Name: סרטן Borealis מערכת העצבים Stomatogastric Dissection (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: למדו את שיטת הניתוח של מערכת העצבים הסטומטוגסטרית מסרטן Cancer borealis. פרוטוקול זה מאפשר הכנה לרישומים אלקטרופיזיולוגיים וחקר מעגלים עצביים ודפוסי תנועה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

בהכרת תודה אנו מודים לחברי מעבדת מרדר. אנו מודים יועץ שלנו, ד&quot;ר איב מרדר, על התמיכה והעידוד שלה. מחקר זה מומן על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מענקים NS-17813 ו - NS-058110.

1. גרוס Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום סרטן על קרח במשך 30 דקות למערכות משעמם החושי והמוטורי של החיה. להקיף אותו מכל צדדיו עם קרח. יש ללבוש כפפות בעת טיפול הסרטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכונו לנתיחה ברוטו ידי הנחת את המחבת לנתיחה וכלי תשתמש. Rongeurs, עצם חיתוך מספריים, מספריים קטנים, שיניים מלקחיים, מרית עם קצה קוני, צלחת שחורה Sylgard מצופה, וסיכות חרקים יש צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את סרטן מדלי הקרח ברגל האחוריות כדי למנוע צובט ומניחים אותו במחבת לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הטפרים לראשונה על ידי פיתול כל אחד פנימה. ואז להסיר את כל הרגל, תוך שימוש בתנועות פיתול זהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש rongeurs, להסיר את maxilla מכסה את הפה. גם להסיר את maxillule רך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש rongeurs שוב, להתחיל מהסוף אחורי רוחבי של שריון ולקבל אחיזה טובה על קצה זה. הצמד מטה עם rongeurs ולשבור את חתיכת שריון משם. הקפד להסיר מספיק שריון כדי לאפשר המרית להיכנס הפתיחה. המשך להסיר את הקצה של שריון עד העיניים לחזור בצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם הצד החד של המרית, לגרד בעדינות את הרקמה הפנימית הרכה מן הגג של שריון הגב. שמור את המרית במגע עם שריון כדי למנוע נזק STNS. השתמש rongeurs להתנתק חלקי שריון אשר הופרדו הרקמה. כמו כן חלק נפרד הרקמות הרכות של שריון הגחון לוודא להפריד כל השרירים adductor הצמדת רקמות שריון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתנתק שריון הגב כמו האחורי ככל הלב שבו יש שתי ossicles קטנה מבצבצת שריון. גזור ככל האפשר הקדמי. לייצב את Cephalon (&quot;פנים&quot;) באצבע אחת תוך שבירת משם את החלקים הקדמי ביותר של שריון הגב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצד הגחוני של שריון, לשלוף את הלסתות אחד בכל פעם, על ידי עיגון rongeurs על הלסת התחתונה, מסובב אותם החוצה כדי לסלק את הלסת התחתונה מן epistome המצורפת, ומשך אותה משם. שני ossicles ארוך עם שרירים יש לצרף הלסת התחתונה המחולץ אם נעשה כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נפרדת ממנו את הרקמה מן הצדדים של Cephalon ליד העיניים בעזרת מרית. עם מספריים קטנים לנתיחה, חוצים הרקמה כמו ליד הרכס של ossicle כשכבת אפשרי אחר שכבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את סרטן בקיר המחבת לנתיחה ולהשעין אותו לאבטחת אותו במקום (מציפורני ניתן להשתמש לשם כך). חותכים את labrum (&quot;השפה העליונה&quot;) הרחק epistome לוודא שלא להשאיר רקמה כלשהי המצורפת. שימוש עצם חיתוך מספריים בשני חתכים אלכסוניים לתוך שריון הגחון כדי להסיר את Cephalon. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את labrum עם מלקחיים שיניים וחתך את labium (&quot;השפה התחתונה&quot;) הרחק ossicle בצד הגחון. ואז בעדינות להרים את השפתיים הרחק שריון הגחון הנותרים. השתמש במספריים קטנים להפריד את החלק הגחוני של הקיבה מרקמת רירית שריון. כאשר ampullae השוער גלויים, לחתוך את הבטן מן הרקמה צידיו של אותו עד הבטן מופק הסרטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עדיין מחזיק את הבטן על ידי השפה עם מלקחיים, שאר הקיבה בכף היד ושופכים מלוחים לתוך הפה. זה מרחיב את הקיבה ואת עושה את זה קל יותר לחתוך פתוח. גזור מפתיחת בפתחו מטה בין הזכות השוער דרך ossicle בין ampullae. ואז לחתוך באלכסון למטה דרך שני סניפים cardial. חותכים את קצות שלוש שיניים בתוך הקיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבטן על צלחת גדולה, שחורה Sylgard מצופה, עם החלק הפנימי של הבטן כלפי מטה. הצמד מטה חמש פינות להכנת סיכות חרקים למלא את המנה עם מלח קרים, לטבול ההכנה כולה (ראה איור 1). </li></ol> 2. פיין Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> , Micro-לנתיחה כלים נדרשים לנתיחה את הקנס. בפרט, מלקחיים ומספריים באביב יש צורך, כמו גם בעל סיכה עם מחט טונגסטן. ברור, Sylgard מצופה, צלחת פטרי וכמה סיכות חוט דק צריך גם להיות מוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ההגדלה הנמוכה ביותר, התחל מצמיד את דשי ליד השפה שפעם פתיחת הפה. סידור מחדש של שאר הסיכות כדי הכנת מתוח סיכה כלשהו בתחומים אחרים הדרושים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם בזהירות את ובהיפודרמיס הבחין מכסה את החלק התחתון של הכנת וקוצצים אותו על פני להשאיר פיסת ובהיפודרמיס עם שתי נקודות לבנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלפים את רקמת צהוב, דליל קרומי בתחתית ההכנה. Mvns מחוברים חלושות אל החלק התחתון של רקמה זו. בזהירות להפריד את mvns מרקמות הצהוב כפי שהיא עצרה. בצע את רקמת צהוב ולעקור לצד המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את התהליכים עבה היציאה המוח להאריך laterallי &#39; אלה הם העצבים commisural. לאחר סוף עצב commissural הוא הגיע, להסיר את מסה של רקמה ספוגית מחוץ לבן, כי כבר לחתוך מהצד של המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איפה יוני ובניו לפגוש את גלגלי השיניים, לחתוך את השריר ורקמות לחשוף את אורכו של יוני ובניו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור אל התיקון ובהיפודרמיס הבחין ולנתק אותה. זה צריך להשאיר פתח בעורק המקיף את STG. חותכים דרך הפתח כדי להפריד בין שני שרירים כי האגף STG. הרם את הקצוות של שרירים אלה לחתוך ימינה מתחתם כדי להפריד בינם לבין העורק ולחשוף את alns ו agns. הפרד את השרירים איגוף עד למעלה כמו הסחוס שוכב על STN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הרקמה המקיפה את עורקי STG עד היכן mvns, dgn, ו dvn להיפגש. עבודה לאורך dvn את lvns לחתוך דרך רקמות, לבנבן עדין המכסה את lvns. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את PSN על ossicle באזור החלק התחתון של התכשיר. PSN ניתן להשתמש כדי לאתר את lvn וצומת dlvn. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא אחרי dlvn מטה כדי לאתר את pyn ו PDN. Pyn לעתים קרובות כורך על ampulla השוער לפתיחה. PDN מזלגות מעל dlvn והוא בין ampulla השוער ואת השוער שרירים אירוביים שסתום. השאירו כמה שרירים המחוברים אחד העצבים האלה כי הם יכולים לבלבל בקלות כאשר ההכנה מועבר המנה Sylgard ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל העצבים נחשפו, לנתק את כל הקשרים שנותרו בין STNS לבין רקמות לא רצויות העצבים של הקיבה. בזהירות להזיז את STNS רחוק משאר הקיבה, חיתוך כל הקשרים החמיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצב את המנה