Name: Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00.000+00:00
Duration: 12 min 23 s
Description: למדו שיטה לניתוח וגידול נוירונים קומיסורליים מחוט השדרה העוברי של עכברים E13. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני צמיחה והכוונה של אקסונים במעבדה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הקנדי לבריאות מחקר (CIHR), את פיטר Lougheed למחקר רפואי הקרן, תוכנית מקגיל ב Neuroengineering, Fonds דה משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ), וכן קרן קנדה עבור חדשנות (CFI ). סבסטיאן ד Langlois נתמך על ידי פרס הדרכה מוסמך של Fonds de la משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ) ועל ידי פרדריק בנטינג וצ&#39;רלס בסט פרס קנדה מלגות לתואר שני מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). אנחנו אסירי תודה על ג&#39;סיקה MT פאם לסיוע עם דמויות.

<ol><li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li>
<li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li>
<li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li>
<li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li>
<li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li>
<li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical%2C+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li>
</ol>

תיארנו שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה עכברוש עובריים. הליך זה נעשה שימוש שגרתי במעבדה שלנו באופן מהימן להכין נוירונים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של הדרכה האקסון. עבור ביולוגיה של התא וניסויים immunochemistry, דיסקציה של פסולת מהן מניבה מספיק נוירונים. כאשר תאים יותר יש צורך, כמו בניסויים רבים ביוכימיה, דיסקציה של שתי המלטות ייתכן שתידרש. עבור אדם מאומן, דיסקציה ו דיסוציאציה של ~ 20 עוברי יכול להתבצע תוך פחות מ 4 שעות. לוחות הזמנים ארוכים תגרום לנתיחה ...

Dissection של חוט השדרה הגבי עוברי עכברים (ראה גם טבלה I) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> E13 להריון מבוים עכברוש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתנול 70% </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים כירורגיות, כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים, דומון # 5, כלים המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות פטרי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L-15 בינוני </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dissection מיקרוסקופ, Leica </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת pipettes פלסטיק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microscissors, כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טונגסטן מחטים בעלי פינים (אחד וו בצורת מחט, אחת L-צורות מחט, אחד מחט ישר), כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חום מומת סוס סרום (HiHS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 צינורות פלסטיק מ&quot;ל </li></ul> Commissural נוירון תרבות (ראה גם טבלה I) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות רקמות החממות (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, לחות מבוקרים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגרמני Desag coverslips זכוכית ו / או פלסטיק תרבות מנות רקמה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פולי-L-ליזין, סיגמא </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי milliQ H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Neurobasal, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חום מומת בסרום שור עוברית (HiFBS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L-גלוטמין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> B27, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פניצילין / סטרפטומיצין אנטיביוטיקה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 37 ° C waterbath </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי פסטר pipettes </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בונזן מבער גז </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS, Ca 2 + / Mg 2 + חינם, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DNAse, וורטינגטון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MgSO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרכזת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemacytometer </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypan פתרון כחול </li></ul>

dissection והתרבות של נוירונים commissural מחוט השדרה עובריים

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

נוירונים Commissural היה בשימוש נרחב כדי לחקור את המנגנונים הדרכה האקסון במהלך ההתפתחות העוברית חוט השדרה. גופי התא של הנוירונים האלה נמצאים בעמוד השדרה הגבי ו האקסונים שלהם לעקוב אחר מסלולי סטריאוטיפית במהלך ההתפתחות העוברית. אקסונים Commissural בתחילה הפרויקט ventrally כלפי floorplate. לאחר חציית קו האמצע, אקסונים אלה להפוך anteriorly הפרויקט לכיוון המוח. כל אחד משלבים אלה מוסדר על ידי פעולה של אותות הדרכה מספר. תרבויות מועשר בנוירונים commissural מתאימות בצורה אידיאלית עבור ניסויים רבים בהתמודדות עם מנגנוני pathfinding האקסון, כולל מבחני מפנה, immunochemistry וביוכימיה. כאן אנו מתארים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. ראשית, חוט השדרה מופרד רצועות הגב הם גזור החוצה. הרקמה הגב אז הוא ניתק את ההשעיה על ידי תא trypsinization והפרעה מכאנית. נוירונים הם מצופה על פולי-L-ליזין coverslips מצופים זכוכית או רקמות תרבות הכלים. לאחר 30 שעות<em&gt; במבחנה</em&gt; רוב הנוירונים הרחיבו האקסון. טוהר התרבות (ים<em&gt; Et al.</em&gt; 2009), בדרך כלל מעל 90%, ניתן להעריך על ידי immunolabeling עם DCC נוירון סמנים commissural, LH2 ו TAG1 (הלמס וג&#39;ונסון, 1998). זו הכנה העצבית הוא כלי שימושי עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; מחקרים של המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון הדרכה commissural ובמהלך התפתחות חוט השדרה.

