Name: קצירת הזרע והזרעה מלאכותית של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: למדו את שיטת קצירת הזרע והזרעה מלאכותית בעכברים לחקר ביולוגיה רבייתית. פרוטוקול זה מאפשר שליטה מדויקת בזמני הרבייה ושימוש בזרע קפוא לשימור שורות גנטיות חשובות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני רוצה להודות מייק דיואי ממרכז במלאי Peromyscus הגנטי של תובנה חשובה שלו, סבלנות וידע על רבייה מכרסמים.

הזרעה מלאכותית הזרעה מלאכותית משמש במקום הזדווגויות טבעי כדי להגדיל את הסיכוי שכל הנקבות יש רצון להיכנס להריון. 2 זכר שימש כל 1 הנקבות superovulated או נקבה ידוע להיות הייחום. Epididymides caudae מעכברים זכרים בוגרים הוצבו השעיה חלב 9% ופרוסים לפתוח עם 18 מחטים מד. הזרע היה מותר לשחות בחופשיות במשך כמה דקות ואז epididymides נלקחו מתוך התערובת. המתלים הוערך באמצעות מיקרוסקופ עבור מפגש והזרע ניעתי. מד בוטה 22 ½ 1 אינטש מחט ארוכה שימש לנהל את הזרע. לכופף 120 ° הוצב על ה 3 / 4 לאורך המחט. המחט המוחדרת לנרתיק עד לעיקול ו .025 - 0.05mls מוזרק. אם עוזר משמש להחזיק את הנקבה בעמדה המתאימה, שימוש בהרדמה אינו נחוץ. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 4 זכרים ונקבות עבור 6 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את הזכרים ביבר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כ 5 מ&quot;ל של חלב 9% לעומת אבקת חלב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניסים 1.5 מ&quot;ל בצלחת פטרי קטן </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את epididymus ואת הזרע הזרע </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניסים 1.5ml חלב 9% </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש בשתי 18 מחטים מד, באמצעות תנועה חיתוך ארוך עם מחטים, פרוסה לפתוח את epididymus ואת הזרע הזרע לשחרר את הזרע </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את שאריות רקמת ולבדוק הזרע במיקרוסקופ </li></ol> הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במחט קהה זווית 120 ° </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק העכבר ביד להזריק תערובת. אם לא נוח עם אדם אחד מחזיק והזרקת, שני אנשים יכולים לשמש. הרדמה לא אמור לשמש, כמו על אחד יודע איך זה יכול להשפיע על ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 0.05ml של תערובת הזרע / חלב לכל נקבה </li></ol> נמען נקבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם למרוח בנרתיק על הנקבות הנמען (בזמן הזה הנקבות הנמען צריך להיות proestrus / ייחום) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקבות שלא הגיעו ייחום על ידי יום 5 צריכה כנראה לא בשימוש </li></ol>

<table><tbody><tr><td>צלחת פטרי</td><td>כלי</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>מחט 18 G</td><td>כלי</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>חלב באבקה</td><td>ריאגנט</td><td>כל ספק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 mL</td><td>כלי</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>כלי</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>כלי</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>מחט קהה 22 G</td><td>כלי</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

