעות מערך הדמיה יומי כדי לפקח על צמיחה פטרייתית ותגובות חיסוניות, כמו גם ספירה של נבגים חיים על ידי ציפוי יחידה יוצר מושבה.

זיהום זחלי זברה עם נבגי אספרגילוס לניתוח אינטראקציות מארח-פתוגן

אנו מציגים פרוטוקול הדמיה חיה ללא תוויות באמצעות טכניקות מיקרוסקופיה אור מועברות כדי ללכוד תמונות, לנתח ולכומת קינטיקה צמיחה של הפטרייה חוטית A. nidulans הן בתרבויות שקועות ומדיה מוצקה. פרוטוקול זה יכול לשמש בשילוב עם מיקרוסקופיה פלואורסצנטית.

ניתוח כמותי של אספרגילוס nidulans קצב הצמיחה באמצעות מיקרוסקופיה חיה ותוכנה בקוד פתוח

פרוטוקול זה הוא שיטה יעילה ומהירה של culturing שמרים ואת התבנית Aspergillus fumigatus מקבוצות גדולות של דגימות קרקע תוך 7 ימים בלבד. ניתן לשנות את השיטות בקלות כך שיתאימו למגוון של מדיות דגירה וטמפרטורות לפי הצורך לניסויים.

בידוד של שמרים ועובשים הניתנים לעיבוד מאדמות כדי לחקור את מבנה האוכלוסייה הפטרייתית

כתב יד זה מפרט פרוטוקול חיסון אופטימלי המשתמש בנדן עלי תירס מנותק למחקרים ציטולוגיים, פיזיולוגיים ומולקולריים הניתנים לשחזור של אינטראקציות תירס עם פתוגנים צמחיים פטרייתיים. מעטה העלים מאפשר תצפית בזמן אמת על אינטראקציות תאיות בין הצמח החי לפטרייה ברקמות לא מקובעות.

נדן תירס מנותק להדמיית תאים חיים של זיהום על ידי פתוגנים פטרייתיים של תירס פוליארי

למד את תהליך איסוף האסקוספורים הסטרילי של Gibberella zeה לניתוח פרופילי ביטוי גנומי. פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה לחקר פתוגניות פטרייתית ופיתוח ביולוגי.

Gibberella zeae Ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray.

גלה סרטונים נוספים