Name: החדר דג הזברה המוח Injection (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: למד טכניקת הזרקת חלולית מוחית לעוברי דג זברה לצורך הדמיית חללי המוח והבנת דינמיקת הנוירואפיתל בפיתוח עוברי. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של מורפוגנזה מוחית בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לאורה Lowery אן שפיתח את הטכניקה הזו במעבדה. HS נתמכת על ידי NIHMH70926. ג&#39;ניפר Gutzman נתמך על ידי מענק CSBi / מרק דוקטורט.

פרוטוקול חלק 1: הכנת microinjection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכונו הזריקה ידי משיכת מחטים נימי סאטר חולץ באמצעות מכשירים מחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את המחט עם פלורסנט לצבוע (כגון טקסס האדום dextran). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר מחט במנגנון micromanipulator ו microinjection. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את המחט לגודל המתאים בזווית כדי ליצור קצה משופעים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את גודל טיפה ולבדוק כי הוא בין 1-2nl לכל זריקה בשמן. </li></ol> חלק 2: הכנת עוברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את העוברים 30 דקות מוקדם יותר בשלב של עניין. לדוגמה, כדי ללמוד את החדרים ב 24 שעות שלאחר ההפריה (hpf), להזריק את העוברים על hpf 23.5. שלב את העוברים על פי קימל et al. (4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת stereomicroscope, בזהירות להסיר את סיסית מן העוברים באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת צלחת פלסטיק מצופה agarose 1%, חורים agarose עם טיפ 100-200 פלסטיק פיפטה μl. הסר בזהירות את אטמי agarose מן החורים באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת העוברים בתקשורת העובר לתוך צלחת agarose עם חורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף tricaine (שנעשו על פי Westerfield (5)) בתקשורת להרדים את העוברים ולמנוע תנועה במהלך הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות במקום זנב העובר לתוך החור, לכוון אותו כך מנגנון הזרקת נמצא בצד האחורי של העובר. </li></ol> חלק 3: הזרקת החדר המוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להזריק את החדר המוח, לסדר את ההתקנה המיקרומניפולציה כך את קצה המחט באותו שדה הראייה כפי העובר על מתח גבוה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות את המחט דרך roofplate הדק של למוח האחורי האחורי רק כדי hingepoint r0/r1 בלי לפגוע ברקמת המוח להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק מספיק לצבוע לחלוטין למלא את החדרים. זה עלול לקחת כמה זריקות כדי למלא את חלל החדר, תלוי בשלב של העובר. </li></ol> חלק 4: הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש נקי של 1% agarose מצופה צלחת, חורים חדשים בצלחת, הסר את המצתים, ולהוסיף tricaine להרדים את העוברים ולמנוע תנועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הזנב של העובר החדר, מוזרק לתוך החור בעמדה עבור תמונה הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קחו את התמונה באמצעות האור המועבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה קריטי מאוד שלא להזיז את העובר או מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי ההגדרות על המיקרוסקופ לקחת תמונה עם אור ניאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שנה את מיקום העובר לקחת תמונות לרוחב עם האור הן מועבר אור ניאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את התמונות כקובצי TIFF עבור עיבוד התמונה Photoshop. </li></ol> חלק 5: עיבוד תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעבד את התמונות ב-Photoshop, פתחו את האור המועבר ותמונות