סרט הווידאו הזה מדגים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. נוירונים commissural ניתק מועילים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון והדרכה.

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

נוירונים קומיסוראליים (Commissural neurons) שימשו באופן נרחב לחקר המנגנונים העומדים בבסיס הנחיית האקסונים במהלך התפתחות חוט השדרה העוברי. גופי התאים...

סרטון זה מדגים שיטה לניתוח והנבטה של נוירונים כולוריים מהחוט השדרני העוברי. ההליך מתחיל באיסוף עוברי חולדה ביום העוברי E 13 ולאחר מכן בהוצאה של החוטים השדרניים. במהלך הניתוח, החוטים השדרניים נפתחים לאורך לוח הגג (roof plate) ומוכנים בתצורת "ספר פתוח".רצועות רקמה גבייה מבודלות ונאספות למבחנה. הרקמה הגבייה מופרדת לתליה של תאים בודדים באמצעות טריפסין ופירוק מכני. לאחר מכן, נוירונים קומיסוריאליים (Commissural neurons) נזרעים על לבישי זכוכית או על צלחות תרבית רקמה מצופות פוליליזין.ניתן להשתמש בהם לאחר מכן כדי לחקור את המכניזמים התאיים והמולקולריים של צמיחת אקסונים והנחייתם. שלום, אני סבסטיאן מהמעבדה לביולוגיה מולקולרית של התפתחות עצבית במכון למחקר קליני של מונטריאול. שלום, אני סטיב מואן, גם אני מהמעבדה לביולוגיה מולקולרית של התפתחות עצבית.היום נדגים לכם הליך לביצוע דיסקציה וגידול של נוירונים קומיסורליים (commissural neurons) מחוט שדרה עוברי. אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור את המנגנונים התאיים והמולקולריים של הכוונת אקסונים. אז בואו נתחיל.כיום, נבצע דיסקציה של חוט השדרה מעוברים של חולדה ביום ה-E 13 שנקצרו לאחרונה והונחו בצלחת עם מצע L 15 לאורך כל תהליך הדיסקציה. חשוב לשמור את העוברים והתמיסות על קרח. זכרו כי בכל שלבי הדיסקציה, קריטי להימנע ממתיחה של חוט השדרה, שכן הדבר עלול להפריע לבידוד של חוט שדרה שלם ותקין.תחת מיקרוסקופ סטריאו, הפר את העובר מכל הרקמות חוץ-עובריות ומממברנות העובר. לאחר מכן, הנח עובר אחד בצלחת הניתוח. השתמש במספרי מיקרו כדי להסיר את הראש ואת החלקים האחוריים מהזוויות המוצגות כאן.פעולה זו תיצור משטח שטוח שיסייע במיקום העוברי לצורך גישה קלה לעמוד השדרה. מקמו את העובר כאשר הצד הבטני פונה כלפי מטה והחלק הקדמי פונה הרחק מהסניגה. השתמשו בפינצטה כדי לקבע את העובר בחוזקה בצד אחד.אין ללחוץ או לשחרר את הפינצטה, אחרת הרקמה תיקרע עם זוג הפינצטות השני. תפסו את העור לצד חבל השדרה. הזיזו את קצות הפינצטות התומכות.קלפו את העור המכסה את גבו של העובר כדי לחשוף את חוט השדרה העטוף בקרומי העטיפה שלו, ונתקו באופן חלקי את הרקמה מימין לחוט השדרה. השתמשו בפינצטה סגורה כדי לדחוף את הרקמה, החל מהגובה שבו נמצאת פינצטת האחיזה. התקרבו ככל האפשר לחוט השדרה מבלי לגעת בו.חזור על הפעולה מספר פעמים לאורך חוט השדרה. פעולה זו תצמידה חלק מגנגליון השורש הדורסאלי ותשבש איברים ונטראליים. השאר מעט רקמה מחוברת בקצוות הקדמי והאחורי, החל מהקצה הקדמי.