Antigen CD4 + הדמיה ספציפיות תאים T באמצעות MHC Class II Tetramers
6 במרץ 2009
הליך זה מדגים את טיהור בהרחבת במבחנה של אנטיגן ספציפי CD4 + T תאים מדם היקפי שלם להדמיה שלהם באמצעות MHC בכיתה tetramers השנייה. Tetramers לאפשר הדמיה ישירה של תאים T עם סגוליות לאנטיגן יחיד ומוגדר הגבלה MHC Class II.
ובכן, מה שמיוחד באמת בבדיקת טיר הוא שהיא מאפשרת לך להמחיש ישירות תאי T ספציפיים לאנטיגן. ה-te, הטיר, הוא ההיבט הייחודי המרכזי של הבדיקה שלנו. זה משולב עם שלב הגברה שאנחנו עושים.
אתה יודע, אנחנו מבודדים את תאי ה-T ואז מגדלים אותם בסביבה שמעשירה את הדגימה לתאי ה-T שמעניינים אותנו. ואז אנחנו יכולים לסמן בדיוק את התאים האלה ולראות אותם על ציטומטר זרימה. ובבדיקות קודמות, כמו CSFE או בדיקות התפשטות שקיימות כבר עשרות שנים, מה שמקבלים זה פשוט מדידות כלליות של מה שקורה עם כל אוכלוסיית תאי T.
אבל יש לך מיליוני תאי T בגוף והם רואים מגוון רחב של דפוסים. אם יש לך מזל, אולי אחד מתוך שניים עד 300,000 תאים מהתאים בדגימה יהיה זה שאתה מסתכל עליהם. ולכן הבדיקה הזו עושה את שלבי ההעשרה.
ואז עם מספר בדיקה, ומכיוון שאתה צובע ישירות, אתה יכול למעשה לדמיין מהרקע אוכלוסייה שהיא פחות מ-1% מכלל התאים. וכך אפשר לראות הבדלים קטנים מאוד ולקבל ספירה די מדויקת של מספר תאי ה-T שנמצאים בדגימת הדם, אתה יודע, שנמצאים אצל אותו אדם שמזהים את דפוס העניין שלך. אבל זה לא נגמר שם, כי הטטרים גם מאפשרים לא רק לסמן את תאי ה-T, אלא גם לבודד אותם לניתוח נוסף.
והטטרים שאתם משתמשים בהם בעצם מיוצרים כאן ב-BRI, נכון? כן. אנחנו אחת ממספר מועט מאוד של מעבדות במדינה שהצליחו להגיע לטטר דרגה שנייה. כוונתנו היא להפיץ את החומרים הללו בעלות לכל מעבדות שמעוניינות לייבא את הטכנולוגיה הזו.
מה לדעתך הם ההיבטים הכי קשים או מאתגרים של הבדיקה הזו כשמדובר בשכפול במעבדות אחרות? ובכן, כשאני חושב על זה, יש בעצם שתיים, גדילת תאי ה-T. זה משהו שהוא באמת קצת אמנות.
אתה, אתה מקבל החלטות כמעט יומיומיות לגבי האם התאים צריכים חומרים מזינים נוספים או שטח נוסף לגדול. והחלק השני, שלדעתי הוא כנראה הכי קשה למפעיל חסר ניסיון הוא בעצם ניתוח הנתונים. להבין איזה חלק של האות הוא באמת תגובה חיובית לעומת איזה חלק הוא פשוט חלק מהותי, אתה יודע, לפיזיקה ולמשיכה.
והעובדה שלכל דבר יש מידה מסוימת של דביקות היא משהו ששוב, דורש הרבה ניסיון, במיוחד בהקשר שבו התגובה הכללית תהיה קצת חלשה. איך המידע שתפיק עם הבדיקה הזו יכול להועיל למטופלים בשלב זה? אחד המאפיינים הראשונים שמופיעים אצל כל חולה אוטואימוני הוא סוג של קונסטלציה של נוגדנים שמיועדים למחלה הזו.
