Name: בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-08T16:03:00.000+00:00
Duration: 16 min 4 s
Description: למדו לבודד ולהרחיב תאי ECFC ו-MSC מחבל הטבור האנושי ללא שימוש בסרום בעלי חיים. שיטה זו מאפשרת יצירת זוגות תאים אוטולוגיים למחקרי השתלה ברפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים קתרינה Schallmoser למתן pHPL, אווה רודה וניקול הופמן להערות שימושי היד, דניאלה טלר לבין מרגרטה Fr hwirth לקבלת סיוע טכני, מוניקה פארל לעריכה לשונית, אווה לנג, מרגיט הולצפפל וסנדרה Eppich על החוג למיילדות למתן את מיתרי. עבודה זו נתמכה על ידי קרן המחקר האוסטרי (FWF, מענק N211-NAN ל DS), המחקר האוסטרי קידום הסוכנות (FFG, מענק N200 ל DS) ועל ידי תא גזע בוגרים Research Foundation (ע&quot;ר). AR הוא עמית לרפואה של התוכנית PhD מולקולרית של האוניברסיטה לרפואה של גראץ.

חלק 1: הגדרת 1. הכנת תרבית תאים בינוני לפני תחילת הכנת בינוני לאסוף את כל החומרים והכלים תצטרך. הפשירי 2 x 56 aliquots מ&quot;ל של lysate ונקווה טסיות האנושי (pHPL, מתוצרת עצמית: התייחסות 1 &amp; יופיטר # 1523), 10 מ&quot;ל של פניצילין 100x / פתרון סטרפטומיצין, 2 x 5 מ&quot;ל של L-גלוטמין (הן סיגמא). ההפשרה ציטוקינים ו - גורם גדילה aliquots (VEGF, bFGF, EGF, IGF, הידרוקורטיזון, חומצה אסקורבית, הפרין, amphotericin כאמור &quot;quots יחיד &#39;) מותאם משלים 1 בקבוק (500 מ&quot;ל) של המדיום EGM-2 (Lonza). מהמקרר לקחת אחד בקבוק 500 מ&quot;ל כל אחד (i) אלפא שונה מדיום חיוני מינימלי (A-ממ) ו (ב) בינוני הבסיס האנדותל (EBM). כל השלבים הבאים מתבצעים ברדס זרימה למינרית רקמה תרבות בתנאים סטריליים. הכן הפרין ללא חומר משמר (למשל, Biochrom) על ידי המסת אבקת לריכוז סופי של 1000 IU / mL עם מים סטריליים. MSC-בינונית: השתמש ב 500 מ&quot;ל של-ממ, להוסיף 56 מ&quot;ל של pHPL מופשר (ראה גם התייחסות 1 לפרטים נוספים) ו 2 IU / mL (= 224 μl של פתרון המניות) של הפארין, חומר משמר בחינם (מונע קרישה של המדיום דרך ובהצטברויות פיברינוגן של פלזמה) להגיע הריכוז הסופי של pHPL 10%. בנוסף להוסיף פניצילין (100U/mL) / סטרפטומיצין (100μg/mL) פתרון של 2 מ&quot;מ L-Glutamin (הן סיגמא). סינון בינוני באמצעות מסנן 20 מיקרומטר, גודל הנקבוביות ואקום (Millipore). תווית הבקבוק כיאות (תאריך, תוכן). ECFC-בינונית: השתמש בקבוק אחד (500 מ&quot;ל) של EBM, מוסיפים את ציטוקינים-aliquots, 56 מ&quot;ל של pHPL, 10 IU / מ&quot;ל ​​(= 1120μl של פתרון המניות) של הפארין, חומר משמר בחינם, פניצילין (100U/mL) / סטרפטומיצין (100 גר &#39;/ מ&quot;ל) פתרון של 2 מ&quot;מ L-Glutamin עד בינוני המסנן הבסיס, עם 20 μl-נקבוביות ואקום גודל המסנן (Millipore). תווית הבקבוק כיאות (תאריך, תוכן). 2. עיקור של מכשירי ניתוח מלקחיים, זוג מספריים חדות כירורגית מחזיק אזמל חייב להיות חום disposables עפרות מעוקר סטרילי. 3. הכנת צינורות לאיסוף חוט הוספת 500 IU של משמר - הפרין חופשי 50 מ&quot;ל צינורות פוליפרופילן (Falcon) ולהתאים את נפח סופי של 20 מ&quot;ל עם PBS. העברת צינורות לחדר הלידה. 4. הסכמה מדעת (אושר על ידי הוועדה המקומית שלך IRB אתית או). שאל את ההורים לפני הלידה אם הם רוצים לתרום חתיכת חוט והולם ליידע אותם על מטרות זה ישמש. 5. כבל תרומה לאחר הלידה ובדיקה של השליה חוט לחתוך חתיכה 10 ס&quot;מ ומיד להעביר אותו צינור שלך prefilled עם הפרין כדי למנוע קרישת הדם הנותר בתוך כלי חוט. ממשיכים עם בידוד תא בהקדם האפשרי. חלק 2: בידוד נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תזרים למינרית רקמות ברדס התרבות על ידי ניקוי משטחים עם Incidin EtOH או 70%. מקום סטרילי 150 ס&quot;מ 2 תאים תרבות צלחות, 75 צלוחיות תא ס&quot;מ התרבות (הן קורנינג), PBS, מכשירי ניתוח עיקור, מגרדים תאים, בעל צינור, stripettes 25 מ&quot;ל ו 5 מ&quot;ל מצויד מזרקים ומחטים סוף בוטה כראוי ברדס ניקה שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום חם שהוכן שלך α-EGM ממ ו-2 תרבית תאים בינוניים עד 37 מעלות צלזיוס באמבט מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו את כבל מחדר הלידה למעבדה שלך מצויד למכסה המנוע תרבית תאים. לאחר העברת כבל לתוך הזרימה למינרית לשטוף אותו פעמיים PBS (על ידי העברת לצלחת חדש) להיפטר לזהם כדוריות הדם. שוטפים את וריד הטבור לאחר canulating אותו בצד אחד עם מזרק 5 מ&quot;ל סטרילי מצויד במחט עם קצה קהה PBS עד הנוזל שיוצא את הקצה השני של החבל הופך שקוף לחלוטין (אדמדם מציין זיהום בדם). </li></ol> ECFCs: <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 75 2 ס&quot;מ צפחת (קורנינג), תווית ומלא 15-20 מ&quot;ל של מדיום EGM-2 מראש התחמם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הכבל לתוך צלחת חדש מלא PBS סטרילית. קחו את המספריים כירורגית לחתוך את חבל הטבור לשתי חתיכות של כ -5 ס&quot;מ אורך (קטעים קצרים קל יותר בתהליך, כי כלי הטבור שזורות לאורך ציר שלהם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נסו למצוא את הווריד הטבורי (כלי גדול), להוסיף אחת להב מספריים כירורגיות שלך לחתוך את הווריד longitudinally. בשלב זה יכול להיות מועיל אם כעוזר יכול להחזיק את הווריד לחתוך כבר עם שני מלקחיים בזמן שאתה לחתוך עוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העוגה בחוטce עם הווריד לחתוך בצלחת חדשה ללא PBS, לקחת את מגרד לגרד תאים של פני השטח (אנדותל) הפנימי של וריד הטבור על ידי שפשוף מקצה אחד לקצה השני. העברת התאים בקבוק שהוכן על ידי ניקוי מגרד את קצה של המדיום. חזור על הליך זה לפחות 10 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הבקבוק שלך ולשים אותו לתוך אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, 95% לחות). </li></ol> MSCs: <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 150 2 ס&quot;מ תרבות צלחת (קורנינג) ואת התווית אותה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קחו את חתיכת חוט (לאחר מקרצפים את שכבת האנדותל) ו לחתוך את חבל הטבור כולו לחתיכות קטנות מאוד באמצעות מספריים סטרילית אזמל סטרילי. גודל מקסימלי של חתיכות חוט צריך להיות 1-2 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת חלקים כבל שלך עם מלקחיים סטרילי לתוך הצלחת שלך מראש שכותרתו תרבות. מאת עוזב צלחת הפתוח במשך 5 דקות לפני מתמלא בינוני, החיבור של החלקים למשטח פלסטיק מחוזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חתיכות חוט מחוברים כראוי הפלסטיק, בעדינות מוסיפים 30-35 מ&quot;ל של אלפא טרום חימם שונה ממ. נסה להשתמש המהירות הנמוכה ביותר כדי לוודא כי כל החלקים נשארים מחוברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצלחת להכניס אותו לתוך אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, 95% לחות). </li></ol> חלק 3: הרחבת התא ואישור פנוטיפ-החיסונית על ידי זרימת cytometry Cell Expansion EFCFs: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הקובץ המצורף של בתאי האנדותל למחרת על מיקרוסקופ חילופי הפוכה כל EGM-2 בינוני להיפטר כל הלא צמוד תאים וחלקיקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את התאים עד שליש מפגש וחילופי המדיום פעמיים בשבוע. כאשר המפגש הוא הגיע, לנתק את התאים עם 0.05% Trypsin/0.7 mM EDTA ולהעבירם כלי תרבות חדשה. בהתאם למספר התאים בתוך בקבוק שלך T75, אתה צריך לבחור את גודל ומספר צלוחיות החדש שלך כדי להבטיח את צפיפות זריעה נמוכה להתרחבות נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שערי שליש המדיום פעמיים בשבוע במהלך התרחבות של התאים. </li></ol> MSCs: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תולדה של MSCs מחוט ייקח יותר זמן, כך שאתה יכול לחכות לפחות 3-4 ימים עד שאתה לבדוק מיקרוסקופ הפוכה להופעת תאים דמויי כישור בסביבה של חתיכות רקמה המצורפת. כאשר יש תא מספיק מחוץ צמיחה, חתיכות נוטים לנתק כי הם מאבדים את הקשר עם הפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 10-12 ימים להסיר את פיסות רקמה, לנתק את MSCs מפלסטיק עם 0.05% Trypsin/0.7 mM EDTA ולהעבירם כלי תרבות חדשה. בהתאם