Name: מערך Multielectrode הקלטות של האפיתל Vomeronasal (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-01T16:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: למדו שיטת מערך רב-אלקטרודי להקלטת פעילות חשמלית באפיתל וומרונזלי בעכבר. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות נוירונים חישניים לגירויים נוזליים עם דיוק רובוטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לחברי מעבדה הקודש. עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לחירשות והפרעות תקשורת (R01 DC005964 ל) ו-NSF IGERT 0,548,890 (הא). ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם ארצות הברית הרווחה מעשי בעלי חיים National Institutes of הנחיות בריאות אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת וושינגטון ועדת שימוש.

חלק 1. הקלטה חשמל מכשור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו משתמשים במערך multielectrode מישוריים (ALA מכשירים מדעיים) עם 10 מיקרומטר שטוח ניטריד טיטניום אלקטרודות מבודדים עם סיליקון ניטריד. 60 אלקטרודות מסודרים בשני תחומי המורכב מרשת 5x6 עם מרווח בין מרכז אל מרכז של 30 מיקרומטר. (תצורות אחרות גם אפשרי; אלקטרודות עם משטח הקלטה 10 מיקרומטר בקוטר טובים יותר אלקטרודות גדולות יותר במונחים של לבודד את הפעילות של נוירונים בודדים.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אותות חשמליים הם מוגבר (הגברה 1000x) באמצעות מגבר 1060 MEA (ALA מכשירים מדעיים). איתותי נרכשים על 10 קילוהרץ באמצעות כרטיס רכישת נתונים (National Instruments) ותוכנות נתונים מותאמים אישית הרכישה (ניתן גם לרכוש תוכנה מסחרית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמה נערכת על ידי MEA רשת ניילון (53 מיקרומטר), המצורף להוסיף מנהג אשר מתאים בנוחות בתוך הטבעת צינור תרבות של MEA. </li></ol> חלק 2. משלוח נוזלי Instrumentation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמה דורש superfusion מתמשך, אשר אנו מבטיחים ידי אספקת פתרון של רינגר (115 נתרן mM כלוריד, אשלגן כלורי 5 מ"מ, 2 סידן כלוריד מ"מ, 2 מגנזיום כלוריד מ"מ, 25 סודיום ביקרבונט מ"מ, 10 HEPES מ"מ, 10 mM D-(+ )-גלוקוז) מהמשאבה HPLC. גירויים מוצגים על ידי ביצוע זריקות לתוך שסתום HPLC ומיתוג בין זרימה דרך הלולאה. גם המשאבה HPLC ומשאבה המזרק הרובוט של הזרקת מסופקים עם הפתרון של רינגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפתרון של רינגר נשמר בתוך אמבט מים חמים (ISOTEMP 105) בשעה 42 ° C במשך הניסוי והוא מבעבע ברציפות עם 95% O 2 / 5% CO 2. בקבוק נפרד של רינגר ללא גלוקוז מוכן גיבוי משאבת מזרק. הפתרון של רינגר מועבר אל הרקמה באמצעות משאבה 307 HPLC (Gilson) בשיעור של 3 mL / min. בניסוי טיפוסי 5-6 שעות, 1 ליטר של כל פתרון של רינגר מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הניסוי, הרקמה superfused ברציפות עם פתרון 37 ° C רינגר. בדיקה דוד ממוקם ישירות מעל הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגירויים מועברים באמצעות 215 הנדלר Gilson נוזלי זרוע רובוטית. גירויים מאוחסנים גומי הכתיר צלוחיות זכוכית, תחת שליטתו של תוכנה Gilson, הזרוע הרובוטית מספק את הגירויים לקו זלוף בעוד קצב הזרימה לחץ מתמיד ומתוחזקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המדינה של שסתום HPLC (לולאה עוסקת / לא עוסקת) מיוצגת על ידי מתח חשמלי, אשר נרשמו על ידי רכישת המחשב כערוץ נוסף כדי להבטיח סינכרון עם הפעילות העצבית. </li></ol> חלק 3. הכנת MEA והתקן Stimulus משלוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ביצוע הנתיחה, למלא את MEA היטב עם BSA ב dH2O לפחות 5 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את MEA באמצעות חימום מבעבע הפתרון של רינגר והמקום MEA על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש המטפל נוזל HPLC המשאבה על פי ההוראות של היצרן. </li></ol> חלק 4. VNO Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ביצוע הנתיחה, למלא 2 60x15 מ"מ צלחות פטרי עם פתרון מבעבע של רינגר ומניחים על קרח. כמו כן למלא 2 Sylgard מנות מצופה פטרי באותו גודל עם הפתרון של רינגר ומניחים על קרח. צ'יל 50 מ"ל נוספים של חם מבעבע של רינגר לשימוש במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר הוא הקריב באמצעות מחנק CO 2 ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא חתכים דו צדדי מהצד של הפה, פועל במקביל לקו הלסת, לחלק האחורי של הראש. הצטרף 2 חתכים לאורך החלק האחורי של הצוואר ולהסיר את החלק הגבי של הראש, עוזב את הלסת התחתונה המצורפת לעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים בסדר, לחתוך בין רקמות לבין צד של עצם הלסת העליונה להפריד בין רקמות העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ב # 3 מלקחיים, לקלף רקמות החיך לחשוף את חלל האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים קטנים או אזמל, לחתוך בין צד של 2 השיניים העליונות הקדמי כדי לשחרר את הקפסולה vomeronasal מן העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ב # 3 מלקחיים, להרים את הקפסולה vomeronasal ידי עצם המקום שטוח בצלחת פטרי על הקרח. הצעדים דרך טבילה צריכה להתבצע תוך פחות מ 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחת תחת stereomicroscope, מואר עם האור המוחזר. הוצא את הקפסולה גרמי מ VNO אחד בכל פעם, באמצעות # 3 מלקחיים. השתמש יד אחת כדי לייצב את הקפסולה הגרמי על ידי מרתק מקצה הזנב, היד השנייה לקלף העצם הרחק VNO, נזהרת שלא לפגוע VNO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר עצם מוסר, העברת VNO אל צלחת פטרי Sylgard מצופה. השתמש צלחת שנותר VNO השני. כבה את התאורה על האור המועבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרו מספריים או מלקחיים # 5, להפריד את VNO מתוך כלי הדם על ידי חיתוך לאורך הקצה של VNO. בשלב זה אתהיש את הגיליון עצביים מופרדים לגמרי כלי הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את VNO עם את (דנדריטים) בצד הפנימי. שימוש ב # 3 מלקחיים, כדי לעגן את VNO Sylgard בפינה של הרקמה. מקלפים את האפיתל עצביים מן lamina הבסיס באמצעות שבר קטן של להב מצופה טפלון גילוח שקיים עם מלחציים. החזקת את הלהב בזווית רדוד (&lt;30 מעלות מעל פני צלחת) הוא הטוב ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה כוס, להעביר את פיסת אפיתל עצביים מצלחת של MEA. מקם את VNO על גבי שדה אלקטרודה עם הצד הדנדריטים למעלה. הסר פתרון Ringer של עודף עם טפטפת. המקום בעל רקמה רשת לתוך הבאר של המערך לקיים את VNO במקום, ולמלא בתמיסת רינגר של צונן. </li></ol> חלק 5. הקלטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את MEA ב מגבר MEA 1060 ואת עמדת בדיקה דוד ישירות מעל הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאשר את המיקום הנכון בדיקה דוד, לגרות עם הפתרון של רינגר המכיל אשלגן 50 מ"מ (תחליף נתרן equimolar) למשך 2 שניות. התאם את מיקום כדי לצמצם את ההשהיה של התגובה העצבית לפתרון אשלגן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Superfuse הרקמה בתמיסת רינגר של מחומם למשך שעה 45 דקות עד 1 לפני ההקלטה כדי לאפשר לרקמות להסתגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האותות החשמליים נשמרים בדיסק באמצעות תוכנות הקלטה אישית. </li></ol> חלק 6. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנותק ניתוח נתונים יכול להיעשות באמצעות הקלטות אלקטרודה גלם. לדוגמה, אנו מודדים את השינויים קצב ירי של תאים רשמה בתגובה ligands בפרט. ערכות נתונים המתקבלים גדול יכול לשמש כדי לענות על שאלות שונות, הכרות עם שפת תכנות או ניתוח (C, Matlab, R, Python, או דומה) נדרשת. </li></ol> חלק 7. נציג תוצאות הכנה זו היא בדרך כלל יציבה מספיק כדי להקליט במשך 6 שעות, מניב כמות גדולה של נתונים (6 שעות של הקלטה מתוך 60 אלקטרודות). <img src="/files/ftp_upload/1845/1845fig1tmb.jpg" alt="איור 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. תמונה של פעילות בו זמנית על פני חצי אחד של המערך מוצג. חלון הזמן משתרע על פני 400 ms. אנא <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1845/1845fig1.jpg">לחץ כאן</a> כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 1. <img src="/files/ftp_upload/1845/1845fig2tmb.jpg" alt="איור 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. בניסוי אופייני, אנו מעוררים עם תרכובות מסוים של ריבית למשך 10 שניות. עקבות זוהי דוגמה של בתגובה שתן עכבר מדולל פי 100 נשים. אנא <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1845/1845fig2.jpg">לחץ כאן</a> כדי לראות גרסה גדולה יותר של הדמות 2.