אנחנו יודעים מהיסודות הבסיסיים של האימונולוגיה שבכל מקום שבו יש תגובת נוגדנים, תמיד יש תגובת תאי T ראשונה. ואם נוכל לבחון אנשים בסיכון ולראות את הקפיצה בפעילות תאי T שמקדימה את יצירת הנוגדנים, זה יעזור לנו להגדיר באמת רמת סיכון חדשה או שאנשים מתקדמים לכיוון אוטונוגדנים, מה שיפתח חלון לטיפולים אינטרונטיביים. הליך זה יטהר וירחיב את תאי ה-CD 4 החיוביים לאנטיגן ויראה אותם באמצעות תגובות טטר וארונות בטיחות ביולוגית מסוג 2 לזרימה למינרית.
זה יהיה מרחב העבודה הראשי של התהליך. צינורות קוני 50 מיליליטר צינור ראשי לבידוד PBMC אחד XPBS. זה צריך להיות חבילת חומר ללא סידן ומגנזיום יחד עם עטוף נייר אלומיניום כדי להגן מפני מיכלי תרסיס פיפטות CoStar 10 mil עם תוספות בעובי 50 מיל למניעת זיהום דם בצנטריפוגה.
פיפטות העברת צנטריפוגות GS שש R, פיפטות פסטר עם בופר המוליטי המכיל 8.3 גרם לליטר. כלוריד אמוניום 1.0 גרם לליטר. נתרן ביקרבונט 0.04 גרם לליטר DI נתרן EDTA טריאן כחול 0.2% תמיסה ב-PBS hemo CYTOMETER 15 מיליליטר צינור קוני ריצה המכיל PBS בתוספת שני מילימולר EDTA ועוד חמישה גרם לליטר.
ערכת בידוד BSA max CD 4 שנרכשה מ-Milin Biotech EP Magnet Block שנרכש מטכנולוגיית Stem Cells. פלטפורמות העשרת תאים מגנטיים אחרות יכלו לשמש ביעילות שווה. צינור פוליפרופילן 5 מיליליטר RPMI 1640 בתוספת 25 מילימולר היפים המשמשים לייצור סרום אנושי משולב בתווך T המשמש להשלמת רצועת עט מדיום תאי T המשמשת להשלמת מדיום תאי T 500 מיליליטר מסנן בקבוק 0.22 מיקרון סטרילי עם פלטה 48 באר המשמשת לתרבות התרחבות חוץ-גופית, חממת CO2 בשלב 37, תמיסה של 20 מיליגרם למיליליטר של פפטיד סינתטי המכיל את האפיטופ הרלוונטי.
חמישה מיליטר פוליסטירן עם צינור פקס טעון פפטיד, דרגה שתיים, המשמשים להמחשת תאי T ספציפיים לאנטיגן, נוגדני אנטי-CD 3, אנטי-CD 4 ואנטי-CD 25 המשמשים לציפוי תאי T ספציפיים לאנטיגן. ציטומטר זרימה בקוטר פקס או מקביל לפני תחילת ההליך. הרכיבו את כל החומרים והציוד במרחב העבודה שלכם.
ההדגמה הבאה תכלול את השלבים הבאים. בידוד PBMC, הפרדת תאי T חיובית ב-CD 4 תרבית התרחבות חוץ-גופית, המחשת תאי T באמצעות צביעה או צביעה. שלב ראשון בבידוד PBMC.
קבל דגימת דם. יש לאסוף דם במזרקים או בצינורות דם ולנוגד קרישה עם הפארין ביחס של אחד ל-50 כדי למנוע קרישה, וצפו לתפוקה של כ-1 מיליון PBMC למיליליטר דם. כ-40% מהם יהיו תאי T חיוביים CD-4.
לשלב את הדם לצינורות חרוטיים של 50 מיליטר. 25 מיליליטר דם לכל צינור. ערבבו בעדינות את הדם לפני קרישת ALI כדי לפזר את הפלזמה.
הוסיפו PBS כדי להעלות את הנפח הכולל ל-40 מיליליטר והנחו תחתון על ידי ייבוש 11 מיליליטר של פיאל שנכנס לצינור הדם והסרת עזר הפיפטה מהפיפטה בזהירות. הפייל מתנקז לאט לאט לתחתית הצינור. לאחר שהרמה התאזנה, הוציאו בהדרגה את הפיפטה מצינור הדם, השליכו את המכסה של צינורות הדם ועברו לאירוסול של המיכלים.
סגור היטב את המיכלים והצנטריפוגה ב-900 פעמים G למשך 20 דקות בלי הפסקה. חשוב שלא יושם שבירה בסוף הספין הזה, שכן כוח השבירה יפריע לשכבת התאים לאחר הספין. ה-pbmc אמור ליצור שכבה לבנה מובחנת בין הפלזמה הצהובה שמעל לבין הפייל השקוף שמתחת.
