Name: בשנת vivo Ca 2 + - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: למדו הדמיית סידן חיה במוח דבורת הדבש במהלך למידה חוש הריח. השיטה מאפשרת מעקב אחר פעילות נוירונים בגוף הפטרייה ומספקת תובנות לגבי מנגנוני הלמידה והזיכרון בחרקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו ממומנת על ידי DFG.

<html> Bee הכנה לראש מילוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס מלקטי מזון דבש דבורים אל הכוורת ומקררים על קרח immobilization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר של פרספקס 3 חדרי הקלטה. תיקון עיניים החזה על הקירות של החדר הקלטה בשעווה נקודת התכה נמוכה קשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך זכוכית נימים כמו נפוץ electrophysiology ולשבור בקצה להשיג בקוטר טיפ של CA. 10μm. כיסוי קצה של נימי עם לצבוע ולהדביק. הדבק דיי מורכב מתערובת של 10:01 Fura-2 dextran וליזין ניתן לתקן tetramethylrhodamine dextran. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך ההליך מכתים לשתק אנטנות עם לפרטי פרטים או n-eicosane. הסר חתיכת לציפורן מעל המוח לדחוף בלוטות קנה הנשימה בצד כדי לאפשר גישה גוף הפטרייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק לתוך הנימים סומה או אזור axonal של נוירונים הגוף פטריות. ניתן לעשות זאת ביד חופשית או באמצעות מניפולטור מיקרו. ואז לשחזר פיסת לציפורן על הקפסולה הראש לשחרר אנטנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזנת דבורים עם פתרון סוכרוז 30% לפני אחסונם במקרה humidified לפחות ארבע שעות או יותר בלילה 20 ° C. </li></ol> בשנת vivo הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניעת תנועות למשל דבורה עם חתיכה קטנה של ספוג כי הוא נלחץ הבטן קבוע עם קליפ או סרט לתא הקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע תנועה של המוח הנובע שאיבה של הוושט, לחתוך חתך קטן לתוך לציפורן מעל labrum ולשלוף בזהירות הוושט ומבנים המקיפים שלה מוצק לשים את זה תחת מתח מבלי לפגוע הוושט 4. עם כיסוי סיליקון דו רכיבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חורים עם מחט ולהכניס אלקטרודות חוט הקלטה של ​​M17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר פיסת לציפורן, קנה הנשימה ובלוטות מעל המוח. תמצצי heamolymph בתוך הקפסולה בראש עם פיסת נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את הקפסולה עם ראש סיליקון דו רכיבי. חשוב המוח מכוסה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום דבורה על הבמה מיקרוסקופ ומקום טיפת מים על פני השטח של סיליקון כדי לטבול את המטרה מטבל של המיקרוסקופ לתוך אגל. פוקוס על נוירונים מוכתם. </li></ol> ריח גירויים הקלטה של ​​אותות Olfactometer: אנו משתמשים במחשב מבוקר, גירוי אישית בנוי המכשיר, או &quot;olfactometer&quot; כפי שתואר לעיל על ידי גליציה ו וטר 3. ריחות הם מדולל לתוך זרם אוויר קבוע מכוונת האנטנות. כל גירוי מורכב הדופק -3 ריח של אוויר רווי ריח 0.2ml. פרוטוקול גירוי ניתן להגדיר TILLVision את תוכנת ההקלטה. מיקרוסקופ והדמיה הגדרת: אנו משתמשים מיקרוסקופ פלואורסצנטי Zeiss. תמונות נרשמות 25 מעלות צלזיוס עם קצב הדגימה של 5 הרץ באמצעות מכשיר עד-Photonics הדמיה רכוב על המיקרוסקופ. אותות סידן נרשמים דרך X60, 0.9 W אולימפוס לטבול אובייקטיבי עם CCD Imago המצלמה (640x480 פיקסלים, 4X זרקת לפח על שבב כדי 160x120 פיקסלים). Fura-2 הוא נרגש עם אור מונוכרומטי של אורך גל 340 ו 380nm עבור מדידות ratiometric. Fluorescence מזוהה באמצעות מראה dichroic 410nm ו 440nm מסנן לעבור זמן רב. הפרמטרים של ההקלטה נקבעים בתוכנת הצריבה. מדידת משך כל 10s זמן חשיפה לשני אורכי הגל יכול להיות מותאם לעוצמת מכתים לקראת כל אחד. M17 הקלטה: השריר מד של labium (M17) היא רשמה extracellularly לפקח על תגובות התנהגותיות הקשורות למידה, כלומר 5 אחוזים, 6. להזריק חוטי נחושת לתוך השריר קרוב חלקי הפה. הזרק אלקטרודה הקרקע לתוך העין. פוטנציאלים השריר הם מוגבר עם מגבר טרום אישית לבנות, ו דיגיטלית המאוחסן במחשב. תחילת Stimulus מופעלת על ידי olfactometer. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הניסוי: ההקלטות של האות סידן מוזנים למחשב ומאוחסנים. TILLVision תוכנת הצריבה מאפשר בדיקה ראשונית של אותות, כמו חישוב היחס בין אורכי הגל (340nm/380nm) וחישוב deltaF (חיסור של הבסיס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיבוד תמונה מבוצעת עם תוכניות נכתב מותאם אישית IDL. חישוב יחס של Ca 2 + אותות 340nm ו 380nm מדידות עבור כל פיקסל. קביעת רקע הקרינה (F) על ידי ממוצע של מעל מסגרות לפני הגירוי ואת לגרוע האות ratiometric (deltaF). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגדיר אזור אינטרסים (ROI): חישוב ממוצע של מסגרות במהלך הגירוי ואת להחיל מסנן לעבור נמוכה (3X3px). המרת מידה אפור בקנה מידה צבע שווא. קביעת פעילות מבנים עצביים כמו כתמים פעילות בתמונות צבע שווא מגדירים את ההחזר על ההשקעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב הדינמיקה הזמני של האזורים הפעילים על ידי חישוב ממוצע הפיקסלים ההחזר על ההשקעה על פני כל המסגרות ללא סינון או תיקון. </li></ol>&gt; ניתוח לשיקום מורפולוגיים יחד עם dextran Fura-2 אנחנו ממלאים את הנוירונים ניתן לתקן עם צבע rhodamine dextran (&quot;מיני אודם&quot;). צבעים לשניהם משקל מולקולרי דומה: הם צריכים להיות שותף נמצא הנוירונים. רחב בתחום ההדמיה מאפשר רק ברזולוציה מרחבית מוגבל מאוד, ולכן מומלץ לבדוק את המבנים מוכתם לאחר הניסוי באמצעות מיקרוסקופ סורק confocal. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי מדידות פיזיולוגיות, לנתח מוח לקבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף ב PBS ו מייבשים בשלבים באתנול וברור salycilate מתיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מיקרוסקופיה confocal להטביע במוח salycilate מתיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו משתמשים במיקרוסקופ TCS לייקה SP2. גל עירור הוא 543nm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנחנו לסרוק את המוח עם אוויר או טבילה אובייקטיבי שמן ולהשוות את המבנים מוכתם נתוני הדמיה. </li></ol> נציג תוצאות: אם מכתים והכנת היה מוצלח, האות בסולם צבע שווא, למשל פטריות הגוף אלפא נוירונים באונה חיצוני, יכול להיראות כמו באיור 1. התגובה ההתנהגותית (PER) ניתן לחשב את תדירות ספייק במהלך הגירוי מינוס תדירות ספייק לפני הגירוי (figure2). המבנים מוכתם עשוי להיחקר ביתר פירוט באמצעות מיקרוסקופ confocal (figure3). <img src="/files/ftp_upload/1353/figure1_new.png" alt="איור 1" /> איור 1: נציג הדמיה סידן אותות (גירוי עם heptanal). ת: אזור הדמיה של המוח דבורה. ב &#39;: תמונה פלורסנט גלם כמו לראות דרך X20 לטבול אובייקטיבי עירור באורך גל 380nm, את אלפא האונה של הגוף פטריות המתואר סגול. דיי היה מוזרק לשפה ventro-לרוחב של אלפא האונות להכתים הנוירונים החיצוניים. C: תמונת צבע שקר נגזר האות הממוצע, deltaF (340/380), גירוי במהלך שלוש השני; אלפא האונה המתוארות סגול, התווה ROI נבחרים שחור. D: הדינמיקה הזמני של האות סידן בתגובה לגירוי ריח, האות הממוצע מאזור ריבית כפי שמצוין ב C. E: הדינמיקה הזמני של האות סידן בתגובה גירוי סוכרוז של ipsi ו-קונטרה לרוחב אנטנה בהתאמה ROI המצוין ב C. <img src="/files/ftp_upload/1353/figure2_new.png" alt="" /> איור 2: תגובה נציג M17. לאחר מיזוג הריח הדבורה מרחיב את חוטם כאשר ריח מוצג ללא תגמול. הקו האדום מציין גירוי ריח. הבלעה: PER של דבורת דבש. <img src="/files/ftp_upload/1353/figure3_new.png" alt="" /> איור 3: מחסנית תמונה ייצוגית. לאחר הניסוי הדמיה מוחית היה גזור. הנוירון מדמות 1 נסרק באמצעות מיקרוסקופ confocal עם מטרה X20 שמן טבילה, אלפא האונה המתוארות סגול.

