Name: מה שחשוב לדעת: Stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: למד סטריאולוגיה ללא הטיה להערכת מספרי נוירונים במוח פרימטים שאינם אנושיים. שיטה זו משתמשת בדיסקטור אופטי ומיקרוסקופיה כדי למפות אוכלוסיות תאים במדויק.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות Ikiel Ptito לקבלת תמיכה טכנית המשיכה שלו. NSERC להעניק MP.

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Aat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+cut+it%3A+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li>
<li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li>
<li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMouton%2C+PR+%22Principles+and+Practices+of+Unbiased+Stereology%22">Principles and Practices of Unbiased Stereology</a>. , The Johns Hopkins University Press. Baltimore. (2002).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+banking%3A+Making+the+most+of+your+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP%2FPS1%3A+Neuroimaging%2C+Stereology%2C+And+Biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22AGE%22%5BJournal%5D)">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
<li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
</ol>

Stereology משוחדת במוח קוף דומה לזה של דגימות ביולוגיות אחרות. עם זאת, בהתחשב בגודל של המוח הפרימטים, תוכנית עיבוד זהיר מומלץ מאז חצי כדור יחיד של הקוף vervet תשואות יותר מ 1200 חלקים כאשר פרוס על 50μm. ראשית אנו ממליצים stereotaxically חוסמים את המוח לגושים 1cm, המספק מטוס סטנדרטי סעיף בין בלוקים נושאים, ממזער סעיפים חלקית בין הבלוקים, ומספק בלוקים בגודל לניהול 5. צעד חיוני stereology היא דגימה שיטתית כזו 6-10 חלקים מתקבלים דרך השטח התייחסות. עבור המוח הפרימטים, זה משא...

<table><tbody><tr><td>סטריאולוגית</td><td>מרכז משאבים לסטראאולוגיה (Chester, MD)</td><td>www.disector.com</td><td></td></tr><tr><td>מערכת Stereologer של ערכת הכלים לסטריאולוגיה (Stereology Tool-Kit)</td><td>BioQuant Life Sciences (נשוויל, טנסי)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מה שחשוב לדעת: stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשובים להבנת תפקוד נורמלי ומחלות תהליכים של המוח האנושי. Stereology משוחדת, השיטה המקובלת המדינה-of-the-art עבור כימות של אובייקטים ביולוגיים בסעיפים רקמה<sup&gt; 2</sup&gt;, מייצר נתונים אמין עבור תכונות מבניות ביולוגי במוח של יונקים<sup&gt; 3</sup&gt;. רכיבי מפתח של הגישה הם משוחדת (שיטתית אקראית) הדגימה של מבנים המוגדרים מבחינה אנטומית (רווחים הפניה), בשילוב עם כימות של מספרים סלולריים, גודל סיבים נימי אורכי, שטח פנים, נפח האזורי הפצות המרחבי של אובייקטים ביולוגיים בתוך התייחסות בחלל<sup&gt; 4</sup&gt;. בין היתרונות של גישות אלו stereological על פני שיטות קודמות הוא ההימנעות של כל המקורות הידועים של טעות שיטתית (לא אקראית) הנובעים מהנחות פגום ולא לאימות מודלים. מחקר זה מסמכים יישום הביולוגי של stereology ממוחשב כדי להעריך את סך האוכלוסייה נוירונים בקליפת המוח הקדמית של המוח הקוף vervet (<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;), בסיוע שתי תוכניות stereology זמינים מסחרית, מדעי החיים ו BioQuant Stereologer (איור 1). בנוסף בניגוד והשוואה של תוצאות BioQuant והן<em&gt; Stereologer</em&gt; מערכות, מחקר זה מספק פרוטוקול מפורט עבור<em&gt; Stereologer</em&gt; המערכת.

הארגון האנטומי של המוח הפרימטים יכול לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם. Stereology משוחדת היא שיטה מדויקת ויעילה לאמוד את מספר נוירון הכולל (או סוג תא אחר) בחלל התייחסות נתונה<sup&gt; 1</sup&gt;.