אור ניאון של העובר אותו לקח באותה תנוחה. הקפד כל ההגדרות זהים עבור כל תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרור תמונה פלורסנט שלך על התמונה האור המועבר ולסדר אותן בדיוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם התמונה פלורסנט שנבחר, בחר &quot;תמונה&quot;, &quot;התאמות&quot;, ואז &quot;החלף צבע&quot; וגם לשנות את הרקע משחור ללבן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלון &quot;החלף צבע&quot; להתאים את גורם &quot;הערפול&quot; ימינה עד התמונות פלורסנט נראה אחיד בצבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלון &quot;שכבות&quot;, בחר &quot;הכפל&quot; להציג את התמונות כיסוי. תמונת חלל החדר שלך צריך להתאים את התמונה בדיוק האור המועבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הקובץ וחזור על כל תמונות אחרות. </li></ol> תוצאות נציג / תוצאה פרופר תמונות הזרקת החדר מוצגים באיור 1 לוחות לספירה, ואילו דוגמה תמונות הזרקה שגויה מוצגים EH. זריקות נכונה יש קצוות חדים ולא מפוזר צבע. הזרקה שגויה, אשר מתרחשת כאשר המחט מוחדרת עמוק מדי לתוך החדר והוא פוגע ברקמת המוח להלן, יכול לגרום לצבוע שמחוץ לעין של מרחב החדר ועל החלמון. <img src="/files/ftp_upload/1218/1218figure1.png" alt="איור 1" width="600" height="742" /> באיור 1. החדר זריקות של 25 עוברי hpf סוג בר. (AD) שיטת הזרקה נכונה (EH) שיטת הזרקה שגויה מוצגים כדוגמאות. (A, E) תמונות brightfield הגב עם תמונות פלורסנט המקביל (B, F) את השכבה של תמונות פלורסנט brightfield (C, G) עבור שיטות הזרקת והלא מדויקות המוצג. החצים מצביעים על אזורים בהם לצבוע הלך מעבר בחלל החדר המוח עקב זריקה החדר נכונה (ראה &quot;פתרון בעיות&quot;). Anterior היא שמאלה כל התמונות. פתרון בעיות: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr style="font-weight:bold; font-size:16px;"><td> בעיה </tד&gt; <td> לגרום </td><td> תרופה </td></tr><tr><td> אתה מועך את העובר עם המחט. </td><td> מחט שלך בוטה מדי או טיפ גדול מדי. </td><td> התחל עם מחט חדשה לא לשבור אותו הרחק מאחור. שפוע מחט שלך כדי לעשות את זה חד כמו מחט מזרק. </td></tr><tr><td> הצבע הוא לאורך העובר ואת החלמון (ראה איור 1E-H). </td><td> מחט שלך עבר הרקמה ולא להישאר בחלל החדר. </td><td> מחט שלך עשוי להיות לא חד מספיק, אז אתה לא מצליח לשלוט על מהירות של לנקב. </td></tr><tr><td> צבע הוא חלש מדי או לא forebrain. </td><td> לא להשתמש בלחץ גבוה מספיק עבור הזריקה, או מחט שלך לא היה רחוק מספיק כדי להגיע הקדמי forebrain כאשר הזריקו את צבען. </td><td> להגביר את הלחץ הזרקה או מקום מחט שלך מעט קדמית יותר במהלך הזריקה. אתה יכול לשים את המחט דרך גבול למוח האחורי, המוח התיכון אם ביתר פירוט נדרש forebrain. אתה יכול גם פשוט לחכות קצת בשביל הצבע כדי לפזר עוד לפני הדמיה. </td></tr><tr><td> תמונות פלורסנט שלך חשוך מסביב לקצוות לאחר החלפת צבע Photoshop. </td><td> שכחת לשנות את ההגדרה &quot;הערפול&quot; בחלון להחליף צבע. </td><td> הזיזו את &quot;הערפול&quot; כל הדרך ימינה בחלון להחליף צבע. </td></tr><tr><td> המחט לא לנקב את roofplate למוח האחורי. </td><td> מחט שלך לא נחתך כראוי. </td><td> הפוך את מחט חדשה. אם אתה עושה הרבה זריקות ייתכן שתצטרך מחטים כמה שהם יכולים לקבל משעמם. </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li>
<li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li>
<li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead%2Fatp1a1a.1+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li>
<li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Westerfield, M. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , University of Oregon Press. (1995).</li>
</ol>

