Name: בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל Stereotaxic (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-16T20:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: למדו שיטה לחיתוך מוח פרימטים בלתי אנושיים במרחב סטריאוטקטי. הפרוצדורה כוללת הכנת ראש קוף מושתל, יצירת פרוסות קורונליות וקיפאון. שיטה זו תומכת במחקר מדעי המוח ובהבנת ארגון המוח הפרימטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות Ikiel Ptito לקבלת תמיכה טכנית המשיכה שלו. NSERC להעניק MP.

חלק 1: טרום עיבוד של רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות צריך להיות perfused היטב עם paraformaldehyde, glutaraldehyde, או פורמלין. זו יכולה להיות מושגת באמצעות זלוף transcardial הסטנדרטית המשמשת בדרך כלל כדי לקצור איברים אחרים. במחקר הנוכחי הנושא היה מורדמת עם קטמין הידרוכלוריד (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג, IM), מורדמים עם ממנת יתר של pentobarbital נתרן (25 מ&quot;ג / ק&quot;ג, ד) ו perfused transcardially עם 0.1 מ PBS עד לחלוטין exsanguinated.This לאחר מכן על ידי פתרון paraformaldehyde 4% PBS דקות 5 (~ 1 ליטר). </li></ol> חלק 2: חסימת Stereotaxic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הנחת הראש לתוך מסגרת stereotaxic את הקואורדינטות של אפס המטוס Horsley-Clarke/interaural צריך לקחת. זוהי נקודת האמצע התיאורטי בין האוזניים. כדי למדוד את המטוס הזה, הברים האוזן צריך להיות מצויד לא פחות במנגנון, אז במקום להב אזמל בזרוע מניפולטור stereotaxic ולמדוד את נקודת האמצע בין הסורגים האוזן. זה חשוב לקביעת שם כדי לחסום את רקמת המבוססים על צרכי המחקר. ברגע זה הוא סיים הגולגולת צריך להיות מוכן קיבעון לתוך המנגנון stereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למקם את הראש לתוך מסגרת stereotaxic הלסת התחתונה יהיה צורך להסיר עם rongeurs עצם אזמל. בנוסף העור, שרירים, רקמות חיבור יש להסיר כדי לחשוף את הגולגולת. לאחר רקמת חיבור יוסר הגולגולת, לחשוף את המוח על ידי לפורר את מכסה הגולגולת (החלק טבלאי של העצם העורפית וכן הקודקודית, עצמות מודעה חזיתית). בחלק הניסוי הנוכחי של מכסה הגולגולת יש הכל מוכן הוסר. היזהרו לא להסיר לחלוטין את העצמות הטמפורלית כי תעלות האוזן צריך להיות תמים כדי למקם את הראש לתוך מסגרת stereotaxic. עניין הנותרים הדורה יש להסיר מן המוח החשוף. הגולגולת עכשיו הוא מוכן להציב לתוך מסגרת stereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו אופן שבו אפשר היה לבצע ניתוח stereotaxic, להתאים את העין, החיך, וברים האוזן כזה ראש קבוע מאובטח במנגנון stereotaxic. מניחים את מניפולטור stereotaxic את הקואורדינטות קדמית / אחורית (A / P) מראש ולהעביר את מניפולטור להיבט לרוחב של המוח. לאט לאט להוריד את הלהב לתוך המוח, להעלות את הלהב לחלוטין מהמוח, ואז להעביר מדיאלית ולהפחית את הלהב שוב. חזור על שני השלבים עד הלהב הגיע היבט לרוחב של חצי הכדור ההפוך. זה משלים את הבלוק העטרה הראשונה. עבור בלוקים העטרה לאחר מכן להעביר את 1cm מניפולטור של ציר P / וחזור עד המוח כולו נחסם. </li></ol> חלק 3: הסרת המוח מהגולגולת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הראש מן המסגרת stereotaxic והחזק את המוח נחשף כף היד שלך. נסו לאבטח את המוח על ידי הצבת קלות למעוך את המוח בכף ידך מקום אצבע הזרת שלך על פני האונות המצחיות, תנועה זו מקטינה של המוח בגולגולת. על מנת למנוע את התייבשות פני השטח pial של המוח, במקום פיסת גזה לחה PBS ברחבי המוח. החזק את הראש בחוזקה על ידי הגולגולת לכרסם עצמות העורפית ובזמן הנותר יחד עם