Name: במבחנה Invasion FluoroBlok גידול Assay (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: למדו שיטת סימון פלואורסצנטי למדידת פלישת תאים דרך ממברנת Matrigel במחקר סרטן. השיטה מאפשרת השוואה בין קווי תאים פולשניים לבלתי פולשניים באמצעות FluoroBlok.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פוסט תיוג ומדידה באמצעות BD calcein AM צבע פלואורסצנטי תאים מסומנים עבור quantitation לאחר שהם פלשו דרך Matrigel BD מטריקס עברה דרך הממברנה BD FluoroBlok. כתוצאה מכך, רק מדידת נקודת הסיום של הפלישה תא ניתן לקבל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל תאים מפגש ~ 80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את רעננותם ואת המערכת להוסיף. <ol style="list-style-type:lower-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החבילה אחסון -20 ° C ולאפשר לו להגיע לטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את החבילה בנייר ולהוסיף 500 μL חמים (37 מעלות צלזיוס) התקשורת הפנים של בארות להוסיף. אפשר צלחת כדי רעננותם עבור 2 שעות 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. הערה: אין צורך רעננותם ציפוי BD פלקון FluoroBlok 24-Multiwell מערכת הכנס שישמש כביקורת נדידת תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר התייבשות, להסיר בזהירות את המדיום מבארות להוסיף מבלי להפריע את שכבת BD Matrigel מטריקס על הממברנה. המערכת נמצאת כעת מוכן לשימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן השעיות התא על ידי trypsinizing monolayers התא resuspending התאים בדם ללא DMEM ב 5 x 10 4 תאים / מ&quot;ל. הערה: אם אתה משתמש סוג תא אחר אתה צריך לקבוע את צפיפות זריעה אופטימלית. כדי לקבוע את צפיפות זריעה אופטימלית עבור סוג הסלולרי שלך על משטח נקבובי הצמיחה, להשתמש במגוון של צפיפות זריעה (תאים / ס&quot;מ 2) כי הסוגריים צפיפות זריעה בשימוש על משטחים nonporous (כלומר, צלוחיות, צלחות וצלחות). לדוגמה, אם אתה כרגע זרע ב 2.5 x 10 תאים 5 / 2 ס&quot;מ, זרע בריכוזים תאים שונים בין 5 x 10 x 4 ו -5 תאים 10 5 / 2 ס&quot;מ, כדי לקבוע את צפיפות אופטימלי זריעת הראשונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 500 μL ההשעיה תא (2.5 x 10 4 תאים) לתאי apical. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 750 μL של chemoattractant (5% ב FBS DMEM) לכל אחד מתאי הבסיס, באמצעות יציאות מדגם עבור גישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה גידול BioCoat BD הפלישה מערכת ציפוי BD פלקון FluoroBlok 24-Multiwell פלייט הכנס עבור 20-22 שעות 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באטמוספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה, להסיר בזהירות בינוני מתאי apical. ניתן להשיג זאת על ידי מצליף את התוכן לתוך מיכל פסולת. אל תיגע במשטח התחתון של המערכת להוסיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את המערכת להכניס צלחת 24 היטב נוספת שהכילה 500 μL / טוב של 4 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​Calcein AM ב HBSS. דגירה במשך שעה 1 ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. הפתרון AM Calcein לא יוסר החדר התחתון לפני קריאת הקרינה כי זה צבע חיוני nonfluorescent כי מומר calcein פלואורסצנטי ירוק על ידי esterases cytosolic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקרינה של התאים פלשו קוראים באורכי גל של 494/517 ננומטר (אקס / em) על הקורא התחתונה קריאה צלחת ניאון. הגדרת רווח ייתכן שיהיה צורך נקבע באופן אמפירי, אך רווח האמצע צריך להיות נקודת התחלה מספיק. הגדרה רווח זה גבוה מדי עלול להוביל הרוויה של הגלאי עם מדגם ניאון מאוד, זה עשוי למנוע את הרכישה של תוצאות משמעותיות. השימוש autogain (אם נתמך על הקורא שלך) אינה מומלצת. מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוכה ניתן להשתמש כדי לאמת את התוצאות שלך, זה מועיל במיוחד לעשות את זה בפעם הראשונה שתפעיל את זה assay. הערה: זה הוא בעל חשיבות עליונה כי מערכות הכנס נקראים באמצעות צלחת המפה הנכונה. למידע על מפות צלחת טעינת לראות BD עלון טכני מס &#39;436 על www.bdbiosciences.com או צרו קשר עם BD תמיכה טכנית (labware@bd.com). אוריינטציה צלחת פרופר הוא עם A1 גם בפינה השמאלית העליונה ואת הלוגו Flacon BD אוריינטציה ימינה כמו צלחת מוכנס לתוך הקורא. </li></ol> נתוני הפחתת נתונים מבוטא במשוואה הבאה: <img src="/files/ftp_upload/1475/1475eqa.jpg" alt="משוואה" /> רקע יכול להיות מופחתים לפני החישוב של הפלישה תא אחוזים RFU = יחידות פלורסנט יחסית.

