Name: לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: למד הדמיה לטווח ארוך בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופיה שדה רחב הפוכה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לעקוב אחרי חלוקת תאים ולהבין רגולציה של התקדמות מיטוטית בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

למחברים אין ניגוד עניינים להצהיר עליו.

לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

בפועל, מה שאעשה הוא להרכיב זאת כאן תחילה ולאחר מכן להחליף אתכם. כעת אבצע שאיבה תוך ניסיון להיות עדין ככל האפשר. אוקיי. מספר שניות של החזקה. אוקיי. בסדר.המאפיינים החשובים של רשת הדמיות הסגנונית (lifestyle imaging grid) שלנו הם, ראשית, שמדובר במיקרוסקופ הפוך, מה שאומר שהעדשה, הדגימות כאן בעדשה, נמצאות למטה. לכן, העדשה מופנית כלפי מעלה וכל המיקרוסקופ, או למעשה כמעט כל המיקרוסקופ, כולל העדשות והדגימה, נמצאים בטמפרטורה של 37 degrees. לכן, כל מה שנמצא בתוך הקופסה מפלסטיק זו הוא בטמפרטורה של 37 degrees.וממש מעל הבמה יש לנו תערובת של אוויר ו-CO2. מדובר ב-5%CO2. הרעיון הוא שהדגימה נמצאת למעשה בתוך תא, בדומה לאינקובטור תאים.כך שזהו מערבל האוויר וה-CO2 שלנו, והוא עובר הלחלה וחימום ואז מועבר בצינור אל הדגימה שעל הבמה. אוקיי. והיום נבצע פלואורסצנציה בערוץ אחד, פלואורסצנציית GFP. זהו הצינור שדרכו נכנס ה-CO2, 5% CO2, והוא פשוט נכנס למחזיק של הבמה.זה חשוב. לאחר מכן נוכל לסגור אותם, להוריד אותם, ואז נעבור לעמדה הראשונה. מה שאעשה הוא לגשת לשדה הראשון, שהוא מדגם הבקרה שלי, ואבחר עמדות בהתבסס על מה שאני רואה על המסך.לכן אני מוודא שאני אכן מביט במיקרוסקופ בכל באר חדשה, מכיוון שמישור המיקוד של כל אחת מהבארים שונה, והצלחת אינה שטוחה לחלוטין בתחתיתה. לכן תצטרכו לבצע כיונונים עדינים בעת המעבר מבאר לבאר. כע

long-term-imaging-mammalian-cells-using-wide-field-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הרקמה העוברית הדמיה בזמן אמת הוא מאתגר לאורך תקופות זמן ארוכות. כאן אנו מציגים assay לניטור שינויים הסלולר משנה הסלולר בחוט השדרה חומוס לתקופות ארוכות עם רזולוציה גבוהה במרחב ובזמן. טכניקה זו יכולה להיות מותאם לאזורים אחרים של מערכת העצבים בעובר המתפתח.

ברזולוציה גבוהה הדמיה חיה של התנהגות התא ב Neuroepithelium פיתוח

הדמית זמן לשגות משמשת כדי להעריך את ההתנהגות של תאים ראשוניים preneoplastic חלב האפיתל הנגזרים ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סיכון לסרטן שד על מנת לקבוע אם יש קשר בין פרמטרים התנהגותיים ספציפיים ונגעים גנטיים מובחנים.

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

המטריצה ​​תאית עוברת שיפוץ משמעותי בריפוי פצעים, דלקות והיווצרות גידול. אנו מציגים גישה מיקרוסקופית immunofluorescence intravital רומן כדי להמחיש את הדינמיקה של סיבי, כמו גם רכיבי מטריצת רשת כמו עם רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה באמצעות epifluorescence או שני פוטונים במיקרוסקופ.

לטווח ארוך Intravital Immunofluorescence הדמיה של רקמות מטריקס רכיבים עם Epifluorescence ומיקרוסקופי שני פוטונים

הדמיה חיה של שבלול האוזן של יונקים העובריים היא מאתגרת, כי התהליכים התפתחותיים ביד פועלים על שיפוע זמני על עשרה ימים. כאן אנו מציגים שיטה culturing ולאחר מכן ההדמיה רקמות explant השבלול עוברית שנלקחו מעכבר כתב ניאון בחמישה ימים.

לטווח ארוך זמן פקיעת הדמיה של Explants שבלול העכבר

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוסקופיה מולטיפוטונית לביצוע הדמיה ארוכת טווח ברזולוציה גבוהה של תא בודד של הריאה השלמה בזמן אמת באמצעות חלון הדמיה מיוצב ואקום.

לטווח ארוך ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופית Intravital בריאה עם חלון הדמיה מיוצב אבק

השיטה המוצגת כאן משתמשת במיקרוגרף יחד עם הדמיה כמותית לחשיפת הארגון המרחבי בתוך תרבויות היונקים. הטכניקה היא קלה להקים מעבדה סטנדרטית בביולוגיה התא והוא מציע מערכת צייתן לחקור מבחנה בפריפרייה.

מיפוי הארגון המרחבי של תאי היונקים באמצעות מיקרודפוסים והדמיה כמותית

מוצג כאן פרוטוקול להשתלת חלון גולגולתי כרוני להדמיה אורכית של תאי מוח בעכברים ערים ומרוסנים ראש.

השתלת חלון גולגולת להדמיה חוזרת ונשנית In Vivo בעכברים ערים

כאן מוצגת גישה להדמיה תוך-ורידית ארוכת טווח באמצעות חלונות סיליקון שקופים אופטית, הניתנים להדבקה ישירות לרקמה/איבר המעניין ולעור. חלונות אלה זולים ורב-תכליתיים יותר מאחרים הנהוגים כיום בשטח, וההחדרה הכירורגית גורמת לדלקת מוגבלת ולמצוקה לבעלי החיים.

הדמיה תוך-ורידית אורכית דרך חלונות סיליקון שקופים

פרוטוקול זה מתאר חלון הדמיה חדש של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה (R.MIW). מיקרוסקופיה תוך-ורידית לאחר השתלת ה-R.MIW מאפשרת הדמיה אורכית ורב-יומית של בלוטת החלב הבריאה והחולה עם רזולוציה תאית בשלבי ההתפתחות השונים.

מיקרוסקופיה תוך-ורידית אורכית באמצעות חלון הדמיה של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר יצירת חלון גולגולתי גדול (6 x 3 מ"מ2) באמצעות עטיפת מזון, סיליקון שקוף וזכוכית כיסוי. חלון גולגולתי זה מאפשר ניסויים בהדמיית סידן בשדה רחב ובשני פוטונים באותו עכבר.

אין ויוו הדמיית סידן בשדה רחב ושני פוטונים מעכבר באמצעות חלון גולגולתי גדול

הפרוטוקולים הנוכחיים מתארים הדמיה חדשה של הר שלם להדמיית מבנים היקפיים בעדשת העין עם שיטות לכימות תמונה. פרוטוקולים אלה יכולים לשמש במחקרים כדי להבין טוב יותר את הקשר בין מבנים מיקרוסקולריים של עדשה לבין התפתחות/תפקוד עדשה.

הדמיה של תושבת שלמה כדי להמחיש ולכמת את מבנה העדשה ההיקפית, המורפולוגיה של התא והארגון

למד הדמיה לטווח ארוך בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופיה שדה רחב הפוכה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לעקוב אחרי חלוקת תאים ולהבין רגולציה של התקדמות מיטוטית בזמן אמת.

לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב

גלה סרטונים נוספים