Sylgard ברור עם המוני הנותרים של רקמת הקיבה על ידי שפשוף אותו על פני השטח של Sylgard עד Sylgard כבר לא מרגיש דביק מדי או יבש. Sylgard הוא הידרופובי STNS תדבק בחריפות את זה אם את המנה Sylgard מצופה אינו מותנה בדרך זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים קצת מלח קרים המנה. תפוס את הקצוות העליונים של העצבים commissural עם מלקחיים ולהביא את STNS כדי בצלחת Sylgard ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פין STNS מטה אל Sylgard. סבר המוח מן העצבים commissural ולהשתמש סיכות minuten כדי לאבטח את ארבעת הקצוות של גלגלי השיניים למטה הראשון. ודא כי הכנה נכונה כלפי מעלה על ידי סימון כי IVN היא מצביעה למעלה מן Sylgard. Dgn צריך לצאת מעט מתחת STG כאשר STG הוא בצד ימין למעלה. הצמד את שאר העצב מסתיים למטה עם סיכות חוט דק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה משם כל שנותר שריר או רקמה STNS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Desheath STG באמצעות בעל פינים ו מכור מעט, מחט בסדר, טונגסטן. עושים חור קטן בפינה של נדן STG הרחק גופי התא ולהשתמש חור כדי לקבל בין שכבות נדן. בזהירות לחתוך כנף של נדן מופרדות לחשוף את neuropil STG וגופים התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פין כל דשי של נדן למטה כדי להגדיל את הנגישות הגופים התא כדי לייצב את STG עבור הקלטות תאיים. Re פינים שאר STNS להבטיח כי כל עצב מתוח היטב במרווחים הקלטה תאיים (ראה איור 3). </li></ol> 3. תוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אידיאלי, כל העצבים צריך להיות חופשי של ניקס ואת הנזק, במיוחד אלה שיירשמו מ. אף אחד העצבים צריכה להיות סבוך או מעוות. STG צריך להיות שלם עם כל התאים מסודרים במבנה זקן סביב neuropil. STNS שלם סימטרית בילטרלי והן נראה כמו הננס עם lvns כמו הרגליים, mvns כמו הזרועות ואת הקצה הקדמי כראש. </li></ol> קיצורים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> STNS </td><td> מערכת העצבים Stomatogastric </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric גנגליון </td></tr><tr><td> בורג </td><td> Commissural גנגליון </td></tr><tr><td> OG </td><td> הוושט גנגליון </td></tr><tr><td> mvn </td><td> חדרית חציון עצב </td></tr><tr><td> יון </td><td> עצב הוושט Inferior </td></tr><tr><td> בן </td><td> עצב הוושט מעולה </td></tr><tr><td> AGN </td><td> עצב קיבה Anterior </td></tr><tr><td> AlN </td><td> עצב לרוחב Anterior </td></tr><tr><td> dgn </td><td> עצב קיבה הגבי </td></tr><tr><td> dvn </td><td> חדרית הגב עצב </td></tr><tr><td> lvn </td><td> חדרית Lateral עצב </td></tr><tr><td> PSN </td><td> הבטן Posterior עצב </td></tr><tr><td> pyn </td><td> השוער עצב </td></tr><tr><td> PDN </td><td> המרחיב השוער עצב </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> סניף הגבי של העצב חדרית לרוחב </td></tr><tr><td> IVN </td><td> חדרית נחותים עצב </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;איור 1&quot; /&gt; איור 1: תרשים הממחיש את המיקום המשוער של STNS בבטן לפני לנתיחה. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: תרשים של שרירים שונים בחלק התחתון של הקיבה כיסוי של STNS של אור ירוק. כל סוג תא STG הוא מופיע עם השרירים הם ידועים innervate. מפה זו שימושית בעת תכנון לנתח עצב שנושא אותות מתא נתון (באדיבות מעבדה נדים). <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: תרשים סכמטי של STNS עם אלקטרודות תאיים ובארות תאיים (מ &#39;מרדר ו בוכר, 2007).