<ol><li>Sethi, G., Ahn, K. S., Pandey, M. K., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celastrol%2C+a+novel+triterpene%2C+potentiates+TNF-induced+apoptosis+and+suppresses+invasion+of+tumor+cells+by+inhibiting+NF-%CE%BAB-regulated+gene+products+and+TAK1-mediated+NF-%CE%9AB+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Celastrol, a novel triterpene, potentiates TNF-induced apoptosis and suppresses invasion of tumor cells by inhibiting NF-κB-regulated gene products and TAK1-mediated NF-ΚB activation.</a> Blood. 109, 2727-2735 (2007).</li>
<li>Takada, Y., Kobayashi, Y., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evodiamine+Aboloishes+Constitutive+and+Inducible+NF-%CE%BAB+Activation+by+Inhibiting+I%CE%BAB%CE%B1+Kinase+Activation%2C+Thereby+Suppressing+NF-%CE%BAB-regulated+Antiapoptotic+and+Metastatic+Gene+Expression%2C+Up-regulating+Apoptosis%2C+and+Inhibiting+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evodiamine Aboloishes Constitutive and Inducible NF-κB Activation by Inhibiting IκBα Kinase Activation, Thereby Suppressing NF-κB-regulated Antiapoptotic and Metastatic Gene Expression, Up-regulating Apoptosis, and Inhibiting Invasion.</a> J. Biol. Chem. 280, 17203-17212 (2005).</li>
<li>Harikumar, K. B., Kunnumakkara, A. B., Ahn, K. S., Anand, P., Krishnan, S., Guha, S., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+cysteini+residues+in+I%CE%BAB%CE%B1+kinase+and+NF-%CE%BAB+%28p65%29+by+xanthohumol+leads+to+suppression+of+NF-%CE%BAB-regulated+gene+products+and+potentiation+of+apoptosis+in+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Modification of the cysteini residues in IκBα kinase and NF-κB (p65) by xanthohumol leads to suppression of NF-κB-regulated gene products and potentiation of apoptosis in leukemia cells.</a> Blood. , 113-2003 (2009).</li>
<li>Nair, A. S., Sishodia, S., Ahn, K. S., Kunnumakkara, A. B., Sethi, G., Aggarwal, B. B. D. eguelin <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((an+Akt+Inhibitor%2C+Suppresses+I%CE%9AB%CE%B1+Kinase+Activation+Leading+to+Suppression+of+NF-%CE%BAB-Regulated+Gene+Expression%2C+Potentiation+of+Apoptosis%2C+and+Inhibition+of+Cellular+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">an Akt Inhibitor, Suppresses IΚBα Kinase Activation Leading to Suppression of NF-κB-Regulated Gene Expression, Potentiation of Apoptosis, and Inhibition of Cellular Invasion.</a> J. Immunol. , 177-5612 (2006).</li>
<li>Partridge, J., Qian, S. Quantitative and High-Throughput Screening of Tumor Cell Invasion using a Cell-based Model. Society for Biomolecular Screening 2005 Conference. 2005 Sept 11-15, Geneva, Switzerland, , (2005).</li>
<li>An Improved In Vitro Device For Measuring Cell Invasion and Method for its Formation. US patent. , 6,740,501,B2 (2004).</li>
<li>Flaherty, P., Goldberger, A., Dery, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Fluorescent+Cell+Labeling+on+Tumor+Invasion+and+Screening+of+Anti-Metastatic+Compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Mole.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Effect of Fluorescent Cell Labeling on Tumor Invasion and Screening of Anti-Metastatic Compounds.</a> Mole. Biol. Cell. 12, 46a-46a (2001).</li>
<li>Flaherty, P., Mannuzza, F., Ilsley, S., Maliakal, J., Wu, M. Screening of Anti-Metastatic Compounds by a Fluorescence Based Tumor Invasion Assay. Screentech 2001 Conference. 2005 Mar 12-16, San Diego, CA, , (2005).</li>
<li>Mannuzza, F., Flaherty, P., Wu, M., Ilsley, S. Development of a Quantitative, High-Throughput Assay System for the Discovery of Anti-Cancer Drugs. Proceedings of the Society for Biomolecular Screening. 1999 Sept 13-16, Edinburgh, SC, UK, , (1999).</li>
</ol>

הכותבים הם עובדי BD Biosciences המייצרת ריאגנטים וכלים המשמשים במאמר זה.

