Name: Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: למדו שיטת ניתוח מדויקת לבידוד עוברי עכבר בגיל 6.5 ימים לאחר הזדווגות. הטכניקה מאפשרת חקר תבניות גנים וקבלת החלטות תאיות בביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dissection של איברי הרבייה של העכבר נקבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיות בהריון מומתים בחנק CO 2 באמצעות גז דחוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את פרקדן בעלי חיים על משטח סופג ולטבול אותו אתנול 70% כדי להפחית את הסיכון של זיהום דיסקציה עם שיער העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצבוט את העור לעשות חתך לרוחב קטן קו האמצע עם מספריים כירורגי רגיל. מתחי את העור היטב מעל ומתחת החתך ומושכים את העור כלפי חוץ הראש והזנב לחשוף את הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחוז הצפק עם מלקחיים ולחתוך לחשוף את חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את איברי הרבייה באזור הגבי של חלל הגוף: שתי קרניים הרחם, oviduct ואת השחלות. </li></ol> Streak בשלב פרימיטיבי (6.5 DPC) Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קרן הרחם ידי אחיזה הרחם להלן oviduct ופצע אותו בחינם יחד mesometrium. המקום הרחם גזור בקרח קר PBS. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="איור 1" width="263" height="132"> איור 1 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד העובר על ידי חיתוך בין אתרים ההשתלה יחד קרן הרחם. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="איור 2" width="575" height="171"> איור 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את רירית הרחם שרירים ידי הזזה מלקחיים של שען בין שכבת השריר שמסביב רקמת decidua אפוף. מקלפים את שכבת השריר האחורי, חשיפת decidua. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="איור 3" width="593" height="166"> איור 3 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ את חלק decidua נחשף בפסגת (כ 1 / 5 של הרקמה decidua) אשר יחשוף את קצה midventral או דיסטלי של העובר סגורה. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="איור 4" width="589" height="212"> איור 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העובר יכול להיות הפגיזו מחוץ באמצעות קצות מלקחיים. פירס decidua עם מלקחיים המקיפים את העובר ואת מלקחיים לפתוח decidua לקרוע לגזרים. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="איור 5" width="249" height="200"> איור 5 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העובר מוסר, קרום של רייכרט, עדיין עשויים להיות מצורפים, כמו גם חרוט ectoplacental (trophoblast). העובר יכול להיות גזור נוספת על ידי דיסקציה זהירה. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="איור 6" width="356" height="222"> איור 6 </li></ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

Postimplantation בעכבר מתרחשת בין 4.5 DPC והלידה. שיטה זו דיסקציה יכול להיות מיושם, למעשה כמתואר, כדי לבודד מוקדם או מאוחר יותר עוברים לשלב ב 5.5-8.5 DPC.

<table><tbody><tr><td>פינצטה למיקרו-דיסקציה, משוררת, ישרה</td><td>כלי</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 זוגות</td></tr><tr><td>פינצטת מיקרו-דיסקציה דגם #55 INOX</td><td>כלי</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 זוגות</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline (1x)</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי סטרילית מפוליסטירן של Fisherbrand</td><td>כלי</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde ב-PBS</td><td>ריאגנט</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספרי דיסקציה ישרים בעלי קצה חד</td><td>כלי</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>נקבות עכברים בהריון</td><td>בעל חיים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה</td><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection של 6.5 עוברים dpc עכבר

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

ניתוח דפוסי ביטוי גנים במהלך השלבים המוקדמים של ההתפתחות העוברית יונקים יכולים לספק רמזים חשובים על תפקוד אינטראקציה גן תאים תאים, מנגנוני איתות כי דפוסים מדריך עובריים. עם זאת, דיסקציה של העובר עכבר decidua זמן קצר אחרי ההשתלה יכול להיות הליך מאתגר, ותיעוד מפורט צעד אחר צעד של תהליך זה הוא חסר. כאן אנו מדגימים כיצד שלאחר ההשתלה (6.5 DPC) עוברים מבודדים תחילה לנתח את הרחם של עכבר בהריון (זיהוי של coitum את התקע הנרתיק יועד 0.5 poist יום) ולאחר מכן לנתח את העובר מן decidua אימהית. דיסקציה של הממברנה של רייכרט מתואר כמו גם הסרה של חרוט ectoplacental.