עמוד השדרה. זה חושף את הבסיס לרוחב היבטים של המוח. לבסוף להסיר כל העצם הפרונטלית הנותרים ואת עצם האף, אשר יאפשר גישה נורות חוש הריח. חשוב להסיר את העצם הקדמית האחרון כי כמו שתסיר את בסיס הגולגולת במוח נע מעט האונות הקדמיות יכולה להתקלקל על קצוות משוננים של העצם fontal. לחתוך ולהסיר הנותרים משנה הדורה. הרם בזהירות את הקדמי של המוח, החלק את אזמל תחת המוח לשחרר את המוח מהגולגולת. </li></ol> חלק 4: מדידות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ישנם מספר של מדידות שימושי יכול להתבצע לפני ההקפאה. לדוגמה, A / P ציר של המוח עם קליפר. יתר על צפיפות מסוימת ניתן למדוד על ידי שקילה המוח, מדידת נפח ידי עקירה של מים בתוך גליל סיימה אז חלוקת המשקל על ידי עקירה נפח (טבלה 1). </li></ol> חלק 5: סיום חוסמים את המוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדרך כלל כאשר להב סכין המנתחים מוחדר לתוך המוח זה לא מספיק זמן כדי לחדור לחלוטין את מלוא הגבי-הגחוני של המוח. ברגע שהמוח מוסר ומידות ברוטו מתקבלים, לקחת סכין חיתוך רקמות ולסיים חוסמים את המוח דרך בצד הגחוני של המוח (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הקפאת בלוקים, יש צורך cryoprotect הרקמה ב-PBS שנאגרו פתרונות מדורגים סוכרוז (10, 20, ו 30%) שמרו על 4 ˚ C עד כיורים המוח. זה בדרך כלל לוקח הדגירה לילה 10%, 2-3 ימים 20% נוספים 3-5 ימים 30% עבור אבני לשקוע בתחתית המיכל. שינוי יומי של הפתרון דואר סוכרוז 30% מומלץ. </li></ol> חלק 6: תוצאות נציג ישנם מספר של מדידות מורפולוגיים ברוטו שניתן לעשות פעם את המוח הוסר הגולגולת. אלה כוללים את אורך / P, משקל, צפיפות מסוימת (טבלה 1). בדרך כלל אנחנו חוסמים את המוח תוך 6-7 בלוקים מדידה 1cm (איור 1). כל תכשיט הוא צילם אז (איור 2) ניתן גזור נוספים בהתאם לצורכי מחקר או מוכן להקפאה בפתרונות סוכרוז מדורגים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נושא </td><td> אורך / P (מ&quot;מ) </td><td> משקל (גרם) </td><td> מים עקירה (מ&quot;ל) </td><td> ספציפיות צפיפות (גרם / מ&quot;ל) </td></tr><tr><td> O2303-2-1-1 </td><td> 64.3 </td><td> 28.1 </td><td> 24 </td><td> 1.171 </td></tr><tr><td> O5180-1 </td><td> 71.3 </td><td> 38.7 </td><td> 34 </td><td> 1.138 </td></tr><tr><td> O2708-3-1 </td><td> 62.8 </td><td> 28.7 </td><td> 26 </td><td> 1.104 </td></tr><tr><td> O9184-4-2 </td><td> 65.3 </td><td> 29.5 </td><td> 24 </td><td> 1.229 </td></tr><tr><td> N459-1-14-2 </td><td> 68.2 </td><td> 31.6 </td><td> 26 </td><td> 1.215 </td></tr><tr><td> ממוצע </td><td> 66.38 </td><td> 31.32 </td><td> 26.8 </td><td> 1.171 </td></tr><tr><td> STD dev </td><td> 3.38 </td><td> 4.33 </td><td> 4.17 </td><td> 0.052 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. מדידות מורפולוגי הגולמי של האונה הימנית של 5 Vervets ישן חודש <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig1.jpg" alt="דמות 1" /> <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig2.jpg" alt="דמות 1.5" /> באיור 1. שרטוטים של מטוסים העטרה המשמש חוסמים את המוח. זוהי דוגמה של המוח המבוגר מוחצן vervet. דוגמה של ההליך חוסם. הקווים האנכיים כאן הם במרווחים של 1 ס&quot;מ, בדרך כלל לייצור בלוקים 7 העטרה מן האונה כל. <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig3.jpg" alt="דמות 2" /> איור 2. בלוקים של רקמת המוח בחלל stereotaxic. לחסום כל תניב כ -200 סעיפים נלקחה ב 50μm. בעזרת שיטה זו הדגימה מעל 1200 חלקים דרך קליפת יילקחו ו 400-500 נוספים במוח הקטן, כאשר פרוס במישור העטרה.