<ol><li>Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representations+of+odors+and+odor+mixtures+visualized+in+the+honeybee+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain.</a> Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).</li>
<li>Rehder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+honeybee%27s+proboscis+reflex+by+electromyiographic+recordings%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantification of the honeybee's proboscis reflex by electromyiographic recordings.</a> J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).</li>
<li>Galizia, C. G., Vetter, R. S. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGalizia%2C+CG+%22Methods+in+Insect+Sensory+Neuroscience%22">Methods in Insect Sensory Neuroscience</a>. Christensen, T. A. , CRC Press. Boca Raton. 345-388 (2004).</li>
<li>Mauelshagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+correlates+of+olfactory+learning+paradigms+in+an+identified+neuron+in+the+honeybee+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain.</a> J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).</li>
<li>Kuwabara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bildung+des+bedingten+Reflexes+von+Pavlovs+Typus+bei+der+Honigbiene+Apis+mellifica%2C+Hokaido+Univ%5BTitle%5D)+AND+%22Zool.+J.+Sci%22%5BJournal%5D)">Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ.</a> Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).</li>
<li>Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+of+proboscis+extension+in+honeybees+%28Apis+mellifera%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera.</a> Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).</li>
</ol>

במצגת זו אנו עברו את כל השלבים לחקור אותות סידן vivo של דבורת דבש. אנחנו מוחלים בטכניקה זו כדי נוירונים הגוף פטריות, אבל הדמיה ניתן לעשות על כל הנוירונים אשר טכניקה מכתים ניתן להקים. התמקדנו נוירונים במסלול חוש הריח של הדבורה דבש. הניסויים מתבצעים כל בחדר חושך. הגדרת מואר באור גל ארוך הנמצא מחוץ לטווח את התפיסה האופטית של הדבורה ואינו להלהיב את צובעת. חשוב להימנע מכל החפצים ניאון, לאוויר בועות למשל הסיליקון. <p class="jove_content" style=";text-align:right;di...