בסרטון הזה אנחנו מדגימים איך להזריק צבע פלואורסצנטי (טקסס האדום dextran) לתוך החדרים במוח דג הזברה מתפתח. שיטה זו משמשת כדי להמחיש את המוח בחלל החדר בניגוד neuroepithelium שמסביב שימושי מאוד לקביעת צורה של מרחב החדר, כמו גם את הצורה של רקמת המוח שמסביב. זה מאפשר לנו להבין טוב יותר את התהליך של היווצרות המוח החדר ואת המורפוגנזה המוח במשך הזמן העובר לחיות. טכניקה זו היא כלי מצוין ללימוד החדר המוח היווצרות פגמים לאפיון ראשוני המחקר של מוטנטים המורפוגנזה המוח.

<table><tbody><tr><td>פינצטה</td><td>כלי</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>צינוריות קפילריות (מחטים)</td><td>כלים</td><td>Frederick Haer and Co.</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>צלחות מצופות אגרוז</td><td>כלים</td><td>צלחות אגרוז (Seakem GTG; Lonza) (Corning)</td><td>צלוחות אגרוז (50027) (430166)</td><td>יש להכין את האגרוז בעומק של כ-2-3 מ"מ בתוך הצלחת, בהתאם לשלב ההתפתחותי של העובר שאתם מזריקים.</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאוסקופי</td><td>מיקרוסקופ</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ בעלת יכולות פלואורסצנציה ובתוספת תוכנה ללכידת תמונות</td><td>כלים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-200 &amp;mu; טיפי פפיטה</td><td>כלים</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>1111-0806</td><td>אלו הם הגדלים המדויקים ליצירת החורים באגרוז, כך שהעוברים יתאימו להם באופן מושלם.</td></tr><tr><td>פוטושופ (Photoshop)</td><td>ניתוח תמונות</td><td>Adobe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לולאת עובר</td><td>כלים</td><td></td><td></td><td>ניתן להכין אותם באופן עצמאי באמצעות פיפטה מזכוכית ושערה או חוט דיג, ולאטום אותם בעזרת שעוות דבורים.</td></tr><tr><td>מיקרו-מזרק</td><td>כלים</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PL1-100</td><td></td></tr><tr><td>שולף מחטים</td><td>כלים</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td>הגדרות (חום 785, מתיחה 70, מהירות 40, זמן 70).</td></tr><tr><td>מיקרו-מניפולטור</td><td>כלים</td><td>Narishige International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צבע פלואורסצנטי Texas-Red Dextran 70,000MW</td><td>ריאגנט</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>D1830</td><td>משקלים מולקולריים אחרים זמינים במידה ונדרש.</td></tr><tr><td>טריקאין (3-אמינובנזואית חומצה אתיל אסתר)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>מדיום לעוברים</td><td>ריאגנט</td><td></td><td></td><td>על פי Westerfield (5)</td></tr></tbody></table>

החדר דג הזברה המוח injection

Zebrafish Brain Ventricle Injection

המוח פרופר החדר היווצרות במהלך התפתחות המוח העוברי נדרש תפקוד המוח הנורמלי. חדרי המוח הינם חללים שמור ביותר בתוך המוח, כי הם מלאות בנוזל השדרה. בשנת דג הזברה, לאחר היווצרות בצינור העצבי, neuroepithelium עובר סדרה של המגבלות וקפלי בזמן שהוא מתמלא נוזל וכתוצאה מכך היווצרות החדר המוח. על מנת להבין את תהליך היווצרות החדר, ואת השינויים בצורת neuroepithelial המתרחשות בעת ובעונה אחת, אנחנו צריכים דרך לחזות את החלל החדר לעומת רקמת המוח. עם זאת, טבעו של עוברי דג הזברה שקוף מקשה להבדיל בין רקמות מחלל החדר. לכן, פיתחנו החדר המוח הזרקת טכניקה שבה שטח החדר מתמלא פלורסנט לצבוע הדמיה על ידי brightfield וכן במיקרוסקופ פלואורסצנטי. Brightfield ותמונות פלורסנט מעובדים אז גבי Photoshop. טכניקה זו מאפשרת להדמיה של מרחב החדר עם צבע פלואורסצנטי, בהשוואה בצורת neuroepithelium בתמונה brightfield. החדר המוח הזרקת דג הזברה יכול להיות מועסק מן ההפריה 18 שעות הודעה דרך שלבים מוקדם הזחל. השתמשנו בטכניקה זו בהרחבה, כמו גם באפיון המורפוגנזה מוח מוטציות (1-3) במחקרים שלנו, של היווצרות המוח החדר ואת המורפוגנזה.

לאחר היווצרות בצינור העצבי, neuroepithelium מכווץ קפלי תוך הצינור מתמלא הנוזל השדרתי עובריים (eCSF) כדי ליצור את החדרים במוח העוברי. פיתחנו טכניקה זו זריקה החדר כדי להמחיש טוב יותר את החלל מילא נוזל לעומת הצורה neuroepithelial בעובר חי.

החדר דג הזברה המוח Injection

היווצרות תקינה של חדרי המוח במהלך התפתחות המוח העוברי נחוצה לתפקוד תקין של המוח. חדרי המוח הם מבנים שמורים מאוד...