<ol><li>Gallagher, M., Rapp, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+animal+models+to+study+the+effects+of+aging+on+cognition.+Annu+Rev+Psychol+48%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The use of animal models to study the effects of aging on cognition. Annu Rev Psychol 48.</a> , 339-370 (1997).</li>
<li>Clancy, B., Darlington, R., Finlay, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+developmental+time+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Translating developmental time across mammalian species.</a> Neuroscience. 105, 7-17 (2001).</li>
<li>Nowakowski, R. S., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+origin+and+route+and+rate+of+migration+of+neurons+to+the+hippocampal+region+of+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The site of origin and route and rate of migration of neurons to the hippocampal region of the rhesus monkey.</a> J Comp Neurol. 196, 129-154 (1981).</li>
<li>Rakic, P., Bourgeois, J. P., Eckenhoff, M. F., Zecevic, N., Goldman-Rakic, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+overproduction+of+synapses+in+diverse+regions+of+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Concurrent overproduction of synapses in diverse regions of the primate cerebral cortex.</a> Science. 232, 232-235 (1986).</li>
<li>Granger, B., Tekaia, F., Le Sourd, A. M., Rakic, P., Bourgeois, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tempo+of+neurogenesis+and+synaptogenesis+in+the+primate+cingulate+mesocortex%3A+comparison+with+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Tempo of neurogenesis and synaptogenesis in the primate cingulate mesocortex: comparison with the neocortex.</a> J Comp Neurol. 360, 363-376 (1995).</li>
<li>Zecevic, N., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+layer+I+neurons+in+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of layer I neurons in the primate cerebral cortex.</a> J Neurosci. 21, 5607-5619 (2001).</li>
<li>Ervin, F. R., Palmour, R. M., Young, S. N., Guzman-Flores, C., Juarez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+consumption+of+beverage+alcohol+by+vervet+monkeys%3A+population+screening%2C+descriptive+behavior+and+biochemical+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Voluntary consumption of beverage alcohol by vervet monkeys: population screening, descriptive behavior and biochemical measures.</a> Pharmacol Biochem Behav. 36, 367-373 (1990).</li>
<li>Palmour, R. M., Mulligan, J., Howbert, J. J., Ervin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+monkeys+and+men%3A+vervets+and+the+genetics+of+human-like+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Of monkeys and men: vervets and the genetics of human-like behaviors.</a> Am J Hum Genet. 61, 481-488 (1997).</li>
<li>Boire, D., Théoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereological+evaluation+of+neurons+and+glia+in+the+monkey+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+following+an+early+cerebral+hemispherectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Stereological evaluation of neurons and glia in the monkey dorsal lateral geniculate nucleus following an early cerebral hemispherectomy.</a> Exp Brain Res. 142, 208-220 (2002).</li>
<li>Bjugstad, K. B., Teng, Y. D., Redmond, D. E. J. r, Elsworth, J. D., Roth, R. H., Cornelius, S. K., Snyder, E. Y., Sladek, J. R. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+migrate+along+the+nigrostriatal+pathway+in+a+primate+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells migrate along the nigrostriatal pathway in a primate model of Parkinson's disease.</a> Exp Neurol. 211, 362-369 (2008).</li>
<li>Lemere, C. A., Beierschmitt, A., Iglesias, M., Spooner, E. T., Bloom, J. K., Leverone, J. F., Zheng, J. B., Seabrook, T. J., Louard, D., Li, D., Selkoe, D. J., Palmour, R. M., Ervin, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+abeta+vaccine+reduces+central+nervous+system+abeta+levels+in+a+non-human+primate%2C+the+Caribbean+vervet%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease abeta vaccine reduces central nervous system abeta levels in a non-human primate, the Caribbean vervet.</a> Am J Pathol. 165, 283-297 (2004).</li>
<li>Mash, D. C., Staley, J. K., Doepel, F. M., Young, S. N., Ervin, F. R., Palmour, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+dopamine+transporter+densities+in+alcohol-preferring+vervet+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Altered dopamine transporter densities in alcohol-preferring vervet monkeys.</a> Neuroreport. 7, 457-462 (1996).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