השתמשו במחט טונגסטן בצורת וו כדי לחתוך את קרומי המוח ולפתוח את חוט השדרה לאורך ה-roof plate. סובבו את העובר ב-180 מעלות והסִירו את הרקמה מהצד הנותר, תוך שימוש באותה שיטה.לאחר מכן, נתקו לחלוטין את הרקמה בצד שמאל של חוט השדרה, הצד שהיה פגוע קודם לכן (שבמקור היה הצד הימני). הניחו את חוט השדרה על צדו והשתמשו בפינצטה כדי להסיר את רוב רקמת המזנכימה שנותרה ואת גנגליוני השורש האחוריים. השתמשו בפינצטה כדי לקלף פתח קטן של הקרומיות. בשלב זה, הקרומיות וחוט השדרה מהווים שתי שכבות של רקמה דמוית סנדוויץ'.השתמשו בפינצטה כדי לקבע את החלק הגדול יותר של חוט השדרה בקצה הקדמי. אחזו את שני הסגמנטים המופרדים בפינצטה וקלפו את הקרומים (meninges). בצעו זאת בתנועה חלקה וקבועה; קילוף לא אחיד עלול לגרום לקרע בשכבת הקרומים או בחוט השדרה.אם שכבת הקרומים נקרעת במהלך המשיכה, חלקו של חוט השדרה שנותר מחובר לקרומים בדרך כלל אינו ניתן להשגה. אם כי לעיתים הדבר אפשרי. השתמשו בפ pipette מפלסטיק כדי להעביר בעדינות את חוט השדרה המבודד לצלוחית עם מצע L 15 עם 10% סרום סוסים שעבר אינאקטיבציה בחום, על קרח, לפני עיבודו של מספר עוברים נוסף.זכרו להחליף את המצע בכלי הניתוח ב-L 15 מקורר כדי לשמור על העובר קריר ולסייע בשימור שלמות הרקמה. אספו את השריכים השדרתיים מכל העוברים לפני המעבר לניתוחים של השריד השדרתי הגבי (dorsal spinal cord). כדי להתחיל בניתוח השריד הגבי, הניחו שריד שדרתי אחד שבודד acabado בצלחת פטרי המכילה L 15 עם 10% סרום סוס מחומם ומופעל.חתכו והסירו את החלק הקדמי הרחב יותר, הכולל חלק מהמוח האחורי. לאחר מכן, השכיבו את חוט השדרה בצורה שטוחה ופרסו אותו כמו ספר פתוח. הרקמה הגבית ממוקמת בחלקים הלטרליים ביותר של חוט השדרה הפתוח; בעודכם מקבעים את החוט בעזרת מחט טונגסטן ישרה, השתמשו במחט טונגסטן בצורת L כדי לחתוך רצועה ברוחב של כחומש מרוחבו של חצי מחוט השדרה. חיתוך של רצועות רחבות יותר יעלה את התבגית, אך יפחית את טוהר התרבית.העבירו מספר רצועות גב (dorsal strips) לפרועת קונית בנפח 15 milliliter המכילה מצע L 15 עם 10% horse serum והניחו את הפרועת על קרח. המשך הפרוצדורה יתבצע בסמיכות למכסה של מre-מabilis למטפחת רקמות או בתוכה. עבור תרבויות אלו, חשוב להכין את התמיסות והציוד מראש, בדרך כלל לפני הניתוח.שלב ה-tation משתמש בצינורות פסטה שעברו ליטוש באש בשני גדלים, אחד שקוטרו הוא מחצית מהגודל המקורי והשני קטן ממנו מעט. לפני התחלת הפעולה, יש לצפות את שני הצינורות שעברו ליטוש באש במצע המכיל סרום, על ידי שאיבת מצע לתוך הצינורות והשארתו למשך 30 שניות. פעולה זו תפחית את מספר התאים שנדבקים לזכוכית במהלך ה-ation.התחילו באימות שהפסים הגביים שקעו לתחתית המבחנה. תחת מכסה זרימה למינרית, הסירו את רוב הנוזל העליון (SUP natant) בעזרת פסטורת פשוטה לכל דגימה. שטפו במהירות עם 3 mL של HBSS קר, ללא מגנזיום וסידן.