<table><tbody><tr><td>מערכת BD BioCoat לבדיקת פלישת גידולים (Tumor Invasion System)</td><td>BD Biosciences</td><td>354165 or 354166</td><td></td></tr><tr><td>תאי HT-1080 ו-NIH/3T3</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מדיום Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM; ללא סרום)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלח Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline, ללא סידן ומגנזיום (DPBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert לשימוש כביקורת נדידת תאים</td><td>BD Biosciences</td><td>351157 or 351158</td><td></td></tr><tr><td>5% סרום עגל עוברי (Fetal Bovine Serum) ב-DMEM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צבע פלואורסצנטי BD Calcein AM</td><td>BD Biosciences</td><td>354216 or 354217</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלחים מאוזנת של Hanks&amp;rsquo; (HBSS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פלטות BD Falcon בעלות 24 בארות לסימון לאחר פלישת תאים</td><td>BD Biosciences</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>קורא פלטות פלואורסצנטי עם יכולת קריאה מהתחתית</td><td>PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

במבחנה invasion fluoroblok גידול assay

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

סימן ההיכר של תאים גרורתי הוא היכולת שלהם לחדור דרך הממברנה המרתף לעבור לחלקים אחרים של הגוף. תאים צריכים להיות מסוגלים גם להפריש פרוטאזות כי לשבור את קרום מרתף וכן להעביר כדי להיות פולשני. BD הפלישה BioCoat המערכת מספקת גידול התאים בתנאים המאפשרים הערכה של הרכוש שלהם פולשנית<em&gt; במבחנה</em<sup&gt; 1,2</sup&gt;. זה מורכב פלקון BD FluoroBlok 24-Multiwell פלייט הכנס עם 8.0 מיקרון נקבוביות הממברנה PET בגודל זה כבר מצופה באופן אחיד עם BD Matrigel מטריקס. זו שכבה אחידה של BD Matrigel מטריקס משמשת קרום מרתף מחדש<em&gt; במבחנה</em&gt; מתן מחסום אמיתי פולשני תאים תוך הצגת מבנה החלבון המתאים ללמוד הפלישה. תהליך ציפוי חוסם את הנקבוביות של הממברנה, חסימת פולשני תאים נודדים דרך הממברנה. לעומת זאת, התאים פולשניים מסוגלים לנתק את עצמם ולהעביר דרך הממברנה מצופה. Quantitation הפלישה התא יכולה להיות מושגת על ידי תיוג או לפרסם תאים טרום הפלישה או עם פלורסנט לצבוע כמו המבת&quot;ן<sub&gt; 12</sub&gt; (3) או calcein בבוקר, בהתאמה, מדידת הקרינה של תאים פולשים. מאז קרום FluoroBlok BD ביעילות חוסם את המעבר של אור 490-700 ננומטר ביעילות&gt; 99%, fluorescently שכותרתו תאים לא פלשו לא מזוהים על ידי הקורא התחתונה קריאה צלחת פלואורסצנטי. עם זאת, התאים פלשו לחלק התחתון של הקרום אינם מוגנים ממקור אור מזוהים עם הקורא את הצלחת בהתאמה. וידאו זה מדגים תא הסיום assay הפלישה, באמצעות calcein AM לזהות תאים פלשו.

וידאו זה מדגים כיצד למדוד את הפלישה תא דרך התרבות מוסיף התא באמצעות מתודולוגיה מבוססת הקרינה.

במבחנה Invasion FluoroBlok גידול Assay

מאפיינן המרכזי של תאים גרורתיים הוא יכולתם לפלוש דרך קרום הבסיס ולהגר אל חלקים אחרים בגוף. תאים חייבים להיות מסוגלים ל...