הסר בעדינות את שכבת תאי הדם הלבנים באמצעות פיפטת העברה והעבר לצינור חדש. חלק מהפלזמה והפיאל עשויים להיות מצוירים יחד עם ה-pbmc, אך הימנעו מהצבת שכבת תאי הדם האדומים. בדרך כלל ניתן לשלב שני צינורות דם לצינור תא אחד בשלב זה.
כדי להגדיל את גודל הכדור, הוסיפו PBS שמביא את הנפח הכולל ל-15 מיליליטר, וצנטריפוגה ב-500 פעמים G למשך 15 דקות על שבירה נמוכה ואירוסול של מיכלים שאופים נוזל באמצעות פיפטת משחת, תוך הקפדה שלא להפריע לכדור. טפלו בבופר המוליטי על ידי הוספת חמישה עד שישה מיליליטרים לכל צינור וערבוב עדין להסרת גושים. הדגרה לא יותר מחמש דקות.
הוסיפו PBS שמביאים את הנפח הכולל ל-50 מיליליטר וצנטריפוגה ב-230 פעמים G למשך 10 דקות. בשבירה נמוכה כבר אין צורך במיכלי אירוסול לסיבובים האיטיים האלה. שטפו פעמיים נוזל שנשאף באמצעות צינור פיפטת מרעה מלא ב-PBS וצנטריפוגה בלחץ של 230 פעמים G למשך 10 דקות לפני שלב השטיפה הסופי, הסר אליקו של תאים מחודשים, דילל בכחול טריאן וספור באמצעות ציטומטר הומו.
ספירת התאים הזו תקבע את נפחי המגיב המשמשים בהפרדת תאי T. שלב שני, בידוד תאי T חיובי ב-CD ארבע, שאיבת נוזל והוספת בופר רץ כדי להעלות את הנפח הכולל ל-40 מיקרוליטר ל-10 מיליון תאים. בדרך כלל זה דורש 30 מיקרוליטר של בופר בתוספת נפח הכדור שנותר.
העבר את הנפח הזה לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. הוסיפו קוקטייל נוגדנים מארבעת ערכות הבידוד של CD, 10 מיקרוליטרים לכל 10 מיליון תאים, ומניחים על הקרח למשך 10 דקות. הסר צינור מקרח, הסר את המכסה והוסיף 30 מיקרוליטר של בופר רץ לכל 10 מיליון תאים.
הוסיפו חרוזים מגנטיים מערכת הבידוד של CD 4. 20 מיקרוליטר ל-10 מיליון תאים בצינור הכיסוי ומניחים על הקרח למשך 15 דקות. הוסיפו 10 נפחים של בופר רץ לשטיפה וצנטריפוגה ב-230 פעמים G למשך 10 דקות.
במהלך הסיבוב, התקן את המגנט וצינור פוליפרופילן בנפח חמישה מיליליטר במקום העבודה שלך. שאיפת נוזל מגלגלת תאים. הוסף שני מיליליטר עם בופר רץ והסר גושים באמצעות פיפט העברה.
באמצעות אותו תאי העברת פיפטות העברה לצינור של חמישה מיליליטר ודגירה במגנט למשך 15 דקות. פרק בזהירות את שבר תאי ה-T החיוביים של CD 4 לצינור מסומן בקוטר 15 מיל על ידי היפוך המגנט וריקון כל החלק פרט לטיפה האחרונה. הוסיפו עוד שני מיליליטר של בופר ריצה לצינור באורך חמישה מיליליטר והוציא מהמגנט.
שטוף בעדינות את תאי ה-CD 4 השליליים מהצדדים של הצינור והעבר לצינור מסומן בקוטר 15 מיל. הוסף שני מיליליטר מדיום תאי T לכל צינור. הסר אליקווטים לספירת תאים וצנטריפוגה ב-230 כפול G למשך 10 דקות.
מדלל אליקווטים של תאים עם כחול טריאני וספור באמצעות ציטומטר המו. ספירות התאים הללו יקבעו את מספר הבארות שישמשו לתרבות ההתרחבות. שלב שלישי.