המתינו שתי דקות להסתדרות של רצועת הצינור העצבי הגבי (dorsal neural tube strip). לאחר מכן, הסירו את ה-HBSS באמצעות הפסטה. הגביהו את הנפח ל-4.7 milliliters.בעזרת HBSS חמים, הוסיפו 0.3 milliliters של 2.5% trypsin כדי להגיע לריכוז סופי של 0.15% trypsin וערבבו בעדינות; הדגירו במקלח מים בטמפרטורה של 37 degree Celsius למשך שבע דקות, תוך ערבוב עדין פעם אחת במחצית זמן ההדגרה. עם סיום ההדגרה, הוסיפו DNase לריכוז סופי של 150 units per milliliter ומגנזיום סולפט לריכוז סופי של 0.15%, וערבבו קצרה.נתחי צינור העצבים הגבי (dorsal neural tube) צריכים להיות כעת מרוסקים. סובב במרכז centrifuge את שברי הרקמה ב-200 G למשך ארבע דקות. הסר את העל-נוזל (supernatant) באמצעות פסטת פראפה (pasta perpe), כך שיישארו כ-50 עד 100 microliters של נוזל בתחתית המבחנה.שקשקו את המבחנה בעדינות כדי לשחרר את המשקע. לאחר מכן, שטפו את התאים על ידי הוספת חמישה מיליליטר של HBSS חם. הניחו לתאים לשקוע בטמפרטורת החדר למשך שתי דקות.סובב במערך צנטריפוגה ושטוף את התאים שנית. הפעם, השהה אותם מחדש ב-2 milliliters של HBSS חם. השתמש בפיפט עם קצה מלוט בחום (fire polish) בעל קוטר חצוי כדי להומוגניзировать את התאים על ידי שאיבה ושחרור איטית של הנוזל למעלה ולמטה ארבע עד שש פעמים; השחרר את הנוזל כנגד דופן המבחנה כדי לפרק גושים גדולים ולהפחית את מוות התאים.הימנעו מיצירת בועות ואל תערבבו יתר על המידה. השתמשו בפיפט זכוכית מלוט בעל הקוטר הקטן ביותר כדי להמשיך בפירוק התאים על ידי שאיבה ופליטה איטית של הנוזל שלוש עד ארבע פעמים באותו אופן. אין צורך לפרק את כל גושי התאים, שכן נטייה להיווצרות אגרגטים של תאים מתים ופסוליות היא שכיחה.המתינו דקה עד שהשקיעים של רשמי הרקמה ישקעו. לאחר מכן, הוציאו 20 µL מהנוזל העליון (SUP natant), אשר אמור להכיל תאים תלוים לספירה ב-hemo soter; על הנוירונים להיות עם חיוניות של לפחות 95% לפי צביעת trypan blue. העבירו את הנוירונים למצע גידול neurobasal בריכוז המתאים ליישום שלכם.לאחר 16 עד 18 שעות, החליפו את המצע למצע גידול עצבי בסיסי (neural basal growth media) כדי למנוע התנתקות. הסירו בעדינות את המצע מהנוירונים באמצעות פיפט במקום שאיבה עם משאבת ואקום. להלן מספר תוצאות מייצגות של נוירונים קומיסוראליים (commissural neurons) מבודדים שהושתלו על כיסויי זכוכית מצופים ב-PLL; ארבע שעות לאחר ההשתלה, הנוירונים נצמדו לפני השטח, 30 שעות לאחר ההשתלה.למרבית הנוירונים יש אקסונים מוארכים עם תרון גדילה גלוי. ניתן להשתמש בנוירונים אלו בקלות בניסויי אימונופלואורסצנציה. בדוגמה זו, מיקרוטובולים מסומנים בירוק, actin באדום ו-NA בכחול.הראינו לכם כיצד לבצע דיסקציה וטיפוח של נוירונים קומיסורליים (commissural neurons) מחוטי שדרה עובריים. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור כי רמת הניקיון של הנוירונים הקומיסורליים תלויה בעובי הפס הדורסלי שמוצא בדיסקציה. זהו כל התהליך.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