פלישת תאים היא שלב חשוב בהתקדמות הסרטן ובתהליך האנגיוגנזה. בדיקות פלישה in vitro מעריכות בדרך כלל את יכולתם של תאים לפרק ממבנה בסיס משוחזר, כגון BD matrix או gel matrix, ולנדוד דרך תבניות תרבית תאים (inserts). בדיקת פלישת הגידול מתחילה כאשר מוסיפים תאים לתבניות Fluor block מצופות ב-matri gel.מוסיפים חומר משיכה כימית של קרום בסיס משוחזר לתא הבסיס ומדגירים את המערכת. במהלך הלילה, תאים פולשים יוכלו לפרק את מחסום ה-matrigel ולעבור דרך ממברנת ה-flora block, ממברנה ייעודית המגנה על ה-Fluor מאור סביבתי. את תכולת התא האפיקלי שופכים, ואת התבנית הרב-באירית מעבירים לצלחת שנייה המכילה Fluor.לאחר הדגירה, תאים חיוניים נצבעים וניתן לזהותם הן באופן ויזואלי והן באמצעות קורא מיקרו-פלייטים. שלום, אני ג'ף פרטריג' מ-BD Biosciences Discovery LabWare. היום נראה לכם פרוטוקול לבדיקת פלישת גידול בבלוק של פלואור.אנו משתמשים בנוהל זה כדי לחקור את פלישת תאי גידול דרך קרום בסיס לעבר חומר מושך כימי. אם כן, נתחיל. גידלו את התאים עבור בדיקת פלישת הגידול עד להגעה לכ-80% confluence.בניסוי זה, נשתמש בקווי התאים HT 10 80 ו-NIH 3T3. הוכח כי תאי HT 10 80 נודדים ופולשים דרך מחסום ה-matrigel במערכת, ולכן הם משמשים כביקורות חיוביות טובות עבור הבדיקה. תאי NIH 3T3 אינם פולשניים, אך הם כן נודדים, ולכן הם משמשים כביקורות שליליות טובות להליך זה.כדי להתחיל, יש להחזיר את המערכת למצב הידרטי על ידי הוצאת מארז מערכת פלישת הגידול של BD bio coat מאחסון בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס והמתנה עד להגעה לטמפרטורת החדר. מכיוון שהבדיקה דורשת טכניקה סטרילית, יש להמתין להגעת הרכיב לטמפרטורת החדר בתוך מנדף לתרבית רקמות. לאחר שהמארז הגיע לטמפרטורת החדר, פתח אותו כדי להחזיר את קרום הבסיס, שדרכו יעברו התאים הנחקרים, למצב הידרטי.הוסיפו 500 µL של מצע חם לתוך בארי הinserts, והניחו לפלטה לעבור רהידרציה במשך שעתיים ב-37 °C ו-5% carbon dioxide. אין צורך לבצע רהידרציה לפלטת ה-BD Falcon Flora Block 24 multi-well insert הבלתי מצופה, שכן היא תשמש כביקורת נדידה תאית כדי להכין את התאים לבדיקת הפלישה (invasion assay). השתמשו ב-Trypsin כדי להפריד את השכבות התאיות המונות ותלו את התאים ב-DMEM נטול סרום בריכוז של 5 × 10⁴ תאים ל-mL.במידה ונעשה שימוש בסוג תא אחר, יש לקבוע את צפיפות הזריעה האופטימלית באופן אמפירי. לאחר רהידרציה של הפלטה המצופה, יש להסיר בזהירות את המצע מבארות האינסרט מבלי להפריע לשכבת ג'ל ה-MA שעל הממברנה. המערכת מוכנה כעת לשימוש.אין לאפשר לשכבת ג'ל ה-MA להתייבש. כדי להתחיל את בדיקת פלישת התאים, הוסף 500 microliters מכל תרחיף תאים לתאי האפיקס (apical chambers) של מערכת פלישת הגידול, הן בתצורות המצופות ב-matrigel והן באלו שאינן מצופות. לאחר מכן, באמצעות פתחי הדגימה, הוסף 750 microliters של חומר מושך כימי (chemo attractant) לתאי הבסיס (basal chambers) בשני סוגי הפלטות, המצופות והבלתי מצופות.