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

דיסקציה STNS היא הצעד הראשון בביצוע הניסוי electrophysiology או אימונוהיסטוכימיה, או לקבלת תאים תרבית תאים. ללא קשר הניסוי נועד, דיסקציה הגולמי יישאר ללא שינוי. עם זאת, דיסקציה הקנס עשוי להשתנות. חשוב לתכנן מראש של זמן שבו תאים אשר עצבים תוכלו להקליט. רוב הנוירונים STG יש תהליכים innervate אחד לפחות שרירים בבטן (ראה איור 2), מסווגים לפי innervated היעד שלהם. לפיכך, הקלטות תאיים נדרשים באופן מלא לאמת את זהות התא כי הוא מוקלט intracellularly. תדירות קצב של השוער וחוסנם משמשים כדי לפ...

<table><tbody><tr><td>Sylgard 170 שחור</td><td>אחר</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>ניתוח גס</td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>סיכות לחרקים גודל 6</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>מספריי מאיו (Mayo)</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-שפכטל</td><td>כירורגיה</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>רונגאורים (Rongeurs)</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה לרקמות</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>חוט טונגסטן עדין (קוטר 0.001 in.)</td><td>כירורגיה</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>ניתוח עדין</td></tr><tr><td>פינצטה #5</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>סיכות מינוטן (Minuten)</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ Moria (להבים 7mm)</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי (100x15mm)</td><td>אחר</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק סיכות</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה עדינה מאוד #5SF</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>אחר</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>מחטי טונגסטן</td><td>כירורגיה</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה</td><td>מיקרוסקופ</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>שונות</td></tr><tr><td>סרטן יונה (&lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>בעל חיים</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

סרטן borealis מערכת העצבים stomatogastric dissection

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

הגנגליון stomatogastric (STG) הוא מודל מצוין לחקר אינטראקציות הסלולר ורשת מכיוון שהוא מכיל מספר קטן יחסית של תאים (כ 25 ב C. borealis) אשר מאופיינים היטב. התאים STG בתערוכה מגוון רחב של יציאות ואחראים על פעולות מוטוריות של הקיבה. הבטן מכיל את טחנת קיבה אשר מתפרק מזון עם שלוש שיניים פנימיים, השוער אשר מסננים את האוכל לפני שהוא מגיע midgut. STG מייצר שתי יציאות קצבית לשלוט טחנת קיבה השוער המכונה גנרטורים דפוס מרכזי (CPGs). כל תא STG יכולים להשתתף אחד או שני מקצבים אלה. CPGs אלה מאפשרים לחקר neuromodulation, הומאוסטזיס, השתנות הסלולר רשת, פיתוח רשת, והתאוששות הרשת. דיסקציה של מערכת העצבים stomatogastric (STNS) מ הסרטן יונה (סרטן borealis) נעשית בשני חלקים: דיסקציה הגולמי בסדר. ב דיסקציה ברוטו הקיבה כולו גזור מן הסרטן. במהלך דיסקציה הקנס STNS מופק הקיבה באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה מיקרו לנתיחה הכלים (ראה תרשים 1). STNS כולל את STG, הגנגליון הוושט (OG), ואת הגרעינים commissural (בורג), כמו גם את העצבים כי innervate את שרירי הבטן. כאן, אנו מראים כיצד לבצע דיסקציה מלאה של STNS לקראת ניסוי electrophysiology שבו התאים STG תהיה רשמה intracellularly ואת העצבים ההיקפיים ישמשו הקלטות תאיים. הטכניקה הנכונה למציאת העצבים הרצוי מוצג, כמו גם הטכניקה שלנו desheathing הגנגליון לחשוף את somata ו neuropil.

מערכת העצבים stomatogastric (STNS) של הסרטן יונה (<em&gt; ג borealis</em&gt;) יכול לשמש electrophysiology, אימונוהיסטוכימיה, תרבות מחקרים התא. מיצוי STNS נעשית שני חלקים: דיסקציה הגולמי בסדר.

סרטן Borealis מערכת העצבים Stomatogastric Dissection

הגנגליון הסטומטוגסטרי (stomatogastric ganglion - STG) מהווה מודל מצוין לחקר אינטראקציות תאיות ורשתיות מכיוון שהוא מכיל מספר קטן יחסית של...

