Name: רביה של האדם גזע עובריים (ES) תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: למד שיטות תרבית לתאי גזע עובריים אנושיים ES באמצעות קולגנאז וניהול קווי תאים H1 ו-H9. טכניקות אלו מסייעות לחוקרים לשמר ולהרחיב תאי גזע ליישומים ביורפואיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

רביה של האדם גזע עובריים (es) תאים

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

רביה של האדם גזע עובריים (ES) תאים

כן, אני לורן דיאון. אני אחראית על מתקן ה-Human Amgen stem cell co ב-MGH. כן, אני לורן, אני אחראית על מתקן ה-Human AM stem cell co ב-MGH.אני עובד עם תאי גזע אנושיים של Amgen כבר שנים, מאז שהייתי פוסט-דוקטור במעבדה של George De לפני ארבע שנים. כעת יש לנו שני קווי תאים, H1 ו-H9, שניהם מתאי Y. הדרך שבה אנו מרחיבים או מתחזקים תאים אלו בתרבית, או ליתר דיוק, הדרך שבה אנו מבצעים פיצול של התאים, היא באמצעות שימוש בקולגנאז.לכן, מה שאני עושה בדרך כלל במספר המעברים הראשונים לאחר זריעת התאים, הוא להשתמש בטכניקה של בחירת מושבות. במקרה זה, אני יכול לבדוק תחת המיקרוסקופ אילו מושבות טובות, מובחנות ובעלות צורה נעימה, ואני אאסוף רק את המושבות הללו, אחתוך אותן למספר חלקים ואחזיר אותן לבקבוק שטוח טרי. את המושבות שנראות פחות מובחנות אני פשוט מותיר כפי שהן.דרך נוספת להעביר את התאים היא באמצעות טריפסין. לכן, אינני משתמש בטכניקה זו כאן. אני סבור שקולגנאז בטוח מעט יותר, מכיוון שתאי גזע אנושיים אינם אוהבים להיות מבודדים או להישאר לבד.לכן, אם תשתמשו בטריפסין למשך זמן רב מדי, למשל שלושה עד ארבעה דקות, כפי שאנו משתמשים בטריפסין עבור סוגים אחרים של תאים, תאי גזע אנושיים יהפכו לתאים בודדים ורובם ימותו, יתמיינו או פשוט לא יידבקו למצע. לכן, הרעיון הוא שעליכם לשמור על התאים כצברים. אינכם רוצים שהם יהיו בודדים בתוך הבקבוק.לכן, השימוש בקולגןאז (collagenase) מאפשר לשמור על התאים כצמחים. לעומת זאת, בשימוש בצ'יפסי (chipsy), בוחרים תאים ששורדים את התהליך הקשה מאוד של אופסוניזציה (opsonization). תאים אלו הם בדרך כלל בעלי יכולת proliferativ גבוהה מאוד.כך ניתן להביא את התאים להסתגל לתהליך הטיפסין הזה. הבעיה היא שישנם תאים שמתנהגים באופן שונה והם מתחלקים הרבה יותר מהר. סיכון אחד הוא שעלולה להיווצר חריגה כרומוזומלית כתוצאה מתהליך חלוקה מהיר מאוד זה.אם כן, אתה טוען שתהליך ה-ization יכול לגרום לבחירה של תאים בתרבית עבור רוב התאים הפרוליפרטיביים. נכון. פעילים יותר וכנראה גם בעלי שיעורי הישרדות גבוהים יותר מאשר תאים אחרים. לכן, לאחר פרוליפרציה, ביסודו של דבר תרבית לאחר פרוליפרציה בטריפסין, לאחר מספר מעברים, הופכת לתרבית שונה, בעלת תכונות שונות אלו.לכן, קשה לקבוע אם הם זהים לחלוטין. אם תבצעו את הבדיקה, הבדיקה הרגילה, נניח שתבדקו סממנים, סממנים רגילים של תאים מובחנים סופית כמו OC four, nano one 60 SC four C, C3, כל המולקולות הללו עשויות עדיין להתבטא. אם תבצעו יצירת TER, תאים אלו עשויים עדיין להבחין ולהיווצר כמו תאים רגילים.אם תסתכלו על הקריוטיפ, ייתכן שתמצאו חריגה כלשהי, אך ייתכן שעדיין יהיה לכם קריוטיפ תקין. היתרון הברירתי עשוי לנבוע פשוט ממוטציה שאינה ניראית בבדיקת קריוטיפ. לכן, העובדה שהם גדלים הרבה יותר מהר היא כשלעצמה, לדעתי, מעט מדאיגה יותר.ואם נרצה להשתמש בתאים אלו להשתלה בנקודה מסוימת, אני בהחלט לא הייתי משתמש בסוג זה של תאים. אוקיי. אז האם תרצה לומר לי מהן הבעיות הטכניות העיקריות בשימוש בטכניקה זו עבור מעברים של תאים? כלומר, שימוש ב-S, כן.זה פשוט לוקח מעט יותר זמן, ובנוסף, מכיוון שהתאים אינם גדלים במהירות, נדרש זמן רב יותר כדי להגיע למספר תאים גבוה מספיק לביצוע ניסוי. לכן, הייתי אומר שזה פשוט פחות נוח. האם תרצה לספר לי בכמה מילים על מטרות הניסוי שלך?כיצד משתמשים בתאי CS? אוקיי, הפרויקט המרכזי שלי כאן הוא להפיק תאים אנדותליאליים מתאי גזע AB אנושיים. והרעיון הוא להיות מסוגל לייצר דם.אנחנו עובדים רבות עם מעבדות להנדסת רקמות ביולוגית, ואחת המטרות שלהן היא לייצר רקמות in vitro. אך אחת המגבלות לכך היא היעדרם של כלי דם העוברים דרך רקמות אלו. לכן, אם נצליח להביא תאים אנדותליאליים או להחדיר תאים אנדותליאליים לרקמה זו, נקבל צמיחה טובה יותר של הרקמה.מכיוון שאתרי מקור מעטים מוכרים עבור תאי אנדותל, כגון דם קר או דם בלחץ, יהיה מעניין להחזיק במקור תאים נוסף, כמו אוזניים אנושיות. היתרון הוא שמאחר שניתן להרחיב תאי אוזניים אנושיות באופן כמעט אינסופי, ניתן לשנות תאים אלה, ליצור מערכת השרה מסוימת ולהיות מסוגל להשתמש בה. לאחר מכן, במוצר הסופי, בתאי החומר שלך, במקרה זה.