חשוב מאוד שלא ייווצרו בועות אוויר בעת מילוי התאי הבסיסיים. כביקורת למעבר תאים, יש להוסיף כל תרחיף תאים וכן את חומר המשיכה הכימי (chemo attractant) לתוך פלטת המבנים BD Falcon Flora Block 24 Multi WA שאינה מצופה. יש להדגיר את מערכת פלישת הגידול ואת פלטת המבנים הבלתי מצופה של Falcon Flora Block 24 Multi WA למשך 20 עד 22 שעות בטמפרטורה של 37 °C, באטמוספירה של 5% carbon dioxide, עד ליום למחרת.בסיום הדגירה, התאים מוכנים לסימון באמצעות הצבע הפלואורסצנטי calcium am. יש להסיר בזהירות את המצע מהתאים האפיקליים על ידי נעירה של התוכן לתוך מיכל פסולת. לאחר מכן, יש להעביר מיד את מערכת הסירט (insert) לפלטת 24 בארות שנייה המכילה 500 µL לבאר של 4 µg/mL.סידום (Calcium) בתוך תמיסת מלח מאוזנת של הנק (Hank's balanced salt solution). חזור על שלבים אלו עם בקרת נדידה (migration control). דגרו את הצלחות למשך שעה אחת ב-37 °C, 5% carbon dioxide.אין לגעת במשטח התחתון של מערכת הסייב (insert). בתום דגירה של שעה אחת עם סידן, ניתן למדוד את הפלואורסצנציה של התאים הפולשים. חשוב ביותר להשתמש במפת פלטה נכונה בעת קריאת מערכות הסייב.הכיוון הנכון של הפלטה הוא כאשר באר A1 נמצאת בפינה השמאלית העליונה ולוגו BD Falcon פונה ימינה; בעת הכנסת הפלטה לקורא, הפלואורסצנציה נקראת באורכי גל של 494 ו-517 nanometers באמצעות קורא פלטות פלואורסצנטי עם קריאה מהתחתית. יש לאמת את התוצאות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך כדי להבטיח שנתוני קורא הפלטות תואמים לתוצאות הוויזואליות. אלו הם נתונים טיפוסיים מקורא פלטות מפלטה מצופה ומפלטת ביקורת לא מצופה, שהתקבלו מבדיקות פלישה של שניים מקווי התאים HT 10 80 ו-NIH three T three.נתונים מבארים ללא תאים מייצגים את הרקע שניתן להפחית לפני חישוב אחוז פלישת התאים. חשבו את אחוז הפלישה באמצעות המשוואה הבאה. אחוז הפלישה שווה לממוצע יחידות הפלואורסצנציה היחסיות או rfu של תאים שעברו דרך הממברנה המצופה ב-matrigel לעבר החומר המושך הכימי (chemo attractant).ערך זה מחולק ב-RFU הממוצע של תאים שנדדו דרך ממברנת בלוק ה-VD flua ללא הציפוי לכיוון חומר המשיכה הכימי. לאחר מכן, ערך זה מוכפל ב-100. גרף זה מציג השוואה של אחוז פלישת התאים בין תאי HT 10 80 לתאי NIH three T three, וכפי שניתן לראות, תאי HT 10 80 הם פולשים בעוד שתאי NIH three T three אינם פולשים.בבדיקת התאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך, התוצאות עקביות עם אלו שהתקבלו מקורא הלוחיות. תאי HT 10 80 הפולשניים פלשו דרך ה-matrigel וכן נדדו דרך הממברנה ללא הציפוי. לעומת זאת, תאי NIH three T three שאינם פולשניים לא פלשו דרך ה-matrigel, אך נדדו דרך הממברנה ללא הציפוי.הרגע הצגנו בפניכם כיצד לבצע בדיקת פלישת גידול באמצעות חסימה פרחית (floral block tumor invasion assay). בעת ביצוע הליך זה, חשוב לשמור על הפלטות במצב אופקי ולמזער את היווצרות בועות, שכן אלו עלולות להשפיע על התוצאות.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