סנט קיטס vervet (Chlorocebus aethiops sabeus) הוא קוף עולם ישן עם דפוסים שיעורים דומים של התפתחות המוח הקורטיקליים קורטיקליים לזו של בני האדם. מין זה שימש מודל מורכב הפרעות התנהגות אנושית כמו התנהגות חרדה, יתר לחץ דם 8, 9 hemispherectomy, מחלת פרקינסון 10, מחלת Alzhemier 11, אלכוהול 12. לאחרונה, מין זה נעשה שימוש כדי לחקור את ההשפעות של חשיפה neuroanatomical נטורליסטי אתנול טרום לידתי. Vervets בהריון הורשו לשתות את המקבילה של 3-...

<table><tbody><tr><td>סקלפל</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>להבי סקלפל</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>כל מספריים כירורגיים מספיקים</td></tr><tr><td>רונגאורים</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>נייר סינון</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקסיס</td><td>Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>להב לחיתוך רקמה</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל stereotaxic

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

השימוש הלא אנושי פרימטים מספק מודל translational מצוינת להבנת תהליכים התפתחותיים הזדקנות בבני אדם<sup&gt; 1-6</sup&gt;. בנוסף, השימוש הלא אנושי פרימטים העניקה לאחרונה את ההזדמנות באופן טבעי מודל הפרעות פסיכיאטריות מורכבות כגון שימוש לרעה באלכוהול<sup&gt; 7</sup&gt;. כאן אנו מתארים טכניקה חוסמים את המוח במישור העטרה של הקוף vervet (<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;) בגולגולת שלם בחלל stereotaxic. השיטה המתוארת כאן מספק מטוס סטנדרטי סעיף בין אבני ונושאים וחתכים חלקית ממזער בין הבלוקים. חתך בלוק של רקמות במישור העטרה גם מקל על סימון שטח של עניין. שיטה זו מספקת בלוקים בגודל לניהול מאז חצי כדור יחיד של הקוף vervet תשואות יותר מ 1200 חלקים כאשר חתכה ב 50μm. יתר על כן על ידי חסימת המוח לגושים 1cm, זה מקל על החדירה של סוכרוז עבור cyroprotection ומאפשרת לחסום להיות פרוס על cryostat רגיל.

פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשוב להבנת עיבוד תקין של המוח. הארגון האנטומי של המוח הפרימטים יכול לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם.

בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל Stereotaxic

השימוש בפרימטים שאינם בני אדם מספק מודל תרגומי מצוין להבנתנו את תהליכי ההתפתחות וההזדקנות בבני אדם1-6. ב...