<ol><li>Dulac, C., Torelo, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+detection+of+pheromone+signals+in+mammals%3A+from+genes+to+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular detection of pheromone signals in mammals: from genes to behaviour.</a> Nat Rev Neurosci. 4, 551-562 (2003).</li>
<li>Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+Vomeronasal+neurons+to+natural+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Responses of Vomeronasal neurons to natural stimuli.</a> Science. 289, 1569-1572 (2000).</li>
<li>Nodari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfated+steroids+as+natural+ligands+of+mouse+pheromone-sensing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sulfated steroids as natural ligands of mouse pheromone-sensing neurons.</a> J Neurosci. 28, 6407-6418 (2008).</li>
</ol>

מערך הקלטות Multielectrode לאפשר לנו את היכולת לפקח על הפעילות סימולטני של אוכלוסייה גדולה של נוירונים. זהו כלי שימושי עבור לחקור את המאפיינים של מערכת החושים, במיוחד את VNO. בניגוד למערכת חוש הריח העיקרי, VNO מזהה גירויים בשלב נוזלי. בנוסף, VNO היא רקמה הטרוגנית. ישנם כ 300 סוגים שונים של קולטנים את העכבר 1, ככל הנראה עם פרופילים תגובה שונה. הקלטות MEA בשילוב עם הזרוע הרובוטית מאפשרים לנו לספק באופן אמין גירויים נוזלי לאוכלוסייה גדולה ומגוונת של נוירונים וזהות תגובה el...

מערך multielectrode הקלטות של האפיתל vomeronasal

Multielectrode Array Recordings of the Vomeronasal Epithelium

הבנת מעגלים עצביים דורש שיטות להקליט נוירונים רבים בו זמנית. עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; מחקרים, אחד הטכנולוגיה זמין כרגע הוא multielectrode מישוריים מערך (MEA) ההקלטה. כאן אנו מסמך השימוש MEAs ללמוד את העכבר vomeronasal איבר (VNO), אשר ממלא תפקיד חיוני זיהוי של פרומונים ו רמזים חברתיים באמצעות אוכלוסיה מגוונת של עצב סנסורי להביע מאות סוגי קולטנים. שילוב של הקלטה MEA עם המטפל נוזל רובוטית לספק גירויים כימיים, התגובות חושית של אוכלוסיה גדולה ומגוונת של נוירונים ניתן להקליט. הכנה מאפשר לנו להסיר את neuroepithelium שלם של VNO מן העכבר לגרות עם סוללה של כימיקלים או ligands פוטנציאל תוך מעקב אחר הפעילות החשמלית של הנוירונים במשך כמה שעות. לכן, טכניקה זו משמשת כאמצעי יעיל בהערכת פעילות ליגנד כמו גם לחקור את המאפיינים של נוירונים הקולטן. אנו מציגים את הטכניקות צורך להכין את האפיתל vomeronasal, הקלטה MEA, וכן גירוי כימי.