an-in-vitro-fluoroblok-tumor-invasion-assay

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Assay אישור mesothelial המתוארת כאן מנצלת את התאים שכותרתו fluorescently ואת זמן לשגות מיקרוסקופיה וידאו להמחיש כמותית למדוד את יחסי הגומלין של סרטן השחלות spheroids תאיים ו monolayers התא mesothelial. Assay מתווך זה מדגים את השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות.

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

זרימת הנוזל ביניים הוא גבוה בגידולים מוצקים והוא יכול לווסת את הפלישה תאים סרטניים. כאן נתאר את הטכניקה ליישם זרימת הנוזל ביניים לתאים משוקע בתוך ולאחר מכן למדוד את השפעותיו על הפלישה התא. טכניקה זו ניתן להתאים בקלות ללמוד מערכות אחרות.

תלת מימדי תרבית תאים מודל למדידת השפעת זרימת הנוזל ביניים על הפלישה תאים סרטניים

סרטון זה מתאר את הטכניקה של שימוש במטריצה טבעית לחקר פלישת תאי גידול. הטכניקה המשמשת בבדיקה זו מספקת את היכולת להעריך אינטראקציות תאים אפיתליאליים-מזנכימליים בסביבה תלת-ממדית ללא צורך במטריצה סינתטית או זרה.

בדיקת פלישת תאי גידול: שיטה תלת-ממדית מבוססת מטריצה טבעית במבחנה להערכת אינטראקציות תאים אפיתל-מזנכימליים

בשימוש נפוץ, שיטות נגישות ביותר לבחינת נדידת תאים ופלישה במבחנה מתוארות. השיטה הראשונה היא assay סגירת פצע תא המודד את תנועתיות תא. השיטה השנייה היא assay ההגירה והפלישה transwell שמעריך את chemotactic וקיבולת פולשני של תאים.

נדידת תאים במבחנה ומבחני פלישה

מאמר וידאו זה מתאר שיטה שונה במבחנה לבחינת תפקידם של הורמונים, ציטוקינים ו/או גורמי גדילה בהנעת פלישת תאים סרטניים.

השתנה<em&gt; במבחנה</em&gt; פלישת Assay כדי לקבוע את התפקיד הפוטנציאלי של הורמונים, ציטוקינים ו / או גורמי גדילה בפלישת תאי הסרטן המתווך

פלישה לרקמות נורמליות שמסביב היא מאפיין מגדיר של גידולים ממאירים. אנו מספקים כאן מבחן מיקרו-צלחת פשוט ואוטומטי למחצה של פלישה לביומטריצה תלת מימדית טבעית שהודגמה במספר מודלים של סרטן אנושי מתקדם.

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

פרוטוקול זה מתאר של assay הפוכה הפלישה אנכי יכול לשמש כדי לכמת את יכולות העברת ופלישה של תאים בתוך תפאורה תלת מימדי תוך שמירה על microenvironment תא. Assay הזה מתאים תאים נדירים ו/או רגישים.

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

הזרקה תוך-גולגולתי Orthotopic של תאים סרטניים שימש בחקר הסרטן ללמוד ביולוגיה גידול במוח, התקדמות, התפתחות, תגובה טיפולית. כאן אנו מציגים פלורסצנטיות מולקולרית טומוגרפיה של גידול xenografts, אשר מספק הדמיה intravital בזמן אמת, כימות של גידול המוני במודלים פרה גליובלסטומה.

קרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית עבור הדמיה In Vivo של גליובלסטומה Xenografts

כאן, אנו מתארים טכניקות הדמיה לחיות תאים למדוד באופן כמותי את ההעברה ואת הפלישה בתאי גזע המוח גידול גליובלסטומה לאורך זמן, תחת תנאים מרובים של הטיפול.

מבחני הדמיה לחיות תאים מחקר המוח גליובלסטומה גידול תאי גזע ההעברה, הפלישה

התהליכים השולטים הפלישה סרטן שלפוחית השתן מייצגים הזדמנויות סמן ופיתוח טיפולית. כאן אנו מציגים מודל הפלישה סרטן שלפוחית השתן אשר משלבת תרבות תלת-ממדי של גידול spheroids, הדמיה בצילום מואץ, מיקרוסקופיה קונפוקלית. טכניקה זו שימושית עבור הגדרת התכונות של תהליך פולשני, הקרנת סוכני טיפולית.

תא תלת-ממדי מערכת תרבות עבור הלומדים הפלישה והערכת הרפוי בסרטן שלפוחית השתן

בשנת מבחנה הפלישה תא מתורבת משמש כדי למדוד את הפוטנציאל של גרורות סרטן על ידי כימות הפוטנציאל התאי עבור פלישה והגירה באמצעות התרבות תאים מוסיף חלבון מטריצה. התאים מאותגרים לעבור דרך מטריצת החלבונים וממברנה נקבובי, לכיוון מיקרוסטנט, ולאחר מכן כימות על ידי מיקרוסקופ אור.

השימוש של העכבר בתאי סרטן הגידול בתוך שיטת הפלישה מחוץ למבחנה כמדד של התנהגות התא אונגניים

למדו שיטת סימון פלואורסצנטי למדידת פלישת תאים דרך ממברנת Matrigel במחקר סרטן. השיטה מאפשרת השוואה בין קווי תאים פולשניים לבלתי פולשניים באמצעות FluoroBlok.

במבחנה Invasion FluoroBlok גידול Assay

גלה סרטונים נוספים