Name: Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: למדו פרוטוקולים לאיסולציה והזרקה של חיידקי Wolbachia מזבובים נגועים לזבובים בריאים באמצעות מכשיר סינון ייעודי. שיטות אלו מסייעות לחוקרים לחקור מנגנוני הדבקה ותפוצת חיידקים בתאי גזע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

שמי הוא Voia Friedman. אני חוקרת עמיתה באוניברסיטת פרינסטון. והיום אני עומדת לספר לכם על מספר פרוטוקולים שפיתחתי כדי להדביק, בתחילה כדי לבודד, לחזור מההמילי של זבובים נגועים, ומאוחר יותר לעזור להזריק את ההמילי לזבובים שאינם נגועים.לסיכום, זהו פרוטוקול פשוט מאוד לבידוד המין לצורכי בסיס. בשלב זה תשתמשו במכשיר של Mepo הכולל מסנן המונח על גבי מבחנה מסוג Eppendorf. תהליך העבודה מתחיל עם כ-100 זבובים. הרגיעו את הזבובים, העבירו אותם למכשיר הסינון (ניתן להשתמש במשפך כדי להקל על ההעברה למכשיר) ושטפו אותם ב-70% ethanol.פשוט מסננים את הנוזל, ניתן לשפוך את האתנול, ואחרי שלוש שטיפות, את השטיפה האחרונה מבצעים עם מים מזוקקים כיוון שאינכם רוצים שהבקטריות יהיו עם עקבות של אתנול. לאחר מכן, מעבירים את התוכן למבחנה חדשה, ומבצעים ספינטדאון במיקרוצנטריפוגה למשך שתי דקות. לאחר מכן ניתן להזריק זאת; רק להאכיל זבובים שאינם מושפעים.לסיכום, קח סרט דבק דו-צדדי; בדרך כלל לסרטים אלה יש שני צדדים, כאשר צד אחד הוא דביק יותר מהשני. השאר את הצד הדביק פונה כלפי מעלה, מכיוון שזהו הצד שבו תדביק את הזבובים מעליו. באופן בסיסי, במכשיר הגז, אם תניח את הפס מעליו, לא תהיה זרימת גז והזבובים יתעוררו אם הם נמצאים מעל הפס.כך שתוכלו פשוט לכוון את הזרימה, וליצור מעין כיסוי, תא קטן באמצעות סרט דביק. לאחר מכן מכוונים את הגז מעל הזבובים. אז אתם מניחים את התאורה הזו כאן עם הסרט הדביק, והזבובים נמצאים שם.הדביקו את הזבובים על החלק העליון של הסרט, כולם באותו כיוון, והניחו את ראשם לכיוון ממנו תכניסו את המחט. כך תוכלו פשוט לעבור מעל הכנף; ודאו שהם אינם עפים, שכן אינכם רוצים שהם יעוף. אם הם התעוררו במהלך הפעולה, אינכם רוצים שהם יברחו.לכן, ודאו שאתם מפעילים לחץ קל עם הקצה נגד הכנפיים של הזבוב באזור הזנב. זה בסדר אם הכנפיים יינזקו. כאשר תסירו את הזבובים לאחר ההזרקה, סביר להניח שהם יאבדו את כנפיהם ממילא, אך הם ישרדו.זה יכול להיות שימושי כיוון שלא תאבדו את הזבובים, לכן הוא מניח שמן מינרלי על המיקרומטר עבור החלק האחורי של המחט, לאחר מכן את מחט ההזרקה, ואז ניתן פשוט לכוונן את הלחץ כדי להעלות את החומר לקצה המחט. אני הזרקתי כמות שבין 10 ל-15 nanoliters, אך העיקר הוא לשמור על עקביות. אוקיי, פרט חשוב אחד בניסוי זה הוא שהזבוב, ברגע שהוא מוזרק, כפי שראיתם, המחט צריכה לחדור רחוק ככל האפשר דרך החלק העליון של הבטן.