מערך Multielectrode (MEA) הקלטות לספק שיטה ללימוד את הפעילות החשמלית של אוכלוסיות גדולות של נוירונים. כאן, אנו מציגים את הפרטים של הכנה MEA להקליט האפיתל עכבר vomeronasal ובמקביל מגרה את הרקמות.

מערך Multielectrode הקלטות של האפיתל Vomeronasal

הבנת מעגלים עצביים דורשת שיטות להקלטה מנוירונים רבים בו-זמנית. עבור מחקרים in vitro, טכנולוגיה אחת הזמינה כיום היא...

מערכים מישוריים של רב-אלקטרודות משמשים להקלטה מאיבר האף העליון (UL nasal organ). ה-VNO מוסר מהעכבר באופן שבו הנוירו-אפיתל נשאר שלם. ראשית, קפסולת ה-VNO מוסרת מהעכבר.לאחר מכן מבודד הנוירו-אפיתלליום מהקפסולה הגרמית, מכלי הדם והלמינה הבזאלית. הרקמה מוצבת ב-MEA כאשר הצד של הפיסות הדנדריטיות (dendritic knobs) פונה כלפי מעלה. לאחר השלמת ההגדרה זו, נשתמש בזרוע רובוטית להגשת גירויים נוזליים לרקמה.שלום, אני חנה ארנון מהמעבדה של Tim Wholly במחלקה לאנטומיה ונוירוביולוגיה בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון. אני שייאן פו, גם אני ממעבדתו של Holy. היום נראה לכם פרוצדורה להקלטה באמצעות מערך אלקטרודות מרובה (multi electrode array) של ה-V nasal organ.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדתנו כדי לחקור את התכונות החושיות או את נוירוני הקולטנים במערכת הנשימה העזר. אם כן, בואו נתחיל. רישומים חשמליים מתקבלים באמצעות מערך אלקטרודות מישורית מרובת נקודות (MEA) עם אלקטרודות שטוחות של titanium nitride ברוחב 10 micrometer המבודדות באמצעות silicon nitride.60 אלקטרודות מסודרות בשני שדות המורכבים מרשת של חמש על שש עם מרווח בין מרכזים של 30 µm. באמצעות מגבר MEA 10 60, האותות החשמליים מוגברים. נדרשת הגברה של פי 1000 לאותות בתדר של 10 kHz.באמצעות כרטיס רכישת נתונים ותוכנת רכישת נתונים ייעודית, הרקמה מוחזקת על ה-MEA באמצעות רשת ניילון, המחוברת לסבב ייעודי המתאים בדיוק לתוך התרבית. כדי להוציא את ה-MEA, כעת לאחר שראינו את המדידות, בואו נראה כיצד לבצע את הדיסקציה של ה-VNO. לפני ביצוע הדיסקציה, מלאו את באר ה-MEA בבומין סרום בקר או BSA, לאחר מכן, שטפו את ה-MEA באמצעות תמיסת רינגר חמה ומאווררת והניחו אותו על קרח.כדי להיערך להבדיקה, מלאו שתי צלחונות פטרי בגודל 60 על 15 מילימטר בתמיסת ringer מאווררת והניחו אותם על קרח. בנוסף, מלאו שתי צלחונות פטרי מצופים ב-sill guard באותו הגודל בתמיסת ringer והניחו אותם על קרח. קררו 50 מיליליטר נוספים של תמיסת ringers מאווררת לשימוש במהלך הבדיקה.התחל עם עכבר שהוקרב על ידי ביצוע חתכים דו-צדדיים מצד הפה, המקבילים לקו הלסת ומתמשכים עד לחלק האחורי של הראש. חבר את שני החתכים לאורך החלק האחורי של הצוואר והסר את החלק הדורסלי (הגבי) של הראש, תוך השארת הלסת התחתונה מחוברת לעכבר בעזרת מספריים עדינים. גזור בין הרקמה לבין שני צדי עצם הלסת העליונה כדי להפריד את הרקמה מהעצם.בשלב הבא, השתמשו בפינצטה מספר 3 כדי לקלף את רקמת החך, ובכך לחשוף את חלל האף באמצעות מספריים קטנים או חיתוך בסקאלפל בין שתי השיניים הקדמיות העליונות ובשני צדדיהן, כדי לשחרר את קפסולת האף העדינה מהעצם בעזרת פינצטה מספר 3. הסירו את קפסולת האף העדינה דרך העצם השטוחה והניחו אותה בצלחת פטרי על קרח. את השלבים הקודמים, עד לשלב הטבילה של ה-VNO בתמיסת רינגר מקוררת, יש לבצע בתוך פחות משלוש דקות.