נוהל זה מתחיל בנתיחה גסה של קיבת הסרטן, שבה מסירים מהסרטן את הגפיים ואת ה-dorsal carpus. הקיבה כולה מופרשת מהחיה. הקיבה נחתכת וננעלת במצב שטוח לצלחת שרד שחורה באמצעות סיכות.כהכנה לניתוח העדין, מערכת העצבים הגסטרית של ה-Steamatic מופרדת מהקיבה ומועברת לפטריית פטרי שקופה מצופה ב-Sard, שם היא מופשטת מהמעטפת שלה כהכנה לניסוי אלקטרופיזיולוגי. שלום, שמי רייצ'ל או מהמעבדה של Martyr באוניברסיטת ברנדייס. ואני גבריאל גוטיירז, גם אני מהמעבדה של Martyr.היום נדגים בפניכם הליך לניתוח של מערכת העצבים הגסטרית הסומטית של הסרטן Crab Cancer Borealis. אנו משתמשים ב-St NS של הסרטן במעבדתנו לניסויי אלקטרופיזיולוגיה, אימונוהיסטוכימיה ותרביות תאים. באמצעות רשת עצבית זו, אנו יכולים לחקור מספר עקרונות יסוד של נוירוביולוגיה, כגון הומיאוסטזיס של נוירומודולציה, שונות של רשתות, התפתחות רשתות והתאוששות של רשתות.אם כך, נתחיל. לפני תחילת הנתיחה, יש להרדים את הסרטן על ידי קבורתו בקרח למשך 30 דקות. ודאו שהוא מוקף בקרח מכל צדדיו.הקרח משבית את מערכות החושים והמוטוריקה של הסרטן, אך הסרטן עשוי להגיב לאחר הוצאתו, בעודו מצונן. הכינו את הנתיחה הגסה על ידי איסוף הציוד הדרוש לחלק זה של הפרוטוקול. לפני התחלת העבודה, הכינו את מגש הנתיחה, מלקחיים, מספרי חיתוך עצם, מספריים קטנים, פינצטה לשיניים, שפכטל בעל קצה חרוטי, צלחת עם ציפוי שחור למניעת החלקה וסיכות לחרקים.היערכו על ידי חבישת כפפות. לאחר שחלפו 30 דקות, הוציאו את הסרטן מדלי הקרח באמצעות רגלו האחורית. כדי למנוע צביטה, הסירו תחילה את הצבתות על ידי סיבוב של כל אחת מהן פנימה, ולאחר מכן הניחו את הסרטן בתבנית הנתיחה.בשלב הבא, הסר כל רגל באמצעות אותה תנועת סיבוב. כעת, לאחר שהבעל חיים נותר ללא גפיים, השתמש ב-Ron Jos כדי להסיר את המקסילה (maxilla) המכסה את הפה ואת המקסילה הרכה. השתמש שוב ב-Ron Jos, התחל מהקצה האחורי-לטראלי של ה-carpus ואחוז היטב בקצה שלו. סגור את ה-Ron Jos בחוזקה ושבור את חלק ה-carpus הזה.ודאו שאתם מסירים מספיק מהקרפוס (carpus) כדי לאפשר לשפכטל להיכנס לפתח. המשיכו להסיר את קצה הקרפוס עד לעיניים וחזרו על הפעולה בצד השני. בעזרת הצד המחודד של השפכטל, גרדו בעדינות את הרקמה הפנימית הרכה מהתקרה של הקרפוס הגבי (dorsal carpus).בזמן ביצוע פעולה זו, השאר את השפכטור במגע עם ה-carus. כדי למנוע פגיעה ב-STNS, השתמש ב-Ron Jos כדי להסיר חלקים מה-carus שהופרדו מהרקמה. הסר את ה-dorsal carus עד לנקודה שבה בולטים שני S קטנים מה-carus.בצע חיתוך קדמי ככל האפשר. ייצב את ה-cephalon בעזרת אצבע אחת תוך שבירת החלקים הקדמיים ביותר של ה-dorsal carus. הפר חלק מהרקמה הרכה מה-ventral carus.יש לוודא שכל שרירי המקרבים המקשרים את הרקמה ל-carus בצדו הגבונאי (ventral) של ה-carus הופרדו. יש לשלוף את המנדיבולות אחת אחת על ידי קיבוע הלסתות הנגדיות למנדיבולה, סיבוב כלפי חוץ ומשיכה; שני מכשולים ארוכים עם שרירים צמודים אמורים להיות מחוברים למנדיבולה שהוצאה. אם הפעולה בוצעה כהלכה, יש להפריד את הרקמה מצדדי ה-cephalon סמוך לעיניים.