לכמות של תאים בתוך הצלחת שלך אתה צריך להחליט על גודל ומספר צלוחיות החדש שלך כדי להבטיח את צפיפות זריעה נמוכה להתרחבות נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שערי שליש המדיום פעמיים בשבוע במהלך התרחבות של התאים. </li></ol> תזרים cytometry ציוד נחוץ: תזרים cytometer (BD FACSCalibur), micronic צינורות (קורנינג), בעל צינור, כבשים סרום (חסימת מגיב), Eppifuge (Eppendorf), נוגדנים חד שבטיים MSCs: CD45, CD14, CD19, HLA-DR, CD31, CD73, CD90, CD105, שולטת אלוטיפ ECFCs: CD45, CD14, CD19, HLA-DR, CD31, CD34, CD90, CD105, CD144, CD146, שולטת אלוטיפ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהגיע למפגש, לנתק את התא עם 0.05% Trypsin/0.7 mM EDTA ו צנטריפוגות ב 300 גרם ב 7 דקות 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend את התאים בריכוז של 1x10 6 תאים / מ&quot;ל PBS שונה ומחייבת לחסום נוגדן נוקבים עם 10% v / v כבשים בסרום במשך 20 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל צינורות micronic ולהוסיף את הריכוז המתאים של נוגדנים שכותרתו ניאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 μl של השעיה תא (חסום) כדי צינור כל דגירה למשך 30 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים על ידי הוספת שונה PBS להסיר בלתי מחייב נוגדנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכי עם תא שכותרתו שלך cytometer את זרימת ולבצע את הניתוח. </li></ol> חלק 4: המושבה ECFC צמיחה, קיבעון, מכתים וניתוח היררכיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרע ECFCs שנקטפו טהור כמעט בצפיפות נמוכה מאוד של ציפוי 3 או 10 תאים לסנטימטר מרובע צלחות תרבית תאים, כדי לאפשר צמיחה מושבה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שערי שליש המדיום פעמיים בשבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 14 ימים (סוף תרבות) להסיר בינוני, לשטוף פעמיים עם PBS ולתקן את מושבות עם פתרון קרים קיבעון (אצטון: מתנול = 3: 2) במשך 15 דקות במקרר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את הפתרון קיבעון ולהשאיר הצלחות לפתוח להתייבש במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רעננותם התאים עם מים מזוקקים במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף פתרון האריס Hematoxylin ואת כתם המושבות קבוע במשך 12 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר פתרון H matoxylin ולשטוף את הצלחות עם מי ברז להיפטר הפתרון מכתים הנותרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלמו תמונות של המושבה על ידי כלבאמצעות stereomicroscope ולייבא *. jpg או tif *. קבצים בפורמט למחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את התמונות באמצעות תוכנת ImageJ ולנתח את מספר הסלולרי מדויק של המושבה כל כמתואר האנימציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את תוכנת ImageJ ולייבא תמונת המושבה באמצעות &quot;קובץ \ פתיחה&quot; לתפקד למשוך למטה בתפריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך באמצעות &quot;תהליך \ רקע הפחת&quot; פונקציה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בפונקציה &quot;בחירה * * אליפטית או מברשת&quot; בתפריט ImageJ לסמן את השוליים המושבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את התמונה המקיפה באמצעות &#39;ערוך \ מחוץ נקה &quot;פונקציה לחתוך את התמונה על ידי בחירת&#39; Image יבול \ &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הסף באופן ידני באמצעות &quot;תמונה \ כוונון \ סף&quot; לתפקד, כך שכל התאים נצבעים באדום לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים של המושבה על ידי בחירת &quot;נתח \ נתח חלקיקים&quot;. בחר את ההגדרות המתאימות (אופטימיזציה עבור כל סוג התא) ובחר &#39;אישור&#39;. תיבת התוצאות, כולל ספירת התאים תמונה חדשה המכילה את קווי המתאר המקביל התאים נספר יופיע. <img src="/files/ftp_upload/1525/1525op2.jpg" alt="איור 1" /></li></ol>