<table><tbody><tr><td>שעווה קשה בעלת נקודת התכה נמוכה Deiberit 502</td><td>Dr. B&amp;#246;hme Sch&amp;#246;ps Dental GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלח אשלגן של FURA-2 dextran, 10 000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>F-3029</td><td>יש להגן מאור.</td></tr><tr><td>tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>D-3312</td><td>יש להגן מאור.</td></tr><tr><td>n-eicosane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21, 927-4</td><td></td></tr><tr><td>דבק Kwik Sil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>KWIK SIL</td><td></td></tr><tr><td>מערכת דימות</td><td>TILL Photonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מצלמת CCD</td><td>Imago</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CED</td><td>Texas Instruments</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

בשנת vivo ca 2 + - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

In vivo למחצה בהכנת vivo הדמיה סידן פותחה במעבדה שלנו על ידי Joerges, קוטנר ואת גליציה לפני יותר מעשר שנים, כדי למדוד את פעילות ריח עורר באונה מחושים 1. מכאן ואילך זה כבר מעודן ברציפות להחיל neuropiles שונים במוח הדבורה. כאן, אנו מתארים את הכנת המשמש כיום במעבדה כדי למדוד פעילות הנוירונים בגוף הפטרייה באמצעות מצמידים dextran סידן רגיש צבע (Fura-2). אנו retrogradely כתם נוירונים גוף הפטרייה על ידי הזרקת צבע לתוך האקסונים שלהם או באזור סומה. אנו מתמקדים בהפחתת הפולשנות, כדי להשיג הכנה שבו עדיין אפשר לאמן את הדבורים באמצעות PER מיזוג. אנו מסוגלים לפקח לכמת את התגובה ההתנהגותית באמצעות הקלטה אלקטרו myograms של השריר השולט PER (M17) 2. לאחר הניסוי פיזיולוגיים המבנים צילמו נחקרות ביתר פירוט באמצעות מיקרוסקופ סורק confocal לכתובת זהותו של הנוירונים.

דבורים יכול להיות מותנה פרדיגמה למידה תיאבון חוש הריח (PER מיזוג). באמצעות ריחות כמו גירויים, הקמנו שיטה שבה התנהגות נרשם ובמקביל הדמיה סידן משמשת למדידת פעילות ריח עורר בנוירונים גוף הפטרייה<em&gt; In vivo</em&gt;.

בשנת vivo Ca 2 + - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש

ההכנה לדימות סידן (Calcium imaging) בשיטות in vivo ו-semi-in vivo פותחה במעבדתנו על ידי Joerges, Küttner ו-Galizia לפני למעלה מעשר שנים, כדי...