בעזרת השפכטר ומספרי ניתוח קטנים, חתכו שכבה אחר שכבה לרוחב הרקמה, ממש לצד השקע של ה-ossicle. השעינו את שארית הסרטן כנגד תבנית הניתוח. בעזרת הצבתים שהופרדו, הפרידו את כל ה-labrum מה-epistle.באמצעות מספריים קטנים או מספריים לחיתוך עצם, בצעו שני חתכים אלכסוניים לתוך ה-ventral carpus. כדי להסיר את ה-cephalon, אחזו כעת ב-labrum באמצעות פינצטה עם שיניים וחתכו את ה-labium מה-osci בצד הוונטרלי. הרימו בעדינות את השפה מה-ventral carus שנותר.השתמשו במספריים קטנים כדי להפריד את החלק הגבי של הקיבה מהרקמה המצפה את ה-carus. כאשר ה-pori canula נראים, גזרו את הקיבה מהרקמה משני צדדיה עד להוצאת הקיבה מהסרטן, תוך החזקת הקיבה ב-lip באמצעות פינצטה. הניחו את הקיבה על כף היד ושפכו סליין לתוך הפה.פעולה זו תרחב את הקיבה ותקל על חיתוכה באמצעות המספריים הקטנים. גזרו מפתח הפה מטה בין ה-ula ישירות דרך המחסום. לאחר מכן, גזרו באלכסון מטה דרך שני ענפי ה-cardio.לבסוף, גזרו את קצותיהם של שלושת השיניים שבתוך הקיבה. הניחו את הקיבה על צלחת מצופה בשעווה שחורה, כאשר פנים הקיבה פונה כלפי מטה, כדי להכין אותה לתסריט הדיסקציה העדין. הצמידו את חמש פינות הקיבה באמצעות סיכות לחרקים והטבילו את הדגימה בסליין קר.הניתוח העדין מבוצע תחת סטראוסקופ ודורש פינצטות ומספריים עם קפיץ, וכן מחזיק סיכות עם מחט טונגסטן. יש להכין מראש צלחת פטרי עם מגן שוליים שקוף ומספר סיכות חוט עדינות; התחל בהגדלה הנמוכה ביותר, והקבע באמצעות סיכות את השטחים הקרובים לשפה שהייתה בעבר פתח הפה. כעת, הרם את הדגימה למצב מתוח על ידי סידור מחדש והוספת סיכות לפי הצורך.בעזרת פינצטה, הרימו בזהירות את ההיפודרמיס המנוקד המכסה את החלק התחתון של הדגימה וגזרו אותו לרוחב. מה שצריך להישאר הוא רقعה של היפודרמיס עם שתי נקודות לבנות. כעת קלפו את הרקמה הקרומית הצהובה והדקיקה הקרובה לתחתית הדגימה. ה-M vns קשורים בצורה חלשה לצדו התחתון של רקמה זו.השתמשו בלהב המספריים כדי להפריד בזהירות את ה-M VNS מהרקמה הצהובה בזמן שהיא נמשכת למעלה. גזרו את הרקמה הצהובה לצד מספר תהליכים לבנים ועבים הנראים לעין במוח. רוב המוח קבור כעת ברקמה.עקבו אחר התהליכים המתרחבים לצדדים ובכיוון השפה. אלו הם שני העצבים הקומיסורליים (commissural nerves). ברגע שנמצא קצה העצב הקומיסורלי, הסירו את הרקמה הספוגית המסיבית בצבע לבן-שומני שגודעה מצד המוח.אתר את ה-iOS וה-sos בצומת שבהם הם פוגשים את ה-commis ganglia. גזור את השריר והרקמה כדי לחשוף את אורכם של ה-IO ns וה-so ns; שני העצבים הללו רצים מדיאלית מה-commis ganglia ופוגשים את העצב הוושטי. חזור לטלאי ההיפודרמיס המנוקד וגזור אותו.פעולה זו אמורה להותיר פתח בעורק המקיף את ה-STG. חתכו דרך הפתח כדי להפריד בין שני השרירים המגביים את ה-STG. הרימו את קצות השרירים הללו וחתכו מתחתיהם כדי להפרידם מהעורק. שלב זה חושף את ה-ALNs.הסר את השרירים הצדדיים עד לקו הסחוס מעל ה-STN. ה-TN הוא עצב העולה מה-STG ויש לו בליטה קלה. לאחר מכן, גזור את הרקמה העורקית המקיפה את ה-STG עד לנקודת המפגש של ה-M vns DGN וה-DVN.