כדי למנוע מוות של הרקמה, הניחו את הצלחת תחת מיקרוסקופ סטריאו המואר באור מוחזר. השתמשו בפינצטה מספר שלוש כדי להסיר את הקפסולה הגרמית מכל VNO בנפרד. השתמשו ביד אחת כדי לייצב את הקפסולה הגרמית על ידי אחיזה מקצה ה-coddle וביד השנייה כדי לקלף את העצם מה-VNO, תוך הקפדה לא לפגוע ב-VNO.לאחר הסרת העצם, העבירו את ה-v וה-o לכלי פטרי מצופה בסיגאר. השתמשו בכלי הפטרי שנותר עבור ה-VNO השני. העבירו את התאורה לאור תבניתי (transmitted light) והשתמשו במספרי מיקרו.השתמשו בפינצטה מספר חמש. הפרידו את ה-VNO מכלי הדם על ידי חיתוך לאורך קצה ה-VNO. בנקודה זו, יריעת העצבים תהיה מופרדת לחלוטין מכלי הדם.הניחו את ה-VNO כאשר הצד הפנימי פונה כלפי מעלה באמצעות פינצטה מספר 3. קבעו את ה-VO למגן ה-S בפינת הרקמה בעזרת פסיקה קטנה של להב תערה מצופה טפלון המוחזק על ידי תפס. קלפו את אפיתל העצבים מהלמינה הבזאלית תוך החזקת הלהב בזווית רדודה, פחות מ-30 מעלות ממשטח הצלחית.השיטה העובדת ביותר היא שימוש בפיפטת זכוכית. העבירו את פיסת האפיתליום העצבי מהצלחת למיקום ה-MEA, כאשר ה-VNO מונח מעל שדה האלקטרודות והצד הדנדריטי פונה כלפי מעלה.הסר את תמיסת הרינגר העודפת באמצעות פיפטה, ולאחר מכן הנח את מחזיק הרשת לרקמה לתוך באר המערך כדי לקבע את ה-vno במקומו. מלא את הבאר בתמיסת רינגר קרה עם השלמת הנתיחה. כדי להתחיל בסשן הקלטה, הנח את ה-MEA במגבר MEA 10 60 ומקם את חיישן החימום ישירות מעל הרקמה כדי לאשר חימום תקין.לאחר מיקום האלקטרודה, גרו את הרקמה באמצעות תמיסת רינגר המכילה 50 millimolar אשלגן למשך שתי שניות. כוון את המיקום כדי להמזער את השהיית התגובה העצבית לתמיסת האשלגן. הרקמה דורשת סופרפוזיה רציפה, המושגת על ידי אספקת תמיסת רינגר באמצעות משאבת HPLC.בצעו פרפוזיה עלית (Super fuse) לרקמה באמצעות תמיסת רינגר מחוממת במשך 45 דקות עד שעה לפני ההקלטה כדי לאפשר לרקמה להסתגל. גירויים מועברים באמצעות זרוע רובוטית של מטפל נוזלים Gilson two 15. הם מוצגים על ידי ביצוע הזרקות לשסתום HPLC ומעבר בין זרימה חופשית (flow through) לבין הלולאה (loop). תחת בקרת תוכנת Gilson, הזרוע הרובוטית מעבירה את הגירויים לקו הפרפוזיה בעוד שקצב זרימה ולחץ קבועים נשמרים.מצב שסתום ה-HPLC מיוצג על ידי מתח חשמלי, הנרשם על ידי מחשב הרכישה כערוץ נוסף. כדי להבטיח סנכרון עם הפעילות העצבית, אותות חשמליים נשמרים בדיסק באמצעות תוכנת הקלטה ייעודית. כעת נציג בפניכם מספר תוצאות מייצגות של הקלטה באמצעות מערך אלקטרודות רב-נקודתי ב-VNO.נוהל זה מניב כמויות גדולות של נתונים בשל המספר הרב של האלקטרודות, וההכנה נותרת בדרך כלל יציבה למשך כשש שעות. להלן דוגמה לנתונים של 400 milliseconds מחצי אחד של ה-MEA. נוהל זה שימושי למדידת התגובה של נוירונים תחושתיים לליגנדים; מוצגת כאן התגובה לשתן של עכברה נקבה בדילול של 100 fold שנרשמה מאלקטרודה בודדת.השתן הוגש למשך 10 שניות, כפי שמסומן על ידי הפס השחור. שימו לב לעלייה בפריקה בעקבות הצגת הגירוי. הצגנו לכם כעת כיצד לבצע הקלטות של מערך אלקטרודות מרובה (multi electro array) ב-VNO של עכבר בעת ביצוע פרוצדורה זו.חשוב לזכור להיות סבלניים. וזהו. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

