מדידת לחץ דם בעכברים באמצעות לחץ נפח הקלטה, שיטת זנב השרוול

המילה coda היא איטלקית למילה זנב. מערכת Coda למדידה לא פולשנית של לחץ דם מאפשרת מדידות של לחץ דם במכרסמים, הודות לחשוף ייעודי להקלטת לחץ נפח המודד שינויים בנפח הדם בזנב כאשר הוא מונח על זנבו של בעל החיים. סרטון זה מדגים כיצד להקים את המערכת, להכין את בעלי החיים ולבצע מדידות של לחץ דם עבור שמונה בעלי חיים בו-זמנית.

שלום, אני Anju Bala Krishnan, מהמעבדה של Alan Dougherty במרכז למחקר קרדיווסקולרי, אוניברסיטת קנטקי, לקסינגטון. היום נדגים לכם הליך למדידת לחץ דם בעכברים באמצעות הקלטת לחץ-נפח בשיטת שרוול זנב. אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור את מערכת הלב וכלי הדם.

בואו נתחיל. להקמה של מערכת ה-CODA, בחרו אזור במעבדה שבו טמפרטורת החדר יציבה ב-20 °C ומעלה. הימנעו ממיקומים ליד פתחי מיזגון; חשיפת בעלי החיים לרעש חזק או לריחות עלולה לגרום לגירוי או למצבי סטרס.

ריחות בעלי החיים עשויים לכלול כל בושם חזק שאתם עשויים להתיז. הפעילו את בקר ה-Coda ולאחר מכן את פלטפורמות החימום המכוונות לרמה שלוש. אם טמפרטורת החדר גבוהה מ-25 °C, התחילו ברמות אחת או שתיים.

בצע ראשית את בדיקת אבחון הבקר (Controller Diagnostics), פתח את תוכנת ה-Coda. בחר את מכשיר ה-Coda על ידי לחיצה עליו. לחץ על "בדיקת המכשיר שנבחר" (test selected device).

בחר את השרוולים והערוצים לבדיקה ולחץ על test. לאחר השלמת בדיקת האבחון של הבקר, סגור את חלון בדיקת המכשיר. בחר את קוד הבקר לשימוש, ולאחר מכן לחץ.

השתמשו במכשירים אלו כדי להגדיר את התוכנה. בחרו ב"ניהול כלי צוות" (tools manage personnel). לאחר מכן, לחצו על "חוקר 1" (researcher one).

כדי לשנות את השם, לחצו על השורות הבאות כדי להוסיף חוקרים נוספים. לאחר מכן לחצו על שמירת נתונים. לחצו על לשונית הטכנאים כדי לערוך או להוסיף טכנאים.

לאחר מכן, לחצו על לשונית specimens כדי לתת שמות לבעלי החיים לצורך זיהוי קל ולבחור את סוג בעל החיים. לאחר מכן לחצו על save data. לבסוף, לחצו על לשונית animals.

כדי לשנות את סוג בעל החיים והרגישות, לחצו על שמירת נתונים (save data), ולאחר מכן סגרו. כדי להתחיל ניסוי חדש, בחרו בקובץ ניסוי חדש (New experiment). הזינו את שם הניסוי, בחרו את החוקר הראשי ובחרו תאריך התחלה.

לחצו על הבא. השלב הבא הוא הזנת מידע בסיסי על הסשן. התחילו בהזנת שם הסשן; הגדירו את מספר מחזורי ההסתגלות (acclimation cycles) לחמישה, או הגדירו לאפס אם אתם מעדיפים שלא לכלול מחזורי הסתגלות.

הגדירו את מספר הסבבים לאחד, ואת הזמן בין הסבבים ל-30 שניות עבור סבבים מרובים. הגדירו את מספר המחזורים לכל סבב ל-20 מחזורים, ואת הזמן בין המחזורים לחמש שניות. לאחר מכן לחצו על הבא.

כדי להתחיל בבחירת הדגימה, בחרו את הדגימה מתוך מאגר הדגימות והקצו אותה לערוץ הפנוי הראשון. לחצו על next כדי להגדיר את פרמטרי הסשן. הגדירו את לחץ החסימה המקסימלי ל-250 millimeters.

זמן ניפוח הכספית ל-20 seconds. עבור עכברים, נפח מינימלי ל-15 µL וסגנון תצוגה לערוץ אחד לכל גרף. ניתן להוסיף גם חוקרים וטכנאים נוספים.

לאחר מכן לחצו על next. עברו על תסריט הסשן ולחצו על next. אין לבחור ב-finish עד לסיום סעיף הכנת בעל החיים, המתואר בהמשך.