בידוד של postimplantation בשלב עוברי מאפשר ללמוד דפוסים גן ולנתח התא השושלת תהליכי קבלת ההחלטות במהלך ההתפתחות העוברית, אבל לנתיחה תקין של העובר מוקדם יכול להיות מאתגר. פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד מוקדם פס פרימיטיבי, בשלב עוברי (~ 6.5 ימים הודעה coitum [DPC]).

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

ניתוח של דפוסי ביטוי גנים במהלך השלבים המוקדמים של התפתחות עוברית ביונקים יכול לספק רמזים חשובים לגבי תפקוד גנים, תקשורת בין תאים...

שמי קלי שי ואני מנהלת המעבדה וכן טכנאית מחקר במעבדתו של נילסן. זה קשה מאוד מכיוון שרבים אינם יודעים כיצד להבחין בין שכבות הרקמה השונות. לכן, מה שעליכם לעשות הוא למעשה לקלף את כל שכבות הרקמה כדי לחשוף את העובר שמתחתיהן, שבשלב זה אינו בעל כלי דם רבים. לכן הוא שקוף מאוד וקשה להבחין בו.השתמשו בפינצטה ובמספריים בעלי קצוות קהים. הפעולה הראשונה שעליכם לבצע היא לתפוס את החיה בקו האמצע ולבצע חתך ראשוני. לאחר מכן, ניתן פשוט להפריד את העור, ובכך לחשוף את בטנה של החיה.ישנה שכבה דקה של הפריטוניאום שאתם תמשכו למעלה בעזרת הפינצטה, ולאחר מכן תוכלו לחתוך אותה במספריים ולהסיטה הצידה. עליכם לחתוך לאורך קו האמצע של בעל החיים ולהפריד את שתי קרני הרחם, המחוברות במרכזן. ניתן לחתוך ממש בבסיס.סביר להניח שתקבלו כמות גדולה של שומן יחד עם הרקמה. קחו את קרן הרחם השלמה של בעל החיים. הניחו אותה ישירות לתוך ה-PBS.כך זה נראה בתוך הקרן. אלו הם אתרי ההשתלה, 1, 2, 3, 4, 5. מה שיש לעשות הוא פשוט להפריד ביניהם.ניתן לחתוך בין אתרי ההשתלה ממש כאן. ניתן פשוט לתפוס את העובר מצדו ולהפריד אותו. בשלב זה, אתם חושפים את ה-deum, שהוא רקמה ספוגית יותר שנמצאת מתחת.לכן העובר צריך להיות בדיוק במרכז, ממש כאן. זהו השפיץ של ה-deciduous. יש להכווין אותו כך שהשפיץ פונה כלפי מעלה.בסופו של דבר, גזרו כחמישית מהמרחק מהקודקוד כלפי מטה. העובר

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

היכולת של תאים עובריים נבטי להתמיין לתאי נבטי קדמוני בשלבי הפיתוח המוקדמים הוא מודל מושלם לכתובת ההשערה שלנו לגבי סרטן פוריות. פרוטוקול זה מראה כיצד לבודד תאים נבטי קדמוני של בלוטות המין המתפתחות 10.5-11.5 ימים coitum עוברים לפרסם העכבר.

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

תחזיות סטריאוטיפית של afferents חושי אל חוט השדרה מכרסם להציע מערכת ניסיונית נגיש ללמוד axonal מסתעפת דרך התחקות של אקסונים יחיד.

DiI-תיוג של נוירונים DRG לחקר axonal מסעף בהכנת הר שלם של חוט השדרה עובריים בעכבר

פרוטוקול להפרדה של אקטודרם וmesenchyme פן עובר מתואר. אנו משתמשים Dispase השני לטיפול בעוברים שלמים ראשון, לנתח בליטות פן שלמות, ואז להפריד אקטודרם וmesenchyme הפנים.

הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme

תרביות עצביות עובריות מנותקות ראשוניות בהיפוקמפוס שימושיות לחקירת מנגנוני האיתות המעורבים במוות נוירונים. מין העוברים לפני הבידוד והדיסוציאציה של ההיפוקמפוס מאפשר הכנה של תרביות זכר ונקבה נפרדות, מה שמאפשר לחוקר לזהות ולחקור איתות תאים ספציפיים למין.

תרביות עצביות מרובדות מין לחקר מסלולי מוות של תאים איסכמיים

צומת וצלחת notochordal בארעיותם איתות המארגנים בפיתוח עוברי העכבר זה ניתן לאבחן באמצעות מספר טכניקות. כאן נתאר בפירוט כיצד לבצע את שתי הטכניקות כדי ללמוד את המבנה ואת מורפוגנזה: 1) סריקה מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM); ו- 2) כל הר immunofluorescence (WMIF).

להמחיש את צומת ואת צלחת Notochordal Gastrulating עוברי העכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה כל הר Immunofluorescence

אנו מציגים את הפרוטוקולים לבחון התפתחות הלב העכבר באמצעות מיקרוסקופ פלורסנטי הר שלם על העכבר עוברי גזור מן חדרית ספציפי MLC-2v-tdTomato כתב טוק-אין עכברים. שיטה זו מאפשרת לנו לבצע בכל שלב של היווצרות חדרית במהלך התפתחות הלב העכבר מבלי מהגידולים שיטות מעבדה הומנית.

ניתוח התפתחות קאמרית הלב במהלך מופרה העכבר באמצעות כל הר Epifluorescence

כאן, אנו מספקים פרוטוקול דיסקציה הנדרש כדי לצלם בשידור חי את הגונד הזכר העוברי המנוח של דרוזופילה . פרוטוקול זה יאפשר תצפית על תהליכים תאיים דינמיים בתנאים רגילים או לאחר מניפולציה מהונדסת או פרמקולוגית.

דיסקציה והדמיה חיה של דרוזופילה גונד העוברית המאוחרת

כאן, אנו מתארים כלים ושיטות חישוביות המאפשרים הדמיה וניתוח של נתוני תמונה תלת-ממדיים וארבעה מימדיים של עוברי עכבר בהקשר של התארכות צירית וסגמנטציה, המתקבלים על ידי טומוגרפיה של הקרנה אופטית טוטו, ועל ידי הדמיה חיה וכתם אימונופלואורסצנטי בהר שלם באמצעות מיקרוסקופיה רב-פוטונית.

גישות הדמיה וניתוח תלת-ממדיות וארבעה מימדים לחקר התארכות צירית וסגמנטציה צירית של בעלי חוליות

באופן קלאסי, האנדוקרדיום של פרימורדיום המסתם העוברי של העכבר נותח באמצעות חתכים רוחביים, קורונליים או סגיטליים. הגישה החדשנית שלנו להדמיה דו-ממדית של האנדוקרדיום באזורים וולוולוגניים מאפשרת קוטביות מישורית וניתוח סידור מחדש של התאים של האנדוקרדיום במהלך התפתחות המסתם.

פנים אל פנים הכנה לכרית אנדוקרדיאלית לניתוח מורפוגנזה מישורית בעוברי עכברים

מאמר זה קובע צינור להשעיה איכותית של תאים בודדים וגרעינים של עוברי עכברים גסטרולטיביים לצורך ריצוף של תאים בודדים וגרעינים.

ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה

למדו שיטת ניתוח מדויקת לבידוד עוברי עכבר בגיל 6.5 ימים לאחר הזדווגות. הטכניקה מאפשרת חקר תבניות גנים וקבלת החלטות תאיות בביולוגיה התפתחותית.

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

גלה סרטונים נוספים