תרבית התרחבות חוץ-גופית שואבת נוזלים מ-CD ארבעה כדורי תאי חיוביים ו-CD ארבעה שליליים בהתאם לספירת התאים. הוסף מדיה ל-CD ארבעה תאים חיוביים כדי להתאים את הנפח ל-3 מיליון תאים למיליון. הוסף מדיה ל-CD ארבעה תאים שליליים כדי לכוון את הנפח ל-10 מיליון תאים למילימטר.
תרבית ההתרחבות דורשת 3 מיליון תאי CD, ארבעה תאים שליליים בכל באר, ו-2 עד 3 מיליון תאים חיוביים CD וארבעה תאים חיוביים בכל באר. בדרך כלל, תאים חיוביים ב-CD 4 הם האוכלוסייה המגבילה. Aliquot CD ארבעה תאים שליליים למספר המתאים של בארות על פלטת 48 בארות.
על ידי הוספת 300 מיקרוליטר לכל אחד, הכניסה את הפלטה לאינקובטור של 37 מעלות למשך שעה. הסר את הצלחת, את האינקובטור, שטוף את הבארות על ידי הוספת 500 מיקרוליטר של מדיה טרייה וצלל בעדינות למעלה ולמטה 12 עד 20 פעמים באמצעות פיפטת העברה והוצאת כל הנוזל. שטיפה זו תשאיר אחריה שכבה של תאי אנטיגן דביקים למציגים.
כשהכביסה מסתיימת, הוסיפו בדיוק מספיק חומר כדי להרטיב את תחתית כל אחד, כלומר בערך 100 מיקרוליטר. אחרת תאי הדבקה A יתייבשו. הוסף שניים עד שלושה מיליון תאי CD חיוביים לכל באר במידת הצורך.
הוסף מדיה נוספת כדי להעלות את הנפח הכולל בכל באר למיליליטר אחד. הוסף את הפפטיד הרצוי לכל אחד. ובכן. הריכוז הטיפוסי לגירוי הוא 10 מיקרוגרם למיליליטר.
לוח המקום האחרון בחממה של 37 מעלות למשך שבעה ימים. אחרי שבעה ימים. הוסיפו 50 מיקרוליטר של המו IL, שניים לכל באר בכל יום שלאחר מכן.
מעקב אחר גדילה של תאים באמצעות מיקרוסקופ לבארות ההזנה שעדיין לא התאחדו על ידי הסרת חצי מהמדיום, הוספת מדיה טרייה ו-50 מיקרוליטר של IL שני בארות מפוצלות על ידי השעיית התאים שמזיזים חצי מהתאים לבאר ריקה. הוספת מדיה טרייה ו-50 מיקרוליטר של IL מחזירה תאים לאינקובטור. התאים המתרחבים יהיו מוכנים לצביעת טיר לאחר 13 עד 15 ימים של תרבית.
שלב רביעי, הדמיית תאי T על ידי צביעת טיר, רכישה או הרכבה של טטרים שיתאימו לפפטיד. שילובי MHC ששימשו לגירוי ארבעת תאי ה-T החיוביים ב-CD. הסר את הפלטה מהאינקובטור.
למשוך בזהירות חצי מהמדיה מכל אחד. העבר אליקו תאים מכל באר, בדרך כלל 75 מיקרוליטרים או כ-50,000 תאים לצינור פקס פוליסטירן של 5 מיליטר, בדרך כלל מיקרוליטר אחד לכל 50 מיקרוליטר בנפח כולל והנח באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות למשך שעה. מומלץ גם לצבוע אליקו שני של כל באר עם טיר לא תואם כתאי בקרה שליליים עם נוגדנים נגד CD 3, נגד CD 4 ואנטי-CD 25.
ניתן להשתמש בסמני נוגדנים נוספים או חלופיים. עם זאת, אין להשתמש בנוגדנים מסומנים ב-PE, שכן ערוץ זה חייב להיות שמור לרמות בשלב זה. כמו כן, יש לסמן כל בקר צבע או איזוטיפ יחיד באמצעות תאים נוספים.
דגרו תאים מסומנים בנוגדנים למשך 15 עד 30 דקות בטמפרטורה של ארבע מעלות. שטוף כל צינור עם 0.5 עד מיליליטר של בופר וצנטריפוגה ב-230 פעמים G למשך 10 דקות. שחרור בזהירות נוזלים מצינורות הפקס, כיילון ציטומטר זרימה באמצעות חרוזי ייחוס, צינורות בקרה בצבע יחיד, בקרות איזוטיפ ועוד.