dissection-culture-commissural-neurons-from-embryonic-spinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

Assay זה מעריך את היכולת של מולקולות איתות, עצם פה חלבון המוךפו"גנטי שהולך 7 (BMP7), לארגון מחדש של אקסונים commissural. Explant של חוט השדרה הגבי העובריים בתרבית הסמוכים המצרפי של הפרשת התאים COS הצמיחה גורמים מועמד. אקסונים commissural ההתמצאות גדל בתוך explant הם דמיינו ידי אימונוהיסטוכימיה.

Assaying את היכולת של מולקולות איתות Diffusible כדי כיוון מחדש עובריים האקסונים Commissural השדרה

אנו מדגימים כיצד לנתח ותרבות חומוס הגנגליון E4 statoacoustic ו E6 explants חוט השדרה. Explants הם תרבותי תחת בסרום ללא תנאים ג'ל קולגן 3D עבור 24 שעות. ההיענות Neurite נבדק עם המדיום גורם הגדילה, שיושלם עם חלבון מצופים חרוזים.

Dissection והתרבות של גנגליון צ&#39;יק Statoacoustic Explants ואת חוט השדרה ג&#39;ל קולגן עבור מבחני תוצאה Neurite

הסרטון מדגים את הבידוד של נוירונים מוטוריים, טרוכליאריים ומוטוריים בעמוד השדרה מעובר עכבר מהונדס. העובר מבטא נוירונים מוטוריים המסומנים בחלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) להדמיה וזיהוי קלים. הנוירונים המוטוריים מבודדים בניתוח תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי ונשמרים בתווך תרבית.

בידוד ותרבית של נוירונים אוקולומוטוריים, טרוכליאריים ומוטוריים בעמוד השדרה מעובר עכבר

תרבויות פרוסות להקל על המניפולציה של התפתחות עובר על ידי גן והפרעות תרופתיות. עם זאת, תנאי התרבות חייבים להבטיח שהתפתחות תקינה יכולה להמשיך בסביבה המופחתת של הפרוסה. אנו מדגימים פרוטוקול המאפשר פיתוח חוט שדרה רגיל להמשיך לפחות 24 שעות.

פרוטוקול עוף עובר חוט שדרת Slice תרבות

תהליכים התפתחותיים כגון התפשטות, דפוסים, בידול, והדרכה האקסון יכולים להיות מודל בקלות בחוט השדרה דג הזברה. במאמר זה, אנו מתארים הליך הרכבה לעוברי דג הזברה, אשר מייעל את ההדמיה של אירועים אלה.

נתיחה והרכבה לרוחב של עוברי דג הזברה: ניתוח התפתחות חוט השדרה

צלחת הרצפה היא מבנה חיוני של תאי העצב מתפתח בעמוד השדרה, ומספקים אותות diffusible לאבות ומבדל. אנו מתארים שיטה להפקה בינונית מותנים בקומת צלחת, כדי להחיל אותו על רקמת חוט השדרה טרי, ועל מנת להעריך את ההשלכות על חלבונים של עניין על ידי ביוכימיה.

תרבות של רקמות מבודדות פלייט מקיר לקיר וייצור בינוני אוויר כדי להעריך את התכונות פונקציונליות של איתותים שפורסם פלייט מקיר לקיר

Lampreys לשחזר תנועה לאחר פגיעה בחוט השדרה מלאה. עם זאת, חלק מתאי העצב מקרין שדרה הם regenerators טוב ואחרים לא. מאמר זה ממחיש את הטכניקות לזחלי צמד ים ים דיור (ומבוגרים הפכו לאחרונה), הפקת transections חוט השדרה מלאה והכנת מוח wholemount וחוט שדרה לכלאה באתר.

חוט השדרה מלא פגיעה ומוח Dissection פרוטוקול Wholemount לאחר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בזחל ים צמד ים

מודלים תרבית תאים מספקים שליטה מפורטת על תנאים סביבתיים ובכך מספקים פלטפורמה רבת עוצמה על מנת להבהיר היבטים רבים של ביולוגיה של תא עצבי. אנו מתארים שיטה מהירה, זולה, ואמינה לבודד, לנתק, ותרבות תאי עצב תחושתי מעובר חומוס. פרטים של הכנת המצע וimmunocytochemistry גם מסופקים.

בידוד והתרבות של ניתק עצב סנסורי מאפרוח עוברים

כאן אנו מציגים פרוטוקול המבוסס על פרוסות חוט השדרה בתרבית על מערכים רב-אלקטרודה ללמוד התחדשות פונקציונלית של קשרי propriospinal במבחנה.

חוקר התחדשות פונקציונלית בחוט השדרה שיתוף תרבויות Organotypic גדלו על מערכים רב-אלקטרודה

מחקר זה מציג טכניקה לבידוד של נוירונים מ WT עכברים neonatal. זה דורש דיסקציה זהיר של חוט השדרה מן העכבר הילוד, ואחריו הפרדת הנוירונים של רקמת חוט השדרה דרך מחשוף מכני אנזימטי.

נוירונים חוט השדרה בידוד ותרבות מ עכברים ניאונטליים

עבודה זו מציגה פרוטוקול להניב התרבויות תאים הומוגנית של מנוע התנועה הראשוני, trochlear, ומנועי השדרה נוירונים. תרבויות אלה ניתן להשתמש לניתוחים השוואתיים של מורפולוגית, תאית, מולקולרית, ו אלקטרופיזיולוגיה המאפיינים של נוירונים מנוע העינית השדרה.

בידוד ותרבות של והעושות, טרוליר, ושדרה מוטוריים נוירונים מ בטרום לידתי : עכברים הטרנסגניים

למדו שיטה לניתוח וגידול נוירונים קומיסורליים מחוט השדרה העוברי של עכברים E13. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני צמיחה והכוונה של אקסונים במעבדה.

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

גלה סרטונים נוספים