הליך זה מתחיל בקיבוע הדבורה בתוך תא הקלטה. חלק מהקוטיקולה מוסר מקפסולת הראש כדי לצבוע מבנים נבחרים במוח. אותות סידן בנוירונים הצבועים מוקלטים in vivo באמצעות מערכת דימוי בשדה רחב.במהלך ההדמיה, ניתן לגרות את הדבורה באמצעות ריחות או הגשת סוכרוז למשש. בדרך זו, ניתן להעמיד את הדבורה על התניה להוציא את השפיר (proboscis) בתגובה לריח. תגובת הוצאת השפיר מנוטרת באמצעות רישומי אלקטרומיוגרמה משריר M 17.לאחר ניסוי הדימות, המוח מנותח לבדיקה מעמיקה יותר של המבנים הצבועים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי. היי, אני מלאני מהמעבדה של rdo Mansel. היי, אני אניה, גם אני מהמעבדה של Mansel.היום נדגים עבורכם פרוצדורה לדימוי סידן in vivo בגוף הפטרייה של דבורת הדבש. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי לחקור קידוד ריח ופלסטיות הקשורה ללמידה במוח של דבורת הדבש. אז בואו נתחיל.התחילו בתפיסת דבורת דבש אוספת בכניסה לכוורת, ולאחר מכן שבבו אותה על ידי קירור על קרח. לאחר מכן, הצמידו את הדבורה לתא הקלטה עשוי פלקסיגלס. השתמשו בשעווה קשה בעלת נקודת התכה נמוכה כדי לקבע את העיניים ואת החזה לדופן.שברו קפילרה מזכוכית בקצה כדי להשיג קוטר של 10 microns. כסו את קצה הקפילרה במשחה המורכבת מתערובת של 10 ל-1 של URA two dextrin ו-fixable Rodin dextrin. הקפילרה שהוכנה תשמש לצביעה.כדי להתחיל בהליך הצביעה, ראשית קבעו את המחושים בעזרת koane. פתחו את קפסולת הראש מעל המוח על ידי הסרת פיסת קוטיקולה ודחיפת בלוטות והטרכאה לצדדים, כדי לאפשר גישה לגוף הפטרייה (mushroom body). השתמשו בפיסת נייר כדי לספוג את ההמולימפה בתוך קפסולת הראש.כדי לצבוע את נוירוני גוף הפטרייה (mushroom body), יש להחדיר את הנימירית לתוך הסומה או לאזור הדנדריטים של הנוירונים. לאחר מכן, החזיר את פיסת הקוטיקולה למעטפת הראש ושחרר את המחוש. לבסוף, האכל את הדבורה בתמיסת סוכרוז 30% ושמור אותה בתוך קופסת פוליסטירן מכוסה במגבת מטבח לחה למשך ארבע שעות לפחות או למשך הלילה בטמפרטורה של 20 degrees Celsius.עם השלמת הכנת הדבורה, ניתן להתחיל בדימות in vivo. ראשית, השתמשו בספוג המחובר לתא ההקלטה כדי למנוע מהדבורה לזוז, על ידי לחיצתו כנגד הבטן. כעת קבעו את מששי הדבורה באמצעות ioane כדי למנוע תזוזה של המוח כתוצאה מפעימות הוושט.בצעו חתך קטן בקוטיקולה מעל הלברום ומשכו בזהירות החוצה את הוושט ואת המבנים המוצקים הסובבים אותו, וכסו אותם בסיליקון דו-רכיבי. לאחר מכן, השתמשו במחט כדי ליצור חורים להחדרת אלקטרודות חוטיות המשמשות להקלטת אלקטרוגרמות משריר הפרוטראקטור של הלביום. הסירו את פיסת הקוטיקולה, את הקנה ואת הבלוטות שמעל המוח.השתמשו בפיסת נייר כדי לספוג את ההמולימפה בתוך קפסולת הראש כדי להקליט אלקטרוגרמות מ-M 17. החדירו חוט נחושת אל השריר בקרבת חלקי הפה. החדירו אלקטרודת הארקה אל העין.כעת מלאו את קפסולת הראש בסיליקון דו-מרכיבי. ודאו שהמוח מכוסה לחלוטין. הניחו את הדבורה עלבמת המיקרוסקופ והניחו טיפת מים על פני השטח של הסיליקון.טבול את עדשת השקיעה (dip objective) של המיקרוסקופ לתוך הטיפה, ולאחר מכן התמקד בנוירונים שעל המשטח. כעת, כאשר ההכנה להדמיה in vivo הושלמה, נוכל לתאר את גריית הריח ואת הקלטת האותות. כדי להעביר גירויי ריח לדבורה, אנו משתמשים באולפקטומטר (olfactometer) מותאם אישית הנשלט על ידי מחשב, המדלל חומרי ריח לתוך זרם אוויר קבוע.גירוי ריח המופנה למשש מורכב מפולס של שלוש שניות של אוויר רווי בריח. לצורך דימות סידן, אנו משתמשים במערך דימות של til photonics המותקן על מיקרוסקופ פלואורסצנטי מסוג zes להקלטת תמונות בטמפרטורת החדר בקצב דגימה של 5 Hz. אותות סידן מוקלטים באמצעות עדשת טבילה Olympus X 60 0.9 W עם מצלמת Ango CCD, כאשר כל מדידה נמשכת 10 שניות.פוטנציאלי השריר מוגברים באמצעות מגבר grass, מוקלטים וממירים לצורה דיגיטלית באמצעות ממיר אנלוגי-דיגיטלי. הקלטות מ-M 17 משמשות לניטור תגובות התנהגותיות הקשורות ללמידה; לאחר השלמת הקלטת האותות, ניתן כעת לעבור לניתוח מורפולוגי ולשחזור. זאת מכיוון שלשני הצבעים ששימשו במהלך המילוי לאחור (backfill) יש אותו משקל מולקולרי.הם ממוקמים יחד בנוירונים. להדמיה בשדה רחב (Widefield imaging) יש רזולוציה מרחבית מוגבלת, לכן נשתמש במיקרוסקופיית סריקה קונפוקלית כדי לבחון את המבנים הצבועים. לאחר הניסוי, יש להוציא תחילה את המוח ולקבע אותו למשך לילה ב-4%formaldehyde בטמפרטורה של 4°C; למחרת, יש לשטוף אותו ב-PBS ואז להוציא ממנו מים (דהידרטציה) בשלבים של אתנול: 10 דקות ב-50%, 70%, 90%, 99% ופעמיים 10 דקות ב-100%. יש להניח את המוח על זכוכית נושאת בעלת חריצים עם טיפה של methyl salicylate, להניח זכוכית כיסוי ואז להציב אותה על שולחן העבודה של מיקרוסקופ סריקה קונפוקלית.סרוק את המוח באמצעות עדשת אובייקטיב באוויר וזום דיגיטלי של 1.1 עד 1.2 בחתכים אופטיים של ארבעה מיקרומטר. כאן אנו רואים את התגובה של נוירונים חיצוניים של גוף הפטרייה (mushroom body) לגירוי ריח של המחושים, שהוקלטה באמצעות אובייקטיב 60x והוצגה בצבעים מלאכותיים. הריבוע האדום משמאל מייצג את משך השהייה של גירוי הריח.לאחר הניסוי, המוח נחתך ומבני הצביעה נבדקים בפירוט רב יותר באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי בהגדלה של 20 x. כך שהראינו לכם כיצד לדגום תמונות של נוירוני גוף הפטריה בדבורת הדבש במהלך למידה ריחית. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור כי ניסויים הכוללים צבעים רגישים לאור חייבים להתבצע בחשיכה.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם. להתראות.