קצירת הזרע והזרעה מלאכותית של עכברים

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

מכרסמים של Peromyscus הסוג (עכברים צבי) הם היונקים הנפוצים ביותר ילידי צפון אמריקה. מינים Peromyscus משמשים מגוון רחב של מחקר כולל טוקסיקולוגיה, אפידמיולוגיה, אקולוגיה, התנהגות, מחקרים גנטיים. הנה הם לספק מודל שימושי עבור הפגנות של הזרעה מלאכותית. שיטות דומות לאלה המוצגות כאן בעבר שימוש במחקרים העכבר כמה צבאים, עדיין אין פרוטוקול מפורט פורסמו. כאן אנו מדגימים את השיטה הבסיסית של הזרעה מלאכותית. שיטה זו כרוכה לחילוץ האשכים של מכרסם, ואז לבודד את הזרע מן האשך ואת הזרע הזרע. הזרע בשלה, עכשיו בתערובת החלב, ממוקמים מערכת הרבייה של הנקבה בזמן הביוץ. הפריה נחשבת 0 יום התזמון של התפתחות העובר. עוברים לאחר מכן, ניתן לאחזר את נקודת הזמן הרצוי מניפולציות. הזרעה מלאכותית ניתן להשתמש במגוון של מינים מכרסם בו העובר העיתוי המדויק הוא קריטי או קשה להשיג. טכניקה זו היא חיונית עבור מינים או זנים (כולל רוב Peromyscus) אשר לא יכול להזדווג באופן מיידי ו / או שם ההזדווגות קשה להעריך. בנוסף, הזרעה מלאכותית מספק התזמון המדויק להתפתחות העובר או מיפוי התקדמות התפתחותית ו / או עבודה מהונדס. מספר מופחת של בעלי חיים יכול לשמש מאז ההפריה מובטחת. שיטה זו הייתה חיונית לקידום מערכת Peromyscus, ויהיה בתקווה להפיק תועלת גם לאחרים.

פרוטוקול זה מדגים שיטות להפקת הזרע מן האשכים של זכרים ואז כשזרעו נקבות עכברים. הליך זה שימושי כאשר זמן מדויק יש צורך במחקרים התפתחותיים כמו גם עבודה מהונדס.

מכרסמים מסוג *Peromyscus* (עכברי צבי) הם היונקים המקומיים הנפוצים ביותר בצפון אמריקה. מינים של *Peromyscus* משמשים במגוון רחב של מחקרים...

שמי אמאנדה דלי מהמעבדה של ד"ר פול וראנה באוניברסיטת קליפורניה ארווין. היום אדגים את ההליך של הפריה מלאכותית. הליך זה כולל הפקת זרע מהזכר, ולאחר מכן העברת הזרע לנקבה בתקופת ביוץ.הסיבה לכך שתרצו לבצע זאת היא שהזכר והנקבה עשויים שלא להזדווג במועד הדרוש לכם, או שמא לא יזדווגו כלל. שוב, ניתן להשתמש בשיטה זו גם עם זרע קפוא אם קו העכברים חשוב מאוד. תהליך זה חשוב מאוד להדגמה כיוון שמדריכים וכתבי עת רבים אינם מראים את הפרוצדורה הנכונה לטיפול בעכבר.ניתן לטפל בעכבר ולהזריק לו באמצעות אדם אחד ללא שימוש בחומר אלחוש עבור הנקבה. דבר זה מבטיח שהנקבה לא תיפגע בשום צורה ומבטיח שההפריה תתרחש בדרך המיטבית ביותר. כלי הניתוח שבהם נשתמש הם שתי ערכות של פינצטות חדות ומספריים חדים אחד.אלה ישמשו לבידוד הטוב ביותר לאורך כל האשכים והשומן שהוזן. לאחר מכן, נשתמש בפינצטה כדי לבודד את האפידידימיס. חלב 9% משמש להעברת הזרע לנקבה.הוא מורכב מ-XPBS אחד בחלבב פודרה שניתן להשיג במכולת המקומית. אני מניח זאת בתוך צלחת פטרי קטנה באופן מבודד, כך שהזרע יישאר באזור ממוקד. מחטים בכיול 18 gauge משמשות לחיתוך פתיחת האפידידימיס, כדי שהזרע יוכל לשחות החוצה אל תוך תמיסת החלב בריכוז 9% שבצלחת הפטרי.לאחר ההשגה וההשחיה, שואבים את הזרע בתמיסת 9% חלב באמצעות מחט בכיליבר 22, בעלת קצה קהה, בזווית של 120 מעלות. מחט זו מחוברת למזרק של 1 מיל

harvesting-sperm-and-artificial-insemination-of-mice

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מדגימים את החדש שפותח אני • ערכת cryo עבור cryopreservation זרע העכבר. שני תאים בשלב התפתחות העובר עם זרע קפוא מופשר השתפר באופן עקבי 5 זנים עכבר עם השימוש בערכה זו. במשך 1.5 שנים, 49 קווי עכבר מהונדסים גנטית היו בארכיון ידי cryopreservation זרע עם • אני cryo ערכה ולאחר מכן התאושש בהצלחה על ידי הפריה חוץ גופית.