propagation-of-human-embryonic-stem-es-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

היכולת של בתאי גזע עובריים אנושיים עצמית לחדש להתמיין לכל סוגי התאים בגוף עולה כי הם מחזיקים הבטחה גדולה עבור שניהם יישומים רפואיים ככלי מחקר להתמודדות עם שאלות יסוד בהתפתחות מחלות. כאן, אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול הגזירה של בתאי גזע עובריים אנושיים מעוברים על ידי בידוד immunosurgical של מסת התאים הפנימית.

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

ההבחנה בין ESC עולה בקנה אחד עם תא מסוג שינויים ספציפיים במבנה ובהרכב של הכרומטין. זיהוי של שינויים אלה מספק תובנות רבות ערך את המנגנונים שמגדירים stemcellness והתמיינות תאים. הכרומטין immunoprecipitation (שבב) מייצגת שיטת ערך לנתח את המנגנונים המולקולריים שבבסיס תא גזע בידול.

הכרומטין immunoprecipitation מן בתאי גזע עובריים אנושיים

וידאו זה מדגים כיצד לשמר את הצמיחה של בתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) בתא ללא תנאים מזין וכיצד ברציפות hESCs מעבר במזין תא ללא תנאים. אישור hESC pluripotency גדל מזין תאים ללא תנאים על ידי מיקרוסקופ immunofluorescence באה לידי ביטוי גם. חלק 3 מתוך 3.

מ MEFs כדי Matrigel 3: hESCs Passaging מ Matrigel על Matrigel

בידול בימוי של hESCs לתוך תאים ספציפיים יצרה עניין רב ברפואה רגנרטיבית. אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול...

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

למרות הפיתוחים אחרונים בהתאמה גנטית, transfection של תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) נותר תהליך גחמני. למיטב ידיעתנו, שיטות שיטתיות ויעילות לתאי אדם transfect מושרים pluripotent גזע (iPSCs) לא דווחה. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים עמידים ביעילות transfect וnucleofect iPSCs אדם.

Transfecting וNucleofecting תאי גזע אנושיים pluripotent מושרים

הקמנו פרוטוקול לזירוז של neuroblasts ישירה אנושי לתאי גזע עובריים pluripotent נשמר בתנאים מוגדרים עם מולקולות קטנות, המאפשרת גזירת אספקה ​​גדולה של אבות העצבית האנושית העצבית תא סוגים של פיתוח עבור מערכת העצבים המרכזית העצבית לתיקון.

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

assay ביטוי גני תא הבודד שדרוש להבנת heterogeneities בתאי גזע.

אפיון תאי גזע עוברי האנושי על ידי הפרט כמותי RT-PCR

שורות תאי כתב להציע אמצעים כדי להמחיש, לעקוב ובודד תאים של ריבית מאוכלוסיות הטרוגניות. עם זאת, באמצעות רקומבינציה הומולוגית קונבנציונלית בתאי גזע עובריים אנושיים מיקוד הגן הוא מאוד לא יעיל. בזאת, אנו מתארים מיקוד מוקד PITX3 CNS המוח התיכון ספציפי גורם שעתוק עם EGFP באמצעות רקומבינציה הומולוגית המשופרת nuclease אבץ האצבע.

ג&#39;ין משופר Nuclease אבץ אצבע מיקוד בתאי גזע עוברי האנושי

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור הדור של התרבות תא יחיד של תאי גזע האדם העובריים והבידול שלהם לתוך תאים מחולל קדמון. הפרוטוקול הוא פשוט, חסון, מדרגי, ומתאים לסינון סמים וליישומים רפואת התחדשות.

בידול עצבי יעיל באמצעות התרבות תא יחיד של תאי גזע האדם העובריים

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע.

הקפאת ES תאים אנושיים

למד שיטות תרבית לתאי גזע עובריים אנושיים ES באמצעות קולגנאז וניהול קווי תאים H1 ו-H9. טכניקות אלו מסייעות לחוקרים לשמר ולהרחיב תאי גזע ליישומים ביורפואיים.

רביה של האדם גזע עובריים (ES) תאים

גלה סרטונים נוספים