Name: גין ירייה transfection של נוירונים בהיפוקמפוס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: למדו פרוטוקול לבידוד היפוקמפוס ממוח שלם באמצעות שלב חיתוך נקי. השיטה כוללת חיתוך רקמה, דגימה ב-37 מעלות צלזיוס ושימוש בפינצטה לבידוד מדויק של נוירונים להמשך מחקר נוירולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

ג&#39;ין ירייה transfection של נוירונים בהיפוקמפוס

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

שלום, אני Kma. אני עובדת במעבדת Case באוניברסיטת Brown. שלב ה-Clean Slicer עם 70% ethanol. הכניסו את המקלעת של הפלטה לתוך שש.מלאו את פלטת הבארים במצע והדגרימו בטמפרטורה של 37 מעלות. העבירו את המוח השלם באמצעות פינצטה בין המוח האמצעי לבין ארבעת אזורי המוח. בודדו את ההיפוקמפוס בצד אחד, ולאחר מכן בודדו את ההיפוקמפוס מהצד השני. הניחו את ההיפוקמפוסים על טיפה של PBS.שאבו את ה-PBS החוצה ובצעו חיתוכים סגיטליים באמצעות חותך הרקמות. חזרו על הפעולה, העבירו את החיתוכים למשטח תמיכה על ידי שאיבה עם שטיפת PBS, ושטפו את החיתוכים על ידי הוספה ושאיבה עדינה של PBS ומצע גידול. הפרידו בין החיתוכים בעזרת פינצטה.שטוף את החתכים ב-PBS ובמצע גידול. העבר שוב את החתכים אל הפלטה והכנס אותם. שאב את מצע הגידול מהחתכים באמצעות פינצטה.חברו את צינור התותח הגנטי (gene gun) לגליל ההליום. חברו את הקנה לתותח הגנטי. מלאו את המחסנית בתחמושת.הכנס את המחסנית לתוך אקדח ה-Jing. כוונן את הלחץ במיכלי ההליום. ירה חרוזי EGFP על החתכים.ועכשיו.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מתארים שיטה להכנת דנ"א כדורים מצופים זהב להדגים את השימוש בכדורים כאלה biolistically transfect נוירונים בהיפוקמפוס פרוסות תרבותי.

הכנת כדורי אקדח ין transfection Biolistic של נוירונים תרבות Slice

הדמיה תא חי היא של כלי מסוים כאשר לומדים את הדינמיקה של סחר אברון. כאן אנו מתארים פרוטוקול הדמיה חיה של צפופה ליבות שלפוחית ​​בנוירונים בתרבית שימוש רחב בתחום מיקרוסקופ פלואורסצנטי. פרוטוקול זה הוא גמיש ניתן להתאים האברונים תמונה אחרים כגון המיטוכונדריה, endosomes, ואת peroxisomes.

הדמיה חיה של צפופה ליבות שלפוחית ​​בתוך ראשי נוירונים בהיפוקמפוס Cultured

פרוטוקול זה מתאר את הצעדים הנדרשים כדי לנתח, transfect דרך electroporation ועכבר תרבות נוירונים בהיפוקמפוס ואת קליפת המוח. לטווח קצר תרבויות ניתן להשתמש ללימודי תולדה של האקסון והדרכה, ואילו לטווח ארוך תרבויות יכול לשמש מחקרים synaptogenesis ניתוח בעמוד השדרה הדנדריטים.

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

מקור: Keener, D. G., et al. אלקטרופורציה של תא בודד על פני תרביות פרוסות אורגנוטיפיות שונות של נוירונים מעוררים ומעכבים ספציפיים לכיתה של עכבר. J. Vis. Exp. (2020).סרטון זה מדגים את התהליך של אלקטרופורציה של תא בודד להחדרת DNA פלסמיד לתאי עצב בתוך תרביות פרוסות היפוקמפוס של עכברים. ההליך כולל מיקום מדויק של פיפטה, התאמות לחץ ופולסים של אלקטרופורציה כדי לחלחל באופן זמני את הממברנה העצבית, מה שמקל על העברת גנים. לאחר האלקטרופורציה, הפרוסה מודגרת כדי לאפשר ביטוי של הגן המבוקש.