<ol><li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+platelet+lysate+can+replace+fetal+bovine+serum+for+clinical-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells.</a> Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).</li>
<li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+system+to+propagate+cord+blood-derived+multipotent+mesenchymal+stromal+cells+for+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application.</a> Regen Med. 2, 371-382 (2007).</li>
<li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+large-scale+expanded+endothelial+colony-forming+cells+function+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo.</a> Blood. 113, 6716-6725 (2009).</li>
<li>Strunk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+and+preclinical+production+of+human+lineage-negative+cells+for+regenerative+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy.</a> Transfusion. 45, 315-326 (2005).</li>
</ol>

המחברים אין לי סכסוכים כספיים של עניין להכריז.

יש מגוון של מקורות שמהם לקבל MSCs או ECFCs כולל מח העצם, רקמת שומן, דם טבורי, וכו &#39; זה הכרחי כדי לקבל את שני הסוגים של אבות מאותו מקור כדי להשוות ישירות את מעורבותם של תאים מסוגים שונים בתהליכי התחדשות רקמות כמו כלי או תרומה התקדמות הגידול. הקלות שבה לבודד ולאחר מכן ללמוד זוגות עצמיים של ECFCs ו MSCs מתורם אותו עושה שיטה זו יתרון למעט וריאצי...

<table><tbody><tr><td>alpha modified MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBM</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מנות ציטוקין בודדות</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בקבוקים של 75 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לוחיות של 150 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גרד תאים</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים מונוקלונליים</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מבחנות של 50 ml</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מסנן של 500 mL עם גודל נקבים של 20 &amp;mu;m</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>הפרין ללא חומר משמר</td><td>Biochrom AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (mscs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ecfcs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