נתח כל צינור באמצעות ציטומטר הזרימה. תאי הטטרה החיוביים צריכים להיות אוכלוסייה נפרדת בין תאי ה-CD 4 החיוביים המורחבים. תאים חיוביים בטטרה הם בדרך כלל חיוביים ל-CD 25 ולעיתים קרובות CD 4 גבוהים.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
פרוצדורה זו מדגימה את טיהורן ואת הרחבתן in vitro של תאי CD4+ T ספציפיים לאנטיגן מדם פריפריאלי מלא, ואת הדמייתם באמצעות טטראמרים של MHC class II. טטראמרים מאפשרים הדמיה ישירה של תאי T בעלי ספציפיות לאנטיגן בודד והגבלה מוגדרת של MHC class II.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום מדעי
- אימונולוגיה
- ביולוגיה של תאי T
- ציטומטריית זרימה
רקע
- תאי T ספציפיים לאנטיגן ממלאים תפקיד מכריע בחסינות נרחשת.
- בדיקות מסורתיות מספקות מדידות כוללות של אוכלוסיות תאי T.
- ויזואליזציה ישירה של תאי T ספציפיים משפרת את ההבנה של תגובות חיסוניות.
- טטרמרים של MHC class II מאפשרים זיהוי מדויק של תאי T.
מטרת המחקר
- לטהר ולהרחיב תאי T מסוג CD4+ ספציפיים לאנטיגן.
- להמחיש תאי T אלו באמצעות MHC class II tetramers.
- לשפר שיטות למחקר תגובות של תאי T.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- בידוד תאי T מדם פריפריאלי.
- הרחבה במעבדה (in vitro) של תאי CD4+ T ספציפיים לאנטיגן.
- סימון תאי T באמצעות טטרמרים של MHC class II.
- ויזואליזציה של תאי T מסומנים באמצעות ציטומטריה של זרימה.
תוצאות עיקריות
- טיהור מוצלח של תאי CD4+ T ספציפיים לאנטיגן.
- הרחבה יעילה in vitro של אוכלוסיות תאי T מטרת.
- ויזואליזציה ברורה של תאי T באמצעות MHC class II tetramers.
- ספציפיות מוגברת בזיהוי תגובות של תאי T.
מסקנות
- השיטה מאפשרת מחקר מדויק של תאי T ספציפיים לאנטיגן.
- טכניקות ויזואליזציה משפרות את ההבנה של מנגנונים חיסוניים.
- גישה זו ניתנת ליישום במגוון מחקרים אימונולוגיים.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
ויזואליזציה ישירה של תאי T מסוג CD4+ ספציפיים לאנטיגן מאפשרת בחינה מדויקת של תגובות חיסוניות בהקשרים של מחלות אוטואימוניות ומחלות זיהומיות. שיטה זו תומכת בתיקוף מטרות (target validation) על ידי קישור הספציפיות של תאי ה-T למכניזמי המחלה, ובכך מספקת ביטחון ניבוי לפיתוח סמנים ביולוגיים (biomarkers) ולתזמון התערבויות טיפוליות. אסטרטגיית ההגברה והצביעה של הבדיקה מאפשרת זיהוי של אוכלוסיות נדירות של תאי T, ובכך מספקת מידע לסיווג סיכונים בקבוצות פרה-קליניות וקליניות.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בחינה של היפותזות טיפוליות באמצעות ויזואליזציה של תאי T ספציפיים לאנטיגנים הרלוונטיים למחלה.
- ערך תפעולי: מספק תיקוף פונקציונלי של מטרות באמצעות תצפית ישירה על התרחבות תאי T המונעת על ידי אנטיגן.
- ערך ניבוי: תומך במיון תיקי פיתוח על ידי זיהוי פעילות מוקדמת של תאי T הקודמת להיווצרות נוגדנים עצמיים באנשים הנמצאים בסיכון.
סריקה ופיתוח בדיקה
- ערך מדעי: מייצר תוצאות כמותיות, המוכנות לניתוח בציטומטריה של זרימה, של שכיחות תאי T ספציפיים לאנטיגן לאחר הרחבה במערכת in vitro.