מכיוון שכאן, בעיקר כאשר המחט חודרת, ישנו מרחב גדול יותר לתנועה למעלה ולמטה. ובשאיפה להיות קרובים יותר לקיטיקולה, הסבירות לחדירה לאיברים חיוניים בזבוב היא נמוכה יותר. סביר מאוד שלא תגרימו חור במעי, למשל, דבר שעלול להרוג את הזבוב שבו אתם מבצעים את הניתוח.שמי הוא Voia Friedman. אני חוקרת עמיתה באוניברסיטת פרינסטון במעבדתו של Eric Hels. והיום אני רוצה לספר לכם על הפרוטוקול שראיתם כעת, בהדגמה.פרוטוקול זה בוצע כיוון שרצינו להוכיח ש-UBA מסוגל לחצות רקמות. UBA הוא אחד הטפילים התו-תאיים המצליחים ביותר על פני כדור הארץ, והוא מדביק בין 20% ל-70% מהחרקים ומספר רב של חלקיקים.כמו כן, הדבר חשוב מאוד בהקשר של מחלות בבני אדם, כיוון שהם מזיהים גם נמטודות המעבירות מחלות כמו עיוורון נהרות או Onchocerciasis. לפיכך, CCA הוא האנדוסימביונט ההכרחי בתולעים אלה. ישנו עניין רב בשימוש ב-CCA גם כאמצעי לשליטה במחלות טפיליות המועברות על ידי יתושים וקרציות, ועל ידי יתושים כגון מלריה ודנגי.פרוטוקול זה פותח בעיקרו כדי להראות שברגע ש-CCA נמצא בתוך חלל הבטן של זבוב, הוא יכול לחצות רקמות ולהגיע לנבט. באופן בסיסי, מה שניתן לראות כאן הוא השחלה של drosophila, וברגע שהחומר נמצא בהמליף, הוא יכול לחצות את המעטפת הפריטוניאלית העוטפת את השחלה.ואז הם חוצים שכבת שריר. למעשה, אחד המקומות הראשונים שבהם הם חודרים אל תוך השחלה הוא תמונת התא הגזע הסומטי. ומשם הם יכולים להגיע לקו הנבט.חיידק זה מועבר באותו האופן שבו מועברים מיטוכונדריה, כלומר באמצעות האם, דרך הציטופלזמה הנוכחת בביצית. לכן, עליהם להיות נוכחים בקו הנבט. זו הסיבה לפיתוח פרוטוקול זה.פרוטוקול זה יכול להיות שימושי מאוד, שכן הדרך המסורתית שבה אנשים היו מנסים לבצע התעתוק ל-wbaa היא באופן בסיסי על ידי לקיחת wbaa והחדרת מין חרק חדש. הדבר היה נעשה באמצעות הזרקות מיקרוסקופיות לתוך העובר, אך אלו הן פרוצדורות מורכבות הרבה יותר.ובעיקרה, אנחנו פשוט מנצלים כאן את הביולוגיה של ה-o, כיוון שהם מסוגלים לחצות רקמות ולנוע לרקמות התאי הגזע, ומשם הם יכולים לעבור לקו הנבט. כך קל יותר להוציא UBA ממינים מסוימים של חרקים נגועים, והם יכולים להיות מועברים למינים שאינם נגועים. כנראה שזהו ההזרקה עצמה.בעיקר עליכם להיזהר לנייד את הזבוב בצורה הטובה ביותר שניתן. אנו משתמשים בסרט דביק דו-צדדי ועליכם להחדיר את המחט קרוב ככל האפשר לזבוב ובמקביל אליו, כדי לא להחדירה עמוק מדי. כך הסיכוי שנגרום למות הזבוב לאחר ביצוע הניתוח יהיה נמוך יותר.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