הפרוצדורה מתחילה עם ראש של קוף שעבר פרפוזיה טובה. לאחר הסרת הגולגולת (calva), הראש מונח במסגרת סטריאוטקסית וסדרת חתכים קורונליים סטריאוטקסיים מבוצעים באמצעות זרוע המניפולטור; לאחר מכן המוחי מוצא, נמדד ועובר קריו-הגנה. שלום, אני ד"ר מארק ברק מהמעבדה למדעי העצבים החזותיים בבית הספר לאופטומטריה באוניברסיטת מונטריאול.אני ד"ר שהין זור, גם אני מהמעבדה למדעי העצבים הוויזואליים בבית הספר לאופטומטריה באוניברסיטת מונטריאול. אני ד"ר מו פטו, מנהל המעבדה למדעי העצבים הוויזואליים בבית הספר לאופטומטריה, אוניברסיטת מונטריאול. היום נראה לכם הליך למיקום המוח של פרימט שאינו אדם במרחב סטריאוטקטי.אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור היבטים שונים של ארגון המוח בהתפתחות נורמלית ובתגובה להפרעות התפתחותיות. אם כן, נתחיל. פרוטוקול זה מתחיל לאחר ביצוע euthanasia, קיבוע ועקירה של ראשו של קוף ורווט (vervet monkey).לפני הוצאת המוח, יש להכין את המסגרת הסטריאוטקסית. ראשית, יש למצוא את הקואורדינטות של אפס מישור Horsley Clark Interoral, או את נקודת האמצע התאורטית בין האוזניים. כדי למדוד מישור זה, יש להתאים את מוטות האוזניים באופן שווה למכשיר.לאחר מכן, מקמו להב סקאלפל בזרוע המניפולטור הסטריאוטקסי ומדדו את נקודת האמצע בין מוטות האוזניים. בשלב הבא, הכינו את הראש להכנסה למסגרת הסטריאוטקסי. השתמשו ב-bone rgo ובסקאלפל כדי להסיר את הלסת התחתונה.בשלב זה, הסר בגירוד את שאריות הגולגולת (calva) לאורך השלבים הללו. היזהר לא להסיר את עצמות הרקה, שכן תזדקק לתעלות השמיעה שלמות כדי לעגן את הראש במסגרת הסטראאוטקסית. באמצעות פינצטה ומספריים, הסר בזהירות את קרומי העטיפה (dura mater) הנראים מהמוח החשוף.כעת הגולגולת מוכנה להכנסה למניפולטור הסטריאוטקסי. כדי להתחיל את החסימה הסטריאוטקסית של המוח, מקמו את הראש בתוך המסגרת, וכוונו את משענת העיניים ומוטות האוזניים כפי שהייתם עושים בניתוח סטריאוטקסי. מקמו את המניפולטור הסטריאוטקסי בציר הקדמי, האחורי או ציר ה-AP שנקבע מראש.כדי להתחיל בחסימת המוח, מקמו את המניפולטור בצדו השמאלי או הימני הרחוק של המוח והורידו את הלהב כדי לבצע את החתך הראשון. הלהב יהיה מאונך לקו האמצע של המוח ויחתוך במישור הקורונלי.הרם את הלהב כדי להתרחק לחלוטין מפני השטח של המוח. לאחר מכן, הזז אותו ממסלולו לכיוון המדיאלי כך שיחפוף מעט את החיתוך הראשון, והנמך את הלהב. חזור על הפעולה. המשך לבצע חיתוכים חופפים עד שתגיע לקצהו המנוגד של המוח.