קביעת ריאקטיביות Titre של סרום באמצעות Assay Haemagglutination

קביעת התגובתיות והטיטר לסרום באמצעות בדיקת המגלוטינין. אומת גלוטן היא תגובה המתרחשת בין נוגדנים מסיסים לאנטיגנים חלקיקים. אלה יכולים לכלול תאים או לשאת מולקולות.

אפיטופים על פני הנשא מאפשרים לנוגדנים לקשור ולקשר את הנשא יחד, מה שמוביל להיווצרות סריג מורכב הנקרא קומפלקס נוגדנים אנטיגן. אגלוטינציה של המכפלת היא צורה ספציפית של אגלוטינציה שבה נוגדנים נקשרים לתאי דם אדומים, הפועלים כאנטיגן החלקיקי. תאי דם אדומים הם מטרות שימושיות מכיוון שהם זמינים וניתן לראות את התוצאות בקלות בעין בלתי.

דגימות הסרום מדוללות באופן סדרתי ולאחר מכן מונחות בצלחת אובו של 96 בארות. לאחר מכן מתווסף תרחיף של תאי דם אדומים תאי ריבה. כאשר הנוגדנים נמצאים בריכוז גבוה, מתרחשת קשירה לתאי הדם האדומים ויוצרים סריג גדול.

כאשר סריג זה מתיישב על ידי כוח הכבידה, הוא תואם את צורת לוחית האובו. במבט מלמעלה, ניתן לראות יריעה רחבה של כדוריות דם אדומות. זוהי תגובת המגלוטינין חיובית.

כאשר רמות הנוגדנים נמוכות, לא יכול להיווצר סריג ותאי הדם האדומים מתאימים את עצמם לצורת לוחית ה-UBO ומתרכזים בבסיס ויוצרים כדור קטן. זוהי תגובת אגלוטינציה שלילית של המכפלת. תרשים זה מראה תגובה חיובית.

התאים יוצרים סריג כשהם מתיישבים, הם תואמים את צורת הצלחת התחתונה U. משמאל ומימין, אנו רואים את המבט העליון שבו נראית יריעה רחבה של כדוריות דם אדומות. אם קיימת כמות ביניים של נוגדנים, תיצפה היווצרות אותיות מסוימות.

הצטברות מכפלת מאפשרת גם לבדוק את התגובתיות של דגימות סרום שונות מול האנטיגן הידוע. ניתן לקבוע גם את הטיטר של דגימת הסרום. הטיטר הוא הדילול האחרון שבו נראתה תגובה חיובית.

בדרך כלל, ככל שריכוז הנוגדנים בדגימת הסרום גבוה יותר, כך הטיטר גבוה יותר. תרשים זה מציג תגובת אגלוטינציה שלילית של המכפלת. אין מספיק נוגדנים כדי לקשר בין כדוריות הדם האדומות.

כאשר התאים מתיישבים על ידי כוח הכבידה, הם מחליקים במורד דופן הבאר ויוצרים כדור הדוק בתחתית. התרשים מימין מראה את תאי הדם האדומים במבט מלמעלה. לניסוי זה, תזדקק לצלחת תחתונה של 1 96 באר U.

חיוני להשתמש בצלחת תחתונה U מכיוון שלוחות תחתונים שטוחים לא יאפשרו לתאים לשקוע לגלולה, מה שהופך את הפרשנות לבלתי אפשרית. חיית מחמד המסוגלת לספק 50 מיקרוליטר בודקת סרום, השעיה של 1% של תאי ריבה ותמיסה חד פעמית של מי מלח חיץ ורוני לכל באר שורה. אחד ל-12, לספק 50 מיקרוליטר של מי מלח רואל.

זה משמש כמדלל שלך. כעת הכניסו 50 מיקרוליטר של סרום לבאר, אחד. זהו הדילול הראשון שלך אחד מתוך שניים.

בעזרת הפרפט, ודא שדגימת הסרום מעורבבת היטב. לאחר הערבוב, מוציאים 50 מיקרוליטר מבאר A אחד ומעבירים לבאר A שתיים. זהו הדילול השני שלך אחד מתוך שניים, מה שנותן לך דילול של פי ארבעה.

המשך בסדרת דילול זו באמצעות בארות 3 עד 11. אל תכניס שום סרום לתוך 12 מכיוון שזו בקרת מי המלח השלילית שלך. עכשיו קח את התרחיף של 1% של תאי ריבה, שעורבב היטב והעביר 50 מיקרוליטר לתוך, ובכן, אחד עד לבאר A 12.

לאחר הוספת התאים, כסו את הצלחת והקישו בעדינות על הצלחת כדי לוודא שהדגימות והתאים מעורבבים. כעת דגרו בחום של 37 מעלות למשך 60 דקות. חממה לחה מתאימה.

במהלך תקופת הדגירה של 60 דקות, יתרחשו אינטראקציות נוגדנים אנטיגן והתאים יתחילו להתייצב. קטעי הווידאו שאתה צופה בהם הם צילום דולג זמן של כל פרק הזמן של 60 הדקות. זהו תקריב של בארות 5 עד 10.

כבר בדקנו, ובכן, 12, שהייתה בקרת ה-VBS שלך בזה. ובכן, התאים יצרו כדור הדוק המצביע על כך שהבדיקה תפקדה כראוי. בארות 5 ו-6 הן דוגמאות לאגלוטינציה חיובית של המכפלת.

ובכן, שבע היא דוגמה לתוצאת אגלוטינציה בינונית בעוד שבארות שמונה, תשע ו-10 שליליות לאגלוטינציה של המכפלת. על סמך תוצאה זו, הטיטר ייקבע על סמך הדילול לבאר, שבע מכיוון שזו הייתה הבאר האחרונה, שבה נצפתה תגובה חיובית.