in-vivo-ca2-imaging-mushroom-body-neurons-during-olfactory-learning

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מתאר הדמיית סידן in vivo בנוירונים דרוזופילה באמצעות GCaMP. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לתעד שינויים בפלואורסצנטיות GCaMP מנוירונים בגוף פטריות במהלך ניסוי מיזוג ריח.

דרוזופילה אין ויוו דימות סידן: שיטה לדימות פונקציונלי של פעילות עצבית

סרטון זה מדגים שיטה להדמיית סידן in vivo באמצעות חיישני סידן סינפטיים מקומיים בזבובים. הוא מתאר את השלבים להכנת הזבובים למיקרוסקופיה, ביצוע מיזוג חוש הריח, והדמיית זרימת סידן הנגרמת על ידי ריח.

ב Vivo הדמיית סידן באמצעות חיישני סידן סינפטיים מקומיים בדרוזופילה מלנוגסטר

סרטון זה מדגים פרוטוקול חיסוני מפורט כדי להמחיש פגמים פנוטיפיים בגופי הפטריות של מוחות דרוזופילה מוטנטיים. הפרוטוקול כולל שימוש בנוגדנים נגד Fas2, חלבון המעורב בהנחיה אקסונלית המאפשרת התפתחות מורפולוגית ותפקודית תקינה של גוף הפטרייה.

הדמיה של תאי עצב בגוף פטריות במוחות דרוזופילה באמצעות צביעת מערכת החיסון

הקלטות ארוכות טווח תאיים בו זמנית משני neuropiles המוח שונה או שני קטעים אנטומיים שונים הוקמו בדבורי דבש. הקלטות אלה מאפשרות החקירה של היבטים זמניים של עיבוד עצבי על פני אזורים שונים במוח בנוירון הבודד, כמו גם ברמת ההרכב בבעלי חיים מתנהגים.