עקבו אחר ה-DVN בעודו מתפצל לשני ה-LVNs. גזרו דרך הרקמה הלבננה והעדינה עד שכל LVN נחשף לחלוטין ופוגש את ה-DLVN. אתרו את ה-PSN מעל ה-Osco.בקרבת התחתית של הדגימה, ניתן להשתמש ב-PSN כדי לאתר את נקודת החיבור בין ה-LVN ל-DLVN. כך ה-DV DLV עובר לכיוון זה. הוא יורד לכאן. כן.ואז זה מתפצל והולך לכיוון הזה. נכון. לכן מה שאני בדרך כלל עושה זה למצוא אותם כאן למטה ואני סוג של עובד את דרכי חזרה למעלה. ה-PDN מסתעף מה-DLVN ונמצא בין ה-ULA לבין שרירי שסתום ה-cardio Pylori. כן. אז הנה ה-ampule ula, ה-ula ampule, ה-P, ה-PYN ממש כאן.הקפידו להשאיר חלק מהשריר מחובר לאחד העצבים הללו כסימן כדי להבדיל ביניהם. לאחר שכל העצבים נחשפו, נתקו כל קשר שנותר בין ה-STNS לבין הקיבה. לבסוף, הסיטו בזהירות את ה-STNS הרחק משאר חלקי הקיבה.חיתוך של חיבורים שהוחמצו. הכינו את צלחת ה-S guard השקופה על ידי שפשוף של רקמת קיבה עליה עד שהיא מרגישה רטובה ופחות דביקה. ה-STNS ייצמדו בחוזקה ל-sogar.אם הצלחת לא הוכנה באופן זה, יש להוסיף לצלחת מעט תמיסת מלח קרה וטרייה. אחזו בקצוות העליונים של העצבים הקומיסוראליים (commissional nerves) בעזרת פינצטה והעבירו את ה-st NS לצלחת סוגאר (sogar) נקייה. המוח יישאר מחובר לעצבים הקומיסוראליים כדי למנוע קשרים.כעת, הכין את ה-STNS לקיבוע על ידי ניתוק המוח מעצבי ה-Commis. השתמש בסיכות minuchin כדי לקבע את ארבעת קצותיהם של עצבי ה-Commis למגן הסף (sill guard). ודא שהדגימה מונחת בצורה נכונה על ידי בדיקה שה-IVN פונה כלפי מעלה ושה-DGN יוצא מעט מתחת לסיכת ה-STG.את שאר קצות העצב מסירים באמצעות פיני סיב דקים, פינצטה עדינה ומספריים. נקה בזהירות כל שארית של שריר או רקמה מה-STNS. כעת יש להסיר את המעטפת של ה-STG באמצעות מחזיק פינים ומחט טונגסטן עדינה ומעוקלת מעט.צרו חור קטן בפינת מעטפת ה-STG, הרחק מגופי התאים. דחפו בעדינות את מחט הטונגסטן לתוך החור והגעישו אותה בין המעטפת לבין ה-Samara. גזרו או קרעו בעדינות לשונית מהמעטפת המופרדת כדי לחשוף את ה-STG neuro pill ואת גופי התאים.הדבק בעזרת סיכות כל מקפל של הנצה כדי להגביר את הנגישות לגופי התאים ולייצב את ה-STG עבור הקלטות תוך-תאיות. מתח את שאר ה-STNS תוך וידוי שכל עצב מתוח ומרווח היטב לצורך הקלטה חוץ-תאית. באופן אידיאלי, כל העצבים צריכים להיות נקיים מצווארים ומנזקים, במיוחד אלו שמהם תבצע את ההקלטות.אף אחד מהעצבים לא צריך להיות סבך או פיתול. ה-STG צריך להיות שלם, כאשר כל תאיו מסודרים במבנה של זקן סביב ה-NI bill. ה-TNS היה סימטרי דו-צדדי ונראה כהומונקולוס, כאשר ה-LVNs מהווים את הרגליים.ה-M vns הן הזרועות והקצה הקדמי הוא הראש. הרגע הצגנו בפניכם כיצד לבצע דיסקציה של מערכת העצבים הגסטרית הסומטית של הסרטן כהכנה לניסוי אלקטרופיזיולוגי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לבצע דיסקציה של העצבים שאתם מתכננים להקליט מהם על ידי מעקב אחר העצבים הרצויים אל השרירים שהם ידועים כמעצבבים.וודאו ש-STNS מהודק בצורה מתוחה על פנית הסיגר השקופה, כאשר הצד ללא הבידוד של ה-STG פונה כלפי מעלה. זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