כעת ניתן להוציא את בעלי החיים ולהציבם לצד מערכת מדידת לחץ הדם של coda. לפני הנחת בעלי החיים במחזיקים, שימו לב לגודלו של כל בעל חיים ביחס לגודלו של המחזיק שנבחר. בעל החיים צריך להיות מסוגל להיכנס למחזיק באופן חופשי.

מקמו כל חיה במחזיק על ידי הרמה מהזנב והנחה עדינה לחלק האחורי של המחזיק, הפונה לקצה הפתוח של חרוט האף. הדקו בזהירות את דלת האחורית למחזיק על ידי סיבוב הבורג שבדלת האחורית. הישמרו שלא לצבוט את הזנב או חלקים אחרים של הגוף בעת הידוק הדלת האחורית.

שקופית הבאה. קונוס האף פונה לעבר פתח האחור. הגבלת תנועת בעל החיים.

על קונוס האף להיות במיקום שימנע מהחיה להסתובב. כאשר החיה בתוך המחזיק, הניחו את המחזיק על פלטפורמת החימום. במיקום שנקבע, אפשרו לחיה לפחות חמש דקות להסתגל למחזיק.

אין לגעת בבעל החיים או לטפל בו. בזמן השהייה בתוך המחזיק, המגע המוגבר עלול לגרות את בעל החיים, ואין להשאיר את בעל החיים במחזיק ללא השגחה. כדי להניח נכון את שרוול החסימה של הזנב, השחילו את הזנב דרך שרוול החסימה והניחו את השרוול קרוב ככל האפשר לבסיס הזנב ללא הפעלת כוח.

לאחר מכן, השחילו את הזנב דרך שרוול חיישן ה-VPR, והמיקמו אותו בטווח של שני מילימטרים משרוול החסימה. הדקו את הפיתול בתוך השקע בחלקו האחורי-עליון של המחזיק. שרוול חסימת הזנב מנופח כדי למנוע את זרימת הדם לזנב.

שריף החסימה מרוקן לאט, ושריף הזנב של ה-VPR, הכולל חיישן שתוכנן במיוחד, מודד את המאפיינים הפיזיולוגיים של זרימת הדם החוזרת כאשר הדם חוזר לזנב. שריף חיישן ה-VPR מודד את נפיחות הזנב כתוצאה מהפעימות העורקיות של זרימת הדם. לחץ הדם הסיסטולי נמדד באופן אוטומטי עם הופעתה הראשונה של נפיחות הזנב.

לחץ הדם הדיאסטולי מחושב באופן אוטומטי כאשר קצב הנפיחות העולה בזנב נפסק. לאחר שכל בעלי החיים הוכנסו למחזיקים ובית הלחץ הונח על זנבותיהם, יש להמתין לפחות חמש דקות כדי לאפשר להם ויסות תרמי. רשמו את טמפרטורת בעלי החיים.

במרבית המקרים, באמצעות מדחום אינפרה-אדום, טמפרטורת בעל החיים צריכה להיות בין 32 ל-35 מעלות Celsius. כעת, לאחר שהבעלי חיים מוכנים, ניתן להתחיל בניסוי. לחצו על "סיום" כדי להתחיל בניסוי.

הקו האדום מייצג את השחרור (deflation) של שרוול החסימה ושרוול חיישן ה-VPR. הקו הכחול מייצג שינויים בנפח הדם בזנב. נקודת ההשתפחות הראשונה של הקו הכחול, קצב השינוי המינימלי, מזהה את לחץ הדם הסיסטולי.

נקודת ההשכחה השנייה של הקו הכחול, קצב השינוי המקסימלי, מזהה את לחץ הדם הדיאסטולי עם סיום הניסוי. הוציאו מיד את בעלי החיים מהשרוולים ומהמחזיק. דוח סיכום סשן פשוט מוצג על המסך.

הנתונים שנאספו בניסוי נשמרים כקובץ Excel. קיימות מספר דרכים לעבד את הנתונים בתוך קובץ ה-Excel. פרקטיקה נפוצה היא חישוב הממוצע וסטיית התקן ומחיקת מדידות.

אם סטיית התקן גדולה מ-30. בנוסף, ניתן לצפות במחזורים שנפסלו וניתן לייצא את כל מסד הנתונים בקלות ל-Excel. עיין בפרוטוקול הכתוב ובמדריך למשתמש.

למידע נוסף, הראיתי לכם כעת כיצד למדוד לחץ דם בעכברים באופן לא פולשני באמצעות רישום לחץ-נפח. חשוב מאוד להפחית את הלחץ המוטל על בעלי החיים על ידי ביצוע פרוצדורה זו, וזאת על מנת לקבל מדידות מדויקות ועקביות. וזה הכל.

תודה שצפיתם ובהצלחה רבה בניסויים.