הקלטות ארוכות טווח בו זמנית בשני שלבים עצביים עיבוד במתנהגים דבורי דבש

בעקבות חשיפה לגורמי לחץ סביבתיים ספציפיים, הנמטודה Caenorhabditis elegans עוברת פלסטיות פנוטיפית נרחבת כדי להיכנס לשלב נעורים 'דאואר' עמיד ללחץ.  אנו מציגים שיטות לאינדוקציה מבוקרת והדמיה של נוירופלסטיות במהלך דאואר.

In vivo ההדמיה של דאואר ספציפי עצבי שיפוץ בג elegans

כתב יד זה מתאר כמה פרוטוקולים לניהול סוכנים תרופתיים כדי דבורי דבש, כולל בשיטות לא פולשניות פשוט לדבורים חינם-עף, כמו גם הגירסות פולשני יותר המאפשרות טיפול מקומי מדויק של דבורים מאופקות.

מניפולציה Neuropharmacological של מאופקים חינם-עף דבש דבורים,<em&gt; Apis mellifera</em

כדי לבחון את ההשפעה המעכבת של סוכנים תרופתי על phospholipase C (PLC) באזורים שונים של המוח הונאיבי, נציג של assay ביוכימי כדי למדוד PLC פעילות באזורים אלה. Assay זה יכול להיות שימושי לצורך השוואת פעילות PLC בין רקמות, כמו גם בין דבורים מפגין התנהגויות שונות.

זיהוי של Phospholipase C פעילות Homogenate המוח של דבורת הדבש

כאן אנו מציגים פרוטוקול שבו ניתן לדמיין את הסידן הטרום ו/או הפוסט-סינפטיות בהקשר של למידה וזיכרון של דרוזוהילה . בשנת הדמיה vivo סידן באמצעות synaptically חיישנים סידן מקומי משולב עם הפרדיגמה הקלאסית מיזוג ריח כגון הפלסטיות הסינפטית הבסיסית בבסיס סוג זה של למידה אסוציאטיבית עשוי להיקבע.

ב-Vivo סידן הדמיה אופטית של למידה הנגרמת הפלסטיות הסינפטית בדרוזופילה מלאנוסטר

אנו מתארים כאן שיטות להשראת וניתוח שיפוץ תלוי חוויית ריח של גלומרולי סינפטי של אונת אנטנה במוח הצעיר של דרוזופילה .

עיצוב מחדש תלוי ניסיון של נוירון חושי חושי הריח של המוח הצעיר קישוריות סינפטית בתקופה קריטית לחיים מוקדמים

מחסום משמעותי לחקר הפעילות התאית במהלך תהליכים קוגניטיביים כמו למידה וזיכרון הוא השימוש בחומרי הרדמה להכנת הדמיה in vivo . הרדמה פוגעת בזיכרון לטווח קצר ובקוגניציה במספר מודלים, כולל דרוזופילה. מחקר זה מציג שיטה ייחודית להכנת דרוזופילה בוגרת להדמיה in vivo ללא הרדמה.

ב Vivo הדמיה של פעילות עצבית בזבובים בוגרים של דרוזופילה לא מורדמת

אנו מציגים פרוטוקולי הדמיית סידן עבור נוירון ריח של זחל דרוזופילה, באמצעות דבק רקמות מקומי לקיבוע. שיטה זו משפרת את היציבות, ומאפשרת ניסויים אמינים in vivo ו-ex-vivo. סקריפטים מותאמים אישית של R מנתחים אותות סידן, ומספקים פלטפורמה יעילה למחקר נוירופיזיולוגי מפורט.

הדמיית סידן in vivo ו-ex-vivo של נוירון במעגל הריח בזחל Drosophila melanogaster בכוכב השלישי

למדו הדמיית סידן חיה במוח דבורת הדבש במהלך למידה חוש הריח. השיטה מאפשרת מעקב אחר פעילות נוירונים בגוף הפטרייה ומספקת תובנות לגבי מנגנוני הלמידה והזיכרון בחרקים.

בשנת vivo Ca ^{2 +} - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש

גלה סרטונים נוספים