חבל הטבור הוא מקור עשיר עבור ובתאים עם פוטנציאל שגשוג גבוהה כולל תאים סטרומה mesenchymal (שמכונה גם בתאי גזע mesenchymal, MSCs) ו אנדותל להרכיב המושבה ובתאים (ECFCs). שני סוגי תאים הם שחקני מפתח בשמירה על שלמות רקמות הם כנראה מעורבים גם בתהליכי ההתחדשות היווצרות הגידול. כדי ללמוד ביולוגיה שלהם לתפקד באופן השוואתי חשוב יש גם סוגי תאים זמין מתורם זהה. זה יכול להיות גם מועיל למטרות משובי להפיק MSCs ו ECFCs מרקמות זהה. מאחר ותרופות הסלולר צריך בסופו של דבר מוצאים את דרכם מהספסל אל המיטה הקמנו שיטה חדשה לבודד להרחיב עוד יותר ובתאים ללא שימוש של חלבון מן החי. משולב lysate טסיות האנושי (pHPL) החליף בסרום שור העובר בכל השלבים של פרוטוקול שלנו לחלוטין להימנע ממגע של תאים וחלבונים xenogeneic. וידאו זה מדגים מתודולוגיה בידוד והרחבת ובתאים מחוט one הטבור. כל החומרים והנהלים יתוארו.

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד והרחבת הבאות של תאים סטרומה mesenchymal ותאי האנדותל המושבה להרכיב ללא שימוש בבעלי חיים בסרום ליצור זוגות עצמיים למטרות השתלה ניסיונית.

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)

השפוע הוא מקור עשיר לתאי אב בעלי פוטנציאל פרוליפרטיבי גבוה, כולל תאי סטרומה מזנכימליים (המכונים גם תאים מזנכימליים...

חבל הטבור האנושי הוא מקור נגיש בקלות לתאי פרוגניטור. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לבידוד ולהתרבות עוקבת של פרוגניטורים אנדותליאליים e CFCs, תת-אוכלוסייה של תאים בתוך דופן כלי הדם, ותאי פרוגניטור מזנכימליים MSCs המופקים מחבל טבור אנושי בודד.ראשית, בעזרת מספריים, בצעו חיתוך לאורכי של הווריד הטבלי האנושי וגרדו את התאים מפני השטח הפנימי של כלי הדם. העבירו את התאים מהמגרד לבקבוק תרבית והמתינו לצמיחת מושבות. חלק מהתאים שנגרדו יפגינו פנוטיפ של תאי אב ויתרבו באופן נרחב ליצירת מושבות גדולות.לאחר שתאים אלו התרבו, ניתן להרחיב את ה-e CFCs בבקבוקים חדשים. לצורך ניתוח נוסף, ניתן גם לבודד אוכלוסיית תאים מזנכימליים משרית טבור אנושית. חתוך חלקים מהטבור לחתיכות קטנות והעבר אותם לצלחת תרבית סטרילית.לאחר מספר ימים, תהיה נראית צמיחה של תאי סטרומה מסביב לחתיכות רקמת השורי של חבל הטבור. העבירו תאים אלו לבקבוקים חדשים והרחיבו אותם לצורך ניתוח נוסף. פרוטוקול זה מאפשר להשיג שני סוגים של שושלות של תאי אב מחומר מוצא בודד של חבל טבור בתוך שלושה עד ארבעה שבועות.שלום, אני אנדראס דניש מהמעבדה של ד"ר T Strong ביחידה למחקר תאי גזע באוניברסיטה הרפואית של Grads באוסטריה. היום נראה לכם פרוצדורה לבידוד, הרחבה ואנליזה של תאי מזנכימליים ותאי ערוצים אנדותליאליים אנושיים משרוך טבילה אחד. הערה אחת לגבי הטרמינולוגיה.התאים ש

isolation-animal-serum-free-expansion-human-umbilical-cord-derived

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

האנדותל להרכיב המושבה ובתאים (ECFCs) הם כלי מבטיח ללמוד הומאוסטזיס לתקן כלי הדם.

בידוד הרחבת בקנה מידה גדול של תאים אנושיים למבוגרים האנדותל המושבה יצירת אב

בתאי אנדותל היוצרים המושבה (ECFCs) מסתובבים לתאי אנדותל עם פוטנציאל חזק שגשוג משובט המוצגים...

