בשנת vivo Ca ^{2 +} - הדמיה של נוירונים גוף אינפקטד במהלך הלמידה חוש הריח של דבורת הדבש

דבורים יכול להיות מותנה פרדיגמה למידה תיאבון חוש הריח (PER מיזוג). באמצעות ריחות כמו גירויים, הקמנו שיטה שבה התנהגות נרשם ובמקביל הדמיה סידן משמשת למדידת פעילות ריח עורר בנוירונים גוף הפטרייה

הליך זה מתחיל בקיבוע הדבורה לתא הקלטה. פיסת ציפורן מוסרת מקפסולת הראש כדי להכתים מבנים נבחרים במוח. אותות סידן בתאי העצב המוכתמים נרשמים in vivo באמצעות מערך הדמיה בשדה רחב.

במהלך ההדמיה ניתן לגרות את הדבורה באמצעות ריחות או אספקת סוכרוז לאנטנה. בדרך זו, הדבורה עשויה להיות מותנית להאריך את הפרובוסקיס בתגובה לריח. תגובת הארכת הפרובוסקיס מנוטרת באמצעות הקלטות אלקטרומיוגרמה משריר M 17.

לאחר ניסוי ההדמיה, המוח מנותח לחקירה מדוקדקת יותר של המבנים המוכתמים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. היי, אני מלאני מהמעבדה של rdo Mansel. היי, אני אניה גם ממעבדת מנזל.

היום נראה לכם נוהל להדמיית סידן in vivo וגוף פטריית דבורת הדבש. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור קידוד חוש הריח ולמידה של פלסטיות הקשורה במוח של דבורת הדבש. אז בואו נתחיל.

התחל בתפיסת מלקט דבורת דבש בכניסה לכוורת, ולאחר מכן שיתק אותו על ידי צינון על קרח. לאחר מכן, הרכיב את הדבורה על תא הקלטה פרספקס. השתמש בשעווה קשה עם נקודת התכה נמוכה כדי לקבע את העיניים ובית החזה על הקיר.

כולם שוברים נימי זכוכית בקצה לקבלת קוטר של 10 מיקרון. מכסים את קצה הנימים במשחת d המורכבת מתערובת של 10 לאחד של דקסטרין URA שני דקסטרין ודקסטרין רודן הניתן לתיקון. הנימים המוכנים ישמשו לצביעה.

כדי להתחיל בהליך הצביעה, ראשית יש לשתק את האנטנות בעזרת קואן. פתחו את קפסולת הראש מעל המוח על ידי הסרת חתיכת קוטיקולה ודחיפת הבלוטות וקנה הנשימה לצדדים, מה שמאפשר גישה לגוף הפטרייה. השתמש בפיסת נייר כדי לספוג את לימפה ההמו בתוך קפסולת הראש.

כדי להכתים נוירונים בגוף הפטריות, הזרקו את הנימים לאזור הסומה או הדנדריטי של הנוירונים. לאחר מכן שחזר את חתיכת הציפורן על קפסולת הראש ושחרר את האנטנה. לבסוף, האכילו את הדבורה בתמיסת סוכרוז 30% ואחסנו אותה בקופסת קלקר מכוסה במגבת מטבח רטובה למשך ארבע שעות לפחות או למשך הלילה בחום של 20 מעלות צלזיוס.

עם השלמת הכנת B, נוכל להתחיל בהדמיה in vivo. כדי להתחיל, השתמש בספוג המחובר לתא ההקלטה כדי למנוע מהדבורה לזוז, ולחץ אותה כלפי מעלה על הבטן. כעת תקן את האנטנות של הדבורה עם יואן כדי למנוע מהמוח לנוע עקב שאיבת הוושט.

חותכים חתך קטן לתוך הקוטיקולה שמעל הלברום ושולפים בזהירות את הוושט ואת המבנים המוצקים שסביבו ומכסים אותם בשני מרכיבי סיליקון. לאחר מכן, השתמשו במחט כדי ליצור חורים להחדרת אלקטרודות תיל המשמשות לרישום אלקטרוגרמות משריר מד זווית השפתיים. הסר את חתיכת הציפורן, קנה הנשימה והבלוטות מעל המוח.