בכך הושלם הבלוק הקורונלי הראשון. העבירו את המניפולטור סנטימטר אחד קדימה או אחורה לאורך ציר ה-AP ובצעו סדרה נוספת של חתכים במישור הקורונלי, במקביל לחתכים הקודמים. המשיכו כך עד שכל המוח יחולק לבלוקים.כעת, לאחר שסיימת את החיתוך, הגיע הזמן להוציא את המוח מהגולגולת. ראשית, הוצא את הראש מהמסגרת. נסה לייצב את המוח על ידי תמיכה עדינה בו בכף היד, כדי למנוע ממנו לזוז בתוך הגולגולת ולהיפגע.הניחו את הזרת על פני האונות המצחית כדי למנוע מהשכבה העליונה של המוח להתייבש. הרטיבו פיסת גזה ב-PBS והניחו אותה על המוח. החזיקו את הראש בחוזקה דרך הגולגולת והסִירו בעזרת השבבה את שאריות עצמות העורף והרקות יחד עם עמוד השדרה.פעולה זו חושפת את בסיס המוח ואת היבטיו הצדדיים. כעת הסר את שארית הקרומי העוטפים (dura). לבסוף, הסר את עצם האף ואת כל שארית עצם המצח, דבר שיאפשר גישה לפקעות הריח (olfactory bulbs).חשוב להסיר את עצם המצח. לבסוף, מכיוון שבמהלך הסרת בסיס הגולגולת המוח זז מעט, הקצוות המשוננים של עצם המצח עלולים לפגוע באונות המצח.הסיר בזהירות את שאריות הקרומים העוטפים את המוח (dura matter), הרם את החלק הקדמי של המוח, החלק את הסכין מתחת למוח ושחרר אותו מהגולגולת. המוח יישאר שלם, בדומה לבצל שנחתך לאורך הגבעול, מכיוון שלהב החיתוך אינו מגיע עד לצד הוונטרלי (הבטני). ישנם מספר מדידות שימושיות שניתן לבצע לפני הקפאת המוח.ראשית, ניתן להשתמש בקליפר למדידת ציר ה-AP של המוח. לאחר מכן, כדי למצוא את הצפיפות הספציפית שלו, יש לשקול את המוח. לאחר מכן מדוד את הנפח על פי דחיקת המים בתוך משורה.כעת יש בידיכם את הצפיפות, המסה חלקי הנפח. לאחר שביצעתם מדידות של המוח כולו, הגיע הזמן לשחרר את בלוקי הרקמה האינדיבידואליים מהמקום שבו הם מחוברים לצד הוונטרלי (הבטני) של המוח, ולהכינם להקפאה. קחו להב לחיתוך רקמות והאריכו כל חיתוך דרך הצד הוונטרלי של המוח כדי לשחרר את הבלוקים.ניתן להשתמש בקליפר למדידת ה-AEs המדיאלי, הלטרלי והאנטרו-פוסטריורי. בלוקי המוח מוכנים כעת לקריו-פרוטקציה ולהקפאה. הרגע הדגמנו בפניכם כיצד לבצע חלוקה לבלוקים של מוח של פרימט שאינו אדם במרחב סטריאוטקסי.בעת ביצוע הליך זה, חשוב להסוג את הלהב באופן מלא לפני ביצוע כל תנועה מדיאלית-לטרלית באמצעות המניפולטור הסטריאוטקסי. כמו כן, בעת הסרת העצמות מהמוח, יש להיזהר שלא לפגוע בקורטקס עם ה-ERs. זהו כל הדבר.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