טפיל (טפילים) צרעות מהווים שיעור גדול של אויבים טבעיים של חרקים רבים,...

מבוא של צרעות טפיליות<em&gt; תסיסנית</em&gt; ואת התגובה החיסונית Antiparasite

מקור: סיווה-ג'ותי, ג'. א. ואחרים. זיהום חיידקי דרך הפה ונשירה ב-Drosophila melanogaster. J. vis. exp. (2018)הסרטון מדגים את ההדבקה בפה של Drosophila melanogaster בחיידקים פתוגניים. הוא כולל הכנת בקבוקי זיהום והעברת זבובים רעבים כדי לאפשר בליעת חיידקים. ההליך מתעד קולוניזציה במעי, ואחריה עיקור פני השטח והומוגניזציה של זבובים. לבסוף, הוא מראה כימות של עומס חיידקים פנימי באמצעות דילול סדרתי וספירת מושבות.

זיהום פה של דרוזופילה מלנגסטר עם חיידקים פתוגניים

מקור: הירויאסו, א., ד ' ואחרים, חילוץ המוציטים מזחלי דרוזופילה מלנגסטר לזיהום מיקרוביאלי וניתוח. J. Vis. Exp. (2018)הסרטון הזה מדגים את התהליך ליצירת זיהום חיידקי בזחלי דרוזופילה על ידי הכנסתם לטיפה חיידקית ודקירתם עם מחט טונגסטן. הזחלים מודגרים לאחר מכן על צלחת אגר מחורצת ועשירה בחומרים מזינים כדי לחקור אינטראקציות בין מארח לפתוגנים.

הקמת זיהום חיידקי בזחלי דרוזופילה

Drosophila melanogaster הוא אורגניזם מודל יוצא דופן לחקר מערכות חיסון מולדות וההשלכות הפיזיולוגיות של זיהום ומחלות. פרוטוקול זה מתאר כיצד לספק זיהומים חיידקיים חזקים וניתנים לחזרה כמותית ל-D. melanogaster, וכיצד למדוד לאחר מכן את חומרת הזיהום ולכמת את התגובה החיסונית של המארח.

זיהום חיידקים מערכתי וחיסון ביטחון פנוטיפים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

שיטה לגידול תסיסנית בתנאי axenic ו gnotobiotic מוצגת. עוברי זבובים הם dechorionated ב חומצת נתרן, הועברו בסביבה נקיה מחיידקים לתזונה סטרילי, וגדלו במיכלים סגורים. ייחסתי דיאטה ועובר עם חיידקים מובילים עמותות gnotobiotic, ונוכחות חיידקים אושר על ידי ציפוי homogenates תסיסנית הגוף כולו.

גידול זבוב הפירות<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתנאי Axenic ו Gnotobiotic

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

פרוטוקול זה מתאר שיטות כדי לחשוף ולהדביק את זבוב הפירות הים דרוזופילה melanogaster עם פתוגנים חיידקיים אורלית, וכדי למדוד את מספר חיידקים זיהומיות המחסן בעקבות זיהום במעיים. בהמשך נתאר את ההשפעה של החיסון מוטציות על הישרדות לעוף בעקבות זיהום חיידקי הפה.

זיהום חיידקי הפה ו Shedding ב דרוזופילה melanogaster

פרוטוקול זה מתאר כיצד להקים זיהום ויראלי ויוו דרוזופילה melanogaster באמצעות שיטת ננו-הזרקת טכניקות בסיסיות כדי לנתח וירוס-פונדקאי אינטראקציה.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

זבובים בוגרים של Drosophila melanogaster נוצלו בהרחבה כאורגניזמים מודל כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס התגובות החיסוניות המולדות של המארחים ואסטרטגיות זיהום מיקרוביאליות. כדי לקדם את שלב הזחלים D. melanogaster כמערכת מודל נוספת או חלופית, מתוארת טכניקת הזרקת זחלים.

Drosophila melanogaster פרוטוקול הזרקת זחלים

ארבע שיטות שימשו לאיתור וולבצ'יה תוך-תאית, אשר השלימו זו את זו ושיפרו את דיוק הזיהוי של זיהום וולבצ'יה של Aa23 שמקורו ב-Aedes albopictus ו-Aa23-T שנרפאו מזיהום וולבצ'יה מקומי באמצעות אנטיביוטיקה.

זיהוי זן וולבצ'יה wAlbB ב Aedes albopictus קווי תאים

קווי תאים שימושיים במחקרים על אורגניזמים תוך-תאיים שלא ניתן לגדל מחוץ לתאים המארחים שלהם. למרות שקווים נגועים בוולבכיה אפשרו תגליות רבות, ההטרוגניות בתוך קווים אלה יכולה להוביל לתוצאות ניסוי משתנות. אנו מציגים פרוטוקול ליצירת שיבוטים של תאים בודדים ותרביות רציפות מתאי JW18 נגועים בוולבכיה.

יצירת תרביות חד-שבטיות מקו התאים של Drosophila melanogaster JW18 נגוע בוולבכיה

למדו פרוטוקולים לאיסולציה והזרקה של חיידקי Wolbachia מזבובים נגועים לזבובים בריאים באמצעות מכשיר סינון ייעודי. שיטות אלו מסייעות לחוקרים לחקור מנגנוני הדבקה ותפוצת חיידקים בתאי גזע.

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

גלה סרטונים נוספים