מה שחשוב לדעת: Stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים

הפרימט שאינו אדם הוא מין תרגומי חשוב להבנת התפקוד התקין ותהליכי המחלה של המוח האנושי. באופן בלתי מוטה...

הליך זה מתחיל בהגדרת מרחב הייחוס. אטלס סטריאוטקסי עשוי לסייע בקביעת הגבולות של אזור העניין. לאחר מכן, ארגנו את השקופיות וקבעו את תדירות דגימת החתכים.הכנס את הפרוסה הראשונה לדגימה לתוך המיקרוסקופ ומלא את פרמטרי הדגימה. במערכת הסטריאולוגית, רשת תמוקם מעל מרחב הייחוס ובכל נקודת חיתוך תידגם דיסקטור אופטי (optical dissector). לאחר שכל הדיסקטורים האופטיים בכל פרוסה יידגמו, מערכת הסטריאולוגיה תספק את תוצאות המחקר.שלום, אני ד"ר Mark Burke ממעבדת מדעי העצבים החזותיים בבית הספר לאופטומטריה באוניברסיטת מונטריאול. שלום, אני ד"ר Shaheen Zur, גם אני ממעבדת מדעי העצבים החזותיים בבית הספר לאופטומטריה באוניברסיטת מונטריאול. שלום, אני ד"ר Morris Petto, מנהל מעבדת מדעי העצבים החזותיים בבית הספר לאופטומטריה, אוניברסיטת מונטריאול.היום נדגים לכם פרוצדורה לביצוע רדיולוגיה בלתי מוטה בפרימטים שאינם אדם. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי להעריך אוכלוסיות נוירונליות כוללות באזורי מוח שונים. אז בואו נתחיל.התחילו את הפרוטוקול הזה עם מוח שעבר קודם לכן פרפוזיה. עם חומר קיבוע כגון paraformaldehyde, המוח צריך להיות מקובע במרחב סטריאוטקסי, מוגן בקריו-פרוטקטור וקפוא. כדי לראות את הפרוטוקולים הללו בפירוט, עיינו במאמר ה-JoVE האחרון שלנו, dissecting the non-human primate brain.במרחב הסטריאוטקסי, יש לבצע חיתוך שי

knowing-what-counts-unbiased-stereology-in-the-non-human-primate-brain

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשוב להבנת עיבוד תקין של המוח. הארגון האנטומי של המוח הפרימטים יכול לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם.

בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל Stereotaxic

בנקאות המוח דגימה שיטתית של חומר ביולוגי מספק את הבסיס stereology משוחדת למקסימום את פוטנציאל נתונים המתקבלים הדגימה כל אחד.

בנקאות המוח: הפיכת רוב דוגמאות המחקר שלך

מקור: Olesen, M. V.,  et al. טכניקת המפרק האופטי להערכת מספרי תאים במודל חולדה של טיפול בנזעי חשמל. {{}}J. Vis. exp. (2017).  הסרטון מדגים את הטכניקה לכימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת המוח. פרוסות רקמת ההיפוקמפוס המכילות נוירונים המסומנים בברומודוקסיורידין (BrdU) נצבעו באמצעות אימונוהיסטוכימיה ולאחר מכן כומתו על פני עובי הרקמה באמצעות טכניקת המפרק האופטי.

כימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת מוח של חולדה באמצעות טכניקת המפרק האופטי

נהלי חיתוך מוח מאורגנים נחוצים כדי לתאם תופעות נוירופסיכיאטריות ספציפיות עם אבחנות neuropathologic מוחלטות. גזרי המוח מבוצעים בצורה שונה על בסיס למקרים Clinico-אקדמיים שונים. פרוטוקול זה מתאר הליך חיתוך המוח סימטרי bihemispheric לחקור הבדלים חצי מוח פתולוגיות מוח אנושיים וכדי למקסם / וביומולקולרית נוכחית ועתידיות טכניקות הדמייה.