הליך זה מתחיל בקביעת שלב ההתפתחות (staging) של עוברי דגי זברה. כאשר העוברים מגיעים לשלב המבוקש, יש להוציאם מהקוריון. לאחר מכן, יוצרים חורים בצלחת מצופה aros באמצעות קצה של פפית כדי להרכיב את העוברים, ומניחים את העוברים בעדינות בתוך החורים כאשר זנבותיהם פונים כלפי מטה.לאחר קיבוע העוברים, מזריקים בזהירות צבע פלואורסצנטי לחלל המערכות (ventricle space) של העובר דרך המוח האחורי. לאחר ההזרקה למערכות, העוברים נדגמים באמצעות דימות והנתונים מעובדים באמצעות Photoshop. שלום, אני ג'ניפר גוטמן מהמעבדה של ד"ר הייזל סיב במכון וייטהד למחקר ביו-רפואי ב-MIT בקיימברידג', מסצ'וסטס.היום נדגים לכם פרוצדורה להזרקה לחדרי המוח של דגי זברה. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי לחקור את התפתחות חדרי המוח ואת המורפוגנזה של האפיתל העצבי בדגי זברה חיים. בשל אופי העוברים השקופים של דגי הזברה, אפיון צורת חדרי המוח עלול להיות קשה.טכניקה זו היא דרך שימושית ופשוטה להבחין בין החלל המלא בנוזל לבין הרקמה שסביבו, ולאפיין עוברים מוטנטיים שעשויים לסבול מפגמים בהיווצרות חדרי המוח. אז בואו נתחיל. כדי להיערך להזרקה לחדר המוח של דגי הזברה, נתחיל בהכנת מחטי ההזרקה.למשיכת מחטי הקפילרה משתמשים במכשיר needle polar של חברת Sutter. לאחר מכן, ממלאים את מחט הקפילרה בצבע פלורסצנטי, כגון Texas red dextrin. לבסוף, מרכיבים את המחט המלאה במיקרו-מניפולטור בתוך מערכת להזרקה מיקרוסקופית.חתוך את המחט באלכסון לגודל המתאים. כדי ליצור קצה משופע, מדוד את גודל הטיפה של המחט ובדוק שהיא נעה בין 1 ל-2 ננוליטר להזרקה בשמן. כדי להתחיל את שלב זה של הפרוצדורה, על פי Kimmel, יש להזריק לכל העוברים 30 דקות לפני השלב המבוקש.לדוגמה, כדי לחקור את הפרונטריקלים (ventricles) 24 שעות לאחר ההפריה, יש להזריק לעוברים 23 וחצי שעות לאחר ההפריה. את העובר בשלב הרלוונטי מניחים תחת מיקרוסקופ סטריאו, ומסירים בזהירות את הכוריון מהעובר באמצעות פינצטה. לאחר מכן, מכינים את העוברים בצלחת agarose באמצעות צלחת פלסטיק מצופה ב-1% agarose, ומבצעים חורים ב-agarose בעזרת טיפ של פיפט פלסטיק של 200 µL.הסר בזהירות את פקקי ה-aros מהחורים באמצעות פינצטה. העבר את העובר ואת מצע גידול העובר אל צלחת ה-aros עם החורים. הוסף trica למצע כדי להרדים את העובר ולמנוע תנועה.במהלך הניסוי, מקמו בעדינות את העובר כאשר הזנב פונה כלפי מטה לתוך החור, וכיוונו אותו כך שמכשיר ההזרקה יימצא בצדו האחורי של העובר. כעת, לאחר שהעובר מוקם ומכוון כראוי בצלחת האגרוס, אנו מוכנים להזרקה לחדרי המוח. ראשית, סדרו את מערך המיקרו-מניפולציה כך שקצה המחט יהיה באותו שדה ראייה של העובר בהגדלה גבוהה.החדירו בזהירות את המחט דרך לוח הגג הדק של המוח האחורי, ממש מאחורי נקודת הציר R0-R1, מבלי לפגוע ברקמת המוח שמתחתיה, והזריקו כמות צבע מספקת למילוי מלא של הפרוזדורות. ייתכן שיידרשו מספר הזרקות כדי למלא את חלל הפרוזדור, תלוי בשלב ההתפתחותי של העובר. כאשר ההזרקה לעובר הושלמה והוא מוכן לדימות, הכינו צלחת אגר (agarose dish) חדשה עבורו.