הזרע עכבר cryopreservation ושחזור באמצעות · אני cryo Kit

Microinjection של ביציות העכבר משמש בדרך כלל עבור transgenesis קלאסי ( כלומר, שילוב אקראי של transgenes) ו CRISPR בתיווך גישור המיקוד. פרוטוקול זה סוקר את ההתפתחויות האחרונות microinjection, עם דגש מיוחד על בקרת איכות אסטרטגיות genotyping.

הדור של עכברים השתנה גנטית דרך Microinjection של ביציות

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקדם אינטגרציה transgene וייצור של מייסד העכברים הטרנסגניים עם יעילות גבוהה על ידי זריקה פשוטה של וקטור במרחב perivitelline של oocyte מופרית lentiviral.

Lentiviral מתווכת הייצור של העכברים הטרנסגניים: שיטה פשוטה ויעילה מאוד עבור לימוד ישיר של המייסדים

כאן, אנו מציגים שיטה ששונתה עבור הקפאת הזמנות של עוברי תא אחד, כמו גם פרוטוקול כי זוגות השימוש של עוברים הקפאת להקפיא ואלקטרופורציה עבור הדור היעיל של עכברים מהונדסים גנטית.

השימוש של עוברים הקפאת-הפשפה לייצור יעילות גבוהה של עכברים ששונו גנטית

מודלים מכרסמים רבים של אנדומטריוזיס מוגבלים על ידי מורכבות טכנית, רבייה, ו / או צורך בעלי חיים immunocompromised או עכברי כתב מיוחד. אנו מציגים מערכת פשוטה של אינדוקציה נגע באמצעות כל עכבר ניסיוני עם מערכת ניקוד אובייקטיבית הניתנת לאימות עצמאי וללא דרישה לכריתת שחלות או ניתוח הישרדות.

מודל מורין סינגני של אנדומטריוזיס באמצעות עכברי רכיבה טבעיים

במאמר זה אנו מתארים טכניקה פשוטה המיועדת לייצור יעיל של עכברים מהונדסים גנטית הנקראת CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). שיטה זו מספקת ריאגנטים לעריכה על ידי אלקטרופורציה לעוברים ביעילות המתקרבת ל-100%. פרוטוקול זה יעיל עבור מוטציות נקודתיות, החדרות גנומיות קטנות ומחיקות בעוברי יונקים.

עריכה גנומית יעילה של עכברים על ידי CRISPR אלקטרופורציה של זיגוטים

שיטת מניפולציית צוואר הרחם המוצגת יכולה לגרום לפסאודו-הריון בעכברים ללא צורך בגידול נקבות עם זכרים שעברו כריתת כלי דם. השראת פסאודו-הריון נדרשת להצלחת החזרת עוברים לא כירורגית והזרעה מלאכותית לא ניתוחית, שניהם מוצגים גם.

גרימת פסאודו-הריון בעכברות נקבות ללא צורך בזכרים שעברו כריתת כלי דם לפני החזרת עוברים לא ניתוחיים או הזרעה מלאכותית

כאן, אנו מציגים שיטה לביצוע הזרקת זרע עגולה (ROSI) בעכברים, טכניקה עם יישומים קליניים מבטיחים ותועלת לחקר המנגנונים העומדים בבסיס התפתחות עוברית.

הזרקת זרע עגולה לעכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכבר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI)-העברת עוברים (ET), המאפשר לנו לצפות בשינויים הקשורים לגיל במטבוליזם של גלוקוז שניתן לייחס ל- ICSI, ומספקים תובנות לגבי ההשפעות ארוכות הטווח הפוטנציאליות שלו על ההתפתחות האנושית.

ניטור רמת הסוכר בדם בצאצאי עכבר לאחר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית

למדו את שיטת קצירת הזרע והזרעה מלאכותית בעכברים לחקר ביולוגיה רבייתית. פרוטוקול זה מאפשר שליטה מדויקת בזמני הרבייה ושימוש בזרע קפוא לשימור שורות גנטיות חשובות.

קצירת הזרע והזרעה מלאכותית של עכברים

גלה סרטונים נוספים