cancer-borealis-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מתארים את לנתיחה קנס של מערכת העצבים stomatogastric מהבטן של לובסטר האמריקאית...

Homarus Americanus Stomatogastric Dissection מערכת העצבים

אנו מתארים את לנתיחה ברוטו של הקיבה של לובסטר האמריקאית...

Dissection ברוטו של קיבה של לובסטר, Homarus Americanus</em

שיתוף פעולה בין אונקוגן הופעל כמו RAS V12 ומוטציות בגנים קוטביות תא כמו שרבטה, לגרום לצמיחת גידול בדרוזופילה שבו תאים סרטניים גם להציג התנהגויות פולשנית. הנה פרוטוקול פשוט לאינדוקציה והתבוננות בגידולים שפירים ופולשנית מוצג.

פרוטוקול גנטי אינדוקציה ויזואליזציה של גידולים שפירים ופולשני בסוג cephalic מכלולי<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Lampreys לשחזר תנועה לאחר פגיעה בחוט השדרה מלאה. עם זאת, חלק מתאי העצב מקרין שדרה הם regenerators טוב ואחרים לא. מאמר זה ממחיש את הטכניקות לזחלי צמד ים ים דיור (ומבוגרים הפכו לאחרונה), הפקת transections חוט השדרה מלאה והכנת מוח wholemount וחוט שדרה לכלאה באתר.

חוט השדרה מלא פגיעה ומוח Dissection פרוטוקול Wholemount לאחר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בזחל ים צמד ים

כאן אנו מתארים את דיסקציה של חוט העצב הבטני של הסרטנים. אנו גם מדגימים טכניקה אלקטרופיזיולוגית לתיעוד תנועה פיקטיבית מנוירונים מוטוריים של שחייה.

מערכת Swimmeret של סרטן הנהרות: מדריך מעשי לDissection של חוט העצב ותאי הקלטות של התבנית מוטורית

מאמר וידאו זה מציג את השימוש בגרעיני השורש הגבי (DRG)/מודל תאי סרטן באדנוקרצינומה של צינור הלבלב.

במבחנת דוגמנות של פלישה העצבית סרטנית: מודל גנגליון השורש הגבה

פלישה פרינוירולית (PNI) היא תכונה שכיחה של קרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר (HNSCC), המעניקה שיעורי הישרדות נמוכים יותר. המנגנונים שלו אינם מובנים היטב. תוך שימוש בנויריטים הנוצרים מגרעיני שורש גב עכברים המוגבלים למטריצה מוצקה למחצה, ניתן לחקור את המסלולים המעורבים ב-PNI של קווי תאי HNSCC.

מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור כירורגי מינימלית פולשנית של השרירים הפנימיים למנגנון האכלה של שבלול ימית הaplysia קליפורניה כדי להבין את התפקידים של שרירים אלה בעת האכלה התנהגות.

שיטה מינימלית פולשנית לשרירי השרירים הפנימיים של השיניים של Aplysia קליפורניה

פרוטוקול זה מציג שיטה להדמיית פעילות אוכלוסיה עצבית עם רזולוציה של תא יחיד במינים לא מהונדסים של חוליות באמצעות צבעים רגישים למתח ספיגה ומערך פוטודיודות. גישה זו מאפשרת זרימת עבודה מהירה, שבה ניתן לבצע הדמיה וניתוח במהלך יום אחד.

הדמיה אופטית מבוססת פוטודיודה להקלטת דינמיקה ברשת עם רזולוציית נוירון יחיד בבלתי חוליות לא מהונדסים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל עכברי של אבלציה של עצבוב אדרנרגי על ידי זיהוי וכריתה של גנגליון צוואר הרחם העליון.

טכניקה כירורגית לכריתת גנגליון צוואר הרחם מעולה במודל מורין

למדו את שיטת הניתוח של מערכת העצבים הסטומטוגסטרית מסרטן Cancer borealis. פרוטוקול זה מאפשר הכנה לרישומים אלקטרופיזיולוגיים וחקר מעגלים עצביים ודפוסי תנועה.

סרטן Borealis מערכת העצבים Stomatogastric Dissection

גלה סרטונים נוספים