dissecting-the-non-human-primate-brain-in-stereotaxic-space

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בנקאות המוח דגימה שיטתית של חומר ביולוגי מספק את הבסיס stereology משוחדת למקסימום את פוטנציאל נתונים המתקבלים הדגימה כל אחד.

בנקאות המוח: הפיכת רוב דוגמאות המחקר שלך

הארגון האנטומי של המוח הפרימטים יכול לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם. Stereology משוחדת היא שיטה מדויקת ויעילה לאמוד את מספר נוירון הכולל (או סוג תא אחר) בחלל התייחסות...

מה שחשוב לדעת: Stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים

קירות החדר לרוחב נבטי להכיל את האזור הגדול ביותר במוח של יונקים בוגרים. באופן מסורתי, מחקרים על נוירוגנזה באזור זה יש לסמוך על טכניקות חתך קלאסית לניתוח היסטולוגית. כאן אנו מציגים גישה חלופית, הטכניקה wholemount, אשר מספק מקיף, en פנים נוף של האזור הזה נבטי.

אזור Subventricular En פנים: מכתים Wholemount ושפל Ependymal

מאמר זה מדגים שימוש יעיל של שיטת חיתוך סיבים כדי לחשוף את ספינלי חומר לבן שטחית ומבנים periventricular של המוח האנושי, בחלל תלת ממדי, לעזרת הסטודנטים ההבנה של מורפולוגיה חדרית.

חקר החלל העמוק - לחשוף את האנטומיה של מבנים Periventricular כדי לחשוף את החדרים הצדדיים של המוח האנושי

מאמר זה מתאר מתודולוגיה מפורט כדי להשיג מקטעים וצורניים שעברו שיטוח של יונקים cortices והמחש מודולים בקליפת המוח באמצעות פתולוגיה ושיטות immunohistochemical.

ויזואליזציה של מודולי קורטיקליים Cortices יונקים שעברו שיטוח

השיטה המתוארת להלן נועדה לספק פרוטוקול מקיף להכנת נוירוכירורגיה יונקים לא אנושיים (NHP) באמצעות שילוב חדשני של שיטות הדפסה תלת מימדיות (תלת מימד) וחילוץ נתוני MRI.

ארגז כלים מבוסס MRI לתכנון נוירוכירורגי בפרימטים לא אנושיים

אנו מציגים פרוטוקול מהיר, שלב אחר שלב, להסרת מוח עכבר ודיסקציה של אזורים בדידים מרקמת מוח טרייה. השגת אזורי מוח לניתוח מולקולרי הפכה לדבר שבשגרה במעבדות רבות למדעי המוח. אזורי מוח אלה מוקפאים באופן מיידי כדי לקבל נתוני תעתיק באיכות גבוהה לניתוח ברמת המערכת.

מיקרו-דיסקציה של מוח העכבר לאזורים שונים מבחינה תפקודית ואנטומית

מאמר זה מתאר תהליכים אוטומטיים לתכנון נוירוכירורגי של פרימטים לא אנושיים בהתבסס על סריקות דימות תהודה מגנטית (MRI). טכניקות אלה משתמשות בשלבים פרוצדורליים בפלטפורמות תכנות ועיצוב כדי לתמוך בתכנון שתלים מותאם אישית עבור NHPs. לאחר מכן ניתן לאשר את תוקפו של כל רכיב באמצעות מודלים אנטומיים תלת-ממדיים (תלת-ממדיים) מודפסים בגודל טבעי.

ארגז כלים לתכנון שתלים עצביים עבור פרימטים לא אנושיים

דימות טומוגרפיה טורית של שני פוטונים (STPT) היא טכניקה לדימוי מסה של רקמה בצורתה התלת-ממדית על ידי שילוב של דימות דו-פוטוני עם בקרת במה אוטומטית וחיתוך מיקרוטום. כאן אנו מתארים פרוטוקול ליישומו עבור מוחות מרמוסטים כדי להבין טוב יותר את התכונות המבניות שלהם.

טומוגרפיה טורית של שני פוטונים של כל המוח המרמוסטי לניתוחים נוירואנטומיים

תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת משלוח של ה-DNA או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. כאן אנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של laevis Xenopus הראשן.

תא יחיד electroporation in vivo בתוך המוח המתפתח אינטקט

למדו שיטה לחיתוך מוח פרימטים בלתי אנושיים במרחב סטריאוטקטי. הפרוצדורה כוללת הכנת ראש קוף מושתל, יצירת פרוסות קורונליות וקיפאון. שיטה זו תומכת במחקר מדעי המוח ובהבנת ארגון המוח הפרימטי.

בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל Stereotaxic

גלה סרטונים נוספים