אפיון פנוטיפי ופונקציונלי של תאים מושבה אנדותל יוצרי נגזר דם טבורי האדם קורד

בזאת אנו מתארים שיטות לנתיחה של רקמות יולדות ועובר מן שלית מונח אנושית, ואחריו בידוד והרחבת גזע mesenchymal / בתאי סטרומה (MSC) מרקמות אלה.

בידוד הרחבת גזע mesenchymal / תאי סטרומה נגזרו רקמה אנושית שליה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לנתיחה של חבל טבור האנושי (UC) ו מדגם שליה העובר לתוך חוט קרונית (CL), ג'ל וורטון (WJ), צומת חבל-שליה (CPJ), ואת השליה עוברת (FP) עבור הבידוד ואפיון של תאי סטרומה mesenchymal (MSCs) באמצעות טכניקת תרבות explant.

בידוד ואפיון של תאי סטרומה mesenchymal מן טבורי אדם העובר שליה

המטרה של פרוטוקול זה נועד לבודד ובתאים אנדותל של דם טבורי. חלק מהיישומים כוללות שימוש תאים אלה כמו סמן לזיהוי חולים עם הסיכון למחלות לב, במחלות איסכמי, ובונה יצירת שסתום כלי הדם והלב רקמות מהונדסים.

בידוד של אנדותל ובתאים של דם טבורי אנושי

חבל הטבור אנושי (UC) ניתן להשיג במהלך תקופת הלידה כתוצאה מונח לידה מוקדמת, ולאחר postterm משלוח. ב פרוטוקול זה, אנו מתארים את בידוד ואפיון של UC-derived בתאי גזע mesenchymal (UC-MSCs) מן העוברים/תינוקות בגיל 19-40 שבועות של הריון.

בידוד ואפיון של האדם נגזר הטבור בתאי גזע Mesenchymal של לידה מוקדמת ותינוקות המונח

רקמת השומן היא מקור מצוין לתאי גזע מזנכימליים. כאן, אנו מביאים את המיצוי, הטיפוח והאפיון שלב אחר שלב של תאי גזע שמקורם ברקמת שומן (ADSCs) מרקמת שומן אפידידימלית של עכברים שוויצרים.

בידוד, הרחבה חוץ גופית ואפיון תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן אפידידימלית של עכבר

מחקר זה מציג הליך דיסקציה קהה ייחודי לשמירה על שלמות הג'לי של וורטון (WJ), וכתוצאה מכך WJ פחות פגום וכמות וכדאיות גדולה יותר של תאי גזע מזנכימליים שנקטפו (MSC). השיטה מפגינה תפוקה ויכולת שגשוג גבוהות בהשוואה לשיטות דיסקציה חדות קונבנציונליות.

בידוד תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור עם יבולים גבוהים ונזק נמוך

הבידודשל MSCs גבוהיםMFGE8 של BAMBI, אחת משלוש תת-הקבוצות העיקריות המרכיבות UC-MSCs אנושיים הטרוגניים, מסייע להבנה מלאה של המאפיינים והפונקציות של תת-סוג זה ליישום עתידי שלו לשיפור היעילות הקלינית במחלות ספציפיות. כאן, אנו מציגים שיטה למיון BAMBIגבוהMFGE8 UC-MSCs.

בידוד של תאי סטרומה מזנכימלייםשמקורםבחבל הטבור גבוה BAMBI גבוה MFGE8

זה פרוטוקול וידאו ממחישה את הבידוד של התרבות האנושית וריד הטבור בתאי האנדותל (HUVEC) מ חבל הטבור האדם. לאחר מבודד את התאים האלה יכול לשמש ב מבחני חוץ גופית אנגיוגנזה כמו Assay אופטימליים הפיברין ביד ג'ל הוכיח גם על ידי המעבדה יוז.

בידוד של האדם תאים עורק טבורי האנדותל (HUVEC)

למדו לבודד ולהרחיב תאי ECFC ו-MSC מחבל הטבור האנושי ללא שימוש בסרום בעלי חיים. שיטה זו מאפשרת יצירת זוגות תאים אוטולוגיים למחקרי השתלה ברפואה רגנרטיבית.

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)

גלה סרטונים נוספים