multielectrode-array-recordings-of-the-vomeronasal-epithelium

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

ההקלטה (EOG) electroolfactogram היא דרך אינפורמטיבי, קל לנהל, אמין להערכת תפקוד הריח ברמה של אפיתל הריח. פרוטוקול זה מתאר הגדרת הקלטה, רקמות העכבר הכנה, איסוף נתונים, ניתוח נתונים בסיסיים.

ניתוח התגובות של נוירונים עכבר חוש הריח חושי באמצעות הקלטה אוויר שלב Electroolfactogram

דרך חזקים כדי ללמוד מפולות העצבית, כלומר בקנה מידה משתנה במרחב ובזמן פרצי פעילות, מעיד על דינמיקה מצב קריטי בקליפת המוח. מפולות לצאת באופן ספונטני בפיתוח בשכבות השטחיות של קליפת תרבותי המאפשר לטווח ארוך מדידות של הפעילות עם מערכים מישוריים משולב רב אלקטרודה (MEA) בתנאים מבוקרים בדיוק.

Multi-אלקטרודה מערך הקלטות של מפולות העצבית תרבויות Organotypic

האיבר הוומרו-נזלי (VNO) מזהה אותות כימיים בתוך-מיניים המעבירים מידע חברתי ורבייתי. ביצענו ניסויי דימוי Ca2+ באמצעות עכברים טרנסגניים המבטאים G-CaMP2 ברקמת ה-VNO. גישה זו מאפשרת לנו לנתח את דפוסי התגובה המורכבים של נוירוני הוומרו-נזל למספר רב של גירויי פרומונים.

התגובות הדמיה העצבית ההכנות Slice של איברים Vomeronasal הבעת חיישן סידן מקודד גנטית

סרטון זה מדגים הקלטה אלקטרופיזיולוגית של נוירונים חושי ריח (OSNs) בעכברים באמצעות טכניקת מהדק טלאי מחורר. אפיתל הריח, המכיל OSN עם קולטני ריח מתויגים פלואורופור, מבודד מעכבר ומאובטח בתא הקלטה. פיפטת הקלטה מהודקת לידית הדנדריטית של OSN, וניסטטין בתוך הפיפטה מנקב את הממברנה כדי ליצור קישוריות חשמלית עם התא. לבסוף, פיפטה נוספת משמשת להעברת ממריץ ריח, והפעילות האלקטרופיזיולוגית של התא המתוקן נרשמת.