- ערך תפעולי: סטנדרטיזציה של זיהוי תתי-אוכלוסיות נדירות של תאי T באמצעות העשרה וצביעה בטטראמרים, ובכך משפר את השחזוריות של הבדיקה.
- תועלת הפלטפורמה: מאפשר סריקה של אינטראקציות בין פפטידים ל-MHC לצורך הערכת אימונוגניות בפיתוח חיסונים ותכשירים ביולוגיים.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- ערך מדעי: מקל על התאמה של ביומרקרים תרגומיים על ידי קישור רמות של תאי T חיוביים לטטראמר עם סיכון למחלה או התקדמותה.
- ערך תפעולי: תומך ברציפות משלב הגילוי ועד לאישור פרה-קליני על ידי מתן אפשרות למעקב אורך של תגובות ספציפיות לאנטיגן.
- הפחתת סיכונים: מסייע בקבלת החלטות על המשך או הפסקת הפיתוח (go/no-go) באמצעות הפחתת העמימות המכניסטית במסלולים המתווכים על ידי תאי T.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת עיבוד (Pipeline)
השיטה משתלבת ברצף הגילוי, ותומכת בבדיקת היפותזות בביולוגיה בסיסית, בהכנת בדיקות (assays) לסריקה ובקבלת תוצאות מכניסטיות במחקר תרגומי.
- ביולוגיה של הגילוי: מאפשרת בדיקת השערות באמצעות בידוד והדמיה של תאי T המגיבים לפפטידים אנטיגניים ספציפיים.
- סריקה: מספקת מוכנות לבדיקה באמצעות פרוטוקולי הרחבה וצביעה סטנדרטיים המניבים תוצאות כמותיות הניתנות לשחזור.
- אנליזה: מספקת מדידות מבוססות ציטומטריה של זרימה של תאים חיוביים לטטראמר, מה שמאפשר השוואה בין תנאים ובין תורמים.
- מחקר תרגומי: מקשר לרצף פרה-קליני על ידי מתן אפשרות לניטור אורך (longitudinal monitoring) של דינמיקת תאי T ספציפיים לאנטיגן הרלוונטיים למודלים של מחלות.
- שימוש חוזר ארגוני: משמשת כפלטפורמה אימונולוגית לשימוש חוזר להערכת ספציפיות לאנטיגן בתחומי טיפול שונים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החיזוי בתיקוף מטרה על ידי הפחתת העמימות המכניסטית בתגובות חיסוניות המונעות על ידי תאי T.
- ערך תפעולי: מבטיח סטנדרטיזציה והדירות באמצעות אסטרטגיות מוגדרות של הרחבה, צביעה ו-gating.
- ערך אסטרטגי: משפר החלטות go/no-go על ידי מתן אפשרות לגילוי מוקדם של פעילות פתוגנית של תאי T, ובכך מפחית סיכון ביולוגי בשלבים מאוחרים.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתעדוף מותאם סיכון באמצעות זיהוי מועמדים אימונוגניים המבוססים על דיוק התגובה של תאי T.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות באימונולוגיה, תרביות תאים ופירוש נתוני ציטומטריה של זרימה.
- תלוי בגישה לריאגנטים של טטראמרים מסוג peptide-MHC, אינקובטורים, כלי הפרדה מגנטית ומכשירי ציטומטריה של זרימה.
- מחייב סטנדרטיזציה בין-צוותית של בקרות צביעה, כולל השוואות עם טטראמרים לא רלוונטיים, כדי לנהל שונות ברקע.
- כולל שיקולי התאמה בעת יישום לסוגי HLA שונים, זיקות פפטידיות שונות או תתי-אוכלוסיות של תאי T.
- מוגבל על ידי האתגר הטכני של שמירה על הרחבה עקבית של תאי T והבחנה בין אות אמיתי לצביעה לא ספציפית באוכלוסיות בעלות שכיחות נמוכה.
שאלות נפוצות בנושאי ביו-פרמה
Chapters in this video
0:00
Title
0:09
Introduction
3:21
Reagents and Equipment
5:44
Assemble Materials and Equipment at Workspace
6:04
Step 1: PBMC Isolation
8:51
Step 2: CD4+ Cell Separatioin
11:01
Step 3: In Vitro Expansion Culture
13:34
Step 4: Visualizing T Cells by Tetramer Staining
15:33
Conclusion
1:05
T Cell Staining