ביטוי גנים באמצעות אלקטרופורציה של תא בודד בתרביות פרוסות היפוקמפוס של עכברים

מקור: Denaxa, M., el al., השתלת אבות של אינטרנוירונים קליפתיים מהונדסים כימוגנטית לתוך מוחות עכברים מוקדמים לאחר הלידה. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את ההליך להזרקת וקטור פלסמיד הנושא את הגן המעניין לאבות בין-נוירוניים בפרוסת מוח עוברית, ואחריו אלקטרופורציה לכניסת פלסמיד וביטוי גנים. אבות אבות מותאמים אלה יכולים לשמש מאוחר יותר לטיפול בהפרעות מוחיות.

העברת גנים בסיוע אלקטרופורציה משובצת אגרוז באבות אבות בין-עצביים בקליפת המוח של עכברים

המשקעים סידן פוספט הוא שיטה נוחה וחסכונית עבור transfection של תאים בתרבית. עם אופטימיזציה, ניתן להשתמש בשיטה זו בתאים שקשה transfect כמו נוירונים עיקרי. כאן אנו מתארים הפרוטוקול מפורט שלנו עבור transfection סידן פוספט של נוירונים בהיפוקמפוס cocultured עם תאי astroglial.

סידן פוספט Transfection של ראשוני נוירונים בהיפוקמפוס

שיפורים אחרונים בתכשירים אורגנוטיפיים של פרוסות מוח אפשרו את ניצולם ליישומים ביוטכנולוגיים. פרוסות אורגנוטיפיות שומרות על מאפיינים מבניים מקומיים של ביולוגיה in vivo, כולל קשרים סינפטיים פונקציונליים. כאן אנו מציגים שיטת אספקה ביוליסטית רגיוסלקטיבית לתיוג ומניפולציה גנטית של פרוסות אלה.

Regioselective Biolistic המיקוד בOrganotypic פרוסות המוח באמצעות אקדח ג&#39;ין השתנה

הציגו כאן היא שיטת צינור רולר ששונה culturing, לסירוגין דימות ברזולוציה של המוח מכרסמים פרוסות בשבועות רבים עם שינוי מיקום מדויק על photoetched coverslips. הכדאיות עצביים, מורפולוגיה פרוסה מתוחזקים היטב. יישומים של השיטה במלואו סגור באמצעות וירוסים עבור ביטוי מסוים סוג התא הינם מסופקים.

רולר ששונתה שיטת צינור לדימות לסירוגין במדויק לשפות אחרות וחוזר על עצמו במהלך תרבות לטווח ארוך של פרוסות המוח בכל מערכת סגורה

מוצג כאן פרוטוקול לאלקטרופורציה חד-תאית שיכולה לספק גנים הן בתאי עצב מעוררים והן בתאי עצב מעכבים על פני מגוון גילאים של תרבות פרוסות היפוקמפוס במבחנה. הגישה שלנו מספקת ביטוי מדויק ויעיל של גנים בתאים בודדים, אשר ניתן להשתמש בהם כדי לבחון פונקציות תאיות אוטונומיות ובין תאיות.

אלקטרופורציה חד-תאית על פני תרבות פרוסה אורגנוטיפית שונה של נוירונים מעכבים היפוקמפוס ומעמד ספציפיים

טכניקה זו ממחישה דרך יעילה כדי להכין את השכפול פגום מניות retroviral קידוד oncogene אדם, לאחר מכן נעשה שימוש לזירוז המחלה myeloproliferative במודל עכבר.

הפקה של רטרווירוס שכפול פגומים-by transfection חלוף של תאים 293T

למדו פרוטוקול לבידוד היפוקמפוס ממוח שלם באמצעות שלב חיתוך נקי. השיטה כוללת חיתוך רקמה, דגימה ב-37 מעלות צלזיוס ושימוש בפינצטה לבידוד מדויק של נוירונים להמשך מחקר נוירולוגי.

ג'ין ירייה transfection של נוירונים בהיפוקמפוס

גלה סרטונים נוספים