רישום טלאי מהדק מחורר של נוירונים חושי ריח בעכברים

סרטון הפרוטוקול מתאר הקמת מהדק טלאי של תא שלם להקלטה אלקטרופיזיולוגית מנוירוני החישה של איבר הוומרונסאל (VNO) בעכברים. פרוסת VNO קורונלית עם נוירונים חושיים המסומנים באופן פלואורסצנטי ממוקמת במערך הקלטה. תא עצב מסומן מתוקן עם פיפטת הקלטה בתצורה של תא שלם לרישום אלקטרופיזיולוגי בתגובה לגירויים כימיים.

הקמת מהדק טלאי לכל התא להקלטה אלקטרופיזיולוגית מנוירונים חושיים Vomeronasal

הקלטות ארוכות טווח תאיים בו זמנית משני neuropiles המוח שונה או שני קטעים אנטומיים שונים הוקמו בדבורי דבש. הקלטות אלה מאפשרות החקירה של היבטים זמניים של עיבוד עצבי על פני אזורים שונים במוח בנוירון הבודד, כמו גם ברמת ההרכב בבעלי חיים מתנהגים.

הקלטות ארוכות טווח בו זמנית בשני שלבים עצביים עיבוד במתנהגים דבורי דבש

הנורה עכבר חוש הריח אבזר (AOB) כבר קשה ללמוד בהקשר של קידוד חושי. הנה, אנחנו מדגימים נתיחה שמייצרת vivo הכנה לשעבר שבו נוירונים AOB יישארו תפקודי מחוברים לתשומות ההיקפית שלהם, ומקלים על מחקרים בתחום עיבוד מידע של פרומונים העכבר וkairomones.

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

אנחנו כאן מתארים כיצד לבצע הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמת קליפת המוח אפילפסיה אנושית. כריתת אפילפסיה רקמה, הכנת פרוסה ומערך רב-אלקטרודה הקלטות של אירועי interictal וictal הם הפגינו בפירוט.

הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמה האנושית אפילפטיים לאחר הניתוח בקליפת המוח

ניתוח התכונות הפיזיולוגיות של נוירונים חושי ריח עדיין מתמודד עם מגבלות טכניות. כאן אנו מתעדים אותם באמצעות מהדק טלאי מחורר בהכנה שלמה של אפיתל הריח בעכברים ממוקדי גנים. טכניקה זו מאפשרת לאפיין את תכונות הממברנה ותגובות לליגנדים ספציפיים של נוירונים המבטאים קולטני ריח מוגדרים.

הקלטה מחוררת תיקון מהדק של עכבר עצב סנסורי חוש הריח בneuroepithelium שלמים: ניתוח פונקציונלי של נוירונים הבעת קולטן odorant מזוהה

כאן, אנו מתארים גישה פיזיולוגית המאפשרת זיהוי וניתוח מעמיק של אוכלוסייה מוגדרת של נוירונים חושיים בפרוסות רקמה קורונלית חריפות של האיבר הוומרונזאלי של העכבר באמצעות רישומי מהדק טלאי של תא שלם.

מעמיק פיסיולוגי ניתוח של אוכלוסיות תאים מוגדרות ב אקוטי רקמות פרוסות של איברי עכבר vomeronasal

מחקר זה מציג שיטה עבור ההקלטה סימולטני של שדה מקומי פוטנציאל המוח, electrocardiograms, electromyograms, ונשימה אותות של חולדה נעה בחופשיות. טכניקה זו, אשר מפחית את עלויות ניסיוני ומפשטת את ניתוח הנתונים, יתרום להבנה של אינטראקציות בין המוח לבין איברים היקפיים בגוף.

הקלטות סימולטני של פוטנציאל קורטיקלית שדה מקומי, רל, Electromyogram נושם קצב מעכברוש נעה בחופשיות

למדו שיטת מערך רב-אלקטרודי להקלטת פעילות חשמלית באפיתל וומרונזלי בעכבר. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות נוירונים חישניים לגירויים נוזליים עם דיוק רובוטי.

מערך Multielectrode הקלטות של האפיתל Vomeronasal

גלה סרטונים נוספים