באמצעות צלחת נקייה מצופה ב-1%aros, נקב חורים בצלחת והוצא את הפקקים. העבר את העובר לצלחת והוסף trica כדי להרדימו ולמנוע תנועה. הנח את הזנב של העובר שקיבל הזרקה לחדר (ventricle) לתוך החור במיקום המאפשר הדמיה גבית (dorsal image).העוברי מוכן כעת לדימות. צלם תמונה באמצעות אור תבני (transmitted light). חשוב מאוד לא להזיז את העוברי או את המיקרוסקופ.בשלב הבא, שנו את ההגדרות במיקרוסקופ וצלמו תמונה באור פלואורסצנטי. מ reposition את העוברי כדי לצלם תמונות מהצד (lateral) הן באור תהום (transmitted light) והן באור פלואורסצנטי. שמרו את כל התמונות כקבצים לצורך עיבוד תמונות ב-Photoshop.כדי לעבד את התמונות ב-Photoshop, פתחו את תמונות האור המועבר והאור הפלואורסצנטי של אותוו עובר שצולמו באותה מיקום. ודאו שכל ההגדרות זהות. עבור כל תמונה, גררו את התמונה הפלואורסצנטית על גבי תמונת האור המועבר ויישרו אותן בדיוק כאשר התמונה הפלואורסצנטית נבחרת. בחרו בתיקוני תמונה (image adjustments), ולאחר מכן ב-"replace color" ושנו את הרקע השחור ללבן.בחלון החלפת הצבע (replace color), כווננו את גורם הטשטוש (fuzziness) ימינה עד שהתמונה הפלורסצנטית תיראה אחידה בצבעה. בחלון השכבות, בחרו באפשרות multiply. כדי לצפות בתמונות החפיפה, תמונת חלל הפרוזנטריק (ventricle space) צריכה להתאים בדיוק לתמונת האור המועבר.שמרו קובץ זה וחזרו על הפעולה עבור תמונות נוספות. אם ההזרקה לחדר (ventricle) בוצעה כראוי, התמונות צריכות להציג קצוות חדים שאינם מפוזרים, כפי שמוצג כאן בתמונות של 25 שעות לאחר ההפריה. בלוח A מוצגת תמונת שדה בהיר (bright field), בלוח B מוצגת התמונה הפלואורסצנטית ובלוח C מוצגת תמונת העל (overlay).מבט צדי של תמונת השכבה העליונה מוצג בלוח D. מאידך, אם במהלך ההזרקה לחדר המוח המחט מוחדרת עמוק מדי, היא תיכנס לרקמת המוח שמתחת לחלל החדר ותוביל להזרקה שגויה. הדבר גורם לכך שהצבע יהיה נראה מחוץ לחלל החדר ובחלמון, כפי שמוצג כאן. לוח E מציג את תמונת השדה המואר.פאנל F מציג את התמונה הפלואורסצנטית ופאנל G מציג את התמונה המורכבת (overlaid). מבט צדי של התמונה המורכבת מוצג בפאנל H. החיצים מצביעים על אזורים שבהם הצבע חדר מעבר לחלל הפרוזנקיולות של המוח. בסרטון זה, הדגמנו כיצד להזריק צבע פלואורסצנטי לפרוזנקיולות של מוח דגי zebrafish בהתפתחות.שיטה זו משמשת להדמיית חלל הפרוזדור של המוח בניגוד לאפיתל העצבי הסובב אותו, והיא שימושית ביותר לקביעת צורת חלל הפרוזדור וכן צורת רקמת המוח הסובבת. טכניקה זו מאפשרת לנו להבין טוב יותר את תהליך היווצרות פרוזדורי המוח ואת המורפוגנזה של המוח לאורך זמן בעובר חי. זהו כלי מצוין לחקר פגמים בהיווצרות פרוזדורי המוח, ולמאפיין ראשוני של מוטנטים במורפוגנזה של המוח.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה שבאמצעותה לנתח את המוח חוליות עוברי דג הזברה מתפתח לחיות ברזולוציה של תא בודד על ידי מיקרוסקופיה confocal. זה כולל את השיטה שבאמצעותה אנו מזריקים את העובר מתא בודד דג הזברה ולאחר מכן הר התמונה במוח המתפתח.