השתמש בפיסת נייר כדי לספוג את ההמו בתוך קפסולת הראש כדי לתעד אלקטרוגרמות מ-M 17. הזרקו חוט נחושת לשריר הקרוב לחלקי הפה. הזרקת אלקטרודה קרקעית לעין.

כעת מלאו את קפסולת הראש בסיליקון דו-רכיבי. ודא שהמוח מכוסה לחלוטין. הניחו את הדבורה על במת המיקרוסקופ והניחו טיפת מים על פני הסיליקון.

טבלו את מטרת הטבילה של המיקרוסקופ לתוך הטיפה, ולאחר מכן התמקדו בנוירוני הבמה. עם השלמת ההכנה להדמיה in vivo, אנו יכולים כעת לתאר גירוי ריח והקלטת אותות. כדי לספק גירויי ריח לדבורה, אנו משתמשים באולפקטומטר שנבנה בהתאמה אישית מבוקר מחשב כדי לדלל ריחות לזרם אוויר קבוע.

גירוי הריח המכוון לאנטנה מורכב מפולס של שלוש שניות של אוויר רווי ריח. לצורך הדמיית סידן, אנו משתמשים במערך הדמיה של til photonics המותקן על מיקרוסקופ פלואורסצנטי zes כדי להקליט תמונות בטמפרטורת החדר עם קצב דגימה של חמישה הרץ. אותות סידן נרשמים באמצעות אובייקט טבילה אולימפוס X 60 0.9 W עם מצלמת Ango CCD, כל מדידה נמשכת 10 שניות.

פוטנציאל השרירים מוגבר באמצעות מגבר דשא ומוקלט ועובר דיגיטציה באמצעות ממיר דיגיטלי אנלוגי. הקלטות מ-M 17 משמשות לניטור תגובות התנהגותיות הקשורות ללמידה עם השלמת הקלטת אותות, כעת נוכל לעבור לניתוח מורפולוגי ושחזור. מכיוון שלשני הצבעים המשמשים במהלך מילוי חוזר יש משקל מולקולרי זהה.

הם ממוקמים יחד בתאי העצב. להדמיית שדה רחב יש רזולוציה מרחבית מוגבלת, ולכן אנו משתמשים במיקרוסקופ סריקה קונפוקלי כדי לחקור את המבנים המוכתמים. לאחר הניסוי, תחילה לנתח את המוח ולקבע אותו למשך הלילה בפורמלדהיד 4% בארבע מעלות צלזיוס למחרת, לשטוף אותו ב-PBS ולאחר מכן לייבש אותו בשלבים של אתנול 10 דקות ב-50%70%90%99% ופעמיים 10 דקות ב-100%הנח את המוח על שקופית חפץ מחורצת עם טיפה של כיסוי מתיל סליצילאט, החלק אותו ואז הנח אותו על שלב המיקרוסקופ של מיקרוסקופ סריקה קונפוקלי.

סרוק את המוח עם עדשת אובייקט אוויר וזום דיגיטלי של 1.1 עד 1.2 בארבעה מקטעים אופטיים מיקרומטר. כאן אנו רואים את התגובה של נוירונים חיצוניים של גוף הפטרייה לגירוי ריח של האנטנות שהוקלטו באמצעות מטרה של פי 60 ומודגמים בצבעים כוזבים. הריבוע האדום משמאל מייצג את ההתמדה של גירוי הריח.

לאחר הניסוי, המוח מנותח ומבני הכתמים נחקרים בפירוט רב יותר באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי בהגדלה של פי 20. אז זה עתה הראינו לכם כיצד לדמות תאי עצב בגוף הפטריות בדבורת הדבש במהלך למידת חוש הריח. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור כי יש לבצע ניסויים הכוללים צבעים רגישים לאור בחושך.

אז זהו. תודה על הצפייה ובהצלחה בניסויים שלך. להת'.