סימטרי Bihemispheric לאחר מות מוח חיתוך לחקר בריא והגבלות מוח פתולוגיים בבני אדם

פרוטוקול זה מתאר שחזורים בקנה מידה גדולה של אוכלוסיות נוירונים סלקטיבית, שכותרתו בעקבות זיהום מדרדר עם וירוס כלבת מהונדס להביע סמני ניאון, ואשכול עצמאי, ללא דעות מוקדמות מנתח המאפשר אפיון מקיף של מדדים מורפולוגיים בין subclasses העצבית ברורה.

שחזור בקנה מידה גדול ועצמאי, Clustering משוחדת בהתבסס על מדדי מורפולוגי לסווג נוירונים באוכלוסיות סלקטיבי

כאן, אנו מציגים שיטה סטריאולוגית, fractionator אופטי, המשמש לכימות היווצרות של נוירונים חדשים, ואת ההישרדות שלהם, בהיפוקמפוס חולדה בעקבות גירוי electroconvulsive. כאשר מיושמים כראוי, את הרגישות והיעילות של שיטות stereological מבטיח הערכות מדויקות עם קבוע מראש קבוע מראש.

טכניקת Fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית

עבודה זו מציג עבור הערכת stereological לא משוחדת של מספרים דופאמינרגיים וכולינרגיים פרוטוקול צעד אחר צעד העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד (קרי, מיקרוסקופ אור, טבלה אובייקט ממונע (x, y, z המטוס), ותוכנה הציבור לניתוח תמונה דיגיטלית.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

השיטה המתוארת להלן נועדה לספק פרוטוקול מקיף להכנת נוירוכירורגיה יונקים לא אנושיים (NHP) באמצעות שילוב חדשני של שיטות הדפסה תלת מימדיות (תלת מימד) וחילוץ נתוני MRI.

ארגז כלים מבוסס MRI לתכנון נוירוכירורגי בפרימטים לא אנושיים

פרוטוקול זה מתאר שיטות לביצוע הדמיית תהודה מגנטית, ניקוי ותיוג חיסוני של מוחות עכברים שלמים באמצעות iDISCO+, ולאחר מכן תיאור מפורט של הדמיה באמצעות מיקרוסקופיה של יריעות אור, וניתוחים במורד הזרם באמצעות NuMorph.

הדמיה וניתוח של כל המוח החד-תאי של מוחות עכברים שלמים של ילודים באמצעות MRI, ניקוי רקמות ומיקרוסקופיה של יריעות אור

דימות טומוגרפיה טורית של שני פוטונים (STPT) היא טכניקה לדימוי מסה של רקמה בצורתה התלת-ממדית על ידי שילוב של דימות דו-פוטוני עם בקרת במה אוטומטית וחיתוך מיקרוטום. כאן אנו מתארים פרוטוקול ליישומו עבור מוחות מרמוסטים כדי להבין טוב יותר את התכונות המבניות שלהם.

טומוגרפיה טורית של שני פוטונים של כל המוח המרמוסטי לניתוחים נוירואנטומיים

מדעי המוח המודרניים צריכים לחקור הבדלים בין מינים רבים, כולל מכרסמים במעבדה ובני אדם. עם זאת, קשיים טכניים מתעוררים כאשר מעורבים יונקים בעלי מוח גדול. גישה זו מתייחסת לשונות בין-מינים באוכלוסיות נוירונים ביונקים שונים מאוד, ומניבה תוצאות דומות למיפוי לחשיפת דפוסי אבולוציה.

גישה השוואתית למחקרי ספירת תאים כמותיים במוחות יונקים שונים מאוד

למד סטריאולוגיה ללא הטיה להערכת מספרי נוירונים במוח פרימטים שאינם אנושיים. שיטה זו משתמשת בדיסקטור אופטי ומיקרוסקופיה כדי למפות אוכלוסיות תאים במדויק.

מה שחשוב לדעת: Stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים

גלה סרטונים נוספים