חיים הדמיה של המוח על ידי עוברי דג הזברה מיקרוסקופיה confocal

אנו מציגים שיטה לאיסוף נוזל שדרה (CSF) וליצור מערכת שאין בה CSF בתוך מערכת חדרית מוח דג הזברה העוברית. זה מאפשר לבדיקה נוספת של רכב CSF והדרישה שלה במהלך התפתחות מוח העוברית.

ניקוז ידני של חדרי המוח העוברי דג הזברה

סרטון זה מתאר אלקטרופורציה in vivo, שהיא טכניקה להעברת דנ"א לתאים אפנדימוגליים בדגי זברה בוגרים.

ב Vivo אלקטרופורציה: שיטה ספציפית לאתר להעברת דגי זברה

סרטון זה מתאר את הטכניקה של מיקרודיסקציה של המוח מדג זברה בוגר. שיטה זו מסייעת בהשגת נויאורוספירות שמקורן במוח שלם שניתן ללמוד עוד יותר.

דיסקציה מוחית של דגי זברה: טכניקה של נוירוביולוגיה של דגים

הסרטון מדגים מיקרו-הזרקה של ליפופוליסכרידים (LPS) למוחם של זחלי דגי זברה כדי לגרום לדלקת עצבית. הזחלים ממוקמים על צלחת מרופדת באגרוז, המחט מוחדרת לחדרי המוח, וה-LPS מוזרק. ה-LPS המוזרק מעורר תגובה חיסונית שמובילה לדלקת עצבית.

גרימת דלקת עצבית בזחלי דגי זברה עם הזרקת ליפופוליסכריד

סרטון זה מדגים את ההליך של הזרקת פפטידים עמילואידים מונומריים למוחם הקדמי של דגי זברה בוגרים כדי ליצור רעילות עמילואידית, המחקה את הנזק העצבי שנראה במחלת...

ביסוס מודל מחלת אלצהיימר במוח של דגי זברה באמצעות הזרקת פפטיד עמילואיד

במאמר זה, אנו מדגימים שיטה למניפולציה של ביטוי גנים בתאי חדריות של telencephalon דג הזברה המבוגר באמצעות oligonucleotides morpholino antisense. אנו מציגים שיטה זו כפרוטוקול יעיל ומהיר שיכול לשמש למחקרים תפקודיים במוח החולייתנים המבוגר.

מיקרומניפולציה של ביטוי גנים במוח דג הזברה למבוגר באמצעות Microinjection Cerebroventricular של oligonucleotides morpholino

הדמיה של כלי דם במוח בפיתוח דג הזברה זחל הוא תאר. טכניקות כדי להקל על ההדמיה 3D ולשנות התפתחות כלי דם במוח באמצעות טיפולים כימיים גם מסופקות.

הדמיה ו3D שחזור של מבני כלי דם במוח בעוברי דג הזברה

שיטה זו מסתמכת על הזרקה של 0.5-3 μL של הפתרון לתוך החזה של דג מבוגר. ההליך מספק ביעילות חלבונים ותרכובות כימיות לתוך הסמיכות של הלב דג זברה מבלי לפגוע האיבר. הגישה מתאימה לבדיקת ההשפעות של גורמי אקסוגני על רקמות שונות של הלב.

הזרקת תוך-החזה לחקר בוגרים של לב זברדג

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההזרקה התוך-חדרית (ICV) של דגי זברה בוגרים עם נוירוטוקסי-הידרוקסידופאמין (6-OHDA) בדיאנספלון הגחוני (Dn) ואת הערכת הליקוי וההתאוששות שלאחר מכן של פוסטלציה של התנהגות שחייה באמצעות מבחן הטנק הפתוח, המלווה בניתוח באמצעות תוכנת מעקב וידאו.

הערכת לוקומוטור של מודל מחלת פרקינסון למבוגרים המושרה על ידי 6-הידרוקסידופמין

פרוטוקול זה מדגים את המיקרו-הזרקה של ליפופוליסכריד לאזור חדר המוח במודל של זחל דג זברה כדי לחקור את התגובה הנוירו-דלקתית והרעילות העצבית המתקבלות כתוצאה מכך.

מיקרו-הזרקות חדריות למוח של ליפופוליסכריד לדגי זברה זחליים להערכת דלקת עצבית ורעילות עצבית

למד טכניקת הזרקת חלולית מוחית לעוברי דג זברה לצורך הדמיית חללי המוח והבנת דינמיקת הנוירואפיתל בפיתוח עוברי. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של מורפוגנזה מוחית בזמן אמת.

החדר דג